小鼠腹部心脏移植模型的建立及技术改进

目的:探讨小鼠腹部心脏移植模型的建立及技术改进。方法:SPF级近交系雄性BALB/c、C57小鼠各50只,体重均在20-30g,C57小鼠作为供体,BALB/c小鼠为受体,利用改进方法行供体升主动脉与受体腹主动脉,供体肺动脉与受体下腔静脉吻合术建立小鼠腹部心脏移植模型,术后观察移植心脏的存活时间和急性排斥反应情况。结果:手术成功率80%,总手术时间(90±10)min;受体手术时间(72±3)min;动脉吻合时间(21.5±2.5)min;静脉吻合时间(20.5±5.5)min。移植术后未用任何免疫抑制剂,小鼠供心存活时间为(7.9±0.7)d,供心停跳后,移植心脏病理排斥反应分级为Ⅱ-Ⅲ级。结论:改进的腹部心脏移植方法简单,手术时间短,手术成功率高。     

大鼠工作型异位心脏移植模型的建立

目的建立一种简单、稳定的大鼠工作型腹部异位心脏移植模型。方法将供体肺动脉与供体左心房吻合,供心升主动脉与受体腹主动脉行端侧吻合,受体血液经供心冠状动脉进入,在供心内循环后,由左心室排出,经供心主动脉吻合口进入受体腹主动脉。结果 20例实验成功17例。成功率85%,供心平均缺血时间为（33.2±3.7）min。失败的原因有吻合口出血,心肌保护不佳。术后1个月心脏彩超检查见供心二尖瓣口和主动脉瓣口均有血流通过。结论大鼠工作型腹部心脏移植模型更接近心脏生理,可更好地应用于实验研究;且操作简单实用,甚至可不需手术显微镜,易于推广。     

连续缝合间断打结吻合动脉在小鼠心脏移植中的应用

 目的  应用连续缝合间断打结法吻合动脉建立小鼠心脏移植模型。方法  近交系C57BL／6j (H-2b)、BALB／c (H-2d)小鼠各30只,建立小鼠腹部心脏移植模型 (C57BL／6j→BALB/c),连续缝合间断打结法端侧吻合供体升主动脉和受体腹主动脉;一针后壁先缝法连续吻合供体肺动脉和受体下腔静脉。观察移植心脏搏动持续时间及受体生存时间。结果  手术成功率90%(27/30),总手术时间 (91.77±6.70)min,动脉吻合时间 (24.63±1.67)min,静脉吻合时间 (15.17±1.80)min。供心中位存活时间8 天,病理组织学示典型排斥反应。结论  应用连续缝合间断打结法吻合动脉降低了小鼠心脏移植的手术难度,效果可靠,值得推广。     

大鼠异位心脏移植模型手术的改良

目的 对大鼠腹部异位心脏移植模型进行操作改良,总结手术技巧以提高手术成功率.方法 以Wistar大鼠作供体,SD大鼠作为受体,常规组供心升主动脉与受体腹主动脉吻合,肺动脉与下腔静脉吻合;改良组采用供心升主动脉与受体腹主动脉吻合,肺动脉与左肾静脉端侧吻合完成心脏移植.术后受体鼠经胃管内给予10 mg/(kg·d)环孢菌素A,比较两组的手术时间、手术成功率和长期存活率.结果 改良组和常规组手术时间分别为(36.8±5.6)min和(40.7±6.5)min,两者相比差异有显著性(P<0.05).改良组的手术成功率为90%,明显高于常规组的65%(P<0.05);移植成功后常规组和改良组术后长期存活率和供心存活时间之间无显著性差异(P<0.05).结论 改良组手术时间短、成功率高,值得进一步推广.     

大鼠心脏移植模型实验体会

目的探讨迅速稳定的大鼠心脏移植模型建设方法。方法利用改良的Ono动物模型,在大鼠腹部行异位心脏移植模型,供体主动脉弓和受体腹主动脉吻合,供体肺动脉和受体腔静脉吻合。结果经过一个月左右的学习期后,大鼠模型会稳定在95%以上,血管吻合时间（25±5）min,供心缺血时间（38±6）min。每天可以完成一组实验动物模型。结论坚持训练,注重手术细节是成功的关键。     

小鼠-大鼠颈部及腹部异种心脏移植模型的建立及比较

目的:建立并比较小鼠—大鼠颈部和腹部协调性异种心脏移植模型。方法:用昆明小鼠和Whister大鼠分别做供体和受体,将小鼠的升主动脉和肺动脉和肺动脉分别与大鼠的右颈总动脉和右颈外静脉端端吻合,建立颈部异种心脏移植模型;将小鼠的升主动脉和肺动脉分别与大鼠的腹主动脉和下腔静脉端侧吻合,建立腹部异种心脏移植模型。通过取心时间、血管吻合时间及并发症对颈部和腹部模型进行比较。结果:正式实验阶段颈部和腹部模型的移植成功率分别为90％和93.3％,移植心平均存活时间分别为2.67±0.73和2.43±0.69天,并发症发生率明显低于预实验阶段。病理检查移植心呈典型的急性血管性排斥改变。结论:小鼠—大鼠颈部和腹部心脏移植模型有各自的特点,经过一定时期的训练,均可稳定的用于实验,是研究协调性异种移植的理想模型。     

大鼠异位工作型心脏移植模型的建立

目的 建立大鼠腹腔异位工作型心脏移植动物模型.方法 Wistar大鼠30只,将供心主肺动脉与左房吻合,再将供心移植到受体腹部,将升主动脉与供心腹主动脉端侧吻合,使得左心房获得前负荷,成为工作型心脏.结果 成功建立大鼠腹腔异位工作型心脏移植模型,15例成功11例,手术成功率为73%.手术平均时间为(38.8±5.7)min.移植心脏获得长期存活,在28 d后通过超声观察可见供体心脏工作正常.结论 手术的关键是提高供心的摘取技术及受体的血管吻合技术,同时术后给与供心适当的按摩辅助也非常必要.此模型可以更好的用于移植免疫学的研究.     

小鼠腹部同种异体心脏移植模型的建立及改进

目的 :建立并改进小鼠腹部同种异体心脏移植模型。 方法 :在放大 2 6倍视野下用 10 0线将小鼠供体心脏的升主动脉和肺动脉分别与受体腹主动脉和下腔静脉行端侧吻合 ,术后观察移植心存活时间并做病理检查。结果 :手术成功率达 90 % ,平均取心时间和血管吻合时间分别为 (5 .9± 0 .97)min和 (38.5± 5 .5 )min ;Balb/c小鼠 昆明小鼠移植心平均存活时间为 (6 .2± 1.0 3)d ,昆明小鼠 昆明小鼠移植心存活时间超过 2 0d。 结论 :小鼠心脏移植模型与大鼠模型相比 ,技术操作难度大 ,术者需更长时间的训练 ,可作为大鼠心脏移植模型的补充 ,是利用纯系鼠进行移植研究的廉价选择     

小鼠腹腔异位心脏移植模型的建立及注意事项

目的 通过建立小鼠腹腔异位心脏移植模型,归纳总结制作流程和注意事项.方法 选用雄性昆明鼠60只,行30对腹腔异位心脏移植模型.取供体心脏时,用4℃肝素水从下腔静脉持续灌注冲洗,待肝脏变色后,剪断腹主动脉,再持续冲洗,待流出液变淡后,进入胸腔取供体心脏,移植手术是在10倍显微镜下由单人操作完成,术中将供体小鼠心脏的升主动脉和肺动脉分别与受体小鼠的腹主动脉和下腔静脉进行端侧吻合,手术完毕后,用棉签压迫止血,1 min后缓慢放开,将供体心脏置于受体腹右侧.结果 共实施手术30例,成功27例,成功率为90％;移植心脏存活＞ 30d;移植心脏5min内复跳,并且活动有力.结论 通过不断优化操作流程和手术技巧,保证了小鼠心脏移植模型建立的质量及成功性.     

小鼠腹腔异位心脏移植模型制作技术的改进

目的：改进小鼠腹腔异位心脏移植模型，探索简捷的手术方法。方法：借鉴大鼠腹腔心脏移植Ono术式，将C57BL/6雄性小鼠80只随机分为供体、受体，20对小鼠（供体、受体各20只）采用传统Ono术式（对照组），20对小鼠（供体、受体各20只）采用改进术式（实验组）。结果：实验组总手术时间［(109.0±10.5)min］低于对照组［(122.0±13.6) min］（P<0.05），其中实验组供心血管吻合时间 ［(21.7±3.1) min］低于对照组［(36.7±7.6) min］（P<0.05），[JP3]实验组供心冷缺血时间［ (29.5±3.5) min］低于对照组［（37.1±6.9) min］（P<0.05）；实验组供心热缺血时间 ［(1.0±0.3) min］与对照组［(0.9±0.2) min］比较差异无显著性（P>0.05）。实验组心脏移植成功17例，失败3例，成功率为85％；对照组心脏移植成功11例，失败9例，成功率为55％，两组成功率比较差异有显著性（P>0.05）；实验组移植心脏存活时间［（25.67±5.47）d］高于对照组［（8.50±1.52）d］（P<0.05）。结论：改进的小鼠腹腔异位心脏移植模型制作技术具有所需手术时间短、造模成功率高及模型小鼠存活时间长的优点。     

风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞的初步研究

目的观察风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞的生物学特性。方法利用相差显微镜、透射电子显微镜、免疫细胞化学技术观察风疹病毒R16株在人胚晶状体上皮细胞中的形态学及生长特性。结果风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞后,细胞不产生明显的病变效应。受病毒感染的人胚晶状体上皮细胞生长速度较慢,10d后可在细胞质内观察到呈不规则球形、由单层脂质膜包绕、直径60～80nm的病毒颗粒,包括致密核心和无致密核心两种颗粒。而在胞核中未发现病毒颗粒。结论风疹病毒R16株能在人胚晶状体上皮细胞中增殖,为进一步研究风疹病毒感染后先天性白内障的发生机制打下基础。     

Preliminary study on Herpes simplex virus type 1 infection of human oral epithelial cell in vitro

Objective： To explore the functions and mechanisms of herpes simplex virus type I（HSV-1） while infecting human oral epithelial cells in vitro（being similar to the infection in vivo）. Methods：An abundance of HSV-1 strains amplified in Vero cells were used to infect human oral epithelial cells. The culture supernatant was collected to infect Vero cells again. Morphology of HSV-1 was identified by inverted microscope and transmission electron microscope. Nucleic acid of the virus was detected by PCR. Results：The infected human oral epithelial cells didn＇ t display an obvious cytopathic effect（CPE） under inverted microscope（while Vero cells which were infected by the culture supernatant showed typical（CPE）. The virus particles were not observed in the cytoplasm nor in nucleus of human oral epithelial cells, however under transmission electron microscope in the cytoplasm of Vero cells, the nucleic acid of HSV-1 could be detected in infected human oral epithelial cells, by PCR. Conclusion-HSV-1 can successfully infect human oral epithelial cells. This model may provide a useful approach for studying the pathogenesis of herpes virus-associated periodontal disease.     

风疹病毒分离株在人脑神经细胞中的形态与形态发生

观察风疹病毒(RV)分离株在人的神经细胞中形态和形态发生过程。方法利用超薄切片电子显微镜技术对自行分离的RV JR 23株在人脑神经细胞中的形态与形态发生过程进行了研究。 结果RV JR23袜感染人脑神经细胞24h后,可在细胞浆的核周围观察到病毒相关结构,包括电子致密颗粒,10nm,核衣壳样结构,15～25nm,“包涵体”样结构,“条纹”样结构伴随核衣壳样颗粒,并逐渐增多。96h可见完整病毒颗粒,192h达到高峰。病毒颗粒呈圆形,由单层脂质膜包绕,直径60～80nm。病毒在双层核膜中间装配,然后披上单层核膜而成熟,核膜破碎后释放入细胞浆。病毒颗粒多见于核周围。结论RV JR23株能在人神经细胞中广泛增殖,其形态发生有独特的方式。     

体外培养人胚晶状体上皮细胞生长特性的研究

目的观察体外培养人胚晶状体上皮细胞的生物学特性。方法组织块贴壁法培养人胚晶状体上皮细胞,通过倒置相差显微镜、透射电子显微镜,采用免疫细胞化学法分析人胚晶状体上皮细胞的生长特性。结果体外培养的原代人胚晶状体上皮细胞在组织块贴壁48～72 h后从组织块边缘长出,具有上皮细胞的形态特点,第10天达到融合。第二代人胚晶状体上皮生长曲线近＂S＂形,经过1～2 d的潜伏期后进入对数生长期,需10 d左右达到融合,细胞形态呈六角形或椭圆形、超微结构保持正常,免疫细胞化学SABC法染色结果显示细胞浆内α-晶状体蛋白染色阳性。结论人胚晶状体上皮细胞具有增殖能力,第二代人胚晶状体上皮细胞是进行白内障相关研究的合适实验对象。     

人巨细胞病毒负荷量对细胞病变的影响

目的探讨感染后人巨细胞病毒负荷量与细胞病变的关系。方法采用不同滴定度的人巨细胞病毒感染传代培养的人胚肺成纤维细胞,建立人巨细胞病毒梯度感染细胞模型,荧光定量PCR法测定感染细胞内及其维持液病毒DNA量,光镜观察致细胞病变作用,电镜检查其超微结构的改变。结果人巨细胞病毒感染后,细胞内与其维持液病毒DNA量成正相关(r=0.83,P<0.01)。当细胞内病毒DNA量>105GE/106HEL时,病毒开始自细胞内释放;当维持液病毒DNA量>103GE/ml时,细胞出现病变。结论人巨细胞病毒感染后,受染细胞排放病毒致细胞外,且细胞内外病毒负荷量成正相关。细胞病变的发生情况与细胞内及其周围环境的病毒负荷量均密切相关。     

EB病毒对体外培养的人鼻咽上皮细胞感染途经的研究

用异硫氰酸荧光素(FITC)标记EB病毒(EBV)感染体外培养的人胚鼻咽上皮和鼻咽癌细胞株(CNE-1和CNE-2),对照为EBV受体阳性的Raji和Ramos细胞。在荧光显微镜下发现FITC-EBV 可与Raji和Ramos细胞结合,如事先经未标记的EBV处理则与 FITC-EBV 结合的阳性细胞数明显下降。贴壁生长的鼻咽上皮细胞不能与FITC-EBV 结合,而刮落的鼻咽上皮细胞则能与FITC-EBV 结合,结果提示鼻咽上皮细胞质膜微细损伤可能成为EBV 直接进入细胞的门户,受损的鼻咽癌细胞更易为EBV 侵入。     

Detection and localization of aleutian disease virus and its antigens in vivo by immunoferritin technique.

Tissues from mink infected with aleutian disease virus were examined by the electron microscope for the presence of virus particles. Virus-like particles, measuring 22 nm in diameter, were observed in macrophages of spleen, mesenteric lymph node and in Kupffer cells in liver of mink ten to 13 days after infection. The virus-like particles were usually present in vacuoles inside the cytoplasm of macrophages and Kupffer cells and, occasionally, similar particles were observed inside the nucleus. Cells from uninfected mink did not contain such patricles. To correlate the existence of these virus-like particles with the presence of aleutian disease virus antigen in infected cells, tissues were processed for immunoferritin technique. It was found that aleutian disease virus antigen was present in vacuoles inside the cytoplasm of cells from the infected spleen, lymph node and liver, and that the location was similar to that of the 22 nm virus-like particles. In addition, some viral antigen was also detected as cytoplasmic granular material. The nuclei of some cells also contained aleutian disease virus antigen. The pattern of aleutian disease virus antigen was similar to the distribution of virus-like particles in cells of infected tissue. It is suggested that virus replication occurs inside the nucleus with subsequent accumulation of virus in the vacuoles of the cytoplasm.     

Ultrastructural study of hepatitis B virus in biliary epithelial cells of duck liver.

Liver specimens from the Shanghai Ma ducks congenitally infected with duck hepatitis B virus (DHBV) were examined by immunohistochemical technique and electron microscopy. All the 12 serum DHBV positive ducks showed varying degrees of positive straining in hepatocytes. In 8 of the 12 ducks, DHBV antigen was discovered in the cytoplasm of biliary epithelial cells. Conventional electron microscopy revealed two kinds of virus particles in the biliary epithelial cells: 1. the incomplete virus, 40-50 nm in diameter and spherical in shape with an outer membrane, located mainly in the dilated cisternae of rough endoplasmic reticulum of the cells in large amounts; 2. the complete virions, 55-60 nm in diameter, were spherical with an outer membrane and located mainly in the cytoplasmic vesicles in small amount. We believe the particles found in the biliary epithelial cells in this study were DHBV particles. It is most likely that the infection and replication of DHBV not only take place in the liver cells but also in the biliary epithelial cells.

     

单纯疱疹病毒Ⅱ型定量紫外线照射后某些生物学特性的改变

<正> 近些年来,关于单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)与宫颈癌的病因学关系,已受到国内外的相当重视,并有许多关于 HSV-2引起体外培养细胞恶性转化和动物体内诱癌的报道。为了减少该病毒增殖性感染所致的细胞死亡,有利于感染细胞转化研究的进行,Duff 和 Rapp 以及 Rapp 和Turner 曾试用了各种方法来灭话