选择性CDK抑制剂对大鼠局灶性脑缺血后胶质增殖及疤痕形成的抑制作用

目的:探讨选择性周期素依赖性蛋白激酶抑制剂Olomoucine对局灶性脑缺血后星形胶质细胞增殖及胶质疤痕形成的抑制作用。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组12只、模型组27只和干预组33只。3组均手术暴露颅骨,模型组和干预组建立光化学法诱导大鼠局灶性脑缺血模型,之后干预组腹腔注射Olomoucine,分别将3组大鼠于处理后3、7、30 d处死,应用免疫组织化学法检测梗死灶周围胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;Western blot法观察损伤侧皮质GFAP、增殖细胞核抗原(PCNA)、周期素蛋白A(CyclinA)和周期素蛋白B1(Cy-clinB1)的表达。结果:缺血后各组梗死灶边缘区GFAP表达明显增强,缺血后7和30 d模型组GFAP表达明显强于干预组(P<0.05),并且7和30 d对照组缺血边缘区可见胶质疤痕形成,尤以30 d最为明显;GFAP、PCNA、Cy-clinA和CyclinB蛋白的表达,模型组明显高于干预组(P<0.05)。结论:Olomoucine可部分抑制胶质细胞的活化增殖及疤痕的形成。该结果提示调控细胞周期可能是治疗脑缺血新的方向。     

Suppression of Astroglial Scar Formation and Enhanced Axonal Regeneration Associated with Functional Recovery in a Spinal Cord Injury Rat Model by the Cell Cycle Inhibitor Olomoucine

Objective：To determine if a cell cycle inhibitior, olomoucine, would decrease neuronal cell death, limit astroglial proliferation and production of inhibitory CSPGs, and eventually enhance the functional compensation after SCI in rats. Methods： Three were used as un-operated controls and twelve as sham operated controls. Follow- ing spinal cord injury, 48 rats were randomly and blindly assigned to either olomoucine （n=24） or vehicle treatment （n=24） groups. Results： Up-regulations of cell cycle components were closely associated with neuronal ceil death and astroglial proliferation as well as the production of CSPGs after SCI. Meanwhile, administration of olomoucine, a selective cell cycle kinase （CDK） inhibitor, has remarkably reduced the up-regulated cell cycle proteins and then decreased neuronal cell death, astroglial proliferation as well as accumulation of CSPGs. More importantly, the treatment with olomoucine has also increased expression of growth-associated proteins-43 （GAP-43）, reduced the cavity formation, and improved functional deficits. Conclusion： Suppressing astroglial cell cycle in acute spinal cord injuries is beneficial to axonal growth, in turn, the future therapeutic strategies can be designed to achieve efficient axonal regeneration and functional compensation after traumatic CNS injury.     

olomoucine对星形胶质细胞增殖的影响及机制研究

目的:观察细胞周期抑制剂olomoucine对培养星形胶质细胞(AS)机械损伤后增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:建立体外培养大鼠纯化的AS物理损伤模型(划痕损伤模型),随机分为对照组、划痕组和干预组,划痕组和干预组均继续培养,干预组给予olomoucine干预。利用免疫荧光细胞化学方法观察损伤后BrdU表达;利用Westernblot印迹分析损伤后PCNA、p27的表达。结果:划痕损伤刺激12h开始出现损伤边缘区AS胞体肥大、数目增加,BrdU阳性细胞比率和PCNA表达水平较对照组增高(P<0.05),p27表达水平较对照组下降(P<0.05);干预组的BrdU阳性细胞比率和PCNA表达水平较划痕组明显减少(P<0.05),p27表达上调(P<0.05)。结论:损伤刺激可促使AS发生反应性胶质增生,CDK选择性细胞周期抑制剂olomoucine可以通过调控细胞周期抑制其反应性增生。     

Cell proliferation and cell cycle control: a mini review

Tumourigenesis is the result of cell cycle disorganisation, leading to an uncontrolled cellular proliferation. Specific cellular processes-mechanisms that control cell cycle progression and checkpoint traversation through the intermitotic phases are deregulated. Normally, these events are highly conserved due to the existence of conservatory mechanisms and molecules such as cell cycle genes and their products: cyclins, cyclin dependent kinases (Cdks), Cdk inhibitors (CKI) and extra cellular factors (i.e. growth factors). Revolutionary techniques using laser cytometry and commercial software are available to quantify and evaluate cell cycle processes and cellular growth. S-phase fraction measurements, including ploidy values, using histograms and estimation of indices such as the mitotic index and tumour-doubling time indices, provide adequate information to the clinician to evaluate tumour aggressiveness, prognosis and the strategies for radiotherapy and chemotherapy in experimental researches.     

Effects of the Cell Cycle Inhibitor Olomoucine on Inflammatory Response and Neuronal Cell Death after Spinal Cord Injury in Rats

Objective:The influence of olomoucine on microglial proliferation with associated inflammatory response after spinal cord injury has been determined.Methods:Microglial proliferation and neuronal apoptosis were observed by immunofluorescence.Level of the proinflammatory cytokine interleukin-1β(IL-1β)expression in the injured cord was determined by Western blot analysis.Results:the cell cycle inhibitor olomoucine,administered at 1 h post injury,significantly suppressed microglial proliferation and produced a remarkable reduction of tissue edema formation.In the olomoucine-treated group,a significant reduction of activated and/or proliferated microglial induced IL-1β expression was observed 24 h after SCI.Moreover,olomoucine evidently attenuated the number of apoptotic neurons after SCI.Conclusion:Our findings suggest that modulation of microglial proliferation with associated proinflammatory cytokine expression may be a mechanism of cell cycle inhibition-mediated neuroprotections in the CNS trauma.     

脑缺血后大鼠神经元和星形胶质细胞p15ink4b表达的差异研究

目的:比较研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p15ink4b在神经元和星形胶质细胞的表达。方法:建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,应用流式细胞术检测各组MCAO再灌注后不同时期神经元和星形胶质细胞中的p15ink4b的表达。结果:缺血侧皮质区星形胶质细胞中的p15ink4b的表达在再灌注3d后开始下调,14d显著下调,与假手术组比较有显著性差异(P<0.05);缺血侧皮质神经元中的p15ink4b在再灌注14d后表达下调,与假手术组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:局灶性脑缺血再灌注损伤后,缺血侧皮质区星形胶质细胞和神经元均有p15ink4b不同程度的表达下调,星形胶质细胞中的p15ink4b表达下调比神经元更为显著。     

还原型谷胱甘肽对大鼠局灶性脑梗死后丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶表达的影响

目的观察还原型谷胱甘肽对大鼠短暂性局灶性脑缺血时丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、超氧化物歧化酶（SOD）的影响。方法采用大脑中动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型，随机分为假手术组、缺血模型组和还原型谷胱甘肽治疗组（1200mg／kg），缺血2h再灌注6h后观测各组的神经行为变化，脑梗死体积，脑组织病理学变化，脑组织MDA含量和SOD、GSH—PX活性。结果还原型谷胱甘肽可以改善大鼠局灶性脑缺血引起的神经行为障碍，减少脑梗死体积（P〈0．05）；可以降低脑组织MDA含量，提高脑组织GSH—PX、SOD活力（P〈0．05）。结论外源性谷胱甘肽可通过提高GSH—PX、SOD活力，降低MDA含量，增强机体清除自由基的能力，及减少大鼠脑组织氧自由基的堆积而发挥对脑缺血再灌注时的保护作用。     

阿托伐他丁对脑梗死再灌注大鼠脑源性神经营养因子的影响

目的:观察阿托伐他丁对脑梗死大鼠脑保护的作用以及对脑源性神经营养因子(brain-deprived neurotrophic factor,BDNF)的影响。方法:线栓法制备SD大鼠大脑中动脉梗死(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型。将大鼠随机分为:假手术组;MCAO组的2 h、24 h、3 d、5 d组;阿托伐他丁组的2 h、24 h、3 d、5 d组。MCAO组和阿托伐他丁组的各时程组再分别分为脑梗死体积亚组、免疫组化亚组,每亚组及假手术组各6只大鼠。在不同时间点观察阿托伐他丁组和MCAO组大鼠神经行为评分、脑梗死体积,用免疫组化法检测BDNF阳性细胞数。结果:神经行为评分和脑梗死体积在阿托伐他丁组和MCAO组的2 h组之间无显著性差异(P>0.05),在阿托伐他丁24 h、3 d、5 d组均显著低于对应时程的MCAO组(P<0.05);各组缺血半暗带BDNF阳性细胞数均增高,但阿托伐他丁组的阳性细胞数显著高于对应时程的MCAO组(P<0.05)。结论:阿托伐他丁能提高大鼠局灶脑缺血半暗带BDNF的表达水平,促进神经元的修复。     

缺血预处理对大鼠局灶性脑梗死的影响

目的：探讨缺血预处理（IP）对局灶性脑梗死预后的影响。方法：SD大鼠38只,随机分为模型组和IP组各19只。模型组建立大鼠局灶性大脑中动脉闭塞（MCAO）再灌注模型;IP组在行MCAO再灌注手术前7d内先行2次15min的IP。2组均于MCAO再灌注术后3h及7d时行Zea longa神经功能评分,然后断头取脑行TTC染色检测梗死体积。结果：MCAO术后3h2组大鼠均有程度不同的神经功能缺失。7d时IP组Zea longa神经功能缺失程度评分明显低于模型组,梗死体积明显小于模型组（均P〈0.01）。结论：IP对大鼠局灶性脑梗死具有保护作用。     

依达拉奉对大鼠局灶性脑梗死Caspase-3表达的影响

目的探讨依达拉奉对大鼠局灶性脑梗死Caspase-3表达的影响,明确依达拉奉的抗调亡机制。方法将Wistar大鼠分为依达拉奉治疗组、脑梗死对照组和假手术组,于14d采用RT-PCR进行Caspase-3 mRNA检测,采用Western blot方法进行蛋白检洲,并进行组间比较。结果脑梗死对照组Caspase-3 mRNA及其蛋白的表达量较假手术组增加;经过依达拉奉治疗后,两指标的表达最有所降低（P〈0．01）。结论依达拉奉可以减少Caspase-3 mRNA及其蛋白的表达,发挥其神经细胞保护作用。     

TLR2配体肽聚糖对骨髓间充质干细胞增殖和细胞周期的影响

本研究探讨不同剂量的Toll样受体2（TLR2）的配体肽聚糖（peptidoglycan,PGN）在体外对人骨髓间充质干细胞（BM—MSC）增殖和细胞周期的影响。采用Ficoll淋巴细胞分离液、密度梯度离心法分离BM—MSC,体外扩增,并通过流式细胞术检测其表面标志以鉴定纯度;将分离培养的BM—MSC按一定浓度接种于96孔板中,以1、10、20μg/ml的PGN与BM—MSC共培养为实验组,不加PGN的BM—MSC为对照组;培养第1至第7天,MTT法检测BM—MSC的增殖情况;以上述浓度的PGN与BM—MSC共培养72小时后,流式细胞术检测BM—MSC的细胞周期。结果表明,BM—MSC与PGN共培养后,BM—MSC的增殖指数明显增加,呈时间、剂量依赖性,以10μg／ml PGN促BMMSC增殖作用最明显。与对照组比较,PGN干预组G0／G1期细胞比例降低,S期和G2／M期细胞比例增加,以10μg／ml组最明显。结论：在培养条件下PGN可以促进更多的BM—MSC进入DNA合成期,从而有更多的细胞分裂,产生大量的增殖细胞,并且这种影响呈时间、剂量依赖性。     

三七三醇皂苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠细胞增殖的影响

目的 :了解局灶性脑缺血再灌注后梗死区周围细胞增殖的动态变化 ,以及三七三醇皂苷 (PTS)对其表达的影响。方法 :采用改良的线栓法制备大脑中动脉阻塞 (MACO) 2h、不同再灌注时间段 (3d、 7d、 14d、2 8d)的大鼠短暂局灶性脑缺血 (transientfocalcerebralischemia)模型。应用 5 -溴脱氧尿嘧啶 (5 -bromod eoxyuridine,Brdu)和Brdu/Nestin免疫双标记法观察再灌注损伤后 3、 7、 14、 2 8d时大鼠神经前体细胞的增殖情况。结果 :脑缺血再灌注后 14d细胞增殖水平达到峰值 ,至再灌注 2 8d细胞增殖水平已明显回落 ,但仍较正常水平高。PTS组细胞增殖水平于再灌注后 7d～ 2 8d均较相同时间段对照组增强 (P <0 0 5 )。再灌注 7、 14d ,PTS组Brdu+/Nestin阳性细胞比例高于N .S组 (P <0 0 5 )。结论 :PTS可促进缺血再灌注后细胞的增殖水平     

颅脑超声治疗脑梗死的临床疗效观察

目的观察颅脑超声治疗脑梗死的效果。方法223例脑梗死患者分为治疗组和对照组。两组药物治疗基本相同,治疗组在药物治疗基础上应用超声扫描脑血管治疗仪治疗。治疗前后应用脑卒中患者临床神经功能缺损程度评分进行评定。结果治疗后两组患者神经功能缺损程度减轻（P〈0.05）,治疗组比对照组减轻更多（P〈0.05）,总有效率治疗组较高（P〈0.05）。结论超声辅助治疗有助于脑梗死患者神经功能恢复。     

异氟烷干预下人羊膜间充质干细胞移植对大鼠脑梗死的影响

目的:观察人羊膜间充质干细胞(AM-MSCs)移植同时予以异氟烷治疗对脑梗死大鼠神经功能恢复的影响。方法:大鼠100只,采用线栓法建立大脑中动脉阻塞脑梗死模型,随机分成假手术组、脑梗死组、AMMSCs移植组、异氟烷组、(AM-MSCs+异氟烷)组,造模后6 h给予相应治疗。移植后7 d各组随机处死6只,采用RT-PCR、Western Blot检测脑组织中GAP-43、AQP4 mRNA和蛋白表达的变化。移植后24 h、3 d及造模后1、2、3、4周行动物神经功能缺损(NSS)评分,在移植后21~28 d进行Morris水迷宫试验。4周后处死行免疫组化、HE染色观察病理学变化。结果:移植后7 d,(AM-MSCs+异氟烷)组大鼠脑组织中GAP-43mRNA和蛋白表达高于脑梗死组、AM-MSCs组、异氟烷组(P0.05);异氟烷组和AM-MSCs组的大鼠脑组织中GAP-43 mRNA和蛋白表达水平高于脑梗死组(P0.05)。(AM-MSCs+异氟烷)组的AQP4 mRNA和蛋白表达低于其他各组(P0.05);AM-MSCs组和异氟烷组低于脑梗死组(P0.05)。移植后1周,(AM-MSCs+异氟烷)组的NSS评分低于异氟烷组、AM-MSCs移植组,异氟烷组、AM-MSCs移植组低于脑梗死组(P0.05)。移植后3~5 d,(AM-MSCs+异氟烷)组平均逃逸潜伏期较异氟烷组、AM-MSCs组、脑梗死组缩短(P0.05或P0.01)。(AM-MSCs+异氟烷)组的目标距离百分比高于异氟烷组和AM-MSCs组(P0.05),并高于脑梗死组(P0.01)。伤后4周,脑梗死组未见神经轴索通过,异氟烷组、AM-MSCs移植组可见少量神经轴索样结构,(AM-MSCs+异氟烷)组可见较多神经轴索样结构(P0.05)。CM-Dil的阳性细胞数(AM-MSCs+异氟烷)组高于AM-MSCs组,异氟烷组高于脑梗死组,假手术组最少(P0.05)。结论:异氟烷干预联合AMMSCs移植治疗大鼠脑梗死可明显改善大鼠的神经学功能。     

电针风池对急性脑梗死大鼠脑星形胶质细胞和神经元的保护效果

目的 探讨电针风池穴对急性脑梗死大鼠脑星形胶质细胞和神经元的调节作用.方法 清洁级Sprague-Dawley雄性大鼠64只,随机数字表法分为假手术组(n=16)、模型组(n=16)、非穴组(n=16)和风池组(n=16).后三组采用改良线栓法制备急性脑梗死模型,后两组于造模后分别电针风池旁非穴部位和风池,共7 d.治...     

早期应用Bobath技术治疗脑梗死偏瘫患者康复疗效观察

目的观察早期应用Bobath技术治疗脑梗死偏瘫患者的康复效果。方法利用Bobath康复技术治疗脑梗死患者174例,通过Fugl-Meyer运动功能评定、改良Barthel指数评定治疗前后肢体功能和日常生活活动能力,观察不同治疗时期(病后1个月内应用组和1个月以上应用组)的康复治疗效果。结果病后1个月内应用组的肢体运动功能和日常生活活动能力的改善情况明显优于1个月以上应用组(均P<0.01)。结论Bobath技术治疗脑梗死偏瘫患者康复效果明显,应用时机越早越好。     

不同环境干预对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围皮层Syn表达的影响

目的：观察不同环境对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围皮层突触膜糖蛋白（Syn）表达的影响。方法：SD大鼠135只,电凝法造成右侧大脑中动脉阻断（MCAO）模型130只为模型组,随机分为模型组1的30只为独居组,一鼠一笼喂养;模型组2的40只为社交组,每笼5只喂养;模型组3的30只为探索学习组,饲养于圆笼和方笼组成的迷宫笼;模型组4的30只为丰富组,笼中有平衡木、滑斜板秋千及各种小木块、玩具等;另5只为假手术组．饲养同社交组。于不同时点（7、14、21及28d）分批处死大鼠,进行免疫组化染色并测定梗死灶周围皮层Syn光密度（cA）。结果：与假手术组比较,其它模型组在各时间点梗死灶周围Syn阳性表达均明显升高,模型组4和模型组3各时间点均高于模型组1及模型组2,模型组4各时点均高于模型组3（P〈0．01）,模型组2在7、14及21d高于模型组1（P〈0．05）。结论：丰富环境、探索学习及社会交往均能促进梗死灶周围皮层Syn表达,而丰富环境和探索学习对脑梗死大鼠功能恢复更有利。     

脑梗死后内源性神经干细胞激活机制研究进展

脑梗死后内源性神经干细胞（NSC）激活的机制与细胞生长因子、神经递质、微环境、基因信号调控和康复治疗等多种因素密切有关,各因素之间相互影响、相互作用。本文综述脑梗死后内源性NSC的激活机制。     

不同穴组电针对局灶性脑梗死大鼠神经行为学及Neurocan表达的影响

目的比较电针不同经络穴组对局灶性脑梗死大鼠神经行为学及neurocan表达的干预效果。方法将健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠85只随机分为5组:假手术组(n=5)、模型组(n=20)、水沟-百会组(n=20)、肝俞-肾俞组(n=20)和足三里-曲池组(n=20);模型组和各电针组线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,随机再分为脑缺血1 d、3 d、7 d、14 d和21 d共5个亚组。神经行为学采用Longa评分,RT-PCR及免疫组化测定缺血侧皮质neurocan mRNA和蛋白表达。结果假手术组无神经功能障碍;各电针组大鼠在缺血3 d后神经行为学评分逐渐恢复,7~21 d时较模型组明显改善(P<0.05)。模型组neurocan mRNA和蛋白表达在缺血1 d后逐渐增强,14 d达到峰值,21 d时有所下降,但仍维持高水平表达(P<0.01);各电针组在缺血3 d后neurocan mRNA和蛋白表达均较模型组低(P<0.05),其中水沟-百会和肝俞-肾俞组在缺血14 d时neurocan mRNA和蛋白表达较足三里-曲池组低(P<0.05)。结论局灶性脑梗死大鼠缺血侧皮质neurocan mRNA和蛋白表达明显上调。急性期给予电针刺激能下调其表达水平,改善神经行为学评分;其中电针水沟-百会穴和肝俞-肾俞穴较足三里-曲池穴治疗效果更好。     

人参皂苷Rg1对局灶性脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用

目的:探讨人参皂甙Rg1对局灶性脑缺血再灌注(FCIR)大鼠的神经保护作用。方法:72只大鼠随机分成假手术组、对照组、尼莫地平组(10.8 mg/kg)、人参皂苷Rg1低剂量组(10 mg/kg)、人参皂苷Rg1中剂量组(20 mg/kg)和人参皂苷Rg1高剂量组(40 mg/kg),每组12只。采用大脑中动脉栓塞法制备大鼠FCIR模型。假手术组和对照组给予生理盐水,其它各组则用相应药物连续灌胃14 d。治疗结束后,评定大鼠神经功能,检测顶颞叶皮质金属蛋白酶抑制因子(TIMP1)阳性细胞数及神经细胞凋亡。结果:人参皂苷Rg1各剂量组及尼莫地平组大鼠的神经功能评分明显低于对照组(P0.05);对照组顶颞叶皮质TIMP1阳性细胞数明显高于假手术组(P0.01),人参皂苷Rg1各组和尼莫地平组TIMP1阳性细胞数明显高于对照组(P0.05或0.01);对照组顶颞叶皮质细胞凋亡率高于假手术组(P0.01),人参皂苷Rg1各组和尼莫地平组细胞凋亡率明显低于对照组(P0.05或0.01)。结论:人参皂苷Rg1可能通过促进TIMP1表达,降低神经细胞凋亡率,进而对FCIR大鼠起到神经保护作用。