大鼠脑缺血再灌注后诱导型环氧合酶和丙二醛的表达及川芎嗪的干预作用

目的 探讨脑缺血再灌注损伤后诱导型环氧合酶(COX-2)和丙二醛(MDA)的表达及其意义,为治疗缺血性脑病提供实验依据。 方法 以线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞的局灶性脑缺血再灌注模型,采用免疫印迹法和硫代巴比妥酸法以及与神经行为相结合的方法,观测缺血再灌注侧大脑皮质内COX-2和MDA的表达和神经功能的变化,2,3,5氯化二苯四氮唑(TTC)染色观测脑梗死体积的变化 结果 MDA与COX-2的表达呈正相关(r=0.910,P＜0.01)。COX-2和MDA在假手术组含量均较低,I 2h/R 6h两者均有明显升高,并随再灌注时间延长逐渐升高,在I 2h/R 24h达高峰,I 2h/R 48h 略有下降,但仍维持在较高水平;与I 2h/R 24h模型组比较,川芎嗪治疗组的脑梗死体积明显减小（P＜0.01),MDA含量明显降低（P＜0.01）。 结论 脑缺血再灌注后,COX-2和MDA的表达较正常组明显增多,是导致脑缺血再灌注损伤的因素之一。川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用。     

红景天苷对大鼠脑缺血再灌注氧化应激损伤的保护作用

目的:探讨红景天苷(SAL)对大鼠脑缺血再灌注损伤(IRI)的神经保护作用。方法:建立大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型。实验分为假手术组、IRI模型组、SAL预处理+IRI组(每日10 g/kg,溶于生理盐水,浓度为1. 5 g/ml,连续灌胃14 d),于再灌注24 h应用试剂盒检测大鼠缺血脑组织中丙二醛(MDA)、活性氧簇(ROS)及超氧化物岐化酶(SOD)的表达水平;应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色方法评定脑梗死体积,计算梗死体积百分比;用Western Blot和免疫荧光染色方法观察大鼠缺血侧脑组织神经元表达的变化。结果:与假手术组相比,IRI模型组MDA、ROS的表达水平明显升高,SOD的表达水平明显降低(P 0. 01),脑梗死体积百分比增大(P 0. 01),Neu N的表达降低(P 0. 01);与IRI模型组相比,红景天苷预处理+IRI组MDA、ROS的表达明显降低,SOD的表达明显升高(P 0. 05),脑梗死体积百分比明显减小(P 0. 01),Neu N的表达升高(P 0. 05)。结论:红景天苷可通过抑制脑缺血再灌注损伤大鼠的氧化应激来减少脑梗死体积而发挥神经保护作用。     

肝细胞生长因子对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的:研究肝细胞生长因子(HGF)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的影响。方法:Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,即假手术组(Sham组),脑缺血/再灌注组(I/R组),HGF处理组(HGF +I/R组)。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型。再灌注24h后,进行神经功能评分,测定脑梗死灶体积,检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:I/R组大鼠出现不同程度的神经功能障碍,缺血侧脑组织见较大的梗死灶(231.15±22.79 mm3),脑组织SOD活性(83.10±17.16 U/mgPro)明显降低、MDA含量(11.86±2.91μmol/gPro)显著增高(与Sham组比较,P0.01)。与I/R组比较,HGF+I/R组神经功能障碍明显改善、梗死灶体积(196.64±25.28 mm3)明显减小(P0.05),SOD活性(109.91±23.93U/mgPro)显著升高(P0.05)、MDA含量(7.49±2.27μmol/gPro)明显降低(P0.01)。结论:HGF对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与增强自由基清除能力,抑制脂质过氧化反应有关。     

NO供体/前体减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

一氧化氮(NO)在脑缺血损伤中具有神经保护和神经毒性双重作用[1].缺血超早期(6 h内),NO具有扩血管、抑制血小板黏附和聚集以及调节脑血流等作用,对缺血性脑损伤有保护作用.脑缺血时,静脉给予NO供体/前体硝酸甘油(Nitroglycerin,NG)/L-精氨酸(L-arginine,ARG),因血压降低等副作用,未发现其脑保护作用.本研究通过介入给药,观察NG和ARC;对脑缺血再灌注后大鼠脑梗死体积及血清NO和丙二醛(MDA)含量的影响,探讨其是否能减轻缺血性脑损伤.     

尼古丁对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的:研究尼古丁对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤是否具有神经保护作用。方法:在大鼠大脑中动脉堵塞(MCAO)前30min给予腹腔注射尼古丁酒石酸盐溶液,观察局灶性脑缺血2h再灌注24h后,大鼠神经行为学评分及脑梗死容积的变化。结果:再灌注24h后,与单纯缺血再灌注组相比,给予尼古丁酒石酸盐溶液注射可以改善动物的神经行为学评分、减少脑梗死容积百分比(P0.05)。结论:尼古丁对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用。     

马来酸桂哌齐特对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究马来酸桂哌齐特对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法:成年雄性大鼠60只,给予线栓法大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)后,随机分为马来酸桂哌齐特处理组和生理盐水对照组,观察大鼠的体重变化和死亡情况;再灌注后2 h和7 d对动物进行神经功能评分;7 d时用TTC染色法比较两组脑梗死体积。结果:两组大鼠的体重(P0.05)和总体死亡率(P0.05)无显著差异,但马来酸桂哌齐特能明显降低MCAO 24 h内的死亡率(P0.05);马来酸桂哌齐特能够显著改善MCAO损伤的神经功能评分,并可明显减少脑梗死体积百分比(P0.05)。结论:马来酸桂哌齐特对大鼠脑急性缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。     

白花丹参对大鼠脑缺血再灌注致线粒体损伤及细胞凋亡的影响

目的:通过观察白花丹参对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑细胞线粒体超微结构、氧化应激功能及脑细胞凋亡的影响,探讨白花丹参对抗脑缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法:采用大脑中动脉内线栓阻断法(MCAO)造成局灶性脑缺血再灌注模型,将SD大鼠随机分为:假手术组、单纯脑缺血再灌注组、白花丹参组及丁苯酞治疗对照组,按照6.5g/kg BW白花丹参生药及15mg丁苯酞的剂量灌胃给药,每天1次,分别于再灌注后12h、24h及48h取损伤侧大脑,应用电镜观察脑细胞超微结构的改变、比色法检测脑组织线粒体丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的变化、流式细胞技术检测脑细胞凋亡率的变化。结果:脑缺血再灌注后大鼠脑细胞内出现大量高电子密度中毒颗粒及空泡,线粒体膜崩解、内嵴消失;MDA含量明显增高(P0.05);GSH-Px酶活性显著降低(P0.05);脑细胞大量凋亡。与脑缺血再灌注组比较,白花丹参能够减少细胞内高电子密度中毒颗粒及空泡,增强线粒体膜的稳定性,显著降低MDA含量(P0.05),延缓GSH-Px酶活性的下降并保护其活性(P0.05),显著降低脑细胞凋亡率(再灌注后24h及48h组,P0.05)。结论:白花丹参可减轻大鼠脑缺血再灌注所致线粒体损伤、延缓GSH-Px酶活性下降,抑制细胞凋亡,从而发挥脑保护作用。     

VEGF降低家兔脑缺血再灌注损伤与caspase-3表达的关系

目的 探讨血管内皮生长因子（VEGF）治疗家兔局灶性脑缺血/再灌注损伤与半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）表达的关系。 方法 复制兔局灶性脑缺血/再灌注模型,分别在缺血2 h,再灌注0、1和3 h应用微量进样器将VEGF立体定向导入梗死灶周,于再灌注3 d观察神经功能、梗死体积、水肿体积、灶周凋亡数和caspase-3表达。 结果 缺血/再灌注0和1 h时,灶周给予VEGF,梗死体积分别较对照组下降23.3%、17.9%,相应的水肿体积、灶周凋亡率及caspase-3表达明显下降（P均<0.01）,神经功能恢复较好,用药越早越明显;再灌注3 h后给药,则无明显作用。梗死体积下降与caspase-3表达下降明显相关（P<0.05）。 结论 VEGF可能通过抑制caspase-3的表达减少脑缺血/再灌注损伤细胞凋亡的发生。     

小鼠脑缺血时自噬相关基因5的抗损伤作用

 目的: 观察自噬相关基因5(Atg5)在小鼠脑缺血再灌注损伤中的抗损伤作用。方法: 将雄性BALB/c小鼠随机分为假手术(sham)组、缺血再灌注(I/R)组、Atg5 siRNA组和control siRNA组。I/R组采用大脑中动脉阻塞(MCAO)60 min后再灌注24 h。Atg5 siRNA组和control siRNA组将5 μL Atg5 siRNA或scrambled siRNA在MCAO前24 h侧脑室注射。实时荧光定量PCR和Western blot检测Atg5的表达;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测抑制Atg5对缺血再灌注损伤后脑梗死面积和水肿率的影响;神经行为学评分法检测抑制Atg5对缺血再灌注损伤后神经症状的影响。结果: MCAO后再灌24 h,缺血半影区Atg5 mRNA和蛋白水平显著增高(P<0.05);Atg5 siRNA明显降低缺血再灌后Atg5 mRNA和蛋白的表达(P<0.05);侧脑室给予Atg5 siRNA能显著增加脑梗死面积和水肿率,并加重神经行为学损伤(P<0.05)。结论: 沉默Atg5加重小鼠脑缺血再灌损伤,提示MCAO后诱导的 Atg5 可减轻小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。     

高血脂对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的:检测高血脂对脑缺血再灌注损伤后缺血侧大脑皮质p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响。方法:喂食高脂饲料建立高血脂动物模型,随后线栓法建立脑缺血再灌注模型。Zea-Longa神经行为学评分法记录大鼠神经行为改变,TTC染色检测脑梗死灶体积,免疫组织化学及免疫印迹检测大脑皮质p38MAPK表达水平。结果:高血脂脑缺血再灌注后神经行为损伤加重,且梗死灶体积较单纯脑缺血再灌注明显扩大。与假手术组比较,单纯脑缺血再灌注组和高血脂脑缺血再灌注组大脑皮质p38MAPK表达明显增加,再灌注2 h时其表达量即开始增高,再灌注24 h时达高峰,而后又降低。相同再灌注时间点,与单纯脑缺血再灌注组比较,高血脂脑缺血再灌注组p38MAPK表达增高。结论:高血脂脑缺血再灌注损伤中,高血脂可上调大脑皮质p38MAPK表达,促进细胞凋亡的发生及加重炎症反应,进而加重缺血再灌注损伤。     

一氧化氮合酶抑制剂对大鼠局灶性脑缺血损伤的影响

目的:观察一氧化氮(NO)和不同类型的一氧化氮合酶(NOS)抑制剂对大鼠局灶性脑缺血损伤后的影响。方法:用线栓法复制大鼠大脑中动脉脑缺血(MCAO)模型后注射氨基胍(AG)和N^G－硝基－L-精氨酸(L-NA),观察大鼠脑缺血后脑梗死体积和脑组织中NO、MDA含量和NOS、SOD活性的变化。结果:AG有明显的减轻局灶性脑缺血损伤作用;L-NA在缺血后1 h、6 h时给药,有保护作用,但在3 h时给药,无显著改变。结论:AG对局灶性脑缺血损伤有治疗作用;L-NA在不同时间给药,对脑缺血损伤也有明显治疗作用。     

Effects and Mechanism of Action of Inducible Nitric Oxide Synthase on Apoptosis in a Rat Model of Cerebral Ischemia‐Reperfusion Injury

Inducible nitric oxide synthase (iNOS) is a key enzyme in regulating nitric oxide (NO) synthesis under stress, and NO has varying ability to regulate apoptosis. The aim of this study was to investigate the effects and possible mechanism of action of iNOS on neuronal apoptosis in a rat model of cerebral focal ischemia and reperfusion injury in rats treated with S‐methylisothiourea sulfate (SMT), a high‐selective inhibitor of iNOS. Seventy‐two male Sprague‐Dawley (SD) rats were randomly divided into three groups: the sham, middle cerebral artery occlusion (MCAO) + vehicle, and MCAO + SMT groups. Neurobehavioral deficits, infarct zone size, and cortical neuron morphology were evaluated through the modified Garcia scores, 2,3,5‐triphenyltetrazolium chloride (TTC), and Nissl staining, respectively. Brain tissues and serum samples were collected at 72 hr post‐reperfusion for immunohistochemical analysis, Western blotting, Terminal deoxynucleotidyl transferase‐mediated dUTP‐biotin Nick End Labeling assay (TUNEL) staining, and enzyme assays. The study found that inhibition of iNOS significantly attenuated the severity of the pathological changes observed as a result of ischemia‐reperfusion injury: SMT reduced NO content as well as total nitric oxide synthase (tNOS) and iNOS activities in both ischemic cerebral hemisphere and serum, improved neurobehavioral scores, reduced mortality, reduced the infarct volume ratio, attenuated morphological changes in cortical neurons, decreased the rate of apoptosis (TUNEL and caspase‐3‐positive), and increased phospho (p)‐AKT expression in ischemic penumbra. These results suggested that inhibition of iNOS might reduce the severity of ischemia‐reperfusion injury by inhibiting neuronal apoptosis via maintaining p‐AKT activity. Anat Rec, 299:246–255, 2016. © 2015 Wiley Periodicals, Inc.     

Neuroprotective effect of 20(S)-ginsenoside Rg3 on cerebral ischemia in rats

This study was conducted to investigate the neuroprotective effects of 20(S)-ginsenoside Rg3 on focal cerebral ischemia in rats. Middle cerebral artery occlusion (MCAO) model in male Wistar-Kyoto (WKY) rats was employed. The behavioral tests were used to evaluate the damage to central nervous system. The infarct area of brain was assessed in the brain slices stained with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC). Hydrogen clearance techniques were used to monitor regional cerebral blood flow (rCBF), spectrophotometric assay methods were used to determine the activities of superoxide dismutase (SOD) and glutathione-peroxidase (GSH-Px), contents of malondialdehyde (MDA) and adenosine triphosphate (ATP) of the brain. Furthermore, the respiratory control ratio (RCR=State 3/State 4) was assessed in the brain mitochondria. The results showed that sublingual vein injection of 20(S)-ginsenoside Rg3 at doses of 10 and 5 mg kg(-1), but not 2.5 mg kg(-1) exhibited significant neuroprotective effects on rats against focal cerebral ischemic injury by markedly decreasing neurological deficit scores, reducing the infarct area and enhancing the rCBF compared with the control group. At the same time, 20(S)-ginsenoside Rg3 significantly improved mitochondrial energy metabolism, antagonized decreases in SOD and GSH-Px activities and increase in MDA level induced by cerebral ischemia. All these findings suggest that 20(S)-ginsenoside Rg3 might provide neuroprotection against the cerebral ischemia-induced injury in rat brain through reducing lipid peroxides, scavenging free radicals and improving the energy metabolism.     

氟代柠檬酸抑制缺血后适应对树鼩脑缺血后海马HIF-1α/iNOS信号通路调控的脑损伤机制

目的:观察缺血后适应(PC)对树鼩脑缺血时海马HIF-1α/i NOS信号通路的调控作用,探讨抑制星形胶质细胞(AS)代谢加重脑损伤的机制。方法:光化学法建立血栓性脑缺血动物模型,氟代柠檬酸盐(FC)作为AS代谢抑制剂,于脑缺血后4 h闭/开缺血侧颈总动脉5 min,共3个循环以建立缺血PC模型。67只雄性树鼩随机分为对照组(n=9)、缺血4 h组(n=9)、缺血24 h组(n=9)、缺血PC 4 h组(n=9)、缺血PC 24 h组(n=9)、FC预处理4 h组(n=11)和FC预处理24 h组(n=11)。采用TTC染色观察树鼩脑梗死体积的变化,通过HE染色观察海马神经元病理学改变,用激光多普勒监测缺血区区域性脑血流(r CBF),免疫组化及Western blot检测海马i NOS表达,用分光光度计测定海马NO产量,用ELISA分析海马HIF-1α水平的变化。结果:脑梗死体积随缺血时间延长而增大,以缺血24 h为显著(P 0. 05);脑缺血后4 h和24 h皮层r CBF均下降(P 0. 05);而海马HIF-1α和i NOS表达增强,NO生成显著升高(P 0. 05)。缺血PC可增加皮层r CBF(P 0. 05),显著缩小脑梗死体积(P 0. 05),下调海马i NOS表达并减少NO的生成(P 0. 05)。而FC预处理组r CBF显著低于缺血组(P 0. 05),海马神经元损伤程度较缺血组加重,脑梗死体积随之增大(P 0. 05)。结论:缺血PC通过调控HIF-1α和i NOS表达而减轻缺血性脑损伤,抑制AS功能可削弱缺血PC介导的保护效应而加重脑损伤。     

Cilostazol protects against hemorrhagic transformation in mice transient focal cerebral ischemia-induced brain damage

Cilostazol, an antiplatelet drug used to treat intermittent claudication, has been reported to offer neuroprotection and endothelial protection in animals with ischemic brain injury. Here, we evaluated the protection afforded by cilostazol against ischemic brain injury and hemorrhagic transformation. Mice subjected to a 2-h filamental middle cerebral artery (MCA) occlusion were treated with cilostazol (10 mg/kg, intraperitoneally just after the occlusion) or with vehicle. Histological outcomes (infarct volume and hemorrhagic transformation) and Evans blue extravasation were assessed after reperfusion. Mean infarct volume, hemorrhagic transformation, and Evans blue extravasation were all significantly reduced in the cilostazol-treated group. Thus, cilostazol protected against ischemic brain injury and hemorrhagic transformation in mice subjected to transient focal cerebral ischemia.     

八肽胆囊收缩素对内毒素休克时大脑皮质损伤的影响及其机制初探

目的：观察八肽胆囊收缩素（CCK-8）对内毒素休克（ES）时大脑皮质损伤的影响，并探讨其可能的机制。 方法： 将日本大耳白兔经静脉注入脂多糖（LPS，8 mg/kg）复制ES模型。32只家兔随机分为对照组、LPS组、CCK-8+LPS组和非特异性CCK受体拮抗剂丙谷胺（Pro）+LPS组，每组8只。监测平均动脉压（MAP）变化，光、电镜观察大脑皮质的组织形态学改变，比色法检测大脑皮质NOS和SOD活性、NO和MDA含量的改变。用SD大鼠 （12只，同上复制模型及分组） 以免疫组织化学染色法观察大脑皮质iNOS和nNOS表达的变化。 结果： 注入LPS后，MAP明显持续低于对照组（P<0.01），大脑皮质组织水肿，iNOS和nNOS表达增强，NOS活性、NO和MDA含量显著高于对照组（P<0.05、P<0.01和P<0.01），SOD活性显著低于对照组（P<0.01）。预先注入CCK-8可明显减轻上述变化，预先注入丙谷胺Pro则加剧以上变化。 结论： CCK-8可减轻ES时的大脑皮质损伤，其机制可能与其抗氧化作用和抑制NO的过量生成有关。     

缺血后处理局灶性脑缺血再灌注模型大鼠相关通路以及白细胞介素8的表达

背景：缺血后处理能够激发内源性保护作用,抑制缺血再灌注后的炎症反应,但具体机制目前尚不明确。目的：观察缺血后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠Toll样受体4-核因子κB信号转导通路以及白细胞介素8表达的影响,进一步阐述缺血后处理的神经保护机制。方法：将110只大鼠随机分为假手术组10只、模型组和缺血后处理组各50只,将大鼠按照Zea-Longa法建立局灶性脑缺血再灌注模型,再进行缺血后处理,即大脑中动脉闭塞2 h后进行3个循环的再灌注15 s/缺血15 s,设模型组和假手术组作对照。对各组进行神经行为学评分,TTC染色测定脑梗死体积,免疫组织化学法检测脑组织Toll样受体4、核因子кB和白细胞介素8蛋白表达,原位杂交法检测其mRNA表达。结果与结论：模型组、缺血后处理组大鼠都出现神经行为学缺失及缺血侧大脑半球梗死。再灌注6,12,24,48,72 h,与模型组相比,缺血后处理组大鼠神经行为学评分显著改善(P < 0.05)、脑梗死体积明显减少(P < 0.05)。模型组和缺血后处理组Toll样受体4、核因子кB、白细胞介素8蛋白和mRNA表达于再灌注6 h时已升高,24 h达峰值。再灌注6,12,24,48,72 h,与模型组各对应时间点亚组比较,缺血后处理组上述各因子表达均显著降低(P < 0.05)。结果证实,缺血后处理可抑制缺血再灌注引起的炎症反应,通过抑制Toll样受体4-核因子κB信号转导通路和下调白细胞介素8的表达,以此发挥神经保护作用。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程