蜂胶黄酮PB3A对人大肠癌SW480细胞株CXCL1和FOS基因表达的影响

目的 探讨蜂胶黄酮短叶松素-3-乙酸酯(pinobanksin-3-acetate,PB3A)处理SW480细胞后CXCL1和FOS基因表达的改变及其与PB3A抑制人大肠癌细胞增殖的关系.方法 采用实时荧光定量RT-PCR和Westernblot法检测PB3A(100 mg/L)处理24小时后SW480细胞的CXCL1和FOS基因转录和蛋白质表达水平.结果 药物干预诱导CXCL1基因的mRNA转录水平下调,差异倍数为0.03(△CT比较,P＜0.01),蛋白质表达强度也降低(0.24±0.03)与非干预的对照组(0.52±0.04)比较表达水平差异有统计学意义(P＜0.01);药物干预诱导FOS基因的mRNA转录水平上调,差异倍数为13.64(△CT比较,P＜0.01),蛋白质表达水平也升高(1.43±0.16),与非干预的对照组(0.58±0.07)比较表达水平差异有统计学意义(P＜0.01).结论 蜂胶黄酮PB3A抗人大肠癌细胞的作用可能与其下调CXCL1基因和上调FOS基因的表达有关.     

胃泌素对大肠癌SW480细胞STAT3信号通路影响的研究

目的:初步探讨胃泌素是否通过STAT3信号通路调控大肠癌细胞的增殖,旨在明确胃泌素调控大肠癌细胞增殖的分子机制.方法:体外培养的SW480细胞同步化疗后加入各实验组药物培养72 h,流式细胞仪检测各组药物作用下细胞增殖指数的变化,RT-PCR方法检测各实验组细胞内STAT3 mRNA表达水平的变化.结果:5肽胃泌素组能通过上调STAT3 mRNA的表达而促进SW480的增殖,流式细胞术结果显示,胃泌素组细胞增殖指数为(37.54±5.17)%较对照组(27.72±5.00)%明显上升,P<0.05;在mRNA水平,胃泌素组SW480细胞STAT3 mRNA基因相对表达为(0.68±0.087)也显著高于对照组(0.44±0.047),P<0.05.结论:STAT3可能是胃泌素促进大肠癌增殖的一个下游靶点,胃泌素可能通过STAT3信号通路调控大肠癌的增殖.     

蜂胶黄酮 pinobanksin-3-acetate对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响及机制

[目的]探讨蜂胶黄酮pinobanksin-3-acetate对体外培养的胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及部分基因表达的影响.[方法]采用四甲基偶氮唑盐(MTr)显色法检测不同浓度PB3A作用不同时间对SGC-7901细胞生长所产生的影响,计算生长抑制率和IC50值;倒置显微镜观察PB3A干预后细胞的形态变化;Annexin V-FITC/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测PB3A(40、80μg/ml)干预24h后SGC-7901细胞FOS、GEM、RGS2、GADD45G及HSPA6的蛋白表达水平,利用Spearman进行候选基因相关性分析.[结果]PB3A可明显抑制SGC-7901细胞的增殖(P＜0.05),且抑制作用呈时间和剂量依赖性.随PB3A剂量的增多,SGC-7901细胞的凋亡率渐增,细胞的早期凋亡率从25.6％提高到50.2％.通过40μg/ml和80μg/ml PB3A干预胃癌SGC-7901细胞24h后与对照组相比,高浓度组GADD45G、HSPA6、GEM、RGSR及FOS蛋白表达有极显著性差异(P＜0.01),而低浓度组GADD45G、GEM和HSPA6蛋白表达有显著性差异(P＜0.05).[结论]PB3A在体外可明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导凋亡的作用,并呈剂量依赖性变化趋势.机制可能与其诱导GEM、RGSR、FOS及HSPA6蛋白的上调表达有关,以上基因可能相互协同导致肿瘤细胞增殖信号通路的抑制并促进胃癌细胞的凋亡.     

生存素siRNA对结肠癌细胞凋亡增殖和侵袭性的影响

目的研究siRNA表达质粒沉默Survivin基因的效率及其对大肠癌细胞株SW480凋亡、增殖和侵袭性的影响.方法构建Survivin基因的siRNA表达质粒(pRNAT/sur-siRNA),用Westeron-blot和半定量RT-PCR研究该表达质粒转染SW480后Survivin蛋白和mRNA表达的变化,流式细胞仪检测Survivin基因沉默后SW480细胞凋亡的变化,MTT法检测SW480细胞体外增值的变化细胞侵袭性实验研究SW480细胞的侵袭性变化.结果针对Survivin的siRNA的表达质粒下调大肠癌SW480细胞株Survivin蛋白和mRNA的表达水平,分别为85.0%,80.0%;pRNAT/sur-siRNA转染SW480后,SW480细胞凋亡率为16.9%;细胞增殖抑制率为37.4%,与对照组相比有显著差异(P＜0.01);细胞侵袭实验示pRNAT/sur-siRNA/SW480细胞、pRNAT/SW480、SW480细胞的细胞穿透数分别为153±66、505±65、578±98个,(P＜0.01).结论针对Siurvivin的siRNA可以显著降低Survivin的表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭,促进肿瘤细胞的凋亡.     

细丝蛋白A抑制荷人结肠腺癌细胞SW480裸鼠移植瘤的生长

目的:探讨细丝蛋白A(fi lamin A,FLNa)基因对人结肠腺癌SW480细胞在裸鼠体内成瘤的影响及其可能的机制。方法:将重组载体质粒pcDNA3.1/V5-His-TOPO/FLNa通过脂质体介导的方式转染到SW480细胞中,RT-PCR和蛋白质印迹法检测SW480/FLNa细胞中FLNa mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞的体外增殖能力。将SW480/FLNa、SW480/pcDNA3.1和SW480细胞接种于裸鼠皮下,观察移植瘤的生长情况,计算抑瘤率,HE染色观察移植瘤组织的形态学变化,RT-PCR和蛋白质印迹法检测移植瘤组织中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)mRNA和蛋白的表达水平。结果:FLNa基因在SW480细胞中获得稳定表达,SW480/FLNa、SW480/pcDNA3.1和SW480细胞的体外增殖能力相似;SW480/FLNa组移植瘤的生长速度和质量低于SW480组,抑瘤率为(88.7±3.5)%(P=0.000);SW480/FLNa组移植瘤组织出现退变坏死,MMP-9mRNA和蛋白的表达水平(0.11±0.02和0.02±0.00)均低于SW480组(1.12±0.02和1.25±0.05),差异均有统计学意义(P=0.012,P=0.025)。结论:FLNa基因具有抑制人结肠腺癌SW480细胞在裸鼠体内的生长作用,其作用机制可能与下调MMP-9的表达有关。     

大肠癌细胞系中Galectin-3表达与其病理分期的差异性分析

目的:研究Galectin-3在4种不同Duke分期的大肠癌细胞系中的差异表达,探讨与大肠癌病理特征的关系。方法:体外培养SW1116、SW480、SW620和LoVo4种不同病理分期大肠癌细胞株,以NIH3T3人类成纤维细胞及肾癌T淋巴细胞作为阴性对照组,胃癌SGL7901细胞作为阳性对照组,用免疫细胞化学方法对Galectin-3进行细胞内定位,RT-PCR方法研究Galectin-3在mRNA水平的表达;蛋白质印迹法研究在蛋白水平的表达。结果:Galectin-3主要表达在大肠癌细胞质中。在Duke分期依次为A到D期的SW1116、SW480、SW620和LoVo4种细胞系中,免疫染色强度逐步增强;在4种不同Duke分期的大肠癌细胞中,Galectin-3的表达水平在mRNA水平和蛋白水平均显示在A期的SW1116中表达较弱,在D期的LoVo中表达最强。组间比较,F值分别为268138.2,942152.2,各组间两两比较,P均<0.05,差异有统计学意义。两者依次增强,各组间比较差异均有统计学意义,P<0.05。结论:Galectin-3主要表达在大肠癌细胞质上,从基因和蛋白水平均表明,Ga-lect...     

缺氧诱导因子1 -α参与结直肠癌细胞上皮间质转化及DNA同源重组修复的机制

目的:研究氯化钴(CoCl2)模拟的细胞体外缺氧微环境对结直肠癌细胞株SW480及Caco-2上皮间质转化及DNA同源重组修复的影响并探究其机制.方法:应用不同浓度的氯化钴(CoCl2)处理SW480及Caco2细胞72 h后,CCK8法检测细胞增殖能力,划痕及Transwell试验检测细胞的迁移及侵袭能力,流式细胞术(FCM)检测细胞周期及凋亡情况,RT-PCR及Western blotting实验检测细胞内相关基因mRNA及蛋白水平的变化情况.结果:CCK-8实验提示细胞在缺氧后增殖能力明显增加(P＜0.05);划痕试验及Transwell侵袭实验提示细胞在缺氧条件下迁移及侵袭能力明显增强(P＜0.05);流式细胞术提示细胞在缺氧后被阻滞在S期(P＜0.05),凋亡率明显下降(P＜0.05);RT-PCR试验表明缺氧后细胞内缺氧诱导因子1-α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)及RAD51的mRNA水平上调(P＜0.05);Western blotting实验表明在缺氧环境下细胞内HIF-1α表达上调(P＜0.05),上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition)相关蛋白:钙黏附蛋白E(E-cadherin)表达下调,波形蛋白(vimentin)及转录抑制因子(snail)表达上调(P＜0.05),DNA同源重组相关蛋白BRCA1及RAD51表达上调(P＜0.05),PI3K/AKT(磷脂酰肌醇-3-羟激酶)信号通路下游关键信号分子AKT1及共济失调毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasia mutant gene)的编码产物ATM激酶磷酸化水平显著上调(P＜0.05).结论:慢性缺氧环境可促进结直肠癌细胞SW480及Caco-2的增殖、迁移和侵袭能力,抑制凋亡,其机制可能与HIF-1 α/PI3 K-AKT、HIF1-α/ATM信号通路介导EMT及DNA同源重组修复过程有关.     

前列腺素E2对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

目的 研究前列腺素E2(PGE2)对结肠癌SW480细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响及其可能的分子机制.方法 分别使用外源性PGE2及其受体EP1的拮抗剂SC19220作用于SW480细胞后,MTr法测定肿瘤细胞黏附能力,transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,RT-PCR及Western blotting检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白水平的改变.结果 外源性PGE2可以显著增加SW480细胞黏附、迁移及侵袭能力,PGE2作用于细胞后,黏附细胞A值由0.207±0.009增加至0.417±0.088,迁移细胞由6.33±0.33增加至43.33±0.88,侵袭细胞由3.67±0.34增加至26.33±0.89,差异均有统计学意义(P＜0.05).SC19220可抑制PGE2所诱导的SW480细胞黏附、迁移及侵袭,PGE2+SC19220组与PGE2组相比,黏附细胞A值由0.417±0.088下降至0.140±0.006,迁移细胞由43.33±0.88下降至28.00±0.58,侵袭细胞由26.33±0.89下降至5.67±0.33,差异均有统计学差异(P＜0.05).RT-PCR及Western blotting检测结果显示,PGE2作用后SW480细胞VEGFmRNA及蛋白水平表达增强,且表达量与PGE2浓度呈正相关.结论 PGE2可显著增加SW480细胞黏附、迁移及侵袭能力,其作用过程可能与VEGF表达上调相关.     

脂质体介导CXCR4 RNA干扰对结肠癌细胞SW480迁移与侵袭影响的研究

目的:探讨CXCR4 RNA 干扰对结肠癌细胞株SW480 CXCR4 mRNA和CXCR4蛋白凋亡、迁移和侵袭能力的影响.方法:采用脂质体转导CXCR4 RNA干扰序列sihCXCR4-3,RT-PCR检测CXCR4 mRNA相对含量,蛋白质印迹法检测CXCR4蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室评价SW480细胞迁移与侵袭能力.结果:sih-CXCR4-3组CXCR4 mRNA的抑制率为81.40％,CXCR4蛋白相对含量为9.62％.早期凋亡率各组间均无差别,晚期凋亡率sihCXCR4-3组为(7.62±0.88)％,高于SW480细胞组(6.41士0 26)％,P=0.0451.迁移实验显示,sihCXCR4-3组平均细胞数为84.25±22.46,低于SW480组(154.63±44.53,P=0.002 6)与NCsihCXCR4组(110.63+ 20.16,P=0.026 6).侵袭实验发现,sihCXCR4-3组平均细胞数为0,低于SW480组(294.43±70.10,P=0.000 0)与NCsihCXCR4(201.43±54.41,P=0.000 0).结论:CXCR4 RNA干扰抑制SW480细胞CXCR4基因与蛋白表达,促进凋亡,降低迁移和侵袭能力.     

缺氧及HIF-1α对结直肠癌上皮-间质转化及侵袭增殖的影响

目的 研究不同缺氧条件下缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、锌指转录因子Snail及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)在结直肠癌SW480细胞中的表达水平,以及它们对细胞的增殖凋亡和侵袭迁移力的影响,探讨三者在结直肠癌的缺氧及上皮间质转化中的作用及可能机制.方法 利用氯化钴(CoCl2)化学诱导细胞缺氧模型,实验分组:常氧组、低氧组和无氧组.采用MTT法检测结直肠癌SW480细胞的生长增殖活性,体外侵袭实验(Transwell小室法)检测细胞的侵袭迁移力,流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡及周期变化,RT-PCR及Western blot检测细胞中HIF-1α、Snail及E-cadherin mRNA与蛋白的表达.结果 MTT结果显示随CoCl2浓度的增加结直肠癌SW480细胞的增殖活性逐渐增加(P＜0.05);Transwell结果显示随缺氧程度的增加穿过基质膜和聚碳酸酯膜的细胞数逐渐增多,侵袭迁移率增加(P＜0.05);FCM检测结果显示与常氧组比较,无氧组和低氧组G0/G1期SW480细胞明显减少,G2/S期细胞明显增多,细胞凋亡率降低(P＜0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示低氧组、无氧组与常氧组比较,SW480细胞内HIF-1α和Snail mRNA与蛋白的表达增加,E-cadherin mRNA和蛋白的表达降低(P＜0.05),且HIF 1 α和Snail的表达呈显著正相关.HIF-1α、Snail与E-cadherin的表达均呈显著负相关(P＜0.05).结论 缺氧及HIF-1α可促进结直肠癌SW480细胞株的体外生长增殖活性,抑制其凋亡,增强其体外侵袭迁移能力,其机制可能是缺氧诱导HIF-1α表达上调直接作用于SW480细胞产生,亦可能是缺氧或HIF-1α表达上调通过促进Snail表达,抑制E-cadherin表达,间接导致EMT的发生发展而产生.     

DNA-PK／AKT／GSK3β通路与结肠癌细胞的放射抗拒性

目的探索结肠癌细胞株SW480在长期分割放疗下获得放射抗拒性的可能机制。方法经不同剂量0Gy、2Gy、5Gy、10Gy单次x射线照射后,以RT．PCR法检测结肠癌亲本细胞SW480和放射抗拒性细胞SW480-R中CCNDlmRNA的表达;Westernblot法检测DNA．PK／AKT／GSK3[3通路中两种细胞株cyclinD1、CDK4、Rb、P—Rb．Ser795、AKT、p-AKT-ser473、GSK313、p-GSK3β-Ser9、DNA．PKcs、P—DNA．PKcs蛋白的表达。结果经单次x射线照射0Gy、2Gy、5Gy、10Gv后,RT—PCR法检测显示SW480．R细胞中CCNDlmRNA的表达明显低于SW480的表达（P〈0．05）,其相对表达水平分别为0．31±0．02、0．32±0．03、0．34＋0．05、0．44±0．04;Westernblot法检测显示SW480和SW480．R中的cyclinDI、CDK4、Rb、P—Rb．Ser795、AKT、P—AKT．Ser473、p-GSK3β-Ser9、DNA—PKcs及p-DNA-PKcs蛋白的表达含量在两种细胞中显著不同,SW480．R的蛋白表达明显高于SW480（P〈0．05）,而GSK313蛋白的表达含量SW480．R却低于SW480（P〈0．05）。结论经过长期分割放疗的结肠癌细胞获得的放射抗拒性可能与激活DNA—PK／AKT／GSK313通路中cyclinD1蛋白过表达介导的DNA损伤反应（DDR）的改变有关。     

靶向SMC1A基因慢病毒介导的RNA干扰对奥沙利铂治疗敏感性的影响

目的 探讨沉默结直肠癌细胞株染色体结构维持-1A（SMC1A）基因对奥沙利铂（L-OHP）敏感性的影响。方法 构建SMC1A基因的小分子RNA干扰表达质粒。与慢病毒包装质粒一起转染239T细胞制备pGCSIL-GFP／SMC1A-siRNA慢病毒载体,并将重组质粒转染结直肠癌SW480、HT-29细胞株。RT-PCR、Western blotting法检测SMC1A mRNA和蛋白的表达情况。CCK-8法检测不同浓度L-OHP对细胞的抑制作用。 结果 pGCSIL-GFP／SMC1A-siRNA慢病毒载体构建成功,RT-PCR产物为343bp。RT-PCR显示重组质粒转染的SW480、HT-29细胞SMC1A mRNA表达量明显低于其对应的未转染细胞（0.13±0.02 vs. 1.02±0.06,0.182±0.019 vs. 1.114±0.032;P＜0.05）;Western blotting 显示干扰后的细胞SMC1A蛋白表达受到明显抑制;不同浓度的L-OHP处理细胞48h后,CCK-8显示转染SMC1A-siRNA细胞生长抑制率较未转染细胞高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 沉默结直肠癌细胞株SMC1A基因对奥沙利铂的敏感性显著增加,为临床进一步提高结直肠癌的疗效提供了研究基础。     

丙氨酰谷氨酰胺对结肠癌细胞功能性FasL基因表达的影响

目的：研究丙氨酰谷氨酰胺（A1a—Gln）对人结肠癌SW480细胞陆LmRNA表达及其诱导淋巴细胞凋亡的影响,为进一步研究和应用谷氨酰胺提供依据。方法：经体外培养结肠癌SW480细胞株,加入不同浓度的A1a—Gin后收集细胞。应用实时定量逆转录-聚合酶链反应（Real—TimeRT—PCR）法检测人结肠癌SW480细胞FasLmRNA的变化;应用流式细胞术检测SW480细胞诱导淋巴细胞凋亡率的变化。结果：Real—Timelit—PCR法检测结果显示,不同浓度A1a—Gin处理后SW480细胞FasLmRNA表达水平均明显低于对照组（P〈0．05）;而且FasLmRNA表达水平随A1a—Gin作用浓度增加而下调,A1a—Gin不同浓度组比较均有显著性差异（P〈0．05）;流式细胞术检测结果表明,随A1a～Gin作用浓度升高,SW480细胞诱导淋巴细胞凋亡率降低,不同浓度组比较均有显著性差异（P〈0．05）。结论：在-定浓度范围内,A1a—Gin可下调人结肠癌SW480细胞FasLmRNA的表达,并能抑制肿瘤细胞反向攻击淋巴细胞。     

基因沉默HIF-1α在结直肠癌SW480细胞的缺氧与上皮-间质转化中的作用

目的通过基因沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),研究其对结直肠癌SW480细胞的生长增殖、侵袭迁移能力,及对锌指转录因子(Snail)与上皮钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响和作用。方法利用氯化钴(CoCl2)化学诱导建立结直肠癌SW480细胞的缺氧模型,设计合成HIF-1α的小干扰RNA(HIF-1α-siRNA)并将其转染入细胞内。通过四甲基偶氮唑兰(MTT)法检测细胞的体外生长增殖活性,体外侵袭实验(Transwell法)检测细胞的体外侵袭迁移力,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫蛋白印迹(Western blot)检测细胞中HIF-1α、Snail及E-cadherinmRNA与蛋白的表达情况。结果 MTT法检测结果显示,缺氧条件下,基因干扰组的OD值及细胞存活率均降低(P<0.05);体外侵袭实验结果显示,基因干扰组侵袭迁移率降低(P<0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示,基因干扰组中HIF-1α和Snail mRNA和蛋白的表达明显降低,E-cadherin mRNA和蛋白的表达明显增强(P<0.05),对3种因子进行相关性分析,结果显示HIF-1α和Snail的表达呈正相关,HIF-1α和Snail均与E-cadherin的表达呈负相关(P<0.05)。结论 RNA干扰沉默HIF-1α基因可抑制结直肠癌SW480细胞的体外生长增殖和体外侵袭迁移能力,其机制可能是由于基因沉默HIF-1α导致细胞中Snail低表达,E-cadherin高表达,抑制了EMT发生、发展所致。     

Axin通过激活p53的表达抑制结肠癌细胞的生长

目的： 观察过表达Axin对结肠癌SW480细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法：将pCMV5-HA-Axin质粒瞬时转染至结肠癌SW480细胞中,并设置转染空载体pCMV5-HA及未转染空白对照组,采用噻唑蓝(MTT)比色法及克隆形成实验检测细胞增殖状态的变化,流式细胞仪检测细胞周期变化;RT-PCR检测Axin及p53 mRNA的表达;Western blot检测Axin及P53蛋白的表达。结果：与转染空载体及空白对照组比较,过表达Axin显著抑制结肠癌SW480细胞的增殖。MTT实验显示转染Axin后细胞生长明显受到抑制,存活的瘤细胞明显减少(P<0.05);克隆形成实验结果显示瞬时转染Axin质粒组细胞集落形成能力明显下降(P<0.05);流式细胞仪分析检测结果显示转染Axin质粒后结肠癌SW480细胞周期G1前期比例升高,G1期明显被阻滞,S期比例下降(P均<0.05)。RT-PCR结果显示转染Axin的SW480细胞中p53 mRNA的表达较转染空载体组升高约1倍(P＜0.05);同时,Western blot结果显示转染质粒Axin后结肠癌SW480细胞中P53的蛋白表达量明显增加,较转染空载体组几近升高1倍(P＜0.05)。结论：过表达Axin抑制结肠癌SW480细胞增殖,其作用机制是通过激活癌基因p53的表达而发挥效应的。     

转录因子Oct4、Sox2在结肠癌中的表达及意义

目的：研究转录因子Sox2、Oct4在结肠癌中的表达及相互关系,探索两者参与结肠癌发生发展中的临床意义。方法：用免疫组织化学SP法检测Oct4、Sox2在50例结肠癌及其匹配的癌旁组织中的表达。West-erRblot检测其在结肠癌细胞株SW480、SW620、Lovo及永生化结肠上皮细胞株HIEC中的表达。结果：免疫组织化学结果显示Oct4、Sox2在结肠癌组织中阳性表达率分别为80％（40／50）,74％（37／50）,显著高于匹配的癌旁组织,后者表达率分别为48％（24／50）,20％（10／50）（P〈0．05）,并且两者阳性表达率呈正相关关系（r=0．465,P〈0．05）。Oct4表达与病理级别呈负相关,而与年龄、性别无相关性。Sox2表达与患者的年龄、性别、病理级别无明显相关性。Westernblot显示结肠癌细胞株与永生化结肠上皮细胞HIEC均表达Oct4,Sox2;0et4、Sox2在结肠癌高转移细胞系SW620较亲本细胞SW480表达增高。结论：转录因子Oct4、Sox2在结肠癌组织中表达高于癌旁组织,并且两者的表达存在正相关性。提示Oct4和Sox2在结肠癌的发生中起着重要的作用。     

香加皮杠柳苷通过抑制Wnt／β-catenin信号通路诱导结肠癌细胞SW480凋亡

背景与目的：Wnt／β-catenin信号通路在人类肿瘤尤其在大肠癌的发生发展中起着重要作用。本研究分析了香加皮杠柳苷（periplocin extracted fromcortex periplocae,CPP）对人结肠癌细胞SW480增殖的抑制作用,及对Wnt／β-catenin信号通路的调控作用。方法：MTT法检测CPP对SW480细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期的变化和凋亡。Western blot法检测CPP处理组与对照组细胞总蛋白、细胞浆蛋白及细胞核蛋白中β-catenin表达变化,电泳迁移率改变法分析CPP作用后SW480细胞核TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力变化。半定量RT—PCR法检测CPP作用后细胞中β-catenin、survivin、c—myc和cyclin D1mRNA的表达。结果：CPP明显抑制SW480细胞增殖（P〈0．01）,并呈时间和浓度依赖性;0．5μg／mLCPP可将SW480细胞阻滞于G0／G1期,并诱导细胞凋亡（P〈0．05）。CPP作用后SW480细胞总蛋白、胞浆蛋白及细胞核蛋白中的B—catenin表达均明显降低（P〈0．01）,细胞核中TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力受到抑制,其下游靶基因mRNA表达水平下降（P〈0．01）,而β-cateninmRNA表达未见明显改变。结论：CPP可明显抑制SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制与抑制细胞Wnt／β-catenin信号转导通路有关。     

前药5-FC联合胃泌素拮抗剂CI-988对转CD基因大肠癌SW480细胞的杀伤作用

目的：探讨联合应用前药5-氟胞嘧啶（5-iluorocytosine，5-FC）和胃泌素拮抗剂CI-988对转组织特异性胞嘧啶脱氨基酶（cytosinedeaminase，CD）基因的大肠癌SW480细胞生长的影响。方法：将转CD基因大肠癌SW480细胞接种至4块24孔细胞培养板中，依次分为实验组1、2、3及对照组，分别以含有前药5-FC、胃泌素拮抗剂CI-988、5-FC联合CI-988及正常培养液进行培养。每天胰酶消化法计数各组4孔，共6d，绘制细胞生长曲线并计算生长抑制率。按上述分组方法另接种培养4组细胞，于培养72h行M1Tr法检测490nm处吸光度A值，计算细胞杀伤率。结果：应用5-FC联合CI-988处理的转CD基因大肠癌SW480细胞在6d后生长抑制率达97％；于培养72h时，实验组1、3细胞杀伤率较对照组有显著性差异（P〈0．01）；实验组2与对照组无显著性差异（P〉0．05）；实验组3较实验组1、2有显著性差异（P〈0．01）。结论：CD／5-FC系统和胃泌素拮抗剂CI-988对转基因大肠癌SW480细胞具有杀伤或抑制作用，联合应用胃泌素拮抗剂可以提高CD／5-FC自杀基因系统对大肠癌细胞的杀伤效应。