何首乌生品及不同炮制品中大黄素含量的测定结果分析

目的：对何首乌生品及不同炮制品中大黄素含量的测定结果进行分析探讨,为此药的临床应用提供可靠的参考依据。方法：以2010年版《中国药典》和《本草纲目》中的方法对何首乌进行炮制,用高效液相色谱法对何首乌生品及用不同炮制方法获得的何首乌水提液、醇提液中大黄素的含量进行测定,并对测定结果进行对比分析。结果：何首乌生品中大黄素的含量最高,九蒸九晒何首乌中大黄素的含量最低。进行水提物测定的结果显示,何首乌生品与九蒸九晒何首乌中大黄素的含量相比,差异明显（P<0.05）,有统计学意义。进行大黄素醇提取物测定的结果显示,何首乌生品与黑豆汁制首乌、九蒸九晒何首乌中大黄素的含量相比较,差异显著（P<0.05）,有统计学意义。结论：不同炮制方法制得的何首乌中大黄素的含量存在一定的差异性。何首乌生品中大黄素的含量最高。     

氟对人胚肝细胞氧化应激、DNA损伤及凋亡的影响

目的 研究氟对人胚肝细胞(L—02细胞)氧化应激、DNA损伤及诱导凋亡的作用。方法 体外培养的L-02细胞接触40、80、160μg／ml氟化钠24h，检测L—02细胞脂质过氧化物(LPO)水平，还原型谷胱甘肽(GSH)含量，DNA损伤率，细胞凋亡率和周期构成比的情况。结果 氟可使L—02细胞LPO水平升高，GSH含量下降，并且二者均与氟浓度呈明显的剂量-效应关系；氟可使L—02细胞DNA损伤率、凋亡率和S期细胞数明显升高，高剂量氟组DNA损伤率和凋亡率与低剂量氟组之间存在显著性差异。结论 氟可致L—02细胞出现氧化应激，引起DNA损伤，诱导细胞凋亡，并且三者之间存在明显的相关关系。     

RP-HPLC法测定生、制首乌中二苯乙烯苷和大黄素的含量

目的研究何首乌炮制前后二苯乙烯苷和大黄素的变化规律。方法采用HPLC法测定生、制首乌中大黄素和二苯乙烯苷含量。结果何首乌及两种制何首乌中二苯乙烯苷的含量分别为：5.512%、3.538%和3.811%;大黄素的含量分别为：0.094%、0.126%和0.119%。结论采用RP-HPLC法测定生、制首乌中二苯乙烯苷和大黄素的含量,可为何首乌及制何首乌饮片的质量控制及何首乌饮片炮制工艺的规范化提供依据,具有推广应价值。     

体外胆红素对L-02细胞生长与凋亡的影响

目的探讨胆红素对正常人肝细胞系L-02生长及凋亡的影响。方法将不同浓度的胆红素(终浓度分别为0、100、150、200、250、300 mg/L)作用于体外培养的正常人肝细胞L-02,分别通过光镜、Hoechst 33258荧光染色、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪Annexin-V和PI双标等技术观察不同浓度胆红素对L-02细胞的相对存活率的影响、细胞的凋亡梯度和凋亡率。结果经不同浓度胆红素溶液作用后,L-02细胞的增殖能力明显下降,其作用呈剂量依赖性;光镜观察显示凋亡细胞变圆,体积缩小;Hoechst 33258荧光强染;MTT法发现细胞生长受到抑制;经琼脂糖凝胶电泳发现200、250、300 mg/L胆红素溶液组可见到DNA梯形条带;流式细胞仪检测示各实验组细胞凋亡率为(1.24±0.72)%、(5.88±1.66)%、(19.69±3.52)%、(31.11±6.94)%、(57.3±8.71)%;均明显高于对照组细胞凋亡率(1.16±0.58)%(P<0.01)。结论胆红素可抑制L-02细胞生长并诱导其凋亡。     

何首乌不同炮制品对肝癌细胞HepG2凋亡影响

目的:研究何首乌不同炮制品对肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法:对何首乌进行清蒸32 h,黑豆拌蒸8 h、16 h、32 h,制成何首乌不同炮制品;30只大鼠随机分为空白对照组、清蒸何首乌组、黑豆汁制首乌A组(18 h)、黑豆汁制首乌B组(16 h)、黑豆汁制首乌C组(32 h)5组。用微板法检测何首乌不同炮制品对血液生化指标的影响;用MTT法和流式细胞术观察何首乌不同炮制品对细胞凋亡的影响。结果:与空白对照组相比,大鼠灌服何首乌不同炮制品后,大鼠含药血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)无显著性差异;天门冬氨酸氨基转移酶(AST)均升高;含药血清对肝癌细胞抑制率显著增强,肝癌细胞凋亡情况明显。而且,何首乌清蒸32 h肝细胞损伤大于黑豆汁制首乌32 h,黑豆汁制首乌32 h肝细胞损伤大于黑豆汁制首乌16 h。结论:何首乌不同炮制品均可引起不同程度的肝脏损伤,黑豆汁制首乌16 h肝细胞损伤相对较小。     

大黄素对肝星状细胞凋亡及胞内钙离子浓度的影响

目的观察大黄素对HSC-T6细胞凋亡及胞内钙离子浓度的的影响。方法将培养细胞分成正常组和大黄素不同浓度干预组(大黄素终浓度分别为10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L),采用流式细胞仪观察各组细胞凋亡率;采用激光共聚焦显微镜检测胞内钙离子浓度的变化。结果不同浓度大黄素诱导HSC-T6的凋亡率分别为4.0±0.5%、4.3±0.6%、6.9±1.1%,与正常组比较有显著性差异(P<0.05);不同浓度大黄素导致HSC-T6细胞胞内钙离子浓度明显增高,其变化率分别为102.50%、125.10%、215.00%,与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论大黄素有诱导HSC-T6细胞凋亡的作用,其机制可能与引起HSC-T6钙超载有关。     

芡实正丁醇部位分离组分对H_2O_2诱导的PC12细胞的神经保护作用及其机制研究

目的研究芡实正丁醇部位的聚酰胺柱分离组分对H_2O_2损伤的PC12细胞的神经保护作用,探讨其对阿尔茨海默病潜在的预防治疗作用及其可能的机理。方法体外培养PC12细胞株,加入浓度为200μmol/L的H_2O_2损伤细胞8h,建立氧化损伤模型,将芡实不同浓度的乙醇提取物分别作用于细胞后,采用MTT法检测各组分对细胞存活率的影响,用试剂盒测定细胞液中SOD活力、MDA含量,RT-PCR检测细胞内APP、BACE-1、GSK-3β的mRNA表达水平。结果与模型组相比,芡实正丁醇部位50%、70%、95%乙醇的洗脱物均能显著改善H2O2损伤的PC12细胞的存活率(P0.05),70%、95%乙醇的洗脱物均能显著增加细胞液中SOD酶的活力,减少MDA的释放(P0.05),下调GSK-3βmRNA表达量(P0.01)。结论芡实正丁醇聚酰胺柱70%、95%的乙醇洗脱物对氧化应激损伤的PC12细胞具有显著的保护作用,其作用机制可能与增加SOD酶活力、减少MDA释放、抑制Aβ累积相关的GSK-3β基因表达有关。     

基于SREBP1的制何首乌抗肝癌脂代谢蒽醌类活性成分的筛选

目的:通过筛选制何首乌抗肝癌蒽醌类活性成分,为其降脂抗癌作用及其机制研究提供实验依据。方法:MTT法检测制何首乌主要蒽醌类成分对肝癌细胞Bel-7402活力的影响;RT-qPCR及Western blot检测对肝癌细胞脂代谢关键因子SREBP1(Sterol regulatory element binding protein 1)mRNA和蛋白的影响。结果:制何首乌蒽醌类成分对肝癌细胞抑制作用排序为:大黄素>大黄酸>芦荟大黄素>大黄素甲醚>大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷>大黄酚,其中大黄素甲醚、大黄素和大黄酸抑制SREBP1 mRNA和蛋白水平的表达。结论:制何首乌中蒽醌类成分对肝癌细胞作用各异,鉴于大黄素在制首乌中含量最高,大黄素可能在制何首乌抑制肝癌脂代谢中发挥主要作用。     

莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞凋亡的拮抗机制

目的研究莲房原花青素（LSPC）对乙醇诱导的人胚肝细胞株L－02凋亡的拮抗作用机制。方法观察5、10、25mg／L的LSPC与200mmol／L乙醇共同作用于肝细胞L-0224h后，对细胞生存率、凋亡率的影响，对细胞凋亡通路的相关基因MAPK38、Caspase3、p53以及生长抑制DNA损伤诱导基因（growth arrest and DNA damage-inducible gene，GADD）GADD34、GADD45β、GADD153表达的影响。结果与乙醇组相比，5mg／L和10mg／L LSPC使细胞的生存率由73．14％上升到84．79％和90．52％。通过抑制细胞p53和Caspase3通路，并通过降低DNA损伤而降低GADD34、GADD45β、GADDl53的表达（P〈0．01），从而有效降低细胞的凋亡率。从11．54％分别降至8．21％和9．10％（P〈0．05）；抑制凋亡率的效果以LSPC5mg／L组最佳，10mg／L组效果次之，但高剂量组（25mg／L）对乙醇所致凋亡的拮抗作用不明显，对细胞生存率也无影响。乙醇和LSPC处理均不影响L～02细胞的MAPK38表达。结论适当浓度的莲房原花青素对乙醇诱导的肝细胞L-02的凋亡有拮抗作用。其抑制凋亡的作用主要是通过p53、Caspase3和GADD途径，而与MAPK途径无关。     

氧化型辅酶Ⅰ抗辐射损伤作用及其量效关系的初步实验

目的 探讨氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)抗辐射损伤作用及其量效关系.方法 L02人正常肝细胞株加入含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中常规方法培养,X线照射后和在照射后即刻加入NAD+,采用MTT法检测细胞活性,TUNEL法检测细胞凋亡,观察X线照射对L02人正常肝细胞的辐射损伤,并观察NAD+对受照射L02肝细胞辐射损伤的影响作用及其与NAD+浓度的关系.结果 L02人正常肝细胞受X线照射后细胞损伤随照射吸收剂量的增大而加重,受照射后24 h细胞抑制作用最显著,细胞损伤多表现为细胞凋亡;加入NAD+可提高受照射细胞存活率,其作用在NAD+终浓度为100～1000μg/ml范围内与浓度呈正相关,在浓度大于1000 μg/ml后,加大浓度并不再显著增加受照射细胞的存活率.结论 NAD+具有一定的抗细胞辐射损伤作用,其作用在一定范围内与其浓度呈正相关关系.     

生、制首乌醇提物对小鼠肝脏的影响

目的:观察炮制对何首乌醇提物不同剂量长期给药对小鼠肝脏的影响。方法:生首乌醇提物、制首乌醇提物按大、中、小剂量灌胃,连续60 d,对受试动物进行血液生化指标及病理组织学的检测。结果:生首乌醇提物小剂量肝指数、病理学积分与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01),其他各给药组仅见趋势;生、制首乌醇提物各剂量组血液生化指标与空白组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:生首乌醇提物临床等效量连续给药60d,对小鼠肝脏存在损伤。     

异地栽培对何首乌活性成分的影响研究

目的探讨环境因素对何首乌活性成分的影响。方法以9个居群何首乌为试验材料,研究异地栽培前后何首乌活性成分含量的变化。结果异地栽培后何首乌中大黄素（P〈0.01）和2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（P〈0.05）的含量与原产地相比有显著性差异,大黄素甲醚含量不因栽培环境改变而发生明显变化。结论何首乌化学成分的差异是由种质因素和环境因素共同作用的结果。     

何首乌对记忆和抗疲劳作用的实验研究

目的研究何首乌对小鼠学习记忆的影响及其抗疲劳作用。方法采用跳台试验、水迷宫实验与爬杆试验、负重游泳试验和肝糖原测定（抗疲劳作用）,分别观察低、中、高剂量（2.6、7.8、23.4g/kg）何首乌提取物对小鼠改善记忆作用和抗疲劳作用的影响。结果①跳台实验结果显示高剂量组在第1天测试和24h后重测试时,动物平均错误次数显著减少（P〈0.05）;水迷宫实验结果显示高剂量组动物平均错误次数减少（P〈0.05）。②在抗疲劳实验中,爬杆试验的结果显示中高剂量的何首乌提取物能够显著延长小鼠在有机玻璃杆上的坚持时间（P〈0.05）。负重实验发现高剂量组动物负重游泳的生存时间与正常组相比明显延长,解剖后的肝糖原测定发现低剂量组肝糖原量明显降低。结论 23.4g/kg的何首乌对小鼠的记忆获得有改善作用,用药量大于7.8g/kg的何首乌对抗疲劳功能有明显改善作用。     

何首乌提取液益生茵发酵前后化学成分变化研究

目的：采用反相HPLC建立何首乌提取液益生菌发酵前后指纹图谱,观察何首乌提取液发酵前后化学成分变化与活性的相关性。方法：以AgilentZORBAXSB—AQ（4．6mm×150mm,5．0μm）为色谱柱,以A（乙腈）和B（0．1％磷酸）为流动相梯度洗脱．流速0．8mL·min-1,柱温20℃,检测波长254nm。结果：建立了有13个共有峰的HPLC色谱图,并比较了色谱峰相对峰面积的变化。结论：何首乌提取液经益生菌发酵后化学成分的变化较大,中药经过发酵可通过多途径影响化学成分,进而改变药物的药理药效。     

水红花子总提取物及各化学部位体外抗肿瘤活性研究

目的:研究水红花子乙醇总提取物(SH1)及各化学部位对人肺高转移细胞株95D增殖的抑制作用,筛选水红花子抗肿瘤主要活性部位.方法:以人肺高转移细胞株95D作为实验用细胞株,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比象(MTT)法对水红花子总提取物(SH1)、石油醚部位(SH2)、乙酸乙酯部位(SH3)、丙酮部位(SH4)和甲醇部位(SH5)进行抗肿瘤活性研究.结果:水红花子各化学部位对人肺高转移细胞株95D有明显的抑制作用,水红花子乙酸乙酯部位和丙酮部位的半数抑制浓度分别为199.1 mg·L-1、261.2 mg·L-1.结论:水红花子乙酸乙酯部位和丙酮部位对人肺高转移细胞株95D细胞增殖的抑制作用较强,为水红花子主要活性部位.     

大黄素对高糖环境下系膜细胞收缩功能的影响

目的 探讨高糖环境下大黄素能否通过抑制系膜区p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的过度活化而改善系膜细胞的收缩功能。方法 培养系膜细胞,调整培养液为以下5组：正常糖组（糖浓度5.6mmol/L,NG组）、高糖组（糖浓度30mmol/L,HG组）、低质量浓度大黄素组（50mg/L大黄素+高糖,LE组）、高质量浓度大黄素组（100mg/L大黄素+高糖,HE组）和过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）抑制剂GW9662组（10μmol/L GW9662+高糖+高质量浓度大黄素,GW组）。系膜细胞收缩力以细胞收缩前后表面积的变化表示,采用Western blot和Real time PCR法测定p38MAPK的活性及PPARγ的表达水平。 结果 高糖组p38 MAPK的活性增加,系膜收缩功能明显下降（P<0.05）;大黄素组能明显抑制p38MAPK的过度活化进而改善系膜细胞的收缩功能,且具有剂量依赖性（50mg/L大黄素组p38活性降低了40%,100mg/L组降低了73%,P均<0.05）;大黄素组PPARγmRNA水平及其蛋白水平均明显升高（P均<0.05）;PPARγ抑制剂GW9662能有效地阻断大黄素所产生的保护效应（P<0.05）。结论 高糖环境下,大黄素通过激活PPARγ抑制系膜区p38MAPK的过度活化进而改善系膜细胞的收缩功能。     

三种黎药的急性毒性研究

目的:观察辣蓼、薜荔和三叉苦等三种黎药水提物的急性毒性反应。方法:三种黎药水提物对小鼠进行灌胃给药,观察并记录小鼠急性毒性反应和死亡率,采用改良寇氏法测半数致死量LD50。结果:测得辣蓼LD50为128.3g.kg-1(相当于成人一次用量的256.6倍),LD5095%可信限为(111.1～139.7)g.kg-1,10d后存活小鼠体重平均增加22.2%。以最大给药量灌胃薜荔(213.6g.kg-1)和三叉苦(168.0g.kg-1),小鼠无死亡,12d后平均体重分别增加28.3%、28.5%。结论:薜荔和三叉苦口服无毒,而辣蓼毒性很小。     

炮制对何首乌小鼠急性毒性的影响

目的：生、制首乌水提液、醇提液对小鼠的急性毒性考察。方法：采用LD50、MLD急性毒性实验方法分别测定生、制首乌水提液、醇提液口服最大给药量、半数致死量。结果：生首乌醇提物的LD50为287.87g.kg-1,制首乌醇提物的606.88g.kg-1。生首乌水提物最大给药量为184g.kg-1,制首乌水提物最大给药量为264g.kg-1。结论：何首乌炮制前后的醇提液对小鼠均有一定的毒性,其中生首乌醇提液急性毒性大于制首乌醇提液。     

发酵何首乌的化学成分研究与鉴定

目的探讨经微生物发酵何首乌前后药理作用改变的物质基础,对发酵后的何首乌化学物质成分进行分离和鉴定.方法经微生物发酵后的何首乌药材分别通过乙酸乙酯和正丁醇的提取,并对提取物进行硅胶柱正相分离方法得到化学成分.结果在发酵何首乌中通过光谱分析法鉴定得到6个化学成分,分别为w-羟基大黄素,大黄素,大黄素甲醚,正丁基-β-D-吡喃果糖,大黄酚,决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷.结论微生物发酵何首乌中主要的化学成分为大黄素和大黄素甲醚,化学成分与生何首乌相比没有发生明显的变化.     

制何首乌标准饮片的均匀化工艺研究

目的 优选制何首乌标准饮片的均匀化工艺.方法 以出粉率为指标进行单因素考察,再在此基础上设计L9(34)正交试验,以出粉率、粒度跨距、醇溶性浸出物、二苯乙烯苷和游离蒽醌的质量分数,以及指纹图谱总峰面积为指标,对投药体积、单次打粉时间、打粉次数3个影响因素进行考察,优选制何首乌标准饮片的均匀化工艺. 结果 优选出最佳均匀化工艺条件为:投药体积占打粉机体积的2/3,单次打粉40 s,打粉2次. 结论 优选出的最佳均匀化工艺稳定,合理可行,可为制何首乌标准饮片均匀化技术规范的制定提供参考依据.