高密度壳聚糖对L-929细胞的毒性研究

目的:研究高密度壳聚糖(high density chitosan,HDC)对小鼠L-929细胞的毒性,以期为其临床安全应用提供依据.方法:观察不同浓度HDC浸提液对体外培养L-929细胞形态的影响,四甲基偶氮唑蓝(methlthiazolyl tetrazolium,MTT)实验评价HDC对L-929细胞生长和增殖的影响,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测HDC浸提液对L-929细胞凋亡的影响,单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)检测不同浓度HDC浸提液对培养的L-929细胞DNA分子损伤的影响.结果:HDC浸提液对体外培养的L-929细胞形态无明显影响,对细胞生长和增殖无明显抑制作用,不同浓度材料浸提液的细胞毒性均为0-1级;FCM示凋亡率随浸提液浓度升高而升高,但不明显;SCGE结果显示HDC对L-929细胞的DNA无明显损伤作用.结论:HDC具有良好的细胞相容性和分子相容性,可为临床的安全应用提供依据.     

颜面赝复体粘接剂的体外细胞毒性

目的:利用体外细胞培养技术,对有机硅改性聚丙烯酸酯类颜面赝复体粘接剂-1(FPSA-1)的细胞毒性进行评价.方法: 采用MTT法评价FPSA-1的细胞毒性.利用体外培养的小鼠肺成纤维细胞(L-929),在培养液中分别添加500,750 mL/L FPSA-1浸提液,于加样后2,4,7 d用MTT法显色,用多道扫描酶标仪测A490nm值,计算相对增殖率,对FPSA-1的细胞毒性进行评价.结果: 随着时间推移,不同浓度的FPSA-1浸提液对L-929细胞增殖均无明显作用(P>0.05),各浓度FPSA-1浸提液加样后2,4,7 d之间差异无统计学意义(P>0.05),提示L-929细胞增殖与浸提液浓度无明显相关性,FPSA-1的细胞毒性分级为1级.结论: FPSA-1无明显细胞毒性,具有良好细胞相容性,是一种有发展前景的颜面赝复体粘接材料.     

纳米羟基磷灰石的分子生物相容性研究

目的 通过对纳米羟基磷灰石(nanosize-hydroxyapatite,nHA)的毒性检测,初步探讨生物材料分子生物相容性研究的必要性.方法 通过形态学观察、四甲基偶氮唑蓝(methl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验及彗星电泳检测nHA的毒性.结果 倒置显微镜观察显示不同浓度的 nHA浸提液对体外培养细胞的形态无明显影响;MTT实验表明nHA对细胞生长和增殖无明显抑制作用,不同浓度浸提液的细胞毒性均为1级,无毒,与生长良好的L-929细胞形态观察结果相符合;彗星电泳结果显示随 nHA浸提液浓度和时间的递增彗星率逐渐增大.结论 nHA具有良好的细胞相容性,但对L-929细胞DNA可能有损伤作用,提示可能有遗传毒性作用,因此检测纳米材料分子生物相容性非常必要.     

聚乳酸-甲壳素接骨板的体外细胞毒性研究

目的 利用体外细胞培养技术,对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行研究,为临床应用作前期准备.方法 分别采用间接接触法(MTT法)和直接接触法评价聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性.MTT法:采用体外培养的小鼠成纤维细胞(L929),在培养液中分别添加不同浓度的聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液(0、50%和100%),于接种后第2、4、7天通过MTT法显色,在酶标仪450 nm波长处测定吸光度值,计算相对增殖率,对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行评价;直接接触法:将体外培养的L929细胞分为两组,空白对照组为常规培养的L929细胞,实验组为L929细胞与聚乳酸-甲壳素接骨板共培养,逐日用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞形态学发生的变化,评价聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性.结果 随道时间推移,不同浓度的聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液对L929细胞增殖均有促进作用(P＜0.01),在第2、4、7天各浓度之间无明显差异性(P＞0.05),提示L929细胞增殖与聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液的浓度无明显相关;L929细胞在聚乳酸-甲壳素接骨板表面粘附生长,随时间推移,粘附细胞数量增加,细胞数量及形态与空白对照组比较无明显差异,评分聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性为0级.结论 聚乳酸-甲壳素接骨板无明显细胞毒性,具有良好细胞相容性,是一种具有发展前景的可吸收骨折内固定材料.     

仿生型α-半水硫酸钙/磷酸八钙/透明质酸钠复合人工骨材料的细胞毒性实验

目的:通过进行体外细胞毒性实验研究,探讨α-半水硫酸钙/磷酸八钙/透明质酸钠(α-CSH/OCP/SH)复合人工材料的体外细胞毒性作用情况。方法:提取并纯化兔骨髓间充质干细胞(BMSCs);制备α-半水硫酸钙/磷酸八钙/透明质酸钠复合人工骨材料的浸提液;分别以培养基、0. 64%苯酚溶液为阴性/阳性对照组,25%、50%、100%浓度的材料浸提液为实验组;分别于第1、3、5、7天观察BMSCs生长状况、检测各组的吸光度(A)、计算细胞相对增殖率(RGR),并对材料的细胞毒性进行分级。结果:各实验组及阴性对照组中兔BMSCs均生长良好,呈典型长梭形;MTT实验结果表明各实验组阳性对照组之间吸光度(A)值的差异均有统计学意义(P<0. 05),且在相应时间节点上25%浓度实验组与50%、100%浓度实验组之间的A值也具有明显统计学差异(P<0. 05)。结论:仿生型α-半水硫酸钙/磷酸八钙/透明质酸钠对兔BMSCs无细胞毒性,且低浓度的材料浸提液对兔BMSCs增殖有利。     

多孔β-磷酸三钙/胶原支架与犬牙周膜细胞三维复合体的构建

目的:探索用多孔β-磷酸三钙/胶原(β-TCP/col)支架与犬牙周膜细胞(PDLCs)在体外构建三维复合体.方法:分离培养犬PDLCs,并对其来源进行鉴定;利用甲基噻唑基四唑法检测β-TCP/col浸提液对PDLCs增殖的影响;并将第3代PDLCs以2×10⁵/mL的浓度接种于β-TCP/col支架上进行三维复合体的体外构建,用扫描电镜观察.结果:β-TCP/col浸提液对犬PDLCs增殖无不良影响;PDLCs可在材料的三维结构上贴附生长,细胞充分伸展,且表面可见明显分泌物. 结论:多孔β-磷酸三钙/胶原支架与犬牙周膜细胞具有良好的生物相容性,二者可在体外构建成三维复合体,提示该材料具有成为牙周组织工程理想支架材料的潜力.     

粘接树脂材料细胞毒性的体外评价

目的评价根管充填材料在不同浓度及时间下的细胞毒性。方法将ParaCore树脂、ParaBond粘接剂、牙胶、AH Plus根管封闭剂分别放置1 d(新鲜组)和7 d(陈旧组),制取浸提液,并制成100.0%、50.0%、25.0%、12.5%的稀释液,与L-929细胞接触24 h,采用二甲基噻唑二苯基四唑嗅盐比色法,比较不同材料在不同浓度和时间下的相对增值率(RGR)。结果新鲜组4种浓度的稀释液中,ParaCore树脂的RGR大于牙胶,ParaBond的RGR小于AH Plus,差异有统计学意义(P均<0.05)。陈旧组4种浓度的稀释液中,ParaCore的RGR大于牙胶,除12.5%浓度外,差异有统计学意义(P均<0.05);ParaBond的RGR小于AH Plus,除25.0%、12.5%浓度外,差异有统计学意义(P均<0.05)。在新鲜组中,随着浸提液浓度增大,各材料RGR降低,不同浓度下,ParaCore、ParaBond和AH Plus的RGR两两比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。放置时间越长,RGR越大,除牙胶外,不同时间下其他3种材料RGR差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 ParaCore树脂的细胞毒性小于牙胶,AH Plus封闭剂的细胞毒性小于ParaBond粘接剂;4种材料的毒性具有浓度相关性;除了牙胶,其他3种材料具有时间相关性。     

口腔正畸用磁块镀氮化钛膜后细胞毒性研究

目的：评价正畸用磁块表面镀氮化钛膜后的细胞毒性。方法：选用L-929小鼠成纤维细胞，采用MTT比色法，以镀镍膜、未镀膜磁块的浸提液作为对照，对镀TiN膜磁块的浸提液进行体外细胞毒性研究。结果：在镀TiN膜磁块的浸提液中，L-929小鼠成纤维细胞的增殖率高于90％，所测试材料的浸体液无细胞毒性。结论：磁块表面镀TiN膜后，有良好的细胞相容性。     

聚L-乳酸/聚L-乳酸接枝的羟基磷灰石复合材料的生物相容性

目的： 研究新型生物降解可吸收材料聚L-乳酸/聚L-乳酸接枝的羟基磷灰石复合物（PLLA/PLLA-gHAP）的生物相容性,为其应用提供生物学依据。方法： 将96孔板上培养的L929细胞分为PLLA/PLLA-gHAP组、PLLA组、阴性对照组（空白培养液）及阳性对照组（含苯酚培养液）4个组,不同组材料浸提液与细胞共培养24、48和72h,以MTT法检测材料对L929细胞活性的影响;将L929细胞接种于被覆PLLA/PLLA-gHAP材料的盖玻片表面上,于1、2和3 d用倒置显微镜观察细胞形态学改变;将PLLA/PLLA-gHAP材料浸提液对小鼠进行腹腔内注射,观察小鼠的急性毒性反应,计数鼠骨髓多染红细胞微核率以检测遗传毒性作用;将PLLA/PLLA-gHAP板植入兔皮下,于2周、3个月和6个月检测兔血液学指标改变,光镜观察植入物周围组织病理学变化。结果：PLLA/PLLA-gHAP材料浸提液对L929细胞的增殖率(RGR)和细胞毒性分级（CTS）的影响与阴性对照组比较差异无显著性（P>0.05）,细胞在材料表面生长良好;材料浸提液对小鼠无急性毒性及遗传毒性（微核率0.24%）;材料在动物体内埋植后,早期组织内有淋巴细胞、巨噬细胞浸润,纤维膜形成,6个月时纤维膜基本消失,炎症反应明显减轻。结论：PLLA/PLLA-gHAP材料具有良好的生物相容性。     

义齿抗菌性能的研究现状

目的 通过载银纳米二氧化钛义齿基托材料体外细胞毒性的测定,初步评价载银纳米二氧化钛的生物安全性.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测载银纳米二氧化钛义齿基托材料(载银纳米二氧化钛浓度30 g/L)100%、50%浸提液培养小鼠成纤维细胞L-929细胞2、4、7 d后吸光度值(OD值),并计算细胞相对增殖率,以6级毒性分类法评级,采用单因素方差分析法对各实验组及对照组的OD值进行统计学分析,显微镜观察细胞的生长状况.结果 实验组各观察期L-929细胞生长良好,形态正常;载银纳米二氧化钛抗菌剂(<30 g/L)的义齿基托的细胞毒级别为0级.结论 载银纳米二氧化钛抗菌剂的义齿基托无细胞毒性.     

颌面部赝复用硅橡胶老化后体外细胞毒性研究

目的 研究颌面部赝复用硅橡胶老化后的体外细胞毒性.方法 以A-2186硅橡胶和液态双组份SEI硅橡胶作为受试材料,根据GB/T3512-2001分别制备24、48、72 h老化试件.以小鼠成纤维细胞(L-929)培养液为浸提介质,参照GB/T16886.5-2003制备相应浓度的浸提液培养L-929细胞.根据试件的老化时间和浸提液的浓度进行实验分组,同时设立阴性和阳性对照.于加入浸提液后的2、4、7 d分别收集细胞,MTT法检测细胞增殖,以测得的吸光度值(D490nm)计算细胞相对增殖率并以此评价受试件的毒性程度.结果 加入浸提液后2、4 d,SEI老化72 h 50%和100%浓度组的D490nm均较阴性对照组显著降低,评价细胞毒性为2级.加入浸提液后7 d,A.2186老化48 h 100%浓度组及老化72 h 50%和100%浓度组的D490nm均较阴性对照组显著降低,评价细胞毒性均为2级;SEI老化48 h 50%和100%浓度组及老化72 h 50%和100%浓度组的D490nm均较阴性对照组显著降低,评价细胞毒性均为2级.除A-2186老化24 h 50%浓度组外(细胞毒性为0级),其余各组细胞毒性评价均为1级.结论 老化48 h后,液态双组份SEI硅橡胶表现出轻微的细胞毒性;老化72 h后,A-2186硅橡胶和液态双组份SEI硅橡胶均有一定的细胞毒性.建议临床使用赝复体的患者定期更换赝复体.     

颌面部赝复用硅橡胶老化后体外细胞毒性研究

目的 研究颌面部赝复用硅橡胶老化后的体外细胞毒性.方法 以A-2186硅橡胶和液态双组份SEI硅橡胶作为受试材料,根据GB/T3512-2001分别制备24、48、72 h老化试件.以小鼠成纤维细胞(L-929)培养液为浸提介质,参照GB/T16886.5-2003制备相应浓度的浸提液培养L-929细胞.根据试件的老化时间和浸提液的浓度进行实验分组,同时设立阴性和阳性对照.于加入浸提液后的2、4、7 d分别收集细胞,MTT法检测细胞增殖,以测得的吸光度值(D490nm)计算细胞相对增殖率并以此评价受试件的毒性程度.结果 加入浸提液后2、4 d,SEI老化72 h 50%和100%浓度组的D490nm均较阴性对照组显著降低,评价细胞毒性为2级.加入浸提液后7 d,A.2186老化48 h 100%浓度组及老化72 h 50%和100%浓度组的D490nm均较阴性对照组显著降低,评价细胞毒性均为2级;SEI老化48 h 50%和100%浓度组及老化72 h 50%和100%浓度组的D490nm均较阴性对照组显著降低,评价细胞毒性均为2级.除A-2186老化24 h 50%浓度组外(细胞毒性为0级),其余各组细胞毒性评价均为1级.结论 老化48 h后,液态双组份SEI硅橡胶表现出轻微的细胞毒性;老化72 h后,A-2186硅橡胶和液态双组份SEI硅橡胶均有一定的细胞毒性.建议临床使用赝复体的患者定期更换赝复体.     

317L-Cu抗菌不锈钢对小鼠成纤维细胞生物学行为的影响

目的 探讨317L-Cu抗菌不锈钢(317L-Cu SS)对小鼠成纤维细胞(L-929细胞)增殖、黏附、凋亡等生物学行为的影响,评价抗菌不锈钢材料的细胞毒性;同时观察不同浓度Cu2+对细胞毒性的影响.方法 检测L-929细胞在普通医用不锈钢(317L SS)、317L-Cu SS、医用纯钛(Ti)及纯铜(Cu)材料浸提...     

四种牙科陶瓷材料细胞毒性研究

目的:初步评价牙科陶瓷材料的生物相容性.方法:根据ISO标准采用体外细胞毒性试验(MTT法)测试不同材料和浸提时间的浸提液对L929小鼠结缔组织成纤维细胞的影响,从而对全瓷材料的生物相容性进行初筛.结果:各组A490nm值均与阴性对照无显著性差异(P＞0.05),材料毒性级别除培养48 h后金属烤瓷粉浸提液组的细胞毒性为1级外,其他各浸提液组均为0级.结论:四种材料体外细胞毒性实验阴性,初步认为材料具有较好的生物相容性.     

数字光处理成型氮化硅陶瓷牙科种植体的制备及其生物安全性的初步评价

背景 氮化硅是一种前景广阔的生物植入材料,数字化光处理技术作为一种先进的3D打印技术,同时具备打印精度高和打印速度快的性能,目前尚缺乏数字光处理成型氮化硅作为牙科用植入材料的研究报道。目的 使用数字光处理技术制备氮化硅陶瓷牙科种植体,评估其微观结构和机械性能,并初步评价其浸提液对小鼠成纤维细胞L929的影响。方法 参考国标GB 30367-2013和GB/T 10700-2006,对数字光处理成型氮化硅陶瓷,采用三点弯曲法测试弯曲强度,单边预裂纹梁法测试断裂韧性,弯曲法测试弹性模量。应用小鼠成纤维细胞L929进行数字光处理成型氮化硅陶瓷浸提液细胞毒性、细胞增殖和细胞活力的检测。结果 为了匹配牙槽骨的弹性模量,设计了低弹性模量氮化硅配方体系,数字光处理成型氮化硅陶瓷弹性模量为125 GPa,弯曲强度为243 MPa,断裂韧性为2.6 MPa·m1/2。细胞毒性实验结果显示,在不同浸提液浓度培养下的L929细胞相对存活率均高于80%。活死细胞荧光染色结果显示,浸提液组与对照组活死细胞数量均无统计学差异(P>0.05)。流式结果示浸提液组增殖指数持续增加,细胞周期与对照组相比无统计学差...     

储存式多孔聚乳酸/β-磷酸三钙复合材料载体的制备及生物学评价

目的:对储存式多孔聚乳酸/β-磷酸三钙(PDLLA/β-TCP)复合材料载体进行生物学评价。方法:采用热致相分离/冷冻干燥法制备储存式多孔PDLLA/β-TCP复合材料载体,通过对载体的结构表征和体外细胞毒性试验、急性全身毒性试验、溶血试验、皮肤刺激试验、微核实验以及动物体内植入试验进行生物学评价,为其临床应用提供生物学依据。结果:①储存式多孔PDLLA/β-TCP复合载体材料具有多孔结构,孔径约60!m,孔率71.9%;②材料浸提液对3T3细胞的相对增殖率(RGR)大于81.3%,无细胞毒性(Ⅰ级);急性全身毒性试验阴性;受试材料溶血率小于2.20%,体外试验不引起溶血反应;皮肤刺激性无红斑、无水肿出现;微核率(1.4±0.8)%,与阴性对照组比较,P>0.05;肌肉植入8周后,纤维包膜完整地包绕PDLLA/β-TCP多孔微管。结论:采用热致相分离/冷冻干燥法制备的此种新颖的储存式多孔PDLLA/β-TCP复合载体材料具有良好的生物相容性。     

根管封闭剂对牙周膜细胞生物相容性的影响

目的：研究氧化锌丁香油类（zinc oxide and eugenol based sealers,ZOE）、环氧树脂类（epoxy resin sealers,ERS）、硅酮基类(silicone based sealers,SBS)根管封闭剂对牙周膜细胞(human periodontal ligmant cells, hPDLCs)的增殖和矿化潜能的影响。方法：选用3颗不同人牙齿来源的hPDLCs进行重复实验,采用酶消化法+组织块培养法进行hPDLCs体外原代培养,按照培养基的不同成分分组：（1）ZOE固化 24 h 浸提液培养基组;（2）ZOE固化 1周浸提液培养基组;（3）ZOE固化 2周浸提液培养基组;（4）ERS固化 24 h 浸提液培养基组;（5）ERS固化 1周浸提液培养基组;（6）ERS固化 2周浸提液培养基组;（7）SBS固化 24 h 浸提液培养基组;（8）SBS固化 1周浸提液培养基组;（9）SBS固化 2周 浸提液培养基组;（10）不含浸提液培养基组（对照组）。采用倒置显微镜观察hPDLCs细胞形态的变化,3-(4,5-二甲基噻唑 2) 2,5-二苯基四氮唑溴盐（methyl-thiazol-diphenyltetrazolium,MTT）法测定细胞增殖能力,试剂盒法测定碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性。选取固化2周的各组材料制备矿化诱导浸提液,不含浸提液的矿化培养基为阳性对照组,采用茜素红染色法及氯化十六烷基吡啶半定量法分析矿化物形成情况。结果：比较相对增殖率( relative growth rate,RGR),ZOE固化2周内均具有中度或严重细胞毒性（RGR为13.6%~39.9%）;ERS固化24 h具有轻微细胞毒性（RGR为63.6%~76.4%）,固化1周后轻微或无细胞毒性(RGR为87.6%~95.3%);SBS固化后无明显细胞毒性(RGR为91.8%~106.7%)。比较ALP活性,SBS不同固化时间组间差异无统计学意义（F=3.397,P=0.053）,且均高于ZOE和ERS组。半定量法检测数据显示,ZOE：D562 nm= 0.180±0.050,ERS：D562 nm= 2.968±0.201,SBS：D562 nm=3.623±0.039,对照组：D562 nm=3.477±0.102,即ZOE相似文献   

硅酸三钙、β-磷酸三钙和Dycal对牙髓细胞增殖能力的影响

目的比较硅酸三钙(C3S)、β磷酸三钙(β-TCP)和Dycal对牙髓细胞(DPCs)增殖能力的影响。方法改良组织块法体外传代培养DPCs。制备含不同质量浓度C3S、β-TCP和Dycal的材料浸提液并处理第3代DPCs(C3S、β-TCP、Dycal不同质量浓度组)3 d,MTT比色法检测细胞增殖能力指标光密度值D(490 nm),以不添加材料浸提液的DPCs作为阴性对照组。分别以6.25 mg/mL的C3S、β-TCP和Dycal材料浸提液培养第3代DPCs(C3S、β-TCP和Dycal组),以普通培养液培养的DPCs作为对照组,流式细胞仪检测各组培养后第3天和第6天的细胞周期的变化。结果 MTT检测结果显示:培养后3 d,C3S不同质量浓度组的D(490 nm)均显著高于阴性对照组(P<0.05),C3S 0.625 mg/mL组和6.25 mg/mL组的D(490 nm)达峰值;β-TCP不同质量浓度组的D(490 nm)与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);Dycal 50 mg/mL和100 mg/mL组的D(490 nm)均显著低于对照组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示...     

聚己内酯与左旋聚乳酸共聚物支架的细胞相容性测定及与软骨细胞体外复合的实验研究

目的:测定聚己内酯与左旋聚乳酸共聚物(poly-caprolactone-b-poly L-lactide,简称PCL-b-PLLA)支架的细胞相容性,探讨PCL-b-PLLA作为软骨组织工程支架的可行性. 方法:用MTT比色法测定PCL-b-PLLA支架不同浓度浸提液与L929小鼠成纤维细胞的相容性,观察测定吸光度(A值), 对支架与软骨细胞复合体行电镜观察. 结果:实验组与对照组的A值相比差异无显著性意义(P>0.05), PCL-b-PLLA支架对细胞增殖无明显促进或抑制作用, 不同浓度支架浸提液的细胞毒性评级均为0级, 电镜显示软骨细胞完全平铺于支架的表面,细胞表面有大量微小突起和基质分泌. 结论:体外复合实验显示PCL-b-PLLA支架具有良好的生物相容性,适于软骨细胞贴附生长, 可作为软骨组织工程支架.     

评价细胞毒性方法的探讨

目的:探讨评价细胞毒性的方法.方法:分别采用MTT法、MTS法和传统的血球计数法比较医用高分子材料的浸提液对小鼠成纤维细胞(L-929)相对增殖率的影响.结果:采用3种测定方法测定此类医用高分子材料,均呈现出高的细胞相对增殖率,其细胞毒性为1级,即无细胞毒性.结论:在常规细胞毒性测试法的基础上采用MTT法和MTS法,能更快捷准确地测定细胞的增殖反应.MTS法与MTT法相比较,其灵敏度更高,操作更简便.