新生大鼠海马齿状回神经干细胞的分离培养与鉴定

目的：从新生大鼠海马齿状回分离并鉴定神经干细胞。方法：利用无血清方法分离、培养新生大鼠齿状回神经细胞,采用免疫细胞化学方法检测神经巢蛋白(Nestin)并鉴定神经元和神经胶质细胞。结果：从新生大鼠海马齿状回分离的细胞群可不断增殖形成神经球,并能自我更新,表达Nestin。自神经球分化出的细胞分别表达神经元、星形胶质细胞特异性抗原。结论：自海马齿状回分离的神经干细胞具有自我更新能力和多分化潜能。     

仙茅苷对学习无助抑郁模型小鼠海马细胞凋亡的作用及其机制研究

目的 研究仙茅苷对学习无助抑郁模型小鼠海马细胞凋亡的作用及其机制。方法 给予仙茅苷预处理,建立小鼠学习无助模型,用行为学实验评估其抑郁样行为,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL）检测海马区细胞凋亡数,免疫荧光法检测海马区胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）荧光强度,免疫印迹法检测海马齿状回（dentate gyrus,DG）区相关蛋白的表达水平。结果 仙茅苷能明显缩短学习无助模型小鼠强迫游泳和悬尾试验中的不动时间（P<0.05）,减少其海马DG区的神经细胞凋亡的数量（P<0.05）,减弱其星形胶质细胞活化（P<0.05）,促进蛋白激酶A磷酸化水平和突触后密度蛋白95的表达（P<0.05）。结论 仙茅苷在学习无助诱导的抑郁样行为中具有保护作用,可能是通过促进蛋白激酶A通路,减少海马DG区的颗粒细胞凋亡和抑制星形胶质细胞活化来介导的。     

二苯乙烯苷对癫痫大鼠神经细胞增殖的影响及其机制探讨

目的观察二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,TSG)对癫痫(epilepsy,EP)大鼠神经细胞增殖的影响,并探讨其可能机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、二苯乙烯苷干预组。应用立体定向脑室内微量注射的方法建立海人酸(kainic acid,KA)诱导的大鼠癫痫模型。造模前30 min腹腔注射给药,致痫后6 h腹腔内注射TSG溶液(3 mg/kg)剂量,次日开始每日8时给予腹腔注射TSG溶液(3 mg/kg)剂量,每日1次,连续注射,共注射42 d,KA模型组动物及假手术组给予等量生理盐水腹腔内注射。用免疫组织化学技术观察TSG对大鼠海马齿状回颗粒细胞下层BrdU阳性细胞数目及海马齿状回区星形胶质细胞数目增殖的影响。结果癫痫发生后各组海马齿状回区及皮层均存在GFAP免疫反应阳性细胞,经统计分析二苯乙烯苷干预组较模型组GFAP免疫反应阳性星形胶质细胞减少,差异有统计学意义(P0.01);BrdU免疫组织化学染色研究显示二苯乙烯苷干预组较假手术组及模型组海马齿状回区细胞增殖数目增加(P0.01),差异有显著统计学意义。结论二苯乙烯苷存在抑制大鼠海马区星形胶质细胞增生,促进增神经细胞增殖的作用。     

酒精对大鼠海马兴奋性氨基酸含量的影响

目的 观察酒精对大鼠海马兴奋性氨皋酸类神经递质的影响.方法 本实验采用微透析和高效液相色谱法-电化学技术观察饮用酒精对大鼠海马兴奋性氨基酸谷氨酸(glutamate,Glu)和天冬氨酸(asparcte,Asp)含量的影响.结果 饮用酒精4周大鼠海马齿状回(dentate gyrus,DG)区细胞外液Glu含量与对照组相比明显减少(P<0.01),Asp含量无明显变化.饮用酒精2周大鼠海马DG区细胞外液GIu含量无明显变化.结论 长期饮用酒精可使海马Glu释放减少.     

光生物调节促进慢性低灌注大鼠海马神经元再生改善认知功能及其抗炎症作用

目的 探讨光生物调节(photobiomodulation, PBM)对脑慢性低灌注大鼠海马神经元再生及认知功能和炎症损伤的影响。方法 将雌性SD大鼠去双侧卵巢,1周后随机分为假手术组(Sham)、BCCAO组、PBM干预组(BCCAO+PBM),每组8只。BCCAO组永久性结扎大鼠双侧颈总动脉(bilateral common carotid artery occlusion, BCCAO)建立脑慢性低灌注模型,但不予光照;Sham组只钝性分离左、右侧颈总动脉,但不结扎,不予光照。BCCAO+PBM组在永久性结扎BCCAO的基础上,采用808 nm激光隔日照射大脑额叶皮层1个月,每次5 min,光剂量为20 mW/cm²。造模完成后第86～90天行Morris水迷宫测试观察大鼠的空间学习记忆功能,第90天处死大鼠进行免疫荧光染色和Western blot分析。免疫荧光染色检测海马齿状回(dentate gyrus, DG)区细胞增殖标记物5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、新生神经元前体细胞的特异性标志蛋白DCX、成...     

鱼藤酮帕金森大鼠多脑区铁积聚与胶质细胞激活

【摘要】目的 观察鱼藤酮帕金森病（PD）大鼠铁积聚脑区胶质细胞是否激活。方法 雄性Wistar大鼠予颈背部皮下注射鱼藤酮（2mg/kg）葵花油乳化液,每日一次,连续注射4到6周制备PD模型,8周时做冰冻切片,行免疫组化染色观察PD大鼠铁积聚脑区小胶质细胞（OX42）和星形胶质细胞（GFAP）。结果 PD大鼠黑质致密部、海马齿状回颗粒细胞层、纹状体苍白球、小脑齿状-间位核及小脑面神经核中铁染色显著积聚区域内小胶质细胞和星形胶质细胞染色积分光密度值较正常组明显增加(P＜0.05)。结论 鱼藤酮PD大鼠铁积聚脑区小胶质细胞、星型胶质细胞均呈激活状态。     

新生大鼠HIBD后海马增殖细胞分化和bFGF的相关性探讨

目的: 观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马齿状回增殖细胞分化情况,及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 干预对其的影响,探讨实验大鼠的远期行为学变化.方法: 7日龄SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血组和bFGF干预组,建立HIBD模型(假手术组不予缺氧处理),分别于术后5、10、14、21 d取脑,采用免疫荧光双标记观察大鼠海马齿状回BrdU/MAP-2、BrdU/GFAP阳性细胞表达,并应用Y-迷宫法进行行为学测定.结果: 缺氧缺血组及bFGF干预组BrdU/MAP-2、BrdU/GFAP阳性细胞于术后10、14 d较5 d时有所升高(P＜0.05),21 d下降至5 d时的水平.与假手术组及缺氧缺血组比较,bFGF干预组于HIBD后各个时间点BrdU/MAP-2、BrdU/GFAP阳性细胞均有所增加(P＜0.05).Y-迷宫测试显示bFGF干预组学习记忆能力较缺氧缺血组有所提高(P＜0.05).结论: HIBD后海马齿状回增殖细胞存在分化为神经元及星形胶质细胞的现象,bFGF能够促进HIBD后海马齿状回增殖细胞向神经元及星形胶质细胞分化,并可以改善大鼠后期行为记忆能力.     

长期给酒精对清醒大鼠海马部分兴奋性氨基酸含量变化的影响

目的:探讨长期给酒精对大鼠海马兴奋性氨基酸类神经递质的作用。方法:本实验采用微透析和高效液相色谱法-电化学(HPLC-ECD)技术观察长期给酒精后大鼠海马兴奋性氨基酸谷氨酸(glutamate,G lu)和天冬氨酸(aspartate,Asp)的含量变化。结果:长期给酒精4周大鼠海马大鼠海马齿状回(dentate gyrus,DG)区细胞外液G lu含量与对照组相比明显减少(P<0.01),Asp含量无明显变化。给酒精2周大鼠海马DG区细胞外液G lu含量无明显变化。结论:长期给酒精对海马的影响是以抑制兴奋性为主,主要与抑制谷氨酸释放量有关。     

电针对高血脂合并脑缺血大鼠海马齿状回星形胶质细胞活化的影响

目的观察电针对高血脂合并脑缺血大鼠海马齿状回星形胶质细胞活化的影响。方法 SD成年雄性大鼠随机分为正常组、模型组、假手术组、电针1组和电针2组。高血脂阶段:饲喂高脂饲料42 d造模,电针1组电针丰隆穴,每天1次,共7 d,电针2组大鼠不做任何干预。合并脑缺血阶段:行Fecl_3诱导的脑缺血模型手术。术后电针组均电针丰隆及百会穴,每天1次,共14 d。手术后第1天对所有大鼠进行神经功能缺损评分,HE染色观察神经元细胞形态学变化。实验完成后检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平,免疫组化法检测缺血侧大脑海马齿状回和皮层缺血半暗带胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达增加。结果与正常组比较,模型组大鼠TC、TG、LDL升高(P0.05),电针组大鼠TG、LDL降低(P0.01);模型组大鼠神经功能缺损评分增高,HE染色可见明显核固缩,组织排列散乱,海马齿状回和皮层缺血半暗带GFAP表达增加。与模型组相比,电针组神经功能缺损评分降低。HE染色可见神经元细胞形态有所恢复,海马齿状回和皮层半暗带GFAP表达在术后第1天减少,第7天增加,第14天减少。结论高血脂阶段电针干预配合脑缺血后电针干预,可降低血脂水平改善大鼠神经功能,调节大鼠海马星形胶质细胞的活化,从而促进脑损伤神经细胞的修复。     

新生大鼠海马齿状回神经干细胞的鉴定及褪黑激素对其分化的影响

目的 :探索新生大鼠海马齿状回神经干细胞分离培养及鉴定方法 ,并观察不同剂量褪黑激素对神经干细胞分化的影响。方法 :从新生大鼠海马齿状回分离得到神经干细胞 ,采用无血清培养技术进行培养 ,并采用 10、10 0 μmol/L褪黑激素诱导分化。应用细胞免疫化学方法进行神经干细胞巢蛋白 (nestin)、神经元特异性烯醇化酶 (neuronspecificenolase ,NSE)、胶质纤维酸蛋白 (glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)检测以进行细胞鉴定。结果 :鉴定表明从新生大鼠海马齿状回分离培养的细胞具有神经干细胞的特征 ,并可在体外增殖 ,经诱导可分化为神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞。褪黑激素能促进神经干细胞向神经元分化 ,但低浓度组与高浓度组的褪黑激素对神经元的分化并无显著性差异。结论 :从新生大鼠海马齿状回成功分离培养了神经干细胞 ,是研究细胞诱导分化的良好模型。褪黑激素能促进神经干细胞向神经元分化。     

肝X受体介导肾小球系膜细胞胆固醇外流

目的:探讨肝X受体在肾系膜细胞脂质代谢中的作用及机制.方法:肝X受体两种亚型的表达运用反转录-多聚酶链式反应和蛋白印迹实验方法证实.ATP结合盒蛋白(ATP-binding cassette,ABC)A1和G1的表达水平用实时荧光定量多聚酶链式反应及转染荧光素酶报告基因方法研究.胆固醇的外流量用[3H]标记胆固醇方法测量.结果:肝X受体两种亚型在肾、肾小球、系膜细胞中均有表达.肝X受体人工合成配体TO901317处理系膜细胞后,不仅ABCA1表达上调,而且ABCG1的表达也增高,并导致游离胆固醇外流增加.结论:在小鼠肾系膜细胞中存在肝X受体两种亚型的表达,肝X受体能够通过上调ABCA1和ABCG1的表达,增加系膜细胞中游离胆固醇的外流,减轻脂质负荷和细胞损伤.     

肝脏X受体β对围生期小鼠海马细胞增殖以及放射状胶质细胞纤维形成的影响

目的 观察肝脏X受体β(liver X receptor β,LXRβ)对围生期小鼠海马细胞增殖以及放射状胶质细胞纤维形成的影响.方法 在胚胎发育18.5 d(E18.5)和生后第2天(P2)行海马免疫组织化学方法检测,分别采用细胞增殖标记增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear ant...     

肝X受体的激活对小鼠糖尿病肝脏脂肪酸合成酶表达的调节

目的 探讨肝X受体(LXR)对糖尿病肝脏脂肪酸合成酶(FAS)表达的影响及机制.方法 将16周龄、雄性、C57BL/6背景下瘦素受体基因缺陷的db/db小鼠和对照的db/m小鼠,分别予以LXR激动剂TO901317(TO)(3 mg·kg-1·d-1)或DMSO灌胃处理7 d;TO(10 μmol/L)刺激人肝癌细胞系HepG2细胞24 h.此外,HepG2细胞转染小鼠FAS启动子报告基因表达质粒,同时转染pcDNA3.1表达载体或LXR或活化型固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)表达质粒12 h;采用免疫组织化学方法检测FAS蛋白在肝脏上的表达,实时荧光定量PCR和蛋白印迹方法分别在mRNA和蛋白水平检测FAS和SREBP-1的表达及TO对其表达的影响,荧光素酶报告基因方法检测LXR激动剂和SREBP-1c对小鼠FAS启动子活性的影响.结果 免疫组化结果显示FAS蛋白在肝脏广泛表达,主要位于肝细胞胞质内.TO可显著降低db/db小鼠空腹血糖水平[由(12.00±1.06)mmol/L下降到(7.73±0.69)mmool/L,P＜0.01]和糖化血红蛋白水平(由5.67%±0.10%下降到4.87%±0.08%,P＜0.01).db/db小鼠肝脏FAS mRNA水平明显高于db/m小鼠,约为5.5倍(P＜0.01);在蛋白水平,db/db小鼠肝脏上的FAS也明显高于db/m小鼠.TO处理可使db/m小鼠肝脏FAS mRNA表达升高约3.5倍(P＜0.05),可使db/db小鼠肝脏FAS mRNA升高约1.7倍(P＜0.05);TO处理可使db/m小鼠肝脏SREBP-1 mRNA升高约2.4倍(P＜0.05),使db/db小鼠肝脏SREBP-1 mRNA升高约2.1倍(P＜0.01).TO能够上调HepG2细胞FAS的mRNA表达水平,升高约1.9倍(P＜0.05);LXR的激活还能显著增加HepG2细胞中FAS基因启动子活性,约为对照组的1.5倍;过表达LXR或SREBP-1c也能增加HepG2细胞FAS基因启动子活性,分别为对照组的1.9倍和1.6倍(均P＜0.01).结论 LXR可能通过其本身的直接作用和SREBP-1C的间接作用上调肝脏FAS的表达,LXR可能介导了糖尿病肝脏的脂质生成过程.     

香砂六君子汤调控CircRNA-0067835对脾虚高脂血症大鼠胆固醇外排的影响

目的 探讨香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠脂质沉积的影响及分子生物学机制.方法 30只SD大鼠随机分成空白对照组、高脂组、脾虚高脂组、香砂六君子汤高剂量组及香砂六君子汤正常剂量组.使用不节饮食加游泳直至力竭的复合方法15 d,建立脾虚模型.随后饲喂高脂饲料10周,检测大鼠血脂水平,确定高脂血症模型复制成功后,香砂六君子汤...     

缺氧对细胞膜ABCA1降解的影响及其机制研究

摘要：目的  探讨缺氧对细胞膜三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）降解的影响及其与钙蛋白酶的相关机制。方法  肝X受体激动剂TO-901317刺激RAW264.7细胞24 h,实时定量聚合酶链反应检测ABCA1 mRNA表达水平。生物素标记法提取细胞膜蛋白,Western blot检测细胞膜ABCA1蛋白水平表达。Western blot检测在放线菌酮存在或不存在条件下,TO-901317干预的RAW264.7细胞经过12 h缺氧（1%氧气O2）处理后细胞膜ABCA1蛋白水平,Suc-LLVY-氨基虫荧光素法检测缺氧细胞内钙蛋白酶活性。RAW264.7细胞给予钙蛋白酶抑制剂ALLN干预,检测细胞膜ABCA1蛋白表达及钙蛋白酶活性。结果  TO-901317上调ABCA1 mRNA及细胞膜蛋白水平表达。无论放线菌酮存在或不存在情况下,缺氧均能降低细胞膜ABCA1蛋白水平,升高钙蛋白酶活性。钙蛋白酶抑制剂ALLN能部分逆转缺氧诱导细胞膜ABCA1蛋白水平降低。结论  缺氧可能通过增加钙蛋白酶活性,从而加速细胞膜ABCA1蛋白降解。

     

帕金森病人血清分化型胚胎软骨表达基因1和肝X受体β水平的相关性研究

目的:探讨帕金森病(PD)病人血清中分化型胚胎软骨表达基因1(DEC1)和肝X受体β(LXRβ)水平及二者相关性.方法:选择PD病人50例(PD组),选择同期健康人群50名为对照(对照组).检测2组受试者血清DEC1、LXRβ水平.结果:PD组血清DEC1水平明显高于对照组(P<0.01),LXRβ水平明显低于对照组(P<0.01).不同性别的PD病人DEC1和LXRβ水平差异均无统计学意义(P>0.05);年龄≥60岁PD病人的LXRβ水平低于<60岁者(P<0.05);有认知功能障碍的PD病人DEC1和LXRβ水平分别明显高于和低于无认知障碍者(P<0.01);随病情分期加重,PD病人的DEC1水平逐渐升高,LXRβ水平逐渐降低(P<0.05~P<0.01).PD病人血清DEC1水平与LXRβ水平呈负相关关系(r= -0.326,P<0.05).结论:PD病人血清DEC1与LXRβ水平呈负相关关系,二者与PD的发病及病情进展有关.     

核受体LXR与炎症反应在鼠原代脑星形细胞间的相互影响

目的 探讨LXR信号传导途径与炎症反应在鼠原代脑星形细胞间的相互作用.方法 用核受体LXR、RXR激动剂激活LXR信号传导途径,LPS诱发炎症反应.通过测定脑星形细胞内LXR靶基因脂蛋白E的含量及炎症因子白细胞介素-1β的含量评估LXR信号传导途径与炎症反应的相互影响.结果 LPS诱导的炎症反应通过影响LXR信号途径降低约50%脑星形细胞内脂蛋白E的含量,而激活LXR信号传导途径可降低40%～50%US诱导的白细胞介素-1β的产生并减弱其对脂蛋白E含量的影响.结论 LXR信号传导途径在维护脑内环境平衡方面起重要作用.     

靶向肝X受体对PD-1单抗治疗原发性肝癌的增敏作用

目的：探索原发性肝癌中肝脏X受体（LXR）与程序性死亡配体1(PD-L1)表达的相关性;明确LXR激动剂（T09）对于PD-1单抗治疗的影响。方法：采用生物信息分析方法分析肝癌中LXR及其下游关键基因ATP结合盒转运体A1(ABCA1)表达和PD-L1表达的相关性。采用免疫组化染色在肝癌组织样本中验证LXR和PD-L1蛋白水平表达的相关性。采用慢病毒介导的RNA干扰技术分析肝癌细胞中LXR沉默对PD-L1蛋白水平表达的影响。建立免疫健全小鼠C57BL/6小鼠Hepa1-6肝癌原位瘤移植模型,分别给予T09和（或）PD-1单抗治疗,测量干预3周后的各组皮下瘤体积。结果：生物信息结果显示,LXR(r=0.20,P=0.021)及其下游关键基因ABCA1(r=0.12,P<0.001)表达和PD-L1表达呈正相关。免疫组化结果显示,高表达LXR的患者往往合并PD-L1高表达,两者表达具有相关性,差异有统计学意义（P<0.05）。通过慢病毒介导的RNA干扰技术敲低了肝癌细胞系中LXR的表达后,PD-L1的表达水平亦显著下调。动物实验显示与对照组、T09组、PD-1单抗组相比,T09...     

氧化性低密度脂蛋白对肝细胞脂肪积累及SIRT1-LXR信号通路的影响

目的探讨氧化性低密度脂蛋白（αLDL）对肝细胞内脂肪积累及SIRT1-LXR信号通路的影响。方法实验分为对照组、高脂（HF）组、αLDL组、HF＋αLDL组和能量限制（CR）组。将HepG2细胞培养于DMEM培养基中,培养48h后用油红O染色法定性观察和测定各组OD值、细胞内脂肪积累,并用RT—PCR法检测各组SIRT1、肝x受体（LXR）及其靶基因ATP结合盒转运蛋白G1（ABCG1）的表达水平。结果与对照组比较,HF组、αLDL组和HF＋αLDL组细胞内脂肪含量均增加（P〈0．05）,CR组脂肪含量下降（P〈0．05）。αLDL组与对照组比较,SIRT1、LXRct和ABCG1mRNA表达均增加,其中SIRT1和LXRα差异有统计学意义：HF组SIRT1和LXRα表达与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）,而ABCG1显著降低（P〈0．05）;HF＋αLDL组LXRα和ABCG1表达均显著降低（P〈0．05）,而SIRT1与对照组比较差异无统计学意义;CR组LXRα和ABCG1表达均显著增加（P〈0．05）,然而SIRT1与对照组比较差异无统计学意义。结论αLDL可能会促进脂肪肝的形成。