β-果糖基转移酶的性质研究

目的研究低聚果糖产生菌黑曲霉 (Aspergillusniger)SIPI 6 0 2来源的 β 果糖基转移酶 (β FT)的性质。 方法经典的酶学研究方法。结果 β FT催化蔗糖转化成蔗果三糖的Km和Vmax分别为 2 6 8.37g L和 2 .37g (min·L) ;将蔗果三糖转化成蔗果四糖的Km和Vmax分别为 173.0 8g L和 0 .10g (min·L)。葡萄糖是 β FT的竞争性抑制剂 ,其Ki=2 4 5 .2 3g L。β FT反应的最适pH为 4 .5～ 6 .0 ,最适温度为 5 5℃。β FT在中性条件、5 0℃以下稳定性良好。β FT转化蔗糖生成低聚果糖的反应进程实验表明 ,高浓度的底物有利于提高反应速度和转化率 ,并且产物中果糖浓度较低浓度底物中低。结论黑曲霉SIPI 6 0 2来源的 β FT适合用于工业化生产低聚果糖     

固定化黑曲霉细胞与固定化葡萄糖异构酶生产高含量低聚果糖

目的 :研究固定化黑曲霉细胞与葡萄糖异构酶协同反应生产高含量低聚果糖的优化条件。方法 :以磷酸化的PVA 海藻酸钙为载体包埋黑曲霉细胞 ,与固定化的葡萄糖异构酶协同反应 ,以蔗糖为原料转化生产低聚果糖。结果 :7.5 %PVA ,1.0 %海藻酸钠包埋 10 %黑曲霉细胞 ,在 pH 6 .7的饱和硼酸 0 .75 %BaCl2 中成型 ,于 0 .7mol/LNaH2 PO4 中强化 1h。与固定化的葡萄糖异构酶一同在 5 0℃ ,pH 7.0条件下与 40 %蔗糖溶液反应 3.5h。重复反应 5批 ,平均转化率为 5 7%。结论 :用优化条件制得的固定化细胞与葡萄糖异构酶协同转化生产低聚果糖 ,重复利用性好 ,且转化率高于单独使用黑曲霉     

β-果糖基转移酶和β-呋喃果糖苷酶的分离纯化

用球磨机Dyno-Mill破碎低聚果糖产生菌黑曲霉（Aspergillus niger)SIPI-602的菌丝体，其离心上清液经硫酸铵分级沉淀，Octyl-Sepharose CL-4B疏水层析，Q－Sepharose Fast Flow阴离子交换层析，Sephacryl S-30凝胶过滤等步骤得到了在SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳上均呈单带的两种酶：β－果糖基转移酶与β－呋喃果糖苷酶。前者可将蔗糖转化低聚果糖，而后者则催化蔗糖和低聚果糖的水解反应。用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得两者的分子量分别为98.86kD和84.92kD。     

阿魏酸钠对转化生长因子β_1抑制肝细胞增殖作用的影响

目的　探讨转化生长因子 β1(TGFβ1)抑制肝细胞生长过程中 ,阿魏酸钠 (sodiumferulic,SF)的干预作用。方法　以培养的正常人肝细胞株 (L0 2细胞 )为对照 ,5 μg·L-1TGFβ1处理的细胞为模型组 ,MTT比色法及3 H TdR参入法分别检测TGFβ1及SF对L0 2细胞生长和DNA合成的影响 ;以流式细胞计数仪分析TGFβ1和SF对L0 2细胞周期各时相变化的影响 ;采用化学荧光探针DCFH DA ,经流式细胞计数仪检测TGFβ1致细胞内活性氧自由基 (ROS)生成情况及不同浓度的SF的干预作用。结果　 5 μg·L-1TGFβ1处理L0 2细胞 2 4h ,细胞存活率下降为对照组的 6 7 93% (P <0 0 1vs对照组 ) ,细胞DNA合成抑制率为 37 5 6 % ,2 5 0μmol·L-1SF可以使L0 2细胞存活率升高 19 2 8% (P <0 0 1vs模型组 ) ,DNA合成增加 17 71% (P <0 0 5vs模型组 ) ;SF促进L0 2细胞周期由G0 /G1期向S期和G2 /M期过渡 ,12 5 μmol·L-1和 2 5 0 μmol·L-1SF使L0 2细胞周期S期的比例分别增加 11 4 5 %和 17 92 % (P <0 0 1vs模型组 ) ;5 μg·L-1TGFβ1使L0 2细胞内ROS产生量升高为对照组的1 90倍 ,6 2 5 μmol·L-1～ 2 5 0 μmol·L-1SF分别降低TGFβ1的诱导作用 14 5 %～ 2 7 5 %。结论　阿魏酸钠对抗由TGFβ1引起的肝细胞生长抑制作用 ,这可能与     

阿尔茨海默病病人脑脊液蛋白指标改变

为给临床提供诊断阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease,AD)的客观指标 ,采用sELISA法分析了 2 1例AD、2 8例非AD痴呆、35例其它神经系统疾病病人、50例正常对照者脑脊液标本 ,观察正常老化和AD进程中脑脊液中Tau、Aβ1 -4 0、Aβ1 -4 2 /4 3变化规律。结果 ,Tau水平随年龄而增加 ,AD组Tau水平为 ( 491 .5± 35.7)ng/L且与临床进程存在相关性 ,Aβ1 -4 2 /4 3水平为 ( 1 0 9.9± 73.2 ) pmol/L,Aβ1 -4 0 /Aβ1 -4 2 /4 3为 ( 1 6.0 3± 4 .0 7)。AD组Tau水平、Aβ1 -4 0 /Aβ1 -4 2 /4 3比率显著高于其他组及Aβ1 -4 2 /4 3水平低于其他组的结果说明对脑脊液中Tau、Aβ1 -4 0、Aβ1 -4 2 /4 3的分析可以帮助诊断AD。     

罗格列酮对果糖饲养大鼠血糖血脂及血管重构的影响

目的　研究罗格列酮 (Rosiglitazone)对高果糖饲料饲养SD大鼠血管重构的作用和对血糖血脂的影响。方法　高果糖饲料饲养SD大鼠 1mon ,随机分为两组 :高果糖组 ,继续喂养高果糖饲料 1mon ;高果糖罗格列酮处理组 ,喂高果糖饲料和罗格列酮 (5mg·kg-1·d-1,溶于饮水中 ) 1mon。最后 ,每组一半大鼠麻醉从心脏取空腹血测血糖、血脂、胰岛素。每组另一半取主动脉和肠系膜小动脉 ,固定 ,切片 ,HE染色 ,用病理分析系统测量主动脉和肠系膜小动脉重构指标 :内径、中膜、中膜 /内径、中膜横切面积。结果　高果糖罗格列酮处理组与高果糖组对比 ,罗格列酮降低了血压 (16 0kPavs 18 0kPa ,P <0 0 1)、胰岛素 (34 89mIU·L-1vs5 3 5 6mIU·L-1,P <0 0 1)、甘油三酯 (0 5 6mmol·L-1vs1 16mmol·L-1,P <0 0 5 ) ,升高了胰岛素敏感指数 :血糖 /胰岛素的值 (0 2 6vs 0 14 ,P <0 0 5 ) ;增加了肠系膜小动脉内径 (173 0 μmvs 10 0 0 μm ,P <0 0 1) ,减小了中膜 (18 8μmvs 2 4 5 μm ,P <0 0 5 ) ,减小了中膜 /内径(10 90 %vs 2 5 5 5 % ,P <0 0 1) ;减小了主动脉中膜 (89 0μmvs 10 9 0 μm ,P <0 0 1) ,减小了中膜 /内径 (5 74 %vs6 80 % ,P <0 0 1)。结论　罗格列酮能降低果糖饲养SD大鼠的高血压 ,?     

MAP激酶家族在淀粉样β蛋白片段25～35引起的大鼠海马炎症反应及细胞凋亡中的作用(英文)

目的　研究淀粉样β蛋白片段2 5～35(Aβ2 5～35)引起的大鼠海马炎症反应、细胞凋亡机制及抗炎药物布洛芬的保护作用。方法　大鼠灌胃给予布洛芬7.5mg·kg- 1,连续应用3周,脑室内单次注射Aβ2 5～35(10 μL ,1mmol·L- 1) ,注射后继续应用布洛芬1周后,取脑,进行尼氏染色和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色,研究海马CA1区锥体神经元形态学改变和星形胶质细胞激活。Western印迹观察白细胞介素 1β(IL 1β) ,胞外信号调节激酶1/ 2 (ERK1/ 2 ) ,有丝分裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK) ,蛋白激酶C(PKC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(caspase 3)蛋白表达。RT PCR分析IL 1βmRNA表达水平。结果　脑室内注射Aβ2 5～35可引起海马CA1区星形胶质细胞激活和浸润,IL 1β蛋白表达和IL 1βmRNA表达水平明显增加,这种炎症反应伴有海马CA1区锥体神经元损伤。另外,Aβ2 5～35也能引起磷酸化的p38MAPK蛋白表达较对照组明显增加,从对照组0 .16 7±0 .0 91增加到0 .4 97±0 .0 5 9(P <0 .0 1,n =4 )。使磷酸化的ERK1/ 2蛋白表达下调,ERK1的表达从对照组0 .14 6±0 .0 10下降到0 (P <0 .0 1,n =4 )。ERK2表达从对照组的0 .4 12±0 .0 5 4下降到0 .131±0 .0 38(P <0 .0 1,n =4 )。这些改变伴随有caspase 3蛋白表达的增加     

中药注射液中5-羟甲基糠醛来源探讨

目的:通过对中药注射液中的5-羟甲基糠醛(5-HMF,5-Hydroxymethylfurfural)来源的初步探讨,为提高中药注射液的质量控制水平提供参考依据.方法:利用HPLC方法对注射液、中间体中的5-HMF和寡糖(葡萄糖、果糖及蔗糖)分别进行含量测定,确定5-HMF的来源;通过模拟生产过程考察不同寡糖的受热不稳定情况,来探讨5-HMF的生成机制.结果:只有在含有果糖的中间体中含有5 -HMF.模拟高温灭菌过程发现仅有果糖受热后转化生成5-羟甲基糠醛及其相关物质,而葡萄糖和蔗糖均没有转化.结论:并不是所有的寡糖在高温下都易转化5-HMF.在常见的三种糖中,只有果糖在高温下易转化生成5-HMF,而葡萄糖和蔗糖不易转化.建议对含果糖的中药注射液进行5-HMF的限度检查,而含葡萄糖和蔗糖的可以不控制该项目.     

利用嘧啶核苷磷酸化酶基因工程菌酶法合成5-氟尿苷的转化率影响因素的研究

研究酶法合成5-氟尿苷(5-FUR)的反应条件.利用嘧啶核苷磷酸化酶(Pyrimidine-nudeoside phosphorylase,PyPNase)基因工程菌大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a 合成5-氟尿苷(5-FUR),考察不同反应条件对转化率的影响;尝试不同反应体系对转化率的影响.结果:(1)最佳转化条件:菌体:0.5 WCG/L;UR:10 mmol/L;5-FU:45mmol/L;PBS:40 mmol/L;T:50℃;pH 7.4;t:60 min,转化率可达91.27%;(2)以Na2SO4溶液为溶剂,比以PBS溶液为溶剂的转化率略有提高.微生物酶法合成5-氟尿苷(5-FUR)的转化率较高,可考虑用于工业生产.     

银杏苦内酯B对豚鼠心室肌细胞动作电位及L-型钙通道的影响

目的　研究银杏苦内酯B(BN 5 2 0 2 1)对豚鼠心室肌细胞动作电位 (AP)和L 型钙通道的影响。方法　全细胞膜片箝技术。AP记录采用电流箝方式 ,电流记录采用电压箝方式。结果　BN 5 2 0 2 1明显缩短动作电位时程 (APD) ,在10 -6mol·L-1浓度 ,APD90 缩短 9% (P <0 0 5 )。在 10 -5mol·L-1浓度 ,APD90 缩短 12 % (P <0 0 1)。 10 -6mol·L-1以上浓度BN 5 2 0 2 1还明显缩短APD50 ,最大缩短达 14% (P <0 0 5 )。较高浓度 (10 -5mol·L-1)的BN 5 2 0 2 1可使静息电位增加 (P <0 0 5 )。BN 5 2 0 2 1浓度依赖性减少L 型钙电流(L ICa)。 10 -6mol·L-1浓度下 ,峰值L ICa降低 2 4 7% (P<0 0 1) ,10 -5mol·L-1浓度下 ,峰值L ICa降低 36 9% (P <0 0 1)。随着药物浓度的增加 ,I U关系曲线逐渐上移 ,但其峰值电压保持不变。结论　BN 5 2 0 2 1明显缩短APD ,抑制L ICa,且具有明显的浓度依赖关系。     

氨氯地平的毛细管电泳手性拆分及其左旋体的光学纯度分析

选择毛细管电泳技术对 (± ) -苯磺酸氨氯地平进行手性拆分。确定最佳条件为 :2 0 cm× 5 0μm未涂层石英毛细管 ,75 mmol/L磷酸盐缓冲液 (p H 2 .5 ,内含 5 mm ol/L CM-β- CD) ,运行电压 12 k V,毛细管柱温 2 5°C,压力进样6 9k Pa· s,检测波长 2 0 0 nm。对国产 S- (- ) -苯磺酸氨氯地平片进行了光学纯度检查 ,3批样品中 S- (- ) -氨氯地平的光学纯度 (峰面积百分含量 )均大于 99.8%。     

健康受试者口服西嗪伪麻缓释片后西替利嗪的药动学

目的:建立口服西嗪伪麻缓释片后西替利嗪血药浓度的液相色谱-质谱(LC-MS)测定法,进行人体药动学研究。方法:采用LC-MS法,测定10名健康受试者口服受试制剂(单剂量含西替利嗪5,10 mg和多剂量)后血浆中西替利嗪浓度。结果:口服受试制剂(单剂量含西替利嗪5 mg)后,估算的西替利嗪的药动学参数t1/2β为(9．8±s 2．3)h;tmax为(1．1±0．3)h,cmax为(171±14)μg·L-1,V1／F为(31±5)L,V／F为(45± 9)L,AUC0-(?)为(1 730±187)μg·h·L-1,MRT0-(?)为(10．4±0．7)h。口服受试制剂(单剂量含西替利嗪10 mg) 后,估算的西替利嗪的药动学参数t1/2β为(9．2±1．8)h;tmax为(1．3±0．5)h,cmax为(343±54)μg·L-1,V1／F为 (26±11)L,V／F为(38±12)L,AUC0-(?)为(3 226±298)μg·h·L-1,MRT0-(?)为(10．1±0．8)h。多剂量口服受试制剂后,估算的西替利嗪的药动学参数t1/2β为(10．0±2．3)h,tmax为(1．3±0．4)h,cmax为(268±25)μg·L-1,V1／ F为(17±5)L,V／F为(26±9)L,AUC0-(?)为(2 616±324)μg·h·L-1,MRT0-(?)为(10．0±0．8)h。结论:本方法结果准确,灵敏度高,西替利嗪在大部分人体内的过程符合二室开放模型,其主要药动学参数与国内外文献报道单方西替利嗪数据一致。     

Aβ_(25-35)抑制成年小鼠海马齿状回区神经前体细胞增殖

目的　观察Aβ2 5-3 5对成年小鼠海马神经前体细胞增殖的影响。方法　 2 0只成年BALB/c小鼠随机分为对照组和模型组 ,对照组注射等量无菌生理盐水 ,模型组侧脑室注射 3μlAβ2 5-3 5(1g·L-1)。动物分别在Aβ2 5-3 5注射后d 5、10、2 0、30灌流处死。动物每次处死前均腹腔注射 3次BrdU(5 0mg·kg-1,间隔 8h)。鼠脑切取冰冻切片 ,进行神经元特异性核蛋白 (NeuN)免疫荧光和BrdU免疫组织化学染色 ,以观察神经元数目及其前体细胞增殖情况。结果　对照组小鼠海马神经细胞形态清晰完整 ,排列规则 ,而侧脑室注射Aβ2 5-3 5后的小鼠海马NeuN阳性细胞数明显减少 ,且同部位的BrdU阳性细胞数目亦明显减少 (P <0 .0 1)。结论　Aβ2 5-3 5在中枢神经系统不仅表现为对成熟神经元的毒性作用 ,而且还明显抑制神经前体细胞的增殖 ,从而影响神经的发生过程。     

棉酚合并卡前列甲酯(PG05)抗早孕作用研究

观察棉酚合并 PG0 5对小鼠的抗早孕作用。结果显示 :单用棉酚 75mg/( kg·d) ,3d无抗早孕作用 ,而同样剂量棉酚与 PG0 50 .2 mg/( kg·d) ,合用 2 d可显著增强抗早孕作用 ,使小鼠活胎数进一步减少 ;棉酚 30 μg/ml和 ( - )棉酚 1 5μg/ml对大鼠黄体细胞 3β- HSD活性均有显著抑制作用 ,( + )棉酚 1 5μg/ml和PG0 51 0 μg/ml对此酶活性无影响 ;( - )棉酚 1 5μg/ml还能抑制大鼠颗粒细胞雌二醇的分泌 ,提示棉酚增强 PG0 5抗早孕作用可能是从多环节影响胚胎正常发育。     

用一种新的Candida magnoliae菌株生产甘露醇

分离到一株在果糖和葡萄糖作为碳源的条件下产生甘露醇的新微生物。用含有 15 0 g/ L 果糖的培养基进行摇瓶发酵 ,16 8h后能产出 6 7g/ L 的甘露醇。用 3%～ 12 % (w/ v)的果糖进行补料分批培养 ,2 0 0 h后甘露醇产量最大可达 2 0 9g/ L ,相当于 83%的得率和 1.0 3g· L- 1 · h- 1 的产量。基于它与对照菌株 C.magnoliae在 2 6 S r DNA上 D1/ D2区的相同序列以及有类似的碳源利用方式 ,所以将这一分离株定名为 Candida magnoliae。用一种新的Candida magnoliae菌株生产甘露醇@龚家玮…     

抗肿瘤药卡培他滨的临床药代动力学

卡培他滨 (ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ)是一个新的口服氟嘧啶氨基甲酸酯 ,口服给药 (12 5 0ｍｇ·ｍ- 2 )后快速而广泛地经胃肠组织吸收 ,并在肿瘤组织中经过三步代谢转化为具有细胞毒性的氟尿嘧啶 (5 ＦＵ)。卡培他滨口服给药后的药物达峰时间 (ｔｍａｘ)为 2ｈ ,血浆达峰浓度 (ｃｍａｘ)为 3～ 4ｍｇ·Ｌ- 1,消除半衰期 (ｔ1/2 )较短(0 .5 5～ 0 .89ｈ) ,在尿和粪中的回收率约为 10 0 %。5 ＦＵ的血浆浓度很低 ,ｃｍａｘ为 0 .2 2～ 0 .31ｍｇ·Ｌ- 1,浓度 时间曲线下面积 (ＡＵＣ)为 0 .4 61～ 0 .698ｍｇ·ｈ·Ｌ- 1,表观分布ｔ1/2 与…     

葛根素与果糖二磷酸钠治疗心绞痛的疗效对比

目的　观察葛根素与果糖二磷酸钠 (FDP)治疗心绞痛的疗效对比。方法　将 132例心绞痛患者分成两组 ,治疗组选用葛根素注射液 8m L(10 0 mg/ 2m L )加入 5 0 g· L-1葡萄糖注射液 5 0 0 m L中静滴 ;对照组选用 FDP10 0 m L(5 g/ 5 0 m L)静滴 ,每日 1次 ,14 d为一观察疗程。两组一般治疗相同。结果　两组治疗后对心绞痛的总有效率分别为 93.94 %和92 .4 0 % ,对常规心电图改善比较的总有效率分别为6 9.70 %和 6 8.18% ,均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　葛根素和 FDP治疗心绞痛疗效肯定且相近 ,不良反应少 ,但价格上葛根素明显优于 FDP,因此 ,葛根素更值得临床推广应用     

小檗胺对血管平滑肌细胞钙动力学影响

本文以Fluo-3/AM 荧光技术和激光扫描共聚焦显微镜检查法, 研究小檗胺 (Ber) 对培养家兔胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)内游离钙 ([Ca 2 ]i ) 的影响结果表明：在胞外钙 ([Ca 2 ]o ) 为?.0 mmol·L -1 条件下，Ber 抑制60 mmol·L -1 KCL1 mmol·L -1 哇巴因Ouabain 30 mmol·L -1 去甲肾上腺素 ( NE ) 1 mmol·L -1 5-羟色胺5-HT 和30 mmol·L -1 三磷酸腺苷 (ATP)引起的 [Ca 2 ]i 升高，而且荧光强度达峰时间亦延长。在无胞外钙条件下，Ber 对咖啡因 (Caffeine)引起的[Ca 2 ]i 升高没有作用。结论：Ber 抑制电压依赖性钙通道 (VDCC) 和受体调控性钙通道 (ROCC) 激活引起的外钙内流，对Caffeine 引起的内钙释放没有影响。Ber 可抑制Ouabain 诱导的细胞内钙升高。     

大鼠体内硝基精氨酸的手性代谢动力学

目的　应用毛细管电色谱 (CEC)对大鼠体内的硝基精氨酸手性转化和代谢动力学进行研究。方法　采用手性配体交换法检测大鼠血浆中D型硝基精氨酸 (D NNA)和L型硝基精氨酸(L NNA)的浓度,应用非房室模型对所获得的血药浓度-时间数据进行拟合,计算药动学参数。结果　D NNA和L NNA在大鼠体内代谢具有明显的异构体选择性,清除率分别为(0 46±0 02)ml·h-1·kg-1和(0 17±0 03)ml·h-1·kg-1 (P<0 05 );T1 /2分别为 ( 1 44±0 28 )h和(3 48±0 41)h(P<0 05)。D NNA到L NNA的单项手性转化率为(50 03±8 5)%。结论　D NNA和L NNA在大鼠体内的代谢有明显的异构体选择性 (其差异可能主要源于D NNA到L NNA的单向手性转化)。     

卡托普利致急性血尿1例

病例】　男 ,55y。高血压病史 2 0 a,脑出血病史 1 7a伴右上、下肢瘫痪 ,混合性失语 ,近 1 d因小便失禁 ,于 2 0 0 0年 3月 2 1日入院。查体 :BP2 2 .5/1 3.3k Pa(1 70 /1 0 0 mm Hg)。血常规 :RBC3.2×1 0 12 /L,Hb 95g/L,WBC 5.2× 1 0 9/L,N 0 .82 ,L0 .1 7。尿常规 :颜色黄 ,透明度清 ,反应碱 ,蛋白 (- ) ,白细胞 (- ) ,红细胞 (- ) ,上皮细胞 (- ) ,管型 (- )。电解质 :Na+1 32 .3mmol/L,K+3.36mmol/L,Cl-1 0 6.0 mmol/L,Ca++1 .8mmol/L,BUN 1 0 .76mmol/L,余查 (- )。入院后给予卡托普利 (常州制药厂 ,批号 991 0 2 2 - 2…