MAPK和NF-κB上调脂多糖诱导的小鼠肺微血管内皮细胞Toll-like受体4的表达

目的 观察MAPK和NF-κB在经脂多糖（LPS）诱导的小鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）Toll-1ike受体4（TLR4）表达增强中的作用。方法 分离培养PMVECs。不同浓度的LPS与PMVECs共培养2h，或与LPS（100μg/L）作用不同时间。用ELISA法检测培养上清液中TNF-α含量。分别用ERK抑制剂PD98059和P38MAPK抑制剂SB203580或NF-κB抑制剂PDTC进行干预。用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测TLR4和TNF-α mRNA。用Western-blot检测ERK／P38MAPK和核蛋白NF-κB的表达。结果 在LPS浓度为50～500μg／L时，作用于PMVECs 2h，或LPS100μg/L作用不同时间时，培养上清液中TNF-α含量呈剂量和时间依赖性显著增加（P〈0．01）。PMVECs表达TNF-α及TLR4mRNA增加，6h时达高峰。分别用上述抑制剂均可缓解上述变化，而同时联合使用PD98059和SB203580则进一步增强该抑制作用。上述抑制剂分别缓解LPS诱导的PMVECs表达ERK／P38MAPK和NF-κB蛋白增强。结论 MAPK和NF-κB上调给脂多糖诱导的小鼠PMVECs TLR4的表达。     

二烯丙基三硫通过NF-κB抑制脂多糖诱导小鼠肺组织IL-1β表达

目的探讨核因子-κB(NF-κB)在二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)小鼠IL-1β表达中的作用。方法小鼠随机分为对照组、ALI组、DATS组、DATS预防组和DATS治疗组。RT-PCR检测肺组织中IL-1βmRNA表达。电泳迁移率改变(EMSA)检测肺组织NF-κB活性,Western blot检测肺组织中磷酸化及非磷酸化IκB的表达。结果ALI组小鼠肺组织中IL-1βmRNA表达明显升高(P<0.01),NF-κB活性及磷酸化IκB表达也明显高于对照组(P<0.05)。DATS预防组可显著抑制肺组织中IL-1βmRNA表达(P<0.05)、NF-κB活性及磷酸化IκB表达(P<0.05),但DATS治疗组的抑制效果不明显。结论DATS可通过抑制LPS诱导的IκB磷酸化及随后的NF-κB活化,进而抑制ALI小鼠肺组织IL-1βmRNA表达,这是DATS发挥抗ALI作用的信号传导机制之一。     

Shh、Gli1在脂多糖致小鼠急性肺损伤中的表达及与NF-κB的关系

目的 探讨Sonic hedgehog(SHH)信号通路中Shh、Gli1及核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤中的表达变化。方法 脂多糖腹腔注射复制小鼠急性肺损伤模型,实验动物随机分为实验组(脂多糖5 mg/kg)和对照组。分别于给药后6、12、24 h取肺组织,观察肺组织病理改变、肺湿干重比值(W/D)、RT-PCR和Western blot检测Shh、Gli1的m RNA和蛋白表达,Western blot检测NF-κB的蛋白表达。结果 实验组肺组织病理损伤评分及W/D比值明显高于对照组(P<0.05)。Shh的m RNA表达水平在各时间点均高于对照组(P<0.05),且与时间呈正相关(P<0.01)。6 h时Gli1的m RNA表达水平与对照组无明显差异(P>0.05),12、24 h时明显高于对照组(P<0.01),且与时间呈正相关(P<0.01)。与对照组相比,实验组6、12、24 h时Shh、Gli1的蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),且与时间呈正相关(P<0.01)。NF-κB的蛋白表达在各时间点均明显高于对照组(P<0.05)。结论 脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤中Shh、Gli1表达上调可能是脂多糖通过调控NF-κB来实现的。     

桔梗皂苷D经NF-κB通路抑制炎症及氧化应激反应减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤

目的:探讨桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的保护作用及其机制.方法:将42只雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、桔梗皂苷D对照组、模型组、低剂量桔梗皂苷D组、高剂量桔梗皂苷D组和地塞米松组,每组7只.除假手术组和桔梗皂苷D对照组外,其余各组以气道滴注脂多糖诱导大鼠急性肺损伤模型.观察造模前后大鼠一般情况.造模2...     

MyD88/PI3-K/NF-κB途径介导脂氧素A4拮抗LPS诱导大鼠内皮细胞的白细胞介素合成

目的研究脂氧素A4（LXA4）对脂多糖（LPS）诱导血管内皮细胞合成白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8的影响，并探讨其机制。方法对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC），用LXA4孵育，再加入LPS；或单用LPS刺激PMVEC。在孵育后用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清中的IL-1β、IL-6、IL-8蛋白表达；用RT-PCR法检测IL-1β、IL-6、IL-8的mRNA表达。应用Western blot法检测磷酸化的磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3-K）、髓细胞分化因子88（MyD88）的表达。应用凝胶电泳迁移率试验（EMSA）测定核因子-κB（NF-κB）和活化蛋白-1（AP-1）的DNA结合活性。结果LXA4呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的PMVEC的IL-1β、IL-6、IL-8的蛋白合成与mRNA表达，抑制PI-3K的表达，抑制NF-κB和AP-1的DNA结合活性，但不影响LPS诱导的MyD88表达。结论LXA4通过下调PI3-K的表达和NF-κB、AP-1的DNA结合活性，拮抗LPS对PMVEC的IL-1β、IL-6、IL-8合成的诱导作用。     

二烯丙基三硫通过NF-κB抑制LPS诱导小鼠肺组织IL-1β表达

目的探讨核因子-KB（NF-KB）在二烯丙基三硫（DATS）抑制脂多糖（LPS）致急性肺损伤（Au）小鼠IL-1β表达中的作用。方法小鼠随机分为对照组、ALI组、DATS组、DATS预防组和DATS治疗组。RT．PCR检测肺组织中IL-1βmRNA表达。电泳迁移率改变（EMSA）检测肺组织NF—KB活性，Western blot检测肺组织中磷酸化及非磷酸化IKB的表达。结果Au组小鼠肺组织中IL-1βmRNA表达明显升高（P〈0．01），NF-KB活性及磷酸化IKB表达也明显高于对照组（P〈0．05）。DATS预防组可显著抑制肺组织中IL-1βmRNA表达（P〈0．05）、NF—KB活性及磷酸化IKB表达（P〈0．05），但DATS治疗组的抑制效果不明显。结论DATS可通过抑制LPS诱导的IKB磷酸化及随后的NF-KB活化，进而抑制ALI小鼠肺组织IL-1βmRNA表达，这是DATS发挥抗ALI作用的信号传导机制之一。     

NF-κB与危重病治疗

核因子 κB (NF κB)为一种参与多种炎症介质基因表达的转录因子。NF κB过度及长时间激活与许多炎性疾病 ,包括脓毒性休克、急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)、缺血及再灌注损伤等有关。为减轻组织和器官损伤 ,NF κB在调控炎症中的重要作用使之成为一个治疗目标。通过基因治疗策略或药物抑制导致NF κB活化中的关键步骤 ,能调控NF κB信号转导。     

丙酮酸乙酯对LPS致急性肺损伤大鼠肺组织NF-κB p65及TNF-α和IL-lβ的影响

目的:观察丙酮酸乙酯(EP)对内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织核转录因子-κB(NF-κB)p65表达及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)含量的影响,探讨EP可能的肺保护机制。方法:雄性SD大鼠30只随机分为三组(n均=10):正常对照组,静脉注射与其它二组等量生理盐水;LPS组,静脉注射脂多糖(LPS)5mg/kg复制大鼠ALI模型;EP+LPS组,于静脉注射LPS前1h腹腔内注射EP(40mg/kg)。所有动物于注射LPS或生理盐水后4h颈动脉放血处死,取肺组织用Westernblot测定其NF-κBp65的表达,用ELISA测定其TNF-α和IL-1β的含量。结果:与对照组相比,LPS组、EP+LPS组肺组织NF-κBp65表达增加,肺组织TNF-α和IL-lβ含量升高(P0.05);与LPS组相比,EP+LPS组肺组织NF-κBp65表达降低,肺组织TNF-α和IL-lβ含量降低(P0.05)。结论:EP通过下调大鼠LPS诱导的肺组织NF-κBp65表达,降低了TNF-α和IL-lβ的释放。EP可减轻ALI大鼠肺的炎症反应。     

双歧杆菌DNA对小鼠巨噬细胞中PKC和NF-κB的影响

目的：探讨青春型双歧杆菌的DNA对巨噬细胞中6种PKC和NF-κB的影响。方法：通过激光共聚焦显微镜观察小鼠腹腔巨噬细胞中PKCα、PKCβI、PKCβII、PKCγ、PKCε和PKCζ的荧光强度,以免疫细胞化学染色法检测巨噬细胞中NF-κB^＋细胞的密度。结果：双歧杆菌DNA注射组小鼠腹腔巨噬细胞中,PKCα和PKCβII的平均荧光强度明显高于对照组（P〈0.01）;而PKCβI、PKCγ、PKCε和PKCζ的平均荧光强度在两组间则无统计学意义（P〉0.05）。双歧杆菌DNA注射组巨噬细胞中,NF-κB^＋细胞的密度显著高于对照组（P〈0.01）。结论：青春型双歧杆菌的DNA可通过活化PKCα、PKCβII和NF-κB来激活巨噬细胞。     

脂多糖诱导大鼠心肌细胞NF-κB、IκB-α的表达及意义

目的研究脂多糖(LPS)诱导大鼠心肌细胞NF-κB,IκB-α的表达及意义。方法100ng/mlLPS刺激心肌细胞0、0.5、1、2、4、6、8h和0、10、50、100ng/mlLPS刺激1h,免疫细胞化学检测NF-κBp65的表达,Westernblot检测IκB-α表达。结果LPS的刺激迅速激活心肌细胞NF-κBp65的表达,于1h时达高峰;IκB-α的表达先降低,后升高。结论LPS可诱导大鼠心肌细胞NF-κB的激活,并通过激活心肌细胞核因子-κB途径从而促进细胞损伤。     

siRNA对小鼠血管内皮细胞NF-κB p65表达的抑制作用

探索RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术在抑制血管内皮细胞激活中的应用前景.利用阳离子脂质体LipofectamineTM000作为转染试剂将化学合成的小鼠NF-κB p65的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染人小鼠EOMA细胞,RT-PCR测定细胞内NF-κB p65 mRNA表达,Westem blot检测细胞内NF-κB p65蛋白水平.同时观察siRNA对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的NF-κB激活的抑制作用.结果显示在转染siRNA后的第24小时,细胞内NF-κB p65mRNA水平降低,蛋白表达量明显减少,而在第48小时、72小时细胞内NF-κB p65蛋白已经无法测出;在TNF-α刺激后,转染siRNA的细胞组内NF-κB p65的表达也明显受到抑制.说明RNAi技术可以抑制NF-κB p65的表达,为进一步研究血管内皮细胞的保护提供了有效的方法.     

NF-κB在急性胰腺炎中的研究进展

NF-κB(转录因子核因子-κB)是一类主要参与机体炎性分子表达调控的转录分子，在急性胰腺炎中，其表达也受到很大的影响，苓主要对近几年NF-κB在急性胰腺炎中的研究作一综述。     

辛伐他汀通过调控HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对内毒素诱导大鼠急性肺损伤的保护作用

目的 探讨辛伐他汀对内毒素诱导的急性肺损伤大鼠保护作用及机制。方法 45只10周龄成年SD雌性大鼠,按随机数字表法平均分为对照组（Control）、急性肺损伤模型组（ALI）和辛伐他汀治疗组（BFTT）,检测支气管灌洗液中总细胞和嗜中性粒细胞数量及肺组织湿/干重量;HE染色观察肺组织病理学改变;ELISA方法检测BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α水平以及肺组织中SOD和MDA的水平;Western blot检测肺组织HMGB1、TLR4和NF-κB的表达。结果 辛伐他汀治疗降低ALI大鼠W/D比值、BALF中的嗜中性粒细胞、总细胞数量及MDS活力,升高SOD活力;改善ALI大鼠肺组织病理变化,抑制HMGB1、TLR4和NF-κB蛋白表达。结论辛伐他汀可以抑制内毒素引起的急性肺损伤,该作用可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。     

槲皮素对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织NF-κB表达的影响

目的观察槲皮素对脓毒症相关急性肺损伤(ALI)大鼠的炎症信号转导通路NF-κB p65的影响。方法选用健康雄性Wistar大鼠36只,随机均分为4组:对照组、脂多糖(LPS)组、槲皮素低剂量组(30mg/kg),槲皮索高剂量组(50mg/kg),用LPS 10mg/kg溶于生理盐水2ml腹腔内注射,建立脓毒症ALI大鼠模型,对照组予等量生理盐水2ml腹腔注射,治疗组于造模前30min腹复腔注射槲皮素,所有实验动物于造模后24h应用10%水合氯醛4ml/kg腹腔注射进行麻醉,并处死。所有大鼠取肺组织进行苏木素-伊红(HE)染色,观察病理学改变并进行病理评分且对比,应用免疫组化及Western blot检测NF-κB p65在肺组织的表达。结果与对照组相比,LPS组的肺损伤明显,病理评分明显增加(P0.05);较LPS组,槲皮素治疗组肺组织HE病理染色明显改善,病理评分显著下降(P0.05),但两个治疗组之间病理评分无统计学差异。与对照组比较,LPS组的免疫组化及Western blot检测的NF-κB p65含量明显增高(P0.05),而槲皮素治疗组比LPS组NF-κB p65含量明显下降(P0.05),但两治疗组比较无明显差异。结论槲皮素对脓毒症ALI大鼠的肺脏保护作用可能与其抑制NF-κB p65的表达相关。     

PDTC抑制大鼠重症急性胰腺炎肺损伤NF-κB的激活

目的观察重症急性胰腺炎(SAP)大鼠NF-κB在胰、肺组织内的表达情况,探讨其与肺损伤的关系。方法SD大鼠45只,随机分为对照组、SAP组、牛磺胆酸钠(二硫代氨基甲酸吡咯烷pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)预处理组(各组再分为3、6、12h3个亚组,对照组n=3,模型组n=6)。采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法建立重症胰腺炎模型,预处理组在建立模型前1h腹腔内注PDTC(100mg/kg)。取胰、肺组织行病理观察,免疫组化SP法观察NF-κB表达情况。结果对照组仅少量肺泡间质细胞表达NF-κB;SAP组与PDTC预处理组NF-κB阳性细胞数明显增加(P<0.05),并呈动态变化,6h达高峰,PDTC预处理6h和12h组明显低于SAP组(P<0.05),阳性信号主要位于胰腺腺泡细胞、中性粒细胞、单核/巨噬细胞、支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞胞浆和胞核内。结论PDTC可能通过抑制NF-κB的激活减轻重症急性胰腺炎并发肺损伤。     

黄芪多糖通过NF-κB诱导巨噬细胞产生NO和TNF-α

Objective To explore the molecular and cell signal transduction mechanism of Astragalus mongholicus polysaccharides (ASP) on macrophage. Methods After stimulating RAW264.7, the change in value of NF-κB was determined by Western blot. The induction of NO and secretion of TNF-α by ASP in macrophage was observed with or without inhibitor of NF-κB using Griess method. Moreover, protein levels of TNF-α secreted by macrophage were investigated with ELISA in respond to ASP. Results 4 h after stimulation by 100 μg/ml ASP, the concentration of NF-κB in nucleus increased significantly, peaked at 6 h. 16 h after stimulation by 100 μg/ml ASP, the activity of iNOS[(23.54±2.41) U/mg protein; P<0.01], producton of NO [(18.9±1.5)μmol/L, P<0.01] and level of TNF-α[(81.2±16.7)pg/ml, P<0.0l] in macrophage were improved markedly. Blocking NF-κB with inhibitor results in decreased levels of NO and TNF-α. Conclusion The results suggest that NF-κB play an important role in induction of NO and TNF-α by ASP in macrophage.     

黄芪多糖通过NF-κB诱导巨噬细胞产生NO和TNF-α

Objective To explore the molecular and cell signal transduction mechanism of Astragalus mongholicus polysaccharides (ASP) on macrophage. Methods After stimulating RAW264.7, the change in value of NF-κB was determined by Western blot. The induction of NO and secretion of TNF-α by ASP in macrophage was observed with or without inhibitor of NF-κB using Griess method. Moreover, protein levels of TNF-α secreted by macrophage were investigated with ELISA in respond to ASP. Results 4 h after stimulation by 100 μg/ml ASP, the concentration of NF-κB in nucleus increased significantly, peaked at 6 h. 16 h after stimulation by 100 μg/ml ASP, the activity of iNOS[(23.54±2.41) U/mg protein; P<0.01], producton of NO [(18.9±1.5)μmol/L, P<0.01] and level of TNF-α[(81.2±16.7)pg/ml, P<0.0l] in macrophage were improved markedly. Blocking NF-κB with inhibitor results in decreased levels of NO and TNF-α. Conclusion The results suggest that NF-κB play an important role in induction of NO and TNF-α by ASP in macrophage.     

多黏菌素B对内毒素诱导的肺泡巨噬细胞中NF-κB活化的影响

目的 :观察多黏菌素B(PMB)对内毒素 (LPS)刺激大鼠肺泡巨噬细胞 (PAM)中核因子 κB(NF κB)激活通路的影响 ,并探讨PMB可能的抗炎效应。方法 :分离、培养大鼠PAM ,分为正常对照组、LPS刺激组及PMB +LPS干预组。各组PAM在刺激后 0、15、30、6 0、12 0和 2 4 0min分别固定 ,提取PAM核蛋白并收集细胞培养上清 ,采用原位杂交 (ISN)技术、凝胶电泳迁移率改变 (EMSA)及ELISA法 ,观察PAM中IKK βmRNA及IκB α的表达 ,检测PMB核蛋白提取物中NF κB的活性和上清液中TNF α的含量。结果 :LPS刺激组IKK βmRNA的水平 ,显著高于刺激前和正常对照组 (P <0 .0 1) ;IκB α的水平的变化趋势与IKK βmRNA刚好相反。NF κB活性的峰值相对于刺激前和正常对照组有显著升高 (P <0 .0 1)。培养上清中TNF α的含量 ,亦显著高于刺激前和正常对照组(P <0 .0 1)。PMB干预组NF κB的活性与TNF α的含量虽较刺激前和正常对照组升高 ,但均显著低于LPS刺激组 (P <0 .0 1)。IκB α水平的最低值显著高于LPS刺激组 (P <0 .0 1) ;而IKK βmRNA的峰值则显著低于LPS刺激组 (P <0 .0 1)。结论 :LPS能诱导PAM中的IKK β激活、IκB α降解和NF κB活化 ,并促进TNF α释放。PMB则能抑制LPS诱导的IKK β激活、IκB α降解、NF κB活化和TNF α     

肝X受体激动剂对脂多糖诱导的炎症反应相关因子IRAK-4和NF-κB的影响

目的:观察在枯否细胞中人工合成的肝X受体激动剂在脂多糖(LPS)诱导的炎症反应中,对白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)和核因子NF-κB的影响.方法:雄性昆明小鼠,用胶原酶原位灌注法分离和培养肝脏Kupffer细胞,获得的细胞随机分为正常对照组、 LPS处理组、 LXR人工合成激动剂T0901317处理组和LPS+T0901317共同处理组.实时-聚合酶链式反应和蛋白Western blot检测各组细胞LXR、 IRAK-4和NF-κB的 mRNA和蛋白表达水平;凝胶电泳迁移率(EMSA)检测NF-κB活性水平.结果:LXR mRNA和蛋白在T0901317组表达都是最高的,而在LPS处理组最低.IRAK4和NF-κB的mRNA和蛋白水平在LPS处理组最高,联合处理组要低于LPS处理组.NF-κB的活性在LPS最高,联合处理组和T0901317处理组都较LPS组降低.结论:LXR激动剂能有效的上调LXR基因和蛋白水平,同时抑制TLR4信号通路中IRAK-4和NF-κB的mRNA水平和蛋白表达水平,并且能抑制NF-κB的活化.