选择性消化道灭菌对急性胰腺炎肠源性内毒素血症的预防作用

目的探讨选择性消化道灭菌(SDD)对肠源性内毒素血症的预防作用.方法 Wistar大鼠60只,胰管逆行灌注法复制急性坏死性胰腺炎(ANP)模型,设立正常对照组、假手术组、ANP组和SDD治疗组(ANP后喂服三联抗生素),记录发病72小时组织学、血清TNFα、IL-1β、肠道菌群、血浆D-乳酸(肠通透性指标)和内毒素含量及病死率. 结果 SDD使ANP胰腺和小肠病理改变减轻,TNFα水平下降(P<0.01).ANP时肠道大肠杆菌等条件致病菌过度繁殖,双歧杆菌数量减少,SDD抑制了致病菌的繁殖,双歧杆菌数量不变,双歧杆菌/大肠杆菌比值(B/E值)回升(P<0.01).SDD组血浆D-乳酸由(8.05±3.05) mg/L降至(3.95±1.83) mg/L(P<0.01),门静脉内毒素由(0.423±0.155) EU/ml下降至(0.227±0.084) EU/ml(P<0.01).ANP组72小时病死率为58.8%,SDD组为14.3%(P=0.005).结论 SDD可减少肠道革兰氏阴性菌含量,保护正常菌群,维护肠屏障,减轻了ANP时肠源性内毒素血症,有助于提高ANP的生存率.     

肝脏Toll样受体4的激活与小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤的关系

目的探讨TOLL样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)的激活与肝缺血再灌注损伤的关系.方法以BALB/c小鼠复制肝脏部分缺血再灌注损伤模型,采用免疫组织化学法观察TLR4在肝脏的分布和表达量,同时监测血浆丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)及门静脉血清内毒素(endotoxin,EN)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的变化;再以TLR4先天性缺损小鼠C3H/Hej和野生型鼠C3H/Heouj为模型,观察ALT和门静脉血清TNF-α的变化.结果 1. BALB/c小鼠肝脏左中叶缺血1 h后,再灌注1、3 h,缺血肝叶内TLR4表达增加,且再灌注1 h最强,阳性细胞主要是枯否细胞及血管内中性粒细胞;2.门静脉血清EN在各时间点与假手术组相比无显著差异(P>0.05);3.再灌注3 h,TNF-α较假手术组升高[Hej(152±43)pg/ml vs. (18±10)pg/ml,n=6,t=5.26,P<0.01;Heouj(249±52)pg/ml vs. (25±13)pg/ml,n=6,t=7.24,P<0.01];4. Hej组小鼠肝功能损伤轻于Heouj组小鼠[再灌注1 h(662±106)pg/ml vs. (1 216±174)pg/ml,n=6,t=4.21,P<0.01;再灌注3 h(1 145±132)pg/ml vs. (2 958±187)pg/ml,n=6,t=13.72, P<0.01],且再灌注3 h其血清TNF-α水平明显低于Heouj组小鼠[(152±43)pg/ml vs. (249±52)pg/ml,n=6,t=3.94,P<0.01].结论 TLR4受体在肝脏缺血再灌注损伤过程中被激活,通过TNF-α等细胞因子介导参与了肝脏缺血再灌注损伤的过程.     

肺泡巨噬细胞活化在急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤中的作用

目的　探讨肺泡巨噬细胞活化在急性坏死性胰腺炎 (ANP)肺损伤中的作用。　方法30只成年SD大鼠随机分为正常对照组、ANP后 1、3、6、12h组 ,每组 6只。逆行性胰胆管注射 3%牛磺酸钠建立ANP大鼠模型 ,正常对照组大鼠自胆胰管内逆行注入生理盐水。经支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞 ,检测支气管肺泡灌洗液中蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶 (MPO)水平、肺泡巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNFα)及一氧化氮 (NO)水平。以反转录聚合酶链反应 (RT PCR)法测定肺泡巨噬细胞TNFαmRNA、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA表达情况。行肺、胰腺组织病理学检查并评分。结果　ANP大鼠肺损伤随着病情进展而逐渐加重 ;肺组织MPO及支气管肺泡灌洗液中蛋白含量逐渐升高 ,12h达最高值 ,分别为 (10 78± 0 5 8)U/g和 (2 0 11 0± 10 5 5 ) μg/ml;肺泡巨噬细胞分泌TNFα、NO水平逐渐升高 ,至 6h达到高峰 ,分别为 (16 2 4 2± 149 2 )pg/ml和 (88 8± 6 5 ) μmol/L ,12h又回落。ANP发生后 ,肺泡巨噬细胞TNFαmRNA、iNOSmRNA的表达情况与TNFα、NO的变化趋势相似。ANP大鼠各组指标与正常对照组相比差异均有显著性意义 (P <0 0 5 )。组织学评分结果表明 ,随着胰腺损伤的加重肺损伤也逐渐加重。肺泡巨噬细胞TNFαmRNA、iNOSmRNA     

急性胰腺炎时胰腺缺血与细胞因子相关性的实验研究

目的探讨大鼠急性胰腺炎(AP)时胰腺缺血和细胞因子过度释放的关系.方法以牛磺胆酸钠诱导大鼠AP,20只为急性水肿性胰腺炎(AEP)模型、20只为急性坏死性胰腺炎(ANP)模型,另取10只正常大鼠作为对照.术后12 h处死各组10只大鼠,取血和胰腺组织,检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素10(IL-10)水平,观察胰腺病理变化,并以多普勒超声仪检测大鼠胰腺血流(PBF).结果AEP大鼠血清和胰腺中TNF-α和IL-10水平均升高,分别为(186±13)、(210±30) pg/ml和(660±29)、(669±62) pg/ml;ANP大鼠两者分别为(337±56)、(443±60) pg/ml和(124±12)、(202±38)     

失血性休克后大鼠腹腔巨噬细胞的功能改变

目的 探讨失血性休克对腹腔巨噬细胞功能变化的影响。方法 成年Wistar大鼠随机分为对照组和失血性休克组,建立失血性休克模型,于失血性休克1h后,运用流式细胞术检测和评价两组腹腔巨噬细胞的凋亡、吞噬凋亡细胞及主要组织相容性复合物Ⅱ(Major histocompatibility complex,MHCⅡ)表达能力的变化。同时,利用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)分析腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(Interleukin,IL)-6的情况。结果 ①失血性休克组大鼠腹腔巨噬细胞的凋亡比例为(8.08±0.75％),对照组为(1.64±0.37％),二者有明显差别(P<0.01)。②失血性休克组腹腔巨噬细胞吞噬凋亡细胞的比例为(17.68±2.53％),对照组为(38.74±7.07％),二者有明显差别(P<0.01);腹腔巨噬细胞MHCⅡ表达能力失血性休克组为(24.04±6.26％),对照组为(45.73±4.63％),二者有明显差别(P<0.01)。③失血性休克组大鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α(99.7±8.4 pg/ml)、IL-6(9.8±0.7pg/ml)分别较对照组(205.3±11.3 Pg/ml)、(30.7±1.8 pg/ml)显著减少(P<0.01)。结论 失血性休克后腹腔巨噬细胞功能明显受损,细胞凋亡能力增加。失血性休克后机体免疫功能降低,凋亡细胞增加而不能及时清除,是机体易感性增加的重要机制     

重症急性胰腺炎腹水对正常肾细胞影响

目的通过观察重症急性胰腺炎(SAP)腹水对正常肾细胞影响,探讨SAP时急性肾功能损伤的机制。方法SD大鼠54只分成SAP组(n=30)和假手术组(n=24),SAP组以5%牛磺酸胆酸钠溶液胆管逆行注射诱导模型,术后6h、12h、24h采集血清、腹水。ELISA法检测血清、腹水TNFα水平,RT PCR检测肾细胞TNFαmRNA表达。将24h采集的血清和腹水处理体外培养NRK细胞,MTT法检测细胞活性,流式细胞术测定NRK细胞凋亡率。结果SAP组6h、12h、24h血清和腹水TNFα水平渐进性升高,各时间段差异显著(P<0.05)且较假手术后明显升高(P<0.01)。SAP组大鼠血清和腹水处理后NRK细胞活性均低于假手术组。SAP组大鼠腹水和血清处理24h后,NRK细胞培养液中TNFα水平较假手术组明显升高(P<0.01);NRK细胞TNFαmRNA表达上调,显著高于假手术组;凋亡率分别为29.67%±4.12%和59.95%±2.11%,假手术组大鼠血清和腹水处理24h凋亡率分别为3.72±2.90%和4.11±3.30%,差异显著(P<0.01)。结论SAP时肾损伤可能与肾细胞过度凋亡有关,而肾细胞过度凋亡与血清和腹水TNFα升高及肾细胞过多分泌TNFα有关,SAP腹水对肾的直接损伤可能比血清明显。     

枯否细胞NF-κB 激活对胆源性内毒素血症大鼠肝部分切除后肝细胞再生的影响

目的探讨胆源性内毒素血症(BE)大鼠肝部分切除(PH)后枯否细胞(KCs)核因子-κB(NF-κB))激活对肝细胞再生的影响.方法将Wistar大鼠分为4组(每组72只)N-PH组(正常大鼠70%PH组);BE-PH组(BE大鼠70%PH组);BE-PH 白细胞介素(IL)-10治疗组;BE-PH治疗对照组.检测70%PH后0、1、6、24、48、72h KCs NF-κB 激活、KCs肿瘤坏死因子α(TNFα)mRNA、IL-1βmRNA和IL-6 mRNA表达以及肝细胞溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)标记.结果 BE-PH组KCs NF-κB活性高于N-PH组(P<0.001),KCs TNFαmRNA、IL-1βmRNA及IL-6 mRNA表达亦明显高于N-PH组,而肝细胞BrdU高峰标记指数(38.82±9.79)低于N-PH组(64.37±13.69)(P<0.01);BE-PHIL-10组KCs NF-κB 活性低于BE-PH组(P<0.01),KCs TNFα、IL-1β及IL-6 mRNA表达减少,而肝细胞BrdU高峰标记指数高于BE-PH组(P<0.05).结论 BE-PH后KCs NF-κB 高水平激活导致KCs TNFαmRNA、IL-1βmRNA及IL-6 mRNA表达增高,从而抑制肝细胞再生,适当调控KCs NF-κB 活性能促进BE-PH后肝细胞再生.     

大黄素对大鼠重症胰腺炎TNFα、IL-6及胰腺腺泡细胞凋亡的影响

目的 :探讨大黄素治疗重症急性胰腺炎 (SAP)的作用机理。 方法 :用胰胆管内逆行注射去氧胆酸钠法制作大鼠SAP模型 ,随机分为对照组、SAP组、大黄素治疗组 ,动态测定术后 0h、6h、12h各组血清TNFα及IL - 6浓度 ,并取胰组织作病理学检查 ,同时应用TUNEL技术分析大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的变化。 结果 :发现大黄素给药后 6h及 12h时血清TNFα、IL - 6水平明显降低 ,腹水量减少 ,胰组织病变程度改善 ;术后 6hSAP组胰腺腺泡细胞凋亡指数为 (3 92± 0 94 ) ,大黄素治疗组为(2 6 5 0± 6 72 ) ,两组比较 ,P <0 0 5。 结论 :大黄素可明显抑制大鼠胰酶及TNFα、IL - 6的释放 ,并且诱导已受损的不可恢复的腺泡细胞凋亡 ,从而改善大鼠重症胰腺炎的病情发展。     

一氧化氮在急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤中的作用

目的　探讨一氧化氮 (NO)在急性坏死性胰腺炎 (ANP)肺损伤中的作用。　方法12 0只成年SD大鼠随机分为正常对照组、ANP组、精氨酸 (L Arg)组、N 硝基 L 精氨酸甲酯 (L NAME)组、混合预处理组 ,每组 2 4只。逆行性胰胆管注射 3%牛磺酸钠建立ANP大鼠模型。经支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞 (AM) ,检测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶 (MPO)水平、AM分泌肿瘤坏死因子α(TNFα) ,NO水平及TNFαmRNA、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达情况。　结果　ANP大鼠肺损伤随着病情进展而逐渐加重 ;肺组织MPO及BALF蛋白含量逐渐升高 ,12h达最高值 ,分别为 (10 8± 0 6 )U/g和 (2 0 11 0± 10 5 5 ) μg/ml;AM分泌TNFα ,NO水平逐渐升高 ,至 6h达到高峰 ,分别为 (16 2 4 2± 14 9 2 ) pg/ml和 (88 8± 6 5 )μmol/L ,12h又回落。AMTNFαmRNA、iNOSmRNA的表达情况与TNFα,NO的变化趋势相似。L Arg、L NAME、混合预处理三组各指标变化趋势与ANP组相似 ,各组与正常对照组相比 ,均有显著性差异 (P <0 0 5 )。L Arg、L NAME组与ANP组相比 ,L Arg组各指标均升高 ,L NAME组各指标均降低 ,差异亦有显著性 (P <0 0 5 )。　结论　由iNOS介导产生的NO的过量生成促进了ANP所致的肺损伤。加入外源性     

急性坏死性胰腺炎胰腺泡细胞功能变化的实验研究

目的　探讨急性坏死性胰腺炎 (acutenecrotizingpancreatitis,ANP)胰腺腺泡细胞氨基酸摄取、酶蛋白合成及细胞的分泌功能情况。方法　采用 5 %牛磺胆酸钠胰管逆行注射制备ANP动物模型。SD雄性大鼠 70只 ,随机分为模型组和对照组。采用L 3 H 苯丙氨酸作为同位素示踪剂和放射自显影技术观察胰腺腺泡细胞氨基酸摄取、酶蛋白合成和细胞外分泌功能。结果　呈点状出血坏死病理学改变的模型组ANP胰腺腺泡细胞氨基酸摄取放射性含量为 (186± 17)dpm/mg ,对照组为 (145±12 )dpm/mg(P >0 0 5 ) ;对照组酶蛋白合成的放射性含量在 30、6 0、90min时分别为 (2 2 81± 16 6 2 )dpm/mg、(30 17± 978)dpm/mg和 (2 5 44± 110 8)dpm/mg,而模型组分别为 (2 2 73± 6 2 7)dpm/mg、(2 840± 82 8)dpm/mg和 (2 6 2 8± 6 0 4)dpm/mg(P >0 0 5 ) ;放射自显影图像提示模型组腺泡细胞间质中可见大量酶原颗粒积聚 ,而对照组细胞间质中未观察到酶原颗粒。结论　ANP呈点状出血坏死时胰腺腺泡细胞氨基酸摄取及酶蛋白合成功能无下降 ,但腺泡细胞分泌途径发生了改变 ,出现了底膜及侧膜的异位分泌。