脑胶质瘤中hMLH1基因表达及启动子区的甲基化状态研究

目的检测脑胶质瘤中hMLH1基因表达及其启动子区的甲基化状态,探讨其在肿瘤发生中的作用。方法采用免疫组化及甲基化特异性聚合酶链反应方法,检测51例脑胶质瘤hMLH1基因表达和启动子区甲基化状态。结果 hMLH1阳性表达率为78.4%(40/51),甲基化率为13.7%(7/51),均与性别、年龄、病理类型无相关性。hMLH1在低级别(Ⅰ~Ⅱ级)胶质瘤和高级别(Ⅲ~Ⅳ级)胶质瘤中的阳性表达率分别为92.0%(23/25)和65.4%(17/26),两者差异显著(P0.05)。hMLH1在低级别(Ⅰ~Ⅱ级)和高级别胶质瘤中hMLH1启动子区甲基化率分别为0.0%(0/25)和26.9%(7/26),两者差异显著(P0.05)。hMLH1表达阳性的胶质瘤和表达阴性的胶质瘤中启动子区甲基化率分别为7.5%(3/40)和36.4%(4/11),两者差异显著(P0.05)。结论 hMLH1基因在胶质瘤中表达及启动子区甲基化状态与胶质瘤病理分级有关,hMLH1可能在胶质瘤的发展中起作用,其启动子区甲基化可能负调控hMLH1基因表达。     

脑胶质瘤中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态研究

目的探讨脑胶质瘤中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态，及其在肿瘤发生中的作用。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）方法，检测42例脑胶质瘤hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态。结果hMLH1启动子区甲基化2例（4．8％），hMSH2启动子区甲基化13例（31．0％），启动子区甲基化与性别、年龄、病理类型和病理分级无明显的相关性。结论hMSH2基因启动子的CpG岛在脑胶质瘤中有高甲基化现象，可能与胶质瘤的发生有关，而hMLH1基因启动子区甲基化少见。     

脑胶质瘤中HINT1基因甲基化状态的研究

目的探讨脑胶质瘤中HINT1基因启动子区的甲基化状态。方法采用双酶切联合定量PCR法和MSP法检测70例脑胶质瘤和30例正常脑组织中HINT1基因启动子区域甲基化状况。结果经双酶切后实时荧光定量PCR和MSP法检测,正常脑组织和胶质瘤HINT1基因启动子区域呈非甲基化状态,与性别、年龄和病理分级无明显的相关性。结论脑胶质瘤中HINT1基因启动子区域呈非甲基化状态。     

胶质瘤干细胞中Nanog基因启动子区甲基化检测及意义

目的检测胶质瘤干细胞中Nanog基因启动子区甲基化表达,并探讨其Nanog基因表达的关系。方法使用无血清悬浮培养法获得胶质瘤干细胞并鉴定;采用甲基化特异性多聚酶链反应(MSP)分别检测胶质瘤干细胞和胶质瘤细胞系U87中Nanog基因启动子区甲基化状态,实时定量多酶链反应(RT-PCR)检测相应细胞中Nanog表达情况。结果由U87胶质瘤细胞系成功获得胶质瘤干细胞(GSCs);MSP检测胶质瘤干细胞和U87细胞系Nanog启动子区皆呈非甲基化状态,且胶质瘤干细胞中Nanog非甲基化程度高于U87细胞系(t=6.988,P=0.000)。实时定量PCR结果显示胶质瘤干细胞中Nanog mRNA相对表达量高于U87细胞系。结论胶质瘤干细胞中Nanog基因启动子区呈非甲基化状态,可能与Nanog基因表达有关,且可能促进Nanog的转录并维持着胶质瘤干细胞的恶性生物学活性。     

胶质瘤患者抑癌基因RASSF1A启动子区甲基化研究

目的探讨RASSF1A抑癌基因在胶质瘤组织及脑正常组织中甲基化程度及与临床特征的关系。方法46例脑胶质瘤组织及6例脑正常组织采自手术患者。用甲基化特异性聚合酶链反应（MS—PCR）方法检测46例胶质瘤（其中包括星形细胞瘤19例，室管膜瘤16例，胶质母细胞瘤11例）及6例脑正常组织中RASSF1A基因甲基化状态。并对RASSF1甲基化发生率与临床各因素之间的关系进行分析。结果（1）46例脑胶质瘤组织DNA标本中RASSF1A基因甲基化发生率为65．2％（30／46）；6例脑正常组织中RASSF1A基因启动子未发生甲基化；RASSF1A在胶质瘤和脑正常组织之间发生甲基化率比较差异有显著性，（P=0．017，P〈0．05）。在46例脑胶质瘤中RASSF1A有30例发生甲基化，其中低级别组14例（14／26），高级别组16例（16／20），两组之间甲基化率比较无明显差异，（P〉0．05）。其中星形细胞瘤，室管膜瘤，胶质母细胞瘤甲基化发生频率分别为63．2％（12／19），68．8％（11／16），63．6％（7／11）。在各组之间甲基化发生率比较均无统计学意义，（P〉0．05）。②RASSF1A基因甲基化程度与脑胶质瘤病理分型、肿瘤大小之间无显著相关性。结论RASSF1A在胶质瘤中有甲基化发生，在脑正常组织中未发生甲基化，检测胶质瘤中RASSF1A基因启动子区甲基化情况对临床判断肿瘤发生发展有指导意义。     

脑胶质瘤SOX7基因的甲基化状态及临床意义

目的 探讨脑胶质瘤SOX7基因的甲基化状态及其与病人预后的关系。方法 收集2013年6月至2015年1月手术切除的胶质瘤标本131例,另取颅脑损伤内减压术中切除的正常脑组织标本32例作为对照。应用甲基化特异PCR及RT-PCR方法检测SOX7基因的甲基化状态及mRNA表达水平。采用Kplan-Meier法分析生存曲线。结果 胶质瘤SOX7基因甲基化率（71.8%,94/131）明显高于正常脑组织（32.4%,11/34;P<0.05）。高级别胶质瘤SOX7甲基化率（81.01%,64/79）明显高于低级别胶质瘤（57.69%,30/52）。胶质瘤SOX7 mRNA水平明显低于正常脑组织（P<0.05）。SOX7基因甲基化组生存期较非甲基化组明显缩短（P<0.01）。结论 胶质瘤SOX7基因甲基化率升高,SOX7在胶质瘤中表达水平下调,SOX7基因的甲基化状态与病人生存期密切相关。     

恶性脑胶质瘤MGMT基因启动子甲基化状态与患者临床预后的相关性

目的 探讨恶性脑胶质瘤组织O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)基因启动子甲基化状态及MGMT蛋白表达与患者生存预后的关系,评价MS-MLPA技术检测MGMT基因启动子甲基化状态对脑胶质瘤化疗的意义. 方法 选择自2006至2010年南方医科大学珠江医院神经外科手术治疗且病理证实为恶性脑胶质瘤(WHOⅢ级、Ⅳ级)的39例患者为研究对象,应用免疫组化染色法检测肿瘤组织MGMT蛋白表达,应用MS-MLPA技术检测MGMT基因启动子甲基化状态,并观察患者化疗后总生存时间. 结果 肿瘤组织中MGMT蛋白表达阳性、弱阳性者与表达阴性者生存时间比较差异有统计学意义(P=0.003),MGMT蛋白表达阳性者比表达阴性者预后更差.肿瘤组织中MGMT基因启动子未甲基化者、低度过甲基化者、中度过甲基化者、高度过甲基化者生存时间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05),MGMT基因启动子过甲基化率越高者预后越好.MGMT蛋白表达与MGMT基因启动子甲基化状态存在统计学相关性(r=0.697,P=0.000),基因甲基化程度越高者蛋白表达越低. 结论 MGMT蛋白表达与MGMT基因启动子甲基化状态均可以作为接受烷化剂化疗的恶性胶质瘤患者生存期的预测指标.MS-MLPA技术是一种可靠的检测MGMT基因启动子甲基化状态的方法.     

p16基因甲基化与脑胶质瘤的关系

抑癌基因p16位于人类染色体9p21,由3个外显子和2个内含子组成.脑胶质瘤中,p16基因5'CpG岛异常甲基化导致P16蛋白表达的减少与肿瘤发病率密切相关.本文总结了p16基因5'CpG岛高甲基化的形成机制、在脑胶质瘤中的发生率以及相应的治疗对策,供临床医生参考.     

IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化在脑胶质瘤中表达及关联度分析

目的探讨脑胶质瘤中异柠檬酸脱氢酶1(isocitrate dehydrogenases 1,IDH1)突变和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子甲基化状态及二者之间的关联性。方法收集手术切除并经病理证实的脑胶质瘤组织133例,采用巢式甲基化特异性PCR(nested methylation-specific PCR,n MSP)法和甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法联合变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)法检测脑胶质瘤中的MGMT基因启动子甲基化情况,直接测序法检测脑胶质瘤中IDH1基因的突变情况。采用χ2检验进行IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化关联度的统计分析。结果 133例脑胶质瘤患者中MGMT基因启动子甲基化88例(66.17%),IDH1突变62例(46.62%)。IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化存在关联(P=0.01)。结论脑胶质瘤中IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化之间关联显著,提示两者在脑胶质瘤的发生发展中可能存在相互调节的作用;IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化是脑胶质瘤的重要疾病相关因素。     

甲基化特异性PCR法和限制性内切酶-PCR法检测脑胶质瘤hMLM1基因启动子区甲基化

目的 研究脑胶质瘤中hMLM1基因启动子区的甲基化状态,并比较不同的甲基化检测方法。方法 采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）法和限制性内切酶-PCR法,检测42例脑胶质瘤和5例正常脑组织中hMLM1基因启动子区的甲基化状态。结果 用MSP法和限制性内切酶-PCR法检测,hMLM1启动子区甲基化率分别为4．8％（2／42）和11．9％（5／42）,启动子区甲基化与性别、年龄、病理类型和病理分级无明显的相关性。结论 在脑胶质瘤中hMLM1基因启动子区甲基化少见,MSP法和限制性内切酶-PCR法是简单、灵敏的甲基化检测方法。     

miR-126基因启动子甲基化状态与高危低级别胶质瘤同步放化疗后生存结局的关系

目的 探讨miR-126基因启动子甲基化状态对高危低级别胶质瘤(LGG)同步放化疗后生存结局的影响.方法 前瞻性收集2015年7月至2016年9月经术后病理证实为高危LGG组织标本共69例,另选取同期颅脑损伤内减压术切除非肿瘤脑组织20例为对照.采用PCR和MSP法检测miR-126水平及其基因启动子甲基化水平.根据实...     

恶性胶质瘤SPARC基因的甲基化状态及其表达水平分析

目的探讨胶质瘤组织中富含半胱氨酸的酸性分泌性糖蛋白（SPARC）基因甲基化状态和mRNA表达水平及两者相关性。方法2008年3月至2011年12月收集98例胶质瘤组织标本和98例正常脑组织标本（颅脑损伤患者术中切取）以及胶质瘤细胞系LN229,提取DNA和RNA,利用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测SPARC基因甲基化状态;利用实时荧光定量PCR检测SPARC基因mRNA表达水平。结果胶质瘤细胞系LN229中SPARC基因呈高度甲基化,其mRNA表达水平极低;去甲基化处理后,mRNA表达水平明显升高（P〈0．01）。胶质瘤组织中SPARC基因甲基化率（70．4％,69／98）明显高于正常脑组织（21．4％,21／98;P〈0．01）,但其mRNA表达水平明显低于正常脑组织（P〈0．01）。而且随着胶质瘤级别的增加,胶质瘤组织中SPARC基因甲基化率明显呈升高（P〈0．05）,但其mRNA表达水平却明显降低（P〈0．01）。伴有SPARC基因甲基化的胶质瘤组织SPARC基因mRNA表达水平明显低于非甲基化胶质瘤组织（P〈0．01）。然而,伴有SPARC基因启动子甲基化的胶质瘤患者生存期与非甲基化患者无统计学差异（P〉0．05）。结论胶质瘤组织中SPARC基因呈高甲基化状态,其mRNA呈低水平表达;SPARC基因mRNA表达水平受其甲基化的影响;SPARC基因高甲基化可能与胶质瘤的发生相关。     

新诊断胶质瘤MGMT基因启动子甲基化水平定量分析

目的 探讨新诊断胶质瘤O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因启动子甲基化（简称MGMT甲基化）水平的变化。方法 回顾性分析2016年1月至2019年6月郑州大学附属肿瘤医院神经外科收治的225例新诊断胶质瘤的临床资料,定量分析MGMT甲基化。结果 新诊断胶质瘤MGMT甲基化水平为（23.68±14.88）%,阳性率89.33%。≥40岁病人MGMT甲基化水平[（24.89±15.67）%]显著高于<40岁病人[（19.85±11.31）%;P<0.05]。少突胶质细胞瘤MGMT甲基化水平[（30.41±12.99）%]显著高于其他类型的胶质瘤[星形细胞瘤为（20.81±13.53）%、少突星形细胞瘤为（23.00±8.21）%、胶质母细胞瘤为（23.39±17.85）%;P<0.05]。胶质瘤MGMT甲基化水平与病人年龄呈正相关（r=0.135,P<0.05）,而与病人性别和肿瘤级别无明显关系（P>0.05）。结论 新诊断胶质瘤MGMT甲基化水平与病人与年龄正相关,少突胶质细胞瘤MGMT甲基化水平明显高于其他类型胶质瘤     

脑胶质瘤中BAI1基因转录表达的研究

目的探讨BAI1 mRNA表达水平与不同级别胶质瘤间的关系。方法选取病理分级为WHOⅡ、Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤标本依次为12例、12例、14例，正常脑组织标本6例；提取总RNA，用半定量RT—PCR法检测BAI1基因的转录表达情况。结果BAI1 mRNA在所有正常脑组织和26例（68．4％）胶质瘤中表达。正常脑组织的BAI1基因转录表达水平高于胶质瘤组．P〈0．05：各级胶质瘤间BAI1基因转录表达水平差异没有统计学意义。结论BAI1基因在胶质瘤中的转录表达水平显著性下降，在部分胶质瘤中表达缺失。BAI1可能与胶质瘤的发展有关。BAI1基因在胶质瘤中的转录表达水平与胶质瘤的级别无关。