微流控芯片快速检测技术在铁皮石斛农药残留检测中的应用研究

目的 探究微流控芯片快速检测技术在铁皮石斛农药残留检测应用的可行性。方法 采用有机溶剂提取样本,并用QuEChERS dispersive SPE净化,通过离心式微流控芯片高通量筛选不同厂家的农药残留检测用酶,考察阴性样品基质干扰的情况,采用不同水平加标的方式,考察微流控芯片农药残留检测方法的灵敏度、重复性、准确性,并和质谱法测定的样品结果进行比较。结果 快速检测方法显著差异率：0.25;灵敏度：99.6%;特异性：96.4%;假阴性率：0.39%;假阳性率：3.57%;准确度：98.81%。采用微流控芯片农药残留快速检测方法与质谱法2种方法检测40批次样品,测定结果表明,2种测定方法结果高度一致,检测结果符合率均为100%。结论 开发的微流控农药残留芯片快速检测技术可用于铁皮石斛农药残留的检测,可以满足基层非专业人员针对大批量农药残留的筛查需求。     

呼吸信号检测的快速微生物方法应用于细胞制品无菌检查的研究

目的 评价基于呼吸信号检测原理的VersaTrek^®快速微生物检测系统作为药典替代方法用于细胞制品无菌检查的可行性。方法 以CAR-T细胞为应用对象,参考中国药典2015年版通则9201和其他国外指导原则,研究快速方法在专属性、检测限、重复性和耐用性方面是否可替代药典方法。结果 各参数的验证结果表明快速方法不劣于药典方法。结论 在经验证的前提下,VersaTrek^®系统可作为药典无菌检查的替代方法用于特定细胞产品的快速放行。     

实时荧光定量PCR法检测中药制剂中沙门菌

目的 采用实时荧光定量PCR技术,建立一种中药制剂中沙门菌的快速检测方法。方法 将中药制剂加入适量的胰酪大豆胨液体培养基中进行增菌后,取增菌液以热裂解法提取总DNA,采用实时荧光定量PCR法特异性检测沙门菌。结果 建立了中药制剂中沙门菌的实时荧光定量PCR检测法,检测可在24 h内完成,灵敏度达每10 g（10 mL）供试品1 cfu,特异性为100%,采用该方法检测18批次样品结果与药典方法一致。结论 采用实时荧光定量PCR法可明显缩短中药制剂中沙门菌检测周期,具有良好的灵敏度和特异性,可作为药典检测方法的有效补充。     

IL-17A单克隆抗体生物学活性检测方法的建立

目的 建立2种检测IL-17A单克隆抗体的生物学方法。方法 ①利用BIAcore T200系统,基于表面等离子共振技术(surface plasmob resonance,SPR)的分析方法检测IL-17A的生物学活性。②采用IL-6释放抑制法测定IL17-A单克隆抗体生物学活性。结果 采用SPR法获得的偶联最佳pH值为5.0,动力学常数为0.100 86 nmol·L^-1,样品浓度为 2.062 5~ 33 nmol·L^-1;IL-6释放抑制法检测的曲线拟合常数R²均满足>0.95,相对活性均在80%~125%,多次试验的RSD≤20%,满足重复性验证标准,符合要求。结论 2种检测方法的结果均较好,可以有效地反映IL-17A的生物学活性,可以简单、快速用于检测IL-17A单克隆抗体生物活性。     

GC测定那可丁中5种残留溶剂的含量

目的 建立可同时测定那可丁中5种残留溶剂的GC法。方法 以1 mol·L^-1的盐酸溶液为溶剂,采用顶空进样法,以DB-624大口径毛细管柱程度升温模式,FID检测器检测那可丁原料中甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、四氢呋喃5种有机溶剂残留。结果 甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、四氢呋喃分别在0.03~3.33,0.04~5.07,0.03~4.93,0.03~4.82,0.01~0.82 mg·mL^-1内线性关系良好,5种成分的平均回收率为98.77%~108.69%;检出限分别为0.02%,0.01%,0.004%,0.01%,0.003%。结论 本方法灵敏度高、准确性好、简便易行,可用于那可丁中有机溶剂残留的检测。     

HPLC快速筛查抗风湿类中成药及保健品中非法添加的10种化学药

目的 建立中成药、保健食品中非法添加的10种抗风湿类化学成分的快速测定方法。 方法 采用高效液相色谱法进行初步筛查。色谱柱：Diamonsil C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相：乙腈-0.02 mol·L^-1醋酸铵溶液,梯度洗脱;流速：1.0 mL·min^-1,检测波长：240 nm。 结果 10种化学药得到了完全分离,检出限<2 ng。 结论 本方法操作简单、快速,灵敏度高,能满足快速筛查抗风湿类中成药及保健品中非法添加化学药的需要。     

QuECHERS-液相色谱-串联质谱同时测定去屑类发用产品中8种抗感染药物

目的 建立QuECHERS-液相色谱-串联质谱法同时检测去屑类发用产品中3种三唑类抗真菌药(伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑)和5种硝基咪唑类药物(洛硝哒唑、二甲硝咪唑、塞克硝唑、替硝唑、奥硝唑)的方法。方法 样品加入1 mL饱和氯化钠溶液并用乙腈提取,通过QuEChERS净化后过滤膜上机检测,以ZORBAX SB-C₁₈色谱柱分离,0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液作为流动相梯度洗脱,电喷雾正离子模式(ESI⁺),多重反应监测扫描,基质外标法定量。结果 8种抗感染药物在20.0~1 000.0 ng·mL^-1内与峰面积均呈良好线性关系,相关系数均＞0.995,在3个不同浓度添加水平下,平均加样回收率为90.3%~113.0%,相对标准偏差RSD(n=6)为0.4%~2.6%。方法的定量限为0.056~1.89 μg·g^-1,检出限为0.014~0.56 μg·g^-1。结论 该方法具有快速简便,净化效果好的特点,可用于去屑类发用产品中8种抗感染药物的检测。     

临床药师基于CYP2D6基因检测指导他莫昔芬个体化用药及其疗效评价

目的：临床药师利用CYP2D6基因检测指导他莫昔芬个体化用药。方法：选取某院2016年3月至2020年7月就诊的168例乳腺癌患者,采用荧光原位杂交技术测定患者的基因型,临床药师根据基因类型为患者制定个体化用药建议。对于正常代谢型患者,建议他莫昔芬20 mg·d^-1;对于中间代谢型患者,建议予他莫昔芬40 mg·d^-1。结果：在168例患者中,基因检测结果显示,正常代谢型患者131例,占77.98%;中间代谢型患者37例,占22.02%。结论：临床药师基于CYP2D6基因检测可以指导他莫昔芬个体化用药。对于中间代谢型患者,乳腺癌复发率高于正常代谢型患者。     

UHPLC-MS/MS同时测定白芷中34种植物生长调节剂残留量

目的 基于UHPLC-MS/MS建立同时测定白芷中34种植物生长调节剂残留量的分析方法。方法 样品通过乙腈高速匀浆提取,浓缩后直接进样,采用Waters Acquity UPLC HSS T3(2.1 mm×150 mm,1.8 µm)色谱柱,流动相0.1%甲酸水溶液含10 mmol·L^–1甲酸铵(A)-乙腈(B),用基质匹配标液外标法进行定量。结果 34种植物生长调节剂在基质中的线性关系良好,相关系数均>0.995,检出限为0.01~9.26 µg·kg^-1,平均回收率为72.4%~100.6%,RSD均<15%。采用该法对35批白芷样品中的植物生长调节剂残留情况进行筛查,其中19批样品中检测出6种植物生长调节剂。结论 建立的植物生长调节剂多残留检测方法灵敏度高,准确性好,有针对性,且前处理简单快速,可用于筛查和检测白芷中植物生长调节剂多残留量。     

气相色谱-三重四极杆串联质谱法同时测定太子参中34种农药残留

目的 采用快速样品处理技术（QuEChERS）结合气相色谱-三重四极杆串联质谱（GC-MS/MS）建立太子参中34种农药残留同时检测的方法。方法 样品用乙腈提取,经过分散固相萃取柱净化后,在GC-MS/MS于多反应监测模式下进行检测,采用基质匹配标准曲线内标法进行定量,以3个添加水平测定样品的回收率和RSD。结果 各农药线性关系良好,相关系数均>0.997,仪器精密度RSD为0.3%~4.8%,回收率为70.6%~106.9%,重复性RSD为2.2%~7.4%,检测限均<0.005 mg·kg^-1。结论 该方法简便、灵敏、准确、可靠,可用于太子参中34种农药残留的测定。     

生化药物中猪、牛与羊性成分PCR检测的阳性对照品的构建

摘 要 目的： 建立生化药物中的猪、牛与羊性成分PCR检测方法的阳性对照品,用于检测生产原料的动物来源是猪源性、牛源性或羊源性。 方法: 分别对自行制备的猪、牛及羊源性成分的阳性对照品,进行了DNA提取,并加入猪、牛与羊特异性引物进行扩增。对扩增产物进行酶切及测序验证。结果: 猪、牛及羊阳性对照扩增产物片段长度、酶切片段长度均与目标序列长度一致。结论: 所构建的猪、牛与羊性成分的阳性对照品可广泛应用于生化药物的种属鉴别中,对生物药物中猪、牛与羊性成分的核酸检测可进行良好的实验室质量控制。     

中药川楝子炮制前后总三萜的含量变化研究

目的 采用紫外-可见分光光度法测定中药川楝子炮制前后总三萜的含量变化。方法 以川楝素为对照品,5%香草醛-冰醋酸溶液和高氯酸显色后,在515 nm处测定其吸光度值。结果 川楝子生品中总三萜含量为9.223 mg·g^-1,3批炒制品中总三萜含量平均值为8.584mg·g^-1。结论 川楝子炮制品中总三萜含量较生品有所降低,此试验结果可为川楝子的炮制减毒机制提供理论参考。     

GC测定以植物或真菌为原料的保健食品中有机磷农药残留

目的 建立保健食品中敌敌畏等16种有机磷农药残留的气相色谱测定方法,了解浙江市场上植物或真菌为原料的保健食品中有机磷农药残留情况。方法 用乙腈提取样品中农药残留,使用Rtx-1701色谱柱分离目标物,使用带火焰光度检测器（FPD）的气相检测。结果 16种有机磷在0.1~2.0 mg·L^-1内呈现良好的线性,定量限（S/N=10）均为0.05 mg·kg^-1,检出限（S/N=3）在0.01~0.02 mg·kg^-1内,在0.25,0.4,1.0 mg·kg^-1 3个添加浓度水平下,16种有机磷的加样回收率为75%~120%。市场抽样90批保健品,有机磷检出12批,检出率为13.3%。结论 该方法简单、快速、准确,适用于保健品中有机磷农药残留的检测。     

洋葱伯克霍尔德菌群3种检测方法的比较

目的 通过对环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、基于聚合酶链式扩增(polymerase chain reaction,PCR)的SYTO 9染料法及TaqMan探针实时荧光定量PCR法(简称TaqMan探针法)3种检测方法的比较,旨在建立一种能够快速、准确检测24株洋葱伯克霍尔德菌群的PCR方法。方法 根据NCBI数据库中24株洋葱伯克霍尔德菌的分子生物学信息,筛选出洋葱伯克霍尔德菌所特有的多个候选序列片段,设计能同时检出24株洋葱伯克霍尔德菌的特异性引物和探针,同时探索了LAMP法、基于PCR的SYTO 9染料法及Taqman探针法3种检测方法,优化筛选出最佳退火温度,并采用39株实验菌株对洋葱伯克霍尔德菌群检测方法开展了验证研究。结果 采用LAMP法无法实现对洋葱伯克霍尔德菌群的有效检出,采用SYTO 9染料法和TaqMan探针法可以实现对20多株洋葱伯克霍尔德菌群的有效检出,而TaqMan探针法扩增效率更高,检测灵敏度、重复性、稳定性更好,能够满足本研究的要求。结论 本研究建立了洋葱伯克霍尔德菌群的TaqMa...     

腺嘌呤功能化石墨烯修饰电极用于地高辛血药浓度检测

目的：通过简单环保的合成方法制备出腺嘌呤功能化的海绵状石墨烯（FSG）,并修饰于丝网印刷电极,作为一种检测地高辛（DG）血药浓度的电分析传感器。方法：合成的石墨烯材料采用扫描电子显微镜进行形态表征,采用循环伏安法检测修饰电极的电化学性能并进行优选,采用方波伏安扫描法测定修饰电极的标准曲线、特异性以及重现性,最后将修饰电极应用于实际样品中DG的检测,并与荧光偏振免疫测定法（FPIA）检测结果比较。结果：FSG修饰电极较其他修饰电极具有更优异的电化学性能,对DG表现出良好的电化学响应,其线性响应范围为0.01~100 ng·mL^-1,检测限为5.76×10^-3ng·mL^-1。对DG的检测不受药物制剂和血浆中其他物质的影响,且能准确测出血浆样品中DG的含量,与FPIA法测定结果无显著性差异。结论：基于FSG的电化学传感器可用于临床样品和药物制剂中DG的快速检测。     

盐酸吡咯列酮口服固体制剂中有关物质测定方法的研究及产品评价

目的:综合对比评价现行盐酸吡咯列酮产品有关物质质量标准,建立一种完善的有关物质测定方法。方法:采用HPLC及HPLC-MS/MS等方法进行检测,对原料及制剂中的杂质进行了分析及相关的比较研究。结果:现行质量标准存在一定问题;制剂中的杂质与原料生产工艺有一定相关性。结论:新建方法专属性强,灵敏度高,能够更为客观的评价不同产品中的杂质水平,可满足产品的质量控制要求。