非小细胞肺癌患者循环肿瘤DNA的研究进展

摘 要：循环游离DNA以细胞外游离形式存在于血液中,可由正常细胞和癌细胞释放。非小细胞肺癌（NSCLC）患者血液中游离DNA水平高于正常人,且循环游离DNA可以反映癌组织的基因突变,甲基化状态,拷贝数改变,杂合子丢失等特征,是肺癌诊断、治疗、预后检测中具有巨大潜力的生物学指标。本综述简要介绍了循环游离DNA的生物学特性,并对近年来循环游离DNA基因改变检测在NSCLC中的临床应用进行阐述。     

非小细胞肺癌组织与癌旁组织SEMA3B基因甲基化分析

目的分析非小细胞肺癌组织与癌旁组织SEMA3B基因启动子区甲基化状况。方法用甲基化特异PCR(MSP)法检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织及癌旁组织标本23例,用克隆测序验证。结果非小细胞肺癌组织标本中SEMA3B基因启动子区有19例(82.6%,19/23)发生异常甲基化,相对应的癌旁组织标本中有18例(78.3%,18/23)发生异常甲基化,但与发病年龄、性别、病理分化无关。结论非小细胞肺癌组织与癌旁组织都表现出SEMA3B基因启动子区异常甲基化,癌旁组织细胞中发生SEMA3B基因启动子异常甲基化可能要早于细胞的恶性增生。     

中国非小细胞肺癌患者血清DAPK基因、p16基因启动子甲基化的分析(英文)

目的分析65名中国南京军区南京总医院的非小细胞肺癌(NSCLC)住院患者血清中DAPK、p16启动子区域甲基化的改变状况及其临床意义。方法运用甲基化特异性PCR技术,检测65例NSCLC患者血清DAPK、p16基因启动子区域甲基化的改变情况,并分析与临床病理资料的关系。结果 NSCLC患者血清DAPK基因甲基化检出率为30．8％(20/65),p16基因甲基化检出率为43．1％(28/65),而正常对照组和良性肺部疾病组血清未检出DAPK基因、p16基因甲基化,DAPK基因、p16基因甲基化检出率与NSCLC病理类型、分期及转移状态无明显关系。结论 DAPK基因、p16基因检出启动子区域异常甲基化是NSCLC早期辅助诊断的分子标志物之一。     

非小细胞肺癌病人血浆p16基因异常甲基化的检测

肺癌高死亡率的根本原因在于早期诊断的困难。现代分子肿瘤学的研究进展揭示了在肺支气管上皮癌变过程中发生的多种分子水平异常,使得我们有可能将外周血等容易取得的微创性样品中的分子病理学改变作为肺癌早期诊断的辅助指标。通过以往的研究我们发现,一条等位基因缺失而另一条等位基因异常高甲基化是肺癌组织中抑癌基因p16失活的重要机制之一。在这项研究中,我们利用从非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC)病人外周血血浆中提取的DNA分析了P16基因的甲基化状态。采用改进的甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP)的方法,95例NSCLC病人的血浆DNA被检测,其中肺鳞癌59例,肺腺癌36例。作为对照,75例相应的肿瘤组织被同时分析。结果显示,p16基因启动子区高甲基化状态的检出率在血浆中为72．6％（69／95）,而在相应的肺癌组织中为74．7％（56／75）。值得注意的是,血浆DNAp16基因异常甲基化只是从那些肿瘤组织DNA表现p16基因高甲基化的病例中被检出－二者存在极好的符合率。我们还发现,在Ⅰ期病人中,血浆p16基因异常高甲基化在肺鳞癌（82．4％）,比在肺腺癌（33．3％）中要高得多（P＜0．005）。从而提示,血浆p16基因异常甲基化有可能成为一项早期发现非小细胞肺癌（尤其是鳞癌）的、非常重要的分子病理学指标。而血浆DNA的MSP则是检测这一指标的敏感、可靠并且便于操作的技术之一,成为一种可以应用于人群筛查的方法。     

小细胞肺癌的染色体改变及意义

小细胞肺癌(SCLC)以其独特的组织学结构、生长迅速、侵袭力强及早发远处转移的生物学特性而有别于其他非小细胞肺癌(NSCLC).近年来,随着体外细胞培养技术、单克隆抗体技术和分子遗传学技术的广泛应用,SCLC的病因学研究取得了可喜的进展。其中,探索SCLC发生发展的遗传学证据,已成为SCLC研究中一个新兴的重要领域。随着实体瘤染色体分析技术的普遍应用,对SCLC染色体改变的研究正受到愈来愈多的重视。     

非小细胞肺癌患者血清Ras相关区域家族1A基因启动子异常甲基化检测及其临床意义

目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子区域的甲基化状态及其临床意义.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术,检测75例NSCLC患者血清RASSF1A基因启动子区域的甲基化状态,并分析其与临床病理参数之间的相关性.结果75例NSCLC患者血清RASSF1A基因启动子区域异常甲基化检出率为30.7%(23/75),而35例肺部良性疾病患者和15例健康志愿者中检出率均为0,差异有统计学意义(P＜0.001).RASSF1A启动子异常甲基化与NSCLC患者的年龄、性别、病理类型无显著相关性,但在晚期及肿瘤分化程度较低的患者中检出率较高(P＜0.05).结论 RASSF1A启动子异常甲基化在NSCLC的发生、发展中起重要作用,有望成为NSCLC辅助诊断和预后判断的分子标记.     

非小细胞肺癌病人痰标本p16和MGMT基因的异常甲基化

痰脱落细胞学检查以其方例、无创的特点成为目前诊断肺癌的最基本手段之一,然而它的敏感性比较差。近年来分子肿瘤学的理论和技术进展为我们提供了利用分子病理学标志物发现早期肺癌的可能。研究表明,某些基因的异常甲基化是肺癌中常见的分子水平改变;其包括p16INK4a(p16)和O^6甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移酶（O^6-methyl-guanine-DNA methyltransferase,MGMT)。在这项研究中,我们从肺癌病人的痰标本脱落细胞中分离制备DNA,检测了p16和MGMT这两个基因的启动子区的甲基化状态。采用甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP)的方法,我们对71例非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC)病的痰标本进行了分析。所有被检NSCLC病人均有明确的组织病理学诊断,其中,肺鳞癌39例,肺腺癌25例,腺鳞癌7例。这71例病人的痰标本仅有31例（43．6％）被细胞学检查诊断为癌。我们的分析资料显示：在71例痰标本中p16基因的高甲基化检出率为83．1％（59／71）,MGMT的高甲基化检出率为59．2％（42／71）。在被测痰细胞DNA中,这两个基因（其中一个或两者）的启动子区异常甲基化的综合检出率高达90．1％（64／71）;而且与相应肿瘤组织中这两个基因的甲基化状态存在很好的符合率。这项研究结果表明,利用MSP技术检查痰脱落细胞DNA中p16和MGMT两基因的异常甲基化是一项敏感、无创、易行的方法。它将有助于非小细胞肺癌早期发现,以及肺癌高危人群的筛查。     

肺癌组织基因组DNA异常甲基化的检测与分析

背景与目的对肺癌组织基因组DNA异常甲基化进行筛选与分析,探索肺癌发病的表遗传致癌机制。材料与方法从肺癌和癌旁组织中分别提取基因组DNA,经Mse1(甲基化非敏感性酶)单独消化或Mse1和BstU1(甲基化敏感性酶)联合消化,消化产物用甲基化敏感性内切酶指纹法(PCR-basedtechnique-Methylation-sensitiveRestrictionFingerprinting,MSRF)进行分析,肺癌组织出现异常甲基化基因片段,进一步将异常甲基化DNA片段进行亚克隆和序列测定,再与基因文库中的基因进行类比分析,同时按年龄、性别及吸烟状况分组并分析其与肺癌DNA异常甲基化的关系。结果84.5%(49/58)的肺癌样本出现异常甲基化现象,但肺鳞癌(82.1%)与肺腺癌(88.5%)的异常甲基化率差异无统计学意义(χ2=0.073,P>0.05);在异常甲基化DNA片段中,高甲基化现象占83%,低甲基化为17%,发现2条重要的高甲基化基因片段,它们分别与抑癌基因WT-1(Wilm'stumorsuppressorgene)和细胞周期调控基因CCNC(humancyclinCgene)匹配;经统计学分析,吸烟、年龄和性别与肺癌DNA异常甲基化无关。结论基因组DNA的异常甲基化,特别是高甲基化现象,可能在肺癌发生发展中起重要作用,这可能是肺癌发病的表遗传机制。     

非小细胞肺癌患者血浆DAPK基因甲基化检测及其临床意义

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆中死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因异常甲基化及其在NSCLC筛查和诊断方面的临床意义。方法用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP)检测112例NSCLC患者癌组织、癌旁组织、外周血血浆和112例正常对照组血浆样品中DAPK基因的甲基化情况,并比较各组检测结果。结果癌组织DAPK基因甲基化率为59.8%,高于癌旁组织的8.0%(P<0.001),其中鳞癌、腺癌、腺鳞癌癌组织和癌旁组织间的甲基化检出率比较差异均有统计学意义(P<0.001);NSCLC患者血浆中DAPK基因甲基化检测率为21.4%,对照组血浆未检测到DAPK基因甲基化(P<0.001)。血浆中DAPK基因甲基化检出率与NSCLC临床分类、临床分期和病理类型无明显相关性。结论利用nMSP法对血浆样本DAPK基因甲基化检测可为非小细胞肺癌的筛查和诊断提供有价值的信息。     

外科治疗小细胞肺癌的现代观点

小细胞肺癌(SCLC)占肺癌总发病率的20～25％。近半个世纪以来,随着对肺癌基础与临床的研究,多数学者公认SCLC是一种全身性疾病,它在组织来源、生物学行为、临床特点、治疗和预后都与非小细胞肺癌(NSCLC)有显著差异。因此对SCLC的外科治疗一直存在分歧。本文复习国内外文献,对外科治疗SCLC的新观点简述如下。 历史回顾: 40～60年代,外科医师对所有肺癌均采用手术治     

p16基因甲基化对非小细胞肺癌发病的影响

目的探讨p16基因甲基化对非小细胞肺癌发病的影响。方法原发性肺癌患者47例及同期无呼吸系统疾病又未患任何肿瘤同性别者94例作对照,采用甲基化特异性PCR等技术,检测p16基因甲基化。结果p16基因甲基化在肺癌组织和正常肺组织中检出率分别为44.7%(21/47)和17.0%(8/47),两者有显著差异(P<0.05)。37例非小细胞肺癌吸烟者中有21例肺癌组织发生p16基因甲基化,而10例非小细胞肺癌非吸烟者中无一例肺癌组织发生p16基因甲基化。p16基因甲基化与年龄、饮酒、肺癌病理分型及肺癌临床分期之间均无明显的相关性(P>0.05)。结论p16基因甲基化与非小细胞肺癌发生的关系非常密切,p16基因甲基化与吸烟有关。检测p16基因甲基化与否,可能有助于肺癌的诊断。     

非小细胞肺癌细胞株TGFBR3基因缺陷表达及其分子机制研究

背景与目的国外有研究表明,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中转化生长因子受体III(TGFBR3)存在缺陷表达,但是分子机制尚未明确。本研究以正常支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cell,HBEpiC)为对照,分析NSCLC细胞株中TGFBR3基因的表达情况,并探讨TGFBR3基因表达失活的分子机制。方法采用Western blot检测HBEpiC和NSCLC细胞株中TGFBR3的表达情况并做相对定量分析;采用DNA直接测序检测TGFBR3基因启动子基本转录元件区的突变情况;应用亚硫酸氢钠处理后测序法(bisulfite sequence-PCR,BSP)检测TGFBR3基因启动子区甲基化状态。结果NSCLC细胞株中TGFBR3表达水平明显低于HBEpiC;高转移细胞株95D明显低于非转移细胞株LTEP-α-2、A549、NCI-H460;HBEpiC与NSCLC细胞株中TGFBR3基因近端启动子区-165到-75区域无遗传突变,且未见甲基化,远端启动子区-314到-199区域均为高甲基化。结论TGFBR3基因在NSCLC细胞株中表达下调,在高转移细胞株95D中尤其明显,提示该基因的表达缺陷对NSCLC发生发展起重要作用,可能与NSCLC的侵袭和转移相关;然而,TGFBR3基因启动子区重要转录元件区域的甲基化状态并不是导致TGFBR3基因表达下调的主要原因。     

EGFR和C-erbB2在非小细胞肺癌中的表达及研究前景

肺癌的发生和发展是一个多因素多阶段的过程,表现为癌基因、抑癌基因、肿瘤转移相关基因的点突变、扩增、异位和缺失,以及某些抗原分子的异常表达.表皮生长因子受体(EGFR)和C-erbB-2癌基因在非小细胞肺癌中过表达并与肿瘤的生长转移及患者的预后密切相关,但在小细胞肺癌中未发现过表达.本文综述了EGFR和C-erbB2的结构、功能、同源性及在正常组织中的分布,重点讨论了EGFR和C-erbB2在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展中的作用及在NSCLC的诊断、治疗、预后方面的应用前景.     

肺癌血清p16基因启动子畸变甲基化检测

[目的]检测肺癌患者血清DNA中p16基因启动子畸变甲基化,并探讨其在肺癌早期诊断和预后评价中的作用。[方法]收集新鲜的肺癌组织及其对应的血清标本69例,肺良性疾病患者标本25例,健康人血清标本10例。采用PCR技术分别检测肿瘤组织DNA和血清游离DNA中p16基因启动子畸变甲基化的状况。[结果]28.99%(20/69)肺癌组织出现p16高甲基化;出现高甲基化的组织标本相对应的20例血清中有15例(75%)出现p16基因高甲基化。肺良性疾病患者及正常人的血清、DNA中均未见p16基因高甲基化。血清p16基因高甲基化与肺癌TNM分期及分化程度密切相关(P<0.01或P<0.05)。[结论]非小细胞肺癌血清中p16基因甲基化状况的检测,可能有助于非小细胞肺癌的早期诊断或预后评估。     

肺癌组织中p16基因缺失的初步研究

目的　探讨p16基因缺失与肺癌发生的关系。方法　采用PCR方法检测 48例肺癌组织标本中p16基因缺失的情况 ,其中包括 2 3例原发性小细胞肺癌 (SCLC)和 2 5例原发性非小细胞肺癌 (NSCLC)。结果　在 2 3例SCLC中没发现p16基因缺失 ,而 2 5例NSCLC中 ,7例存在p16基因缺失 ,缺失率达 2 8%。结论　结果提示p16基因的变异与原发性非小细胞肺癌的发生及发展相关。     

EGFR和C—erbB2在非小细胞肺癌中的表达及研究前景

肺癌的发生和发展是一个多因素多阶段的过程，表现为癌基因、抑癌基因、肿瘤转移相关基因的点突变、扩增、异位和缺失，以及某些抗原分子的异常表达。表皮生长因子受体(EGFR)和cerbB2癌基因在非小细胞肺癌中过表达并与肿瘤的生长转移及患的预后密切相关，但在小细胞肺癌中未发现过表达。本综述了EGFR和cerbB2的结构、功能、同源性及在正常组织中的分布，重点讨论了EGFR和C-erbB2在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展中的作用及在NSCLC的诊断、治疗、预后方面的应用前景。     

表观遗传学修饰与非小细胞肺癌

在非小细胞肺癌（ NSCLC）中,基因异常甲基化是其主要特征。原癌基因的低甲基化有致癌潜能,而抑癌基因的高甲基化也可诱发肿瘤。此外,组蛋白乙酰化和去乙酰化修饰的平衡与肿瘤的形成密切相关。组蛋白乙酰化酶能直接乙酰化增生相关基因,导致细胞的增殖转化;而组蛋白去乙酰化酶也能改变某些基因组蛋白的乙酰化水平,影响NSCLC的发生与发展。由此可见,这些表观遗传学的异常在NSCLC的形成和发展中起到了极为重要的作用。     

非小细胞肺癌组织MGMT基因启动子过甲基化与临床病理特征相关性的研究

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)过甲基化状况与临床病理特征的关系.方法:甲基化特异性PCR(MSP)检测120例病理确诊的非小细胞肺癌组织及癌旁正常肺组织和30例病理确诊为肺炎症组织中MGMT的甲基化状况.结果:120例NSCLC组织中MGMT基因启动子甲基化率(35%)显著高于癌旁正常组织甲基化率(5%,P<0.05),亦显著高于30例正常肺组织中甲基化率(0,P<0.05).NSCLC中MGMT基因启动子过甲基化状态与淋巴结转移、TNM分期、吸烟史、肿瘤分化程度有关(P值均<0.05),与患者年龄、性别、病理组织类型无关(P值均>0.05).结论:在NSCLC中,MGMT基因启动子甲基化可能与肺癌的发生、发展相关.     

非小细胞肺癌微卫星(GT/CA)n重复序列多态性的研究进展

非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌最主要的组织学类型,患者数量庞大且晚期患者疗效差,现有治疗手段虽取得巨大进展但仍面临挑战。肿瘤的发生伴随大量基因组序列的不稳定,(GT/CA)_n重复序列是一种常见的微卫星序列,参与了基因转录和DNA甲基化等调控过程。现有研究表明,NSCLC中(GT/CA)_n重复序列的多态性与EGFR、HO-1和HIF-1α基因的表达密切相关,可作为探索NSCLC发生发展的分子机制、开发诊疗预后分子标志物及相关表观遗传学研究的切入点。本文总结了NSCLC中微卫星(GT/CA)_n重复多态性的相关研究,希望能为NSCLC的相关研究提供参考。     

肺癌组织中MTS2/p15的表达及意义

抗癌基因是抑制肿瘤形成的一类基因,从肿瘤发生过程看,由随机突变导致抗癌基因失活,要比诱发癌基因激活的概率大,因此从理论上讲,致癌变过程中抗癌基因的作用更为突出[1].p15基因是一种抑癌基因,其基因产物为p15蛋白,对细胞生长起负调节作用.研究表明,非小细胞肺癌(NSCLC)中p15基因优先改变,而小细胞肺癌(SCLC)未见改变[2].肺癌p15蛋白研究尚无报道,本研究应用SABC免疫组化方法检测肺癌组织中p15蛋白表达情况,旨在探讨p15蛋白表达对NSCLC及SCLC的鉴别诊断及对预后判断的价值.