gasdermin3在小鼠同步化毛囊周期中的表达

目的 研究新基因gasdermin3在小鼠同步化毛囊周期中表达的规律及意义.方法 通过松蜡合剂脱去小鼠背部毛囊静止期毛发,诱导脱毛区域毛囊周期同步化,取脱毛诱导后5、9、18、25 d等4个时相点的材料作RT-PCR、Western blot以及免疫组织化学(IHC)检测.结果 在所选择的4个时相点都检测到了gasde...     

GasderminA3基因突变对小鼠毛囊β-catenin表达的影响

目的探讨GasderminA3(GSDMa3)基因突变前后β-catenin在毛囊中表达的变化。方法采用免疫组化S-P法、RT-PCR、Western blot等方法,检测出生后11d(毛囊生长期)、16d(毛囊退化早期)、18d(毛囊退化晚期)、24d(毛囊静止期)等各个时相点的GSDMa3基因突变鼠和C57BL/6(B6)鼠背皮毛囊β-catenin的表达表化。结果GSDMa3基因突变鼠和B6鼠β-catenin的表达均从11～24d逐渐减弱,但GSDMa3基因突变鼠β-catenin的表达在各个时期均强于B6鼠。在生长期,β-catenin表达于内外根鞘和毛母质细胞中,在GSDMa3基因突变鼠的表达强于B6鼠;在退化期,β-catenin主要表达于外根鞘和毛母质细胞中,在突变鼠的表达更强于B6鼠;在静止期,β-catenin主要表达在突变鼠的外根鞘细胞中,而在B6鼠的毛囊中表达很少。结论GSDMa3基因可能通过调节β-catenin的表达,影响毛囊的生长和发育。     

毛囊黑素谱系细胞中β-catenin在毛囊周期中的表达

目的探讨毛囊周期中,β-catenin在毛囊黑素谱系细胞中的表达变化.方法采用β-gal染色、石蜡切片免疫组化、RT-PCR、Western blot等方法检测Dct-Lac-Z CD1小鼠毛囊的黑素谱系细胞随着毛囊的周期其细胞数量、分布的变化及β-catenin的表达在mRNA和蛋白水平表达量及部位的变化.结果 WB及RT-PCR结果表明在毛囊周期中,β-catenin的表达总量由高到低依次为生长早期(P4、P29)、生长中期(P8)、静止期(P23)、退化期(P18),数据经统计学单因素方差分析,各组间存在显著差异(P<0.05).免疫组化结果显示在黑素谱系细胞中,β-catenin强表达于活化的黑素母细胞、黑素干细胞和分化过程中的黑素细胞,弱表达于静息的黑素干细胞、成熟分化的黑素细胞.结论β-catenin的上调能促进毛囊黑素谱系细胞的分化,其周期性的表达变化可能是毛发周期性色素生成的基础.     

大鼠生长期触须毛囊干细胞中FGF-13的表达研究

目的探讨大鼠生长期触须毛囊中以及体外培养的毛囊隆突部细胞即毛囊干细胞中FGF-13的表达分布及其意义.方法分别采用免疫组织化学方法和免疫细胞化学方法检测FGF-13的表达.结果体外和在体两种情况下,毛囊隆突部细胞都有FGF-13的表达,在体情况下毛囊Bulge区以下毛球部以上的外根鞘细胞中亦有干细胞标记和FGF-13的表达.结论提示FGF-13参与生长期触须毛囊隆突部细胞沿毛囊外根鞘向下迁移这一过程.     

整合素β1在大鼠毛囊中的表达稳定性研究

目的探讨整合素β1（β1 integrin）在大鼠背皮毛囊发育及生长周期中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学技术检测β1 integrin在胚胎E17．5、E18．5、E19、E20和出生后1、7、29d的表达。结果在E17．5、E18．5、E19、E20 β1 integrin在发育毛囊中未见表达,在胚胎前期即E17．5、E18．5时表皮呈阳性表达,到E19、E20转为阴性。出生后1、7d β1 integrin在毛囊外根鞘中下段接近毛球部呈阳性表达,29d在皮脂腺细胞呈阳性表达。结论β1 integrin在大鼠毛囊生长期作为毛囊干细胞标记物比较好,并且它对毛囊干细胞维持自身的稳定性有重要作用。     

JNK在小鼠毛囊周期中的动态表达

目的研究JNK在生后小鼠背皮毛囊周期中的表达规律及探讨其对毛囊周期的调控作用。方法选择生后不同时期(1、7、14、16、21、31 d)C57BL/6J小鼠54只,采用RT-PCR技术,检测JNK mRNA在小鼠背皮毛囊周期中的表达情况;采用Western blot和免疫组化技术,进一步检测JNK蛋白在毛囊周期中的表达规律。结果 RT-PCR检测结果表明,在毛囊周期中,JNK1在生长早期(生后7、31 d)表达最强,退化期(生后16 d)和静止期(生后21 d)维持较弱的表达;JNK2在各时相点均有中等强度表达。单因素方差分析显示,JNK1的表达水平在生长早期(0.99±0.02)与静止期(0.30±0.01)间存在显著差异(P<0.05),JNK2在生长早期(0.77±0.01)与退化期(0.97±0.03)间存在显著差异(P<0.05)。Western blot与RT-PCR检测结果一致。免疫组化结果显示,在毛囊生长期,JNK主要表达于毛母质和外根鞘;进入退化期,JNK表达于外根鞘和上皮索;静止期毛囊中无表达。结论 JNK在毛囊周期中呈动态表达模式,生长期JNK可能通过影响毛母质细胞的增殖和/或分化来调节毛囊生长;退化期JNK可能涉及毛囊细胞的凋亡过程。     

毛囊干细胞的研究进展

毛囊干细胞在毛囊的形态发生和毛发的周期生长起着重要的作用。毛囊干细胞具有干细胞的一般特征，并定位于毛囊隆突部。它具有自己特定的表面标志物、调节基因以及传导通路。     

雄激素受体在大鼠触须毛囊干细胞中的表达研究

目的探讨在毛囊周期的3个不同时期(生长期、退化期和静止期)中大鼠毛囊干细胞中以及体外培养的毛囊干细胞中雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达规律及其意义.方法采用免疫组织化学方法检测AR表达,采用总RNA提取法及RT-PCR检测AR mRNA的表达情况.结果①在体情况下,生长期、退化期和静止期毛囊干细胞中均有AR的表达,AR mRNA在生长期呈强表达,而在退化期和静止期表达微弱;②体外情况下,培养的毛囊干细胞中有AR的表达.结论毛囊干细胞在整个毛囊周期中均有AR的表达,是雄激素作用的靶细胞;AR mRNA在毛囊周期中呈规律性表达,提示雄激素与其受体的相互作用可能对毛囊干细胞的分化具有重要的促进作用.     

毛囊隆突细胞

毛囊具有不断更新的功能,提示毛囊中存在干细胞。由于周期漫长的细胞集中存在于隆突部位,所以隆突细胞被认为是表皮组织的干细胞。现已成功证实隆突细胞具有干细胞的一系列特性:高增殖能力、多向分化能力等。基于技术的飞速发展,人们对隆突细胞的表面标志、分离技术以及基因表达都有了较深刻的认识。     

新生小鼠不同部位皮肤毛囊早期发育差异的比较

目的：本研究旨在观察出生后小鼠不同部位皮肤毛囊早期发育生长差异及细胞色素C的表达分布。方法：对新生1-9天的昆明白系小鼠背部、尾部和触须部皮肤取材,进行HE染色,用二步法免疫组织化学对组织进行细胞色素C进行表达分布检测。结果：新生小鼠不同部位皮肤毛囊发育差异很大,这种差异不仅体现在形态差异上,而发育时间的差异也十分明显。小鼠出生后背部皮肤和尾部皮肤的毛囊发育都经过了一个非线性的发育和生长期,过了非线性的发育和生长期才开始快速生长,相比较尾部发育略迟于背部。触须部毛囊发育特征和背部尾部差异很大,一出生便可看到较成熟的触毛,没有经过稳定期便开始发育。结论：通过形态学比较,结合CytC表达分布水平,发现新生小鼠不同部位皮肤毛囊早期发育存在形态和时间上的差异。     

重建毛囊的组织学研究

目的：观察毛囊真皮鞘成分和上皮成分细胞间的相互作用和相互影响。方法：采用细胞三维培养技术将分段毛囊上皮细胞分别与毛乳头细胞、真皮鞘细胞及真皮成纤维细胞进行器官型培养来重建表皮和毛囊。结果：在真皮成纤维细胞凝胶上培养的毛囊间表皮细胞、上段、下段和球部细胞重建出了表皮，而上段细胞形成的表皮最厚，球部细胞形成的表皮最薄；在毛囊真皮鞘细胞胶原凝胶上时上段和下段细胞重建出了毛囊结构。结论：首次成功地证明毛囊     

毛囊细胞移植法诱导毛囊的初步研究

目的 构建一个可靠有效的移植毛囊细胞诱导毛发发育的模型,以治疗脱发.方法 取自愿捐献的成人头皮标本,联用显微分离与免疫磁珠法获得人毛囊干细胞;消化法获得毛乳头细胞.培养后混合植入裸鼠皮下,观察毛囊形成情况.结果 在裸鼠的皮肤切片中可以看到较为完整的毛囊结构形成.结论 毛囊细胞移植法可以在体内诱导出毛囊样结构,为将来治疗脱发奠定了基础.

Abstract：

Objective To establish a convenient and reliable method for inducing hair regeneration by follicular cell implantation for the treatment of alopecia. Methods The human hair follicle stem cells were separated and purified by micromanipulation and magnetic cell sorting, and human scalp dermal papilla cells were isolated by enzyme digestion. The two cells were mixed and implanted subcutaneously in nude mice to observe the regeneration of the hair follicles. Results Formation of intact hair follicle-like structures was observed in the skin sections of the recipient nude mice. Conclusion Follicular cell implantation can induce hair follicle-like structures in nude mice, which provides a means for efficient hair regeneration for treatment of hair loss.     

人毛乳头细胞在不同传代时期某些细胞因子表达的变化

目的 观察毛乳头细胞在体外培养条件下的生长特性,为毛囊重建提供参考资料.方法 采用二步酶消化法分离正常人头皮毛囊的毛乳头细胞,在体外进行传代培养,用免疫组化方法观察不同传代毛乳头细胞生长因子表达的差异.结果 高代培养毛乳头细胞逐渐丧失其凝集性生长的特性,生长因子的表达逐渐消失.结论 毛乳头细胞的生长及其特性的保持受许多因素的影响,体外培养的毛乳头细胞与体内有差异.低代毛乳头条件培养基可恢复毛乳头细胞部分生长特性.     

人游离毛囊体外培养及动态观察

目的进行人发毛囊的体外培养,并对其中后期改变进行形态学、组织学观察。方法将美容除皱术中切除的头皮在无菌条件下分离出游离的毛囊,培养于含血清DMEM培养基中,动态观测毛囊的生长速度及形态学、组织学改变。结果成功进行了人发毛囊的体外培养,毛囊培养中后期呈退化期改变。结论在含血清DMEM培养基中生长的毛囊易较早进入退化期,简化了游离毛囊的常规病理制片方法。     

利用中性蛋白酶消化法扩增毛囊干细胞的实验研究

目的完善毛囊干细胞的体外培养扩增体系。方法接种毛囊干细胞于滋养层细胞上,利用中性蛋白酶分离毛囊干细胞和滋养层细胞传代,进行鉴定并计算扩增数目。结果经中性蛋白酶传代后,毛囊干细胞生长良好,可连续培养至15代;第12代(P12)毛囊干细胞免疫细胞化学检测均表达K15、β1-整合素及p63,原代(P0)至P12毛囊干细胞均表达K15 mRNA。以P10计算,细胞数量为1.2×1036,约250 m2,满足构建的需要。结论通过滋养层接种毛囊干细胞结合中性蛋白酶消化法传代,可大量扩增毛囊干细胞。     

人各段毛囊上皮细胞培养的增殖力比较

目的 比较毛囊球部和隆突部上皮细胞的增生能力。方法 采用０．５％分离酶将人正常头皮毛囊上皮组织与真皮组织分离,再将毛囊上皮细胞分成上段、下段和球部,然后进行传代培养。结果：上段细胞传代次数最多,形成的克隆数量多,细胞生长活力最强,而球部细胞的生长能力最差,下段细胞有少数能形成进行性生长克隆。结论：毛囊上段细胞的增生能力最强,支持隆突激活假说,即毛囊干细胞定位于隆突部。     

螺内酯对体外培养的人毛囊影响的实验研究

目的：观察螺内酯（spironllactone）对体外培养的人毛囊生长的影响。方法：建立人毛囊体外培养模型，加入不同浓度的螺内酯，通过目镜测微尺测量毛囊的长度，利用^3H-胸腺嘧啶核苷酸（^3H-TdR）掺入法检测毛囊DNA合成率。结果：螺内酯各浓度组毛囊生长长度与空白对照组相比无明显差异（P〉0．05）。^3H-TdR掺入法检测与长度检测结果一致。结论：螺内酯对体外培养的人毛囊的生长无促进和抑制作用。     

横断毛囊体外再生的形态学研究

目的：研究毛囊横断后再生的条件，探索毛囊干细胞的初步定位．方法：将人头皮分离成游离的毛囊，共进行了8批横断毛囊培养，每批培养毛囊约30根，每批分3组，从不同位置(紧贴毛球、毛囊下1／3处、毛囊下1／2处)横断毛囊后进行培养，观测毛囊的生长情况及形态学改变．结果：紧贴毛球上方或在毛囊下1／3横断，上段毛囊大部分可以再生出新毛球样结构，毛囊可继续生长，上段毛囊平均生长长度分别为0．78mm和0．67mm，可生长比例分别为75％和70％；在毛囊下1／2横断，上段毛囊可生长比例仅为12．5％，明显低于前两组(P＜0．01)．结论：在一定位置横断毛囊，上段的毛囊细胞可以发生增殖分化，毛囊可以继续生长，并再生出新的毛球样结构，表明上段毛囊是其干细胞所在地．     

正常人毛乳头细胞和真皮鞘细胞的生长特性观察

目的 观察毛乳头细胞和真皮鞘细胞在体外培养条件下的生长特性。方法 采用胶原酶消化法培养正常人头皮毛囊的毛乳头细胞和真皮鞘细胞,在体外进行传代培养,测定毛乳头细胞不同时相点的细胞数,并观察表皮细胞生长因子、氢化可的松＋胰岛素、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对毛乳头细胞和真皮鞘细胞增殖的影响。结果 毛乳头细胞、真皮鞘成纤维细胞和真皮成纤维细胞的生长呈现３个时相,即停滞期、指数生长期和缓慢生长期。３种细胞都有４ｄ的停滞期,５～１１ｄ为指数生长期,之后呈现出缓慢生长。ＥＧＦ对３种细胞都有显的促进作用（Ｐ〈０．００１）,尤其是对真皮鞘成纤维细胞的作用更强。氢化可的松和胰岛素、ＧＭ－ＣＳＦ对３种细胞的作用不明显。毛乳头细胞、真皮鞘细胞和成纤维细胞的倍增时间分别为６０、５９．２、７６．８ｈ。结论 ＥＧＦ对毛乳头细胞、真皮鞘细胞和