甲异靛对K562原代细胞凋亡作用研究

目的探讨甲异靛诱导慢性髓系细胞白血病K562细胞株凋亡的作用。方法K562细胞经20μm／L甲异靛处理12h、24h、48h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果K562未经甲异靛作用时凋亡率[（1．0±0．36）％]与人体正常细胞系NIH3T3凋亡率[（2．6±0．39）％]相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;K562细胞空白组凋亡率为（1．0±0．36）％,12h组为（12．5±0．69）％,24h组为（19．4±1．07）％,48h组为（42．5±3．22）％,与NIH3T3细胞组同时间比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;k562组12h、24h、48h与空白组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。甲异靛能使K562细胞阻滞于G2／M期,G2／M期细胞比例增加,G0／G1期和S期细胞减少。结论甲异靛对体外K562细胞有诱导凋亡作用,其作用与时间成正相关关系。甲异靛可使K562细胞阻滞于G2／M期。     

二烯丙基二硫诱导K562细胞凋亡及与G2 / M期阻滞关系研究

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对体外培养的人白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用细胞计数法、形态学观察、MTT分析法、AO／EB染色、流式细胞术探讨DADS对K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果1．DADS在10-80mg-L。范围内,对K562细胞的抑制作用呈剂量一时间依赖效应。2．DADS浓度在10-80mg．L-1。时作用K562细胞24h后,凋亡率逐渐升高,差异有统计学意义（p〈0．05或P〈0．01）。3．不同浓度DADS作用于K562细胞24h后,K562细胞阻滞于G2／M期。结论DADS有抑制K562细胞增殖和促进K562细胞凋亡的作用,其作用的可能机制与k562细胞阻滞于G2／M期有关。     

人参总皂苷对白血病细胞K562凋亡及生存素表达的影响

目的探讨人参总皂苷（TSPG）对人白血病细胞株K562生长和凋亡的影响及其可能机制。方法采用噻唑兰比色法（Mar）观察TSPG对K562细胞生长的影响;流式细胞仪观察TSPG对细胞凋亡的影响;用RT-PCR检测TSPG诱导K562细胞凋亡中生存素（Survivin）基因的表达情况。结果TSPG对K562细胞生长有抑制作用,呈剂量依赖关系（P〈0．05）;10、100、200μg／ml组细胞凋亡率分别为16．67％、23．78％、33．98％,药物组与对照组差异有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）;随着TSPG浓度升高,Survivin基因的表达水平逐渐下调（P〈0．05）。结论TSPG可以抑制人白血病细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调Survivin基因的表达有关。     

金雀异黄素对胃癌细胞SGC-7901凋亡的诱导及相关基因表达的调控

目的：研究金雀异黄素（Genistein,Gen）对胃癌细胞SGC-790t凋亡的影响及凋亡相关基因表达的调控。方法：应用MTT比色法检测Gen对胃癌细胞SGC-7901生长活力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;RT—PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Fas表达水平的改变。结果：Gen对SGC-7901细胞有生长抑制作用,且呈时间／浓度依赖性;10．0mg·L^-1,20．0mg·L^-1Gen能诱导SGC-7901细胞凋亡,凋亡率与剂量正相关（r=0．9830）;Gen使SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA表达下调,Fas mRNA表达上调。结论：Gen可能通过调控Bcl-2、Fas的基因水平而诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡。     

硝普钠抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡的实验研究

目的：观察外源性一氧化氮(NO)供体硝普钠对K562细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡作用：方法：将不同浓度的硝普钠与K562细胞在体外培养，观察其作用时间效应和剂量效应；用活细胞计数、MTT法观察硝普钠对K562细胞增殖的抑制作用；用DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin—V／PI双标记和DNA片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。同时设高铁氰化钾(PFC)对照组和空白对照组。结果：NO能抑制K562细胞生长，并在一定的剂量范围内呈现作用时间和剂量的量效关系．大部分细胞阻滞于G0／G1期；K562细胞与硝普钠作用后出现典型的细胞形态改变，DNA片断化，亚G1峰检出并显著增加，Annexin V／PI和DNA片段原位末端标记表达增加等均证实NO能诱导K562细胞凋亡。而对照组并无此类变化。结论：NO通过阻滞G0／G1期细胞显著抑制K562细胞的增殖，并有很强的致凋亡作用。     

丁酸钠对乳腺癌细胞MCF-7生长抑制的影响

目的探讨丁酸钠对乳腺癌细胞MCF-7生长的抑制作用。方法将乳腺癌细胞MCF-7常规培养至对数生长期,采用浓度为0、2．5、5．0、10．0mmol／L的丁酸钠处理后,观察对MCF生长的抑制作用。结果浓度为2．5、5．0、10．0mmol／L的丁酸钠处理的MCF-7细胞生长速度明显慢于亲本细胞,随着浓度的增加呈减慢趋势,差异有统计学意义（P〈0．05）。浓度为5mmol／L的丁酸钠处理后的MCF-7细胞克隆形成率明显低于MCF亲本细胞,差异有统计学意义（P〈0．05）。丁酸钠处理的细胞G1明显高于亲本细胞,S期及G2／M期明显低于亲本细胞,凋亡细胞百分比明显高于亲本细胞,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论丁酸钠可能是通过诱导MCF-7细胞凋亡而起到逆转其恶性生物学行为的作用。     

丹参酮衍生物对K562细胞的生长抑制及诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮衍生物对人红白血病细胞株K562的生长抑制以及诱导凋亡作用。方法MTT比色法检测不同浓度丹参酮1、丹参酮2和丹参酮B对K562细胞的增殖抑制作用;PI单染法检测3者对K562细胞周期的影响;An-nexin V/PI双染法检测3者对K562细胞诱导凋亡的作用。结果丹参酮1和丹参酮B能够抑制K562细胞增殖,IC50分别为5.22和15.11μmol·L-1,且分别在2.5~10μmol·L-1和10~40μmol·L-1剂量范围内,G0/G1期细胞比例的增加及早期凋亡细胞百分率的提高均呈剂量相关性;丹参酮2在100μmol·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为27.8%,无诱导其凋亡作用,但可以使G0/G1期细胞增多。结论丹参酮1和丹参酮B抑制K562细胞增殖,阻滞其于G0/G1期并诱导细胞凋亡;丹参酮2对K562细胞没有明显生长抑制及诱导凋亡作用,但可将其阻滞于G0/G1期。     

环孢菌素A诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的：本实验旨在观察环孢菌素A对K562细胞株凋亡的影响。方法：采用瑞氏染色、DNA电泳、流式细胞仪、TUNEL法观察环孢菌素A对K562细胞株凋亡的影响。结果：20μmol/L环孢菌素A作用24小时可诱导K562细胞凋亡，瑞氏染色呈瑞典型的凋亡形态学改变，DNA电泳呈“阶梯状”条带，流式细胞仪显示凋亡峰，细胞周期分析环孢菌素A可使K562细胞生长阻滞于G0－G1期，环孢菌素A处理组的凋亡率高于对照组（P＜0．01）。结论：环孢菌素A可诱导K562细胞株凋亡。     

阿糖胞苷对白血病飚62细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨阿糖胞苷对诱导入白血病细胞株K562细胞增殖和凋亡的影响。方法采用噻唑蓝比色法（MTT）检测不同剂量的阿糖胞苷作用于K562细胞24h、48h、72h增殖影响,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率。结果各浓度阿糖胞苷对K562细胞的生长具有明显抑制作用。在同一浓度下,抑制增殖作用随阿糖胞苷作用时间的延长而增强,呈现出剂量和时间效应关系。阿糖胞苷作用于K562细胞后,G0／G-期细胞所占比例随着阿糖胞苷作用时间的延长而增加,S期与G2／M期细胞所占比例则呈时间依赖性下降。阿糖胞苷作用于K562细胞后,凋亡的K562细胞所占比例随着药物浓度和作用时间的增加而增加,呈现对阿糖胞苷的时间．浓度依赖性。结论阿糖胞苷对人自血病细胞株K562细胞的增殖有明显的抑制作用,并可以时间和浓度依赖方式促进K562细胞的凋亡。     

紫杉醇对胶质瘤细胞系C6增殖抑制的影响

目的通过体外实验探讨紫杉醇对胶质瘤细胞系C6的抗增殖作用及其作用机制。方法应用形态学、四甲基偶氮唑蓝实验(MTT)、流式细胞术对紫杉醇诱导的胶质瘤细胞系C6进行检测和观察。结果①紫杉醇1nmol／L剂量组镜下观察细胞形态无明显变化,贴壁状况良好;紫杉醇10、100nmol／L剂量组可见细胞密度减小,少许贴壁生长,偶见坏死细胞;紫杉醇1 000nmol／L剂量组细胞贴壁状况不好, 大部分细胞漂浮于培养液中,部分细胞已坏死;②通过MTT观察到紫杉醇各剂量组与对照组相比抑制率均增高(P<0．05),随着时间的延长,各剂量组不同时间段之间的抑制率增高(P<0．05);紫杉醇对C6的抑制率有剂量和时间的依赖关系;③流式细胞仪分析结果显示细胞有G2-M期阻滞,1 000nmol／L紫杉醇分别作用24、48h后,G2-M期细胞比例分别为63．75％、37．20％(同对照组比较P<0．01)。紫杉醇作用48h时出现凋亡峰,细胞凋亡率为14．31％。结论紫杉醇对胶质瘤细胞系C6具有明显的生长抑制作用,呈时间-剂量依赖性;紫杉醇可以诱导胶质瘤细胞系C6细胞发生凋亡,凋亡与G2-M期阻滞密切相关,G2-M 期阻滞达到一段时间后才诱导细胞凋亡。     

蒙古黄芪凝集素对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡

目的研究蒙古黄芪凝集素(AMML)对慢性髓系白血病细胞系K562的生长抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响。方法用MTT法测定AMML对K562细胞的生长抑制作用;荧光染色和流式细胞术分析检测AMML诱导K562细胞周期变化和凋亡的影响。结果AMML对K562细胞的生长增殖具有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖性。60mg.L-1的AMML处理K562细胞72h后其生长抑制率高达89%。AMML处理的K562细胞呈现典型的细胞凋亡形态改变,如胞核破裂、染色质固缩。流式细胞仪(FCM)分析结果说明AMML可以引起K562细胞S期阻滞,并诱导K562细胞凋亡。结论AMML通过S期阻滞抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,AMML在抗肿瘤新药开发中具有潜在的应用价值。     

Induction of cell death and modulation of Annexin A1 by phytoestrogens in human leukemic cell lines

BackgroundPhytoestrogens are polyphenolic plant compounds which are structurally similar to the endogenous mammalian estrogen, 17β-estradiol. Annexin A1 (ANXA1) is an endogenous protein which inhibits cyclo-oxygenase 2 (COX-2) and phospholipase A2, signal transduction, DNA replication, cell transformation, and mediation of apoptosis.ObjectiveThis study aimed to determine the effects of selected phytoestrogens on annexin A1 (ANXA1) expression, mode of cell death and cell cycle arrest in different human leukemic cell lines.MethodsCells viability were examined by MTT assay and ANXA1 quantification via Enzyme-linked Immunosorbent Assay. Cell cycle and apoptosis were examined by flow cytometer and phagocytosis effect was evaluated using haematoxylin-eosin staining.ResultsCoumestrol significantly (p < 0.05) reduced the total level of ANXA1 in both K562 and U937 cells and genistein significantly (p < 0.05) reduced it in K562, Jurkat and U937 cells, meanwhile estradiol and daidzein induced similar reduction in U937 and Jurkat cells. Coumestrol and daidzein induced apoptosis in K562 and Jurkat cells, while genistein and estradiol induced apoptosis in all tested cells. Coumestrol and estradiol induced cell cycle arrest at G2/M phase in K562 and Jurkat cells with an addition of U937 cells for estradiol. Genistein induced cell cycle arrest at S phase for both K562 and Jurkat cells. However, daidzein induced cell cycle arrest at G0/G1 phase in K562, and G2/M phase of Jurkat cells. Coumestrol, genistein and estradiol induced phagocytosis in all tested cells but daidzein induced significant (p < 0.05) phagocytosis in K562 and Jurkat cells only.ConclusionThe selected phytoestrogens induced cell cycle arrest, apoptosis and phagocytosis and at the same time they reduced ANXA1 level in the tested cells. The IC50 value of phytoestrogens was undetectable at the concentrations tested, their ability to induce leukemic cells death may be related with their ability to reduce the levels of ANXA1. These findings can be used as a new approach in cancer treatment particularly in leukemia.     

Genistein-induced apoptosis of human breast cancer MCF-7 cells involves calpain-caspase and apoptosis signaling kinase 1-p38 mitogen-activated protein kinase activation cascades

The molecular mechanisms of genistein-induced apoptosis of human breast cancer MCF-7 cells were investigated. Genistein showed 50% cell growth inhibition at IC50=27.5+/-0.8 micromol/l in 24 h incubation under 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide assay conditions. Genistein is known to express both cell growth activity at nanomolar concentrations and anti-cell growth activity at micromolar concentrations. It was found that genistein at 100 micromol/l concentration effectively induced apoptosis of MCF-7 cells in 24 h. Genistein-induced apoptosis involved activation of calpain, caspase 7 and poly(ADP ribose) polymerase. Dantrolene, an inhibitor of Ca release from the endoplasmic reticulum, inhibited genistein-induced activation of calpain and caspase 7, in addition to effectively negating genistein-induced apoptosis. MCF-7 cells treated with genistein also showed increased phosphorylation of p38 mitogen-activated protein kinase, whereas no effect was observed for extracellular signal-regulating kinase 1/2. Phosphorylation of apoptosis signaling kinase 1, an upstream regulator of p38 mitogen-activated protein kinase, was also increased by genistein treatment. Genistein-induced phosphorylation of apoptosis signaling kinase 1 and p38 mitogen-activated protein kinase was diminished by the presence of dantrolene. These results suggest that genistein-induced apoptosis in MCF-7 cells is mediated through calpain-caspase 7 and apoptosis signaling kinase 1-p38 mitogen-activated protein kinase activation cascades that involve Ca release from the endoplasmic reticulum.     

粘附分子CD54、CD44在苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡中的作用

目的观察苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡时细胞粘附分子(CD54、CD44)表达水平的变化,探讨粘附分子在苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡中的作用。方法以一定浓度的苦瓜蛋白处理K562细胞;CCK-8试剂盒检测其对细胞生长的影响;流式细细术(An-nexinⅤ)、透射电镜等方法检测细胞凋亡;同时应用流式细细术检测粘附分子(CD54、CD44)蛋白表达水平的变化。结果苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显的抑制作用;流式细胞术及形态学观察(电镜)证实一定作用浓度的苦瓜蛋白可诱导K562细胞发生明显的细胞凋亡;苦瓜蛋白处理组K562细胞中CD54、CD44表达分别为18.62%和1.32%,对照组分别为0.25%和0.17%,分别上调了18.37%、1.15%。结论苦瓜蛋白引起K562细胞凋亡的过程中,粘附分子CD54表达上调;CD54表达上调可能是苦瓜蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一,其机制可能涉及细胞粘附依赖性细胞凋亡。     

天南星醇提取液诱导人K562细胞凋亡的实验研究

目的:探讨天南星醇提取物对人K562细胞的细胞凋亡作用.方法:采用四唑盐比色法(MTT)测定天南星醇提取物对人K562细胞的抑制作用,采用流式细胞术检测天南星醇提取液对人K562细胞凋亡的影响.结果:天南星醇提取液可明显抑制人K562细胞株的增殖,实验组与对照组间差异有统计学意义(P<0.01).IC<,50>达到65.07 μg·mL<'-1>.流式细胞学检查发现天南星提取物处理后的人K562细胞出现凋亡现象,且有一定的量效和时效关系.结论:天南星醇提取液能抑制体外培养人K562细胞的增殖,可能是通过诱导K562细胞的凋亡来实现的.     

三羟基异黄酮通过AMPK和mTOR信号通路对宫颈癌细胞抑制作用的研究简

目的：探讨三羟基异黄酮对人官颈癌Cas-ki细胞株生长凋亡的影响及机制。方法：磺酰罗丹明B（SRB）比色法检测不同浓度三羟基异黄酮（GEN）干预对Hela,SiHa,Caski,HeLa-S3,HeLa229及C-33A等宫颈癌细胞株生长增殖的影响。流式细胞术检测细胞周期和线粒体膜电位变化情况,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot检测细胞内-磷酸腺苷（AMP）激活的蛋白激酶（AMPK）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关基因的信使核糖核酸和蛋白水平的表达。免疫沉淀法检测三羟基异黄酮对Caski细胞结节性硬化症基因1／结节性硬化症基因2（TSC2／TSC1）复合物组装的影响。结果：三羟基异黄酮的抗癌效能次序是Caski〉Hela〉C-33A〉SiHa〉HeLa-S3〉HeLa229;三羟基异黄酮彻底阻滞了Caski细胞周期进程,并诱导其凋亡。三羟基异黄酮没有改变G,调节蛋白的mRNA表达水平,表明蛋白翻译受到抑制,但转录水平没受到影响。三羟基异黄酮诱导组装TSCl／TSC2,并通过抑制包括mTOR（Ser2448）、pTOS6K（Thr421／Ser424和Thr389）和4E-BPl（Thr37／Thr46和Thr70）等蛋白质磷酸化导致细胞蛋白质合成受阻。三羟基异黄酮干预还引起宫颈癌细胞AMPK活性升高。AMPK抑制剂复合物C显著逆转三羟基异黄酮干预效果的结果表明AMPK通路是三羟基异黄酮抑制宫颈癌细胞增殖过程中的关键途径。此外,线粒体膜电势和线粒体含量下降表明三羟基异黄酮引起线粒体氧化应激。结论：三羟基异黄酮干预Caski细胞后,引起线粒体应激反应,激活AMPK信号通路,使线粒体膜电位下降、TSC1／TSC2复合物形成增加及mTOR介导的蛋白质翻译通路受阻,最终导致宫颈癌Caski细胞周期G1期阻滞,并诱导其凋亡。     

Preliminary studies on induction of apoptosis by genistein on HepG2 cell line.

Consumption of soy products has been linked to lower the incidence of number of cancers. Genistein, one of the principal soy isoflavones, has been shown to inhibit the growth of a number of tumor cell lines in vitro. In this study, we investigate the effects of genistein on cell growth and apoptosis in human hepatocellular carcinoma HepG2 cell by looking for the formation of nuclear apoptotic bodies and DNA ladder formation. Additionally, flow cytometry analysis with propidium iodide staining has been conducted to detect the apoptotic cells. We found inhibition of cell growth and apoptotic nuclei, DNA fragmentation and increased apoptotic cells after treatment with genistein, indicating apoptotic cell deaths. From these results we observed that genistein inhibits the growth of HepG2 cells and induce apoptosis, however, further definitive studies are needed. These results may support the potentially effective chemopreventive and/or chemotherapeutic of genistein against liver cancer.     

染料木黄酮对人白血病K562细胞凋亡及增殖的影响

目的:观察染料木黄酮(GEN)对人白血病细胞增殖及凋亡的影响,探讨其抗白血病的可能性。方法:不同浓度(10、20、30、40、50 mg/L),不同时间(6、12、24、48、72 h)染料木黄酮作用后,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测K562细胞(慢性髓细胞性白血病细胞株)及人外周血单个核细胞增殖;DNA断裂梯带电泳、Annexin-V/PI双染色流式细胞仪分析检测GEN诱导K562细胞凋亡的作用。结果:GEN可有效地抑制肿瘤细胞增殖,而对正常细胞毒性较小(PBM-CIC50=35.5 mg/L和K562 IC50=13.2 mg/L),抑制作用呈明显的时间、剂量—效应关系(P<0.05);GEN体外能够诱导K562细胞凋亡,诱导作用呈时间、剂量依赖关系(P<0.05);结论:GEN具有抗白血病细胞的作用。     

沙利度胺对人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的影响研究

目的:研究沙利度胺对人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的影响。方法:将K562细胞分为对照(未加药)组和沙利度胺低、中、高剂量(0·5、1·0、2·0mmol·L-1)组,加入相应药物分别作用24、48、72、96h后,MTT法检测各组细胞生长抑制率,Wright-Giemsa染色观察各组细胞形态变化,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果:K562细胞的生长抑制率和凋亡率与沙利度胺浓度和作用时间均呈正相关;与对照组比较,沙利度胺3个剂量组作用72、96h后细胞的生长抑制率明显升高(P<0·05),4个时间点的细胞凋亡率均明显升高(P<0·01)。沙利度胺3个剂量组作用72h后,K562细胞出现细胞体积缩小等凋亡形态。结论:沙利度胺能够抑制K562细胞的增殖,呈一定的浓度和时间依赖性,并能够诱导K562细胞的凋亡。