高效液相色谱法测定隐球菌性脑膜炎患者脑脊液中两性霉素B和伊曲康唑含量

目的建立人脑脊液（cerebrospinal fluid,CSF）中两性霉素B（amphotericin B,AmB）和伊曲康唑（itraconazole,ITZ）含量测定的高效液相色谱方法,并用于隐球菌性脑膜炎患者脑脊液样品的测定。方法脑脊液样品经固相萃取后直接进样。AraB测定采用Gemini5wC18柱,流动相为5mmol／L乙二胺四乙酸二钠（醋酸调pH至4．5）／乙腈（62／38,V/V）,流速0．3mL／min,DAD检测器;检测波长410nm。ITZ测定采用YMC C18柱,流动相为0．2％三氟乙酸／乙腈（45／55,V/V）,流速1．1mL／min,荧光检测器：激发波长260nm,发射波长365nm。结果AmB和ITZ的线性范围均为5ng／mL-100ng／mL,线性相关系数大于0．999,最低定量限为5ng／mL,低、中、高浓度质控样品在日内、日间精密度均小于7．6％。结论该方法灵敏、快速、简便,适用于隐球菌性脑膜炎患者治疗药物监测。     

高效液相色谱法测定人血浆中比阿培南浓度

目的 建立测定人血浆中比阿培南浓度的反相高效液相色谱法.方法 采用YMC-C18(150 mm×4.6 mm,5μm)柱,以0.1 mol/L醋酸钠(醋酸调pH4.5):乙腈=98:2(V:V)为流动相,流速1.0 mL/min,柱温35℃,紫外检测波长为300 nm,直接沉淀蛋白后用二氯甲烷反洗,进样0.03mL.结...     

新型二维高效液相色谱测定人血清伏立康唑浓度方法的建立与应用

目的建立全自动二维高效色谱法(2D-HPLC)测定血清中伏立康唑的浓度并应用于临床。方法第一维色谱柱为ASTON SC2柱(4.6mm×25mm,5μm),流动相为20mmol/L磷酸铵∶乙腈∶甲醇=3∶1∶1(V∶V∶V,磷酸调pH=5.4),流速1.2mL/min;第二维色谱柱为SHIMADZU C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为10mmol/L醋酸铵(三乙胺调pH7.0)∶10mmol/L醋酸铵(三氟乙酸调pH3.0)∶甲醇∶乙腈=30∶10∶10∶50(V∶V∶V∶V),流速1.0mL/min;中间柱为ASTON SH柱(3mm×10mm,5μm),辅助流动相为纯水。样品由一维色谱柱萃取,经中间柱捕获并转移至第二维色谱柱分析,检测波长256nm,柱温40℃,进样量200μL。结果伏立康唑在0.28～22.56μg/mL范围内线性关系良好,r=0.999 9,最低定量限为0.28μg/mL,方法回收率为99.01%～104.62%,提取回收率为85.81%～89.82%,日内、日间精密度RSD均小于9%。结论该方法操作简单、准确、灵敏,符合血清样品的测定要求,适用于伏立康唑临床血药浓度测定。     

UPLC法测定金宁口服液中绿原酸、隐绿原酸、橙皮苷、蒙花苷的含量

目的 建立超高效液相色谱法(UPLC)测定金宁口服液中绿原酸、隐绿原酸、橙皮苷、蒙花苷含量的方法.方法采用Acquity BEH C18(2.1 mm×100mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-0.1％甲酸水为流动相,梯度洗脱;流速0.3 mL/min;检测波长300 nm;柱温40℃.结果 全宁口服液中绿原酸、隐绿原酸...     

高效液相色谱法测定血浆中的阿替洛尔浓度

目的 :建立测定人血浆中阿替洛尔浓度的HPLC法。方法 :采用混合有机试剂 (氯仿∶异丙醇 ,75∶25,V/V)萃取样品中的药物 ,对干燥后的残渣用流动相复溶 ,应用高效液相色谱法分离 ,采用荧光检测器检测 (检测波长Ex=225nm ,Em=300nm)。流动相为乙腈∶水∶1mol/L磷酸缓冲液6∶89∶5(V/V/V) ,pH=4 ,流速1ml/min ,内标为美托洛尔。结果 :血浆中阿替洛尔在15.6～1000.0ng/ml范围内 ,药物浓度与峰面积比值呈良好的线性关系 (r=0.9996 ,RUN=3)。总回收率为98.78 %±7.96 %。日内和日间差异均小于10%。最低检出限为10ng/ml。结论 :用改进后的高效液相色谱法测定人血浆中阿替洛尔的浓度具有对样品纯化程度高、分析周期短等优点 ,实际应用效果良好     

青紫颗粒制备工艺及质量控制方法研究

目的 建立HPLC法用于青紫颗粒制备工艺过程的质量控制,并对中试样品中丹酚酸B和绿原酸含量进行测定.方法 丹酚酸B和绿原酸测定条件:色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1％磷酸为流动相梯度洗脱,流速为1 mL/min,柱温为30℃,检测波长为286 nm...     

复方盐酸吡咯列酮格列美脲片中有关物质的测定

目的:建立以HPLC法测定复方盐酸吡格列酮格列美脲片中的有关物质.方法:采用HypersilBDS柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温35℃,流动相:乙腈-水-醋酸(600:400:1.2),用氨水调节pH值至6.0为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长228 nm.结果:检测限为0.25 ng,方法专...     

HPLC法测定血瘀证患者口服川芎丹参煎剂后阿魏酸血药浓度

目的对以往建立的人血清中阿魏酸浓度测定的HPLC法加以改进,并测定了血瘀证患者口服川芎丹参煎剂后阿魏酸的血药浓度.方法以香豆素为内标,甲醇-水-醋酸(4059.70.3)为流动相,Diamonsil(TM)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流速1.0 mL/min,以二极管阵列检测器测定322 nm波长下的数据,以沸水浴法加甲醇处理血清样品.结果阿魏酸和内标分离完全,阿魏酸在32.18～965.38 ng/mL范围内线性关系良好(r= 0.998 1),日内和日间RSD＜10%,平均回收率为(99.3±5.4)%,最低检测限为1.6 ng/mL,最低检测浓度为15.7 ng/mL.结论此法简单、快速、灵敏而准确,适用于人血清中阿魏酸血药浓度的测定.     

RP-HPLC法测定人血浆中氯氮平浓度

目的:建立测定人血浆中氯氮平高效液相色谱法。方法:血浆样品经适当处理,色谱柱为Luna C18(250×4.6mm,5μm)柱,流动相为乙腈:30mmol/L醋酸铵(46:54,V/V),柱温40℃,流速0.9mL/min,检测波长243nm,艾司唑仑为内标。结果:测定方法在0.05-1.6μg/mL范围内线性良好(r=0.9992,n=6),高、中、低浓度加样回收率均在98.8%~104.0%之间,日内、日间RSD在2.96%~11.5%之间,最低检测浓度为0.01μg/mL(S/N=3)。结论:本方法快速、简便、准确,适用于临床氯氮平浓度监测。     

HPLC法测定奈韦拉平片的含量及有关物质

目的高效液相色谱法测定奈韦拉平片的含量及有关物质的研究。方法采用C18色谱柱 (5 μm ,4 .6mm× 2 5 0mm)。以ψ(乙腈 ∶水 ) =2 3∶77为流动相 ,流速 1.0mL/min ,紫外检测器于 2 14nm测定。结果HPLC法的线性范围为 0 .5～ 12 5 μg/mL ,r=0 .9999,最低检测限 2ng,样品溶液在 8h内稳定 ,日内精密度和日间精密度良好 (RSD <0 .5 % ) ,回收率为 99.6 %。结论采用HPLC法测定奈韦拉平片的含量及有关物质的方法简便 ,结果准确可靠     

内毒素对NRK52E细胞生长及细胞间缝隙连接功能的影响

【目的】 研究不同浓度内毒素(LPS)对NRK52E细胞生长和细胞间缝隙连接功能的影响&#65377;【方法】 体外培养NRK52E细胞,随机分为对照组及LPS处理组,LPS处理组分别用5个不同浓度的LPS(10 ng/mL&#65380;50 ng/mL&#65380;100 ng/mL&#65380;500 ng/mL&#65380;1 000 ng/mL)作用24 h&#65377;采用四甲基偶氮唑盐法检测NRK52E细胞的生长;细胞荧光免疫示踪法测定NRK52E细胞间缝隙连接传递的功能;Western Blotting测定对照组&#65380;LPS 10 ng/mL组和LPS 100 ng/mL组Cx43蛋白的表达&#65377; 【结果】 ① 与对照组和LPS 10 ng/mL组相比,LPS 50 ng/mL&#65380;100 ng/mL&#65380;500 ng/mL及1 000 ng/mL组细胞生长明显降低(P < 0.01)&#65377;②与对照组相比,LPS 100 ng/mL&#65380;500 ng/mL及1 000 ng/mL组细胞间缝隙连接功能明显降低(P < 0.01)&#65377;③内毒素浓度与NRK52E细胞生长和细胞间缝隙连接传递数目呈负相关(r = -0.941,-0.872,P < 0.01)&#65377;④与对照组比较,LPS 10 ng/mL组和LPS 100 ng/mL组的Cx43蛋白表达明显降低(P < 0.05)&#65377; 【结论】 LPS对NRK52E细胞的生长呈浓度相关性的抑制,这种作用与细胞间缝隙连接功能有关&#65377;     

心肺复苏后患者血清内皮选择素和S100b蛋白水平的变化及其临床意义

目的 观察心肺复苏后患者的可溶性粘附分子P选择素(P-selectin)、E选择素(E-selectin)和S100b的变化,并探讨其临床意义.方法 收集2014年10月至2016年10月期间海南省人民医院急救中心收治的院内52例心肺复苏患者的血清样本,其中以循环恢复时间超过48 h的14例患者为生存组,而48 h内循环未恢复的38例患者为死亡组,比较两组患者在不同时间点的P-selectin、E-selectin和S100b变化规律.结果 复苏后30 min时,患者的血清P-selectin在死亡组高于生存组[(357.1±109.7)ng/mL vs(264.8±53.5)ng/mL],差异有统计学意义(P<0.05);复苏后E-selectin在生存组30 min[(52.5±11.8)ng/mL vs(52.5±11.8)ng/mL]、12 h[(50.1±7.4)ng/mL vs(92.8±16.3)ng/mL]和24 h[(65.0±10.8)ng/mL vs(119.0±9.3)ng/mL]均低于死亡组(P<0.05),而生存组S100b血清水平在12 h[(0.67±0.11)ng/mL vs(1.21±0.32)ng/mL]和24 h[(0.39±0.06)ng/mL vs(0.84±0.07)ng/mL]均低于死亡组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 心肺复苏后粘附分子P-selectin、E-selectin和S100b的变化对心肺复苏患者的预后判断具有重要的临床意义.     

塞曼原子吸收汞分析仪测定尿汞的方法学评价

目的对塞曼原子吸收汞分析仪测定尿汞的方法进行评价,为实验检测及临床诊断中选用简便、快捷的测汞方法提供参考。方法采用塞曼原子吸收光谱法(ZAAS)和氢化物发生-原子吸收光谱法(HG-AAS)进行尿汞含量测定,对两种方法的检出限、准确度、精密度及一致性进行比较。结果 ZAAS在0~1000 ng/m L范围内呈良好的线性关系(R2=1.0000),HG-AAS在0~20 ng/m L范围内呈良好的线性关系(R2=0.9990)。ZAAS和HG-AAS检出限分别为0.156 ng/m L、1.593 ng/m L,ZAAS灵敏度较高。ZAAS加标回收率在97.5%~103.2%之间,HG-AAS加标回收率在95.6%~104.5%之间;重复测量10 ng/m L、100 ng/m L汞标准溶液10次,ZAAS的相对标准偏差(RSD)分别为0.30%和0.36%,HG-AAS的RSD分别为2.82%和1.11%,两种方法准确度和精密度均满足GBZ/T 210.5-2008标准的要求,ZAAS精密度较高。用两种方法对30份尿液样本进行检测,经配对t检验,差异无显著性(P0.05),两种方法检测结果有较高一致性(R2=0.9961)。结论 ZAAS能够快捷、准确测量尿汞含量,检出限较低、精密度较高。     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中芹黄春浓度及其在药代动力学研究中的应用

目的：研究大鼠分别灌胃和静脉给药芹黄春（芹菜素-7-O-β-D吡喃葡萄糖苷）溶液后,血浆中的芹黄春药物浓度及其药代动力学性质。方法6只雌性Sprague Dawley大鼠随机分为两组,每组3只,分别经灌胃(10 mg/kg)和静脉注射(2 mg/kg)给予芹黄春溶液后,按设计的时间点从大鼠眼内眦静脉丛采集血液样品,置于肝素化的离心管中,低温离心得血浆。采用甲醇沉淀法处理血浆生物样品,利用LC-MS/MS方法对血浆生物样品进行分析。药代动力学参数由Kinetica 2000软件进行计算。结果芹黄春浓度在1~2000 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.9974),定量下限为1 ng/mL,低(8 ng/mL)、中(100 ng/mL)、高(1200 ng/mL)3个浓度的提取回收率均大于90%,日内日间精密度和稳定性的RSD均小于12.8%,日内日间准确度在91.5%~107%,方法学考察均符合要求。大鼠经静脉注射和灌胃芹黄春后,Cmax分别为(2363±96) ng/mL和(13.3±5.8) ng/mL,AUC0~∞分别为(796±201) h· ng/mL和(28.9±9.2) h· ng/mL,大鼠经静脉注射和后t1/2为(1.20±0.17) h,芹黄春的口服生物利用度约为0.6%。结论所建立的LC-MS/MS分析方法方便、快速,灵敏度高,准确度好,可用于大鼠血浆芹黄春浓度测定及其药代动力学的研究。     

胰岛素样生长因子-I和人绒毛膜促性腺激素对成年大鼠Leydig细胞葡萄糖转运蛋白基因表达调控

目的:研究胰岛素样生长因子I(IGF I)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)对成年大鼠睾丸Leydig细胞中葡萄糖转运蛋白(GLUT)基因表达的影响,为进一步探讨Leydig细胞中睾酮的合成、分泌与葡萄糖代谢的关系提供依据。方法:采用改良的Klinefelter方法从成年大鼠睾丸中分离获得Leydig细胞;用反转录聚合酶链技术检测IGF I和hCG对原代培养的Leydig细胞中GLUT基因表达的调控作用。结果:分离得到纯度为98%的大鼠Leydig细胞,并与对照组比较,hCG可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA的表达水平(P<0.001),且此作用具有剂量依赖性与时效性。当在试验组细胞中单独加入IGF I或IGF I和hCG作用于细胞后,发现IGF I(100ng mL)可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA的表达(P<0.01),也可与hCG协同作用显著提高GLUT8基因的mRNA表达,该结果与IGF I(100ng mL)和hCG(10ng mL)能协同作用极显著增加睾酮合成水平(P<0.001)的结果是相吻合的。在大鼠Leydig细胞中,无论10ng mL或100ng mL还是两者同时作用于细胞,都不能影响GLUT1和GLUT3基因的mRNA水平。结论:在成年大鼠Leydig细胞中,IGF I和hCG对细胞中的GLUT8基因表达的调节作用具有特异性,其协同作用能显著提高细胞中GLUT8基因mRNA水平,增强细胞摄取葡萄糖的能力,给细胞提供更多的代谢能源,最终增加Leydig细胞睾酮的合成与分泌。     

Slit2蛋白对TNF-α诱导的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖迁移的影响

目的：观察Slit2蛋白对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖迁移的影响。方法采用川北医学院第二临床医学院实验室培养的大鼠VSMCs ,实验分两部分,第一部分：Slit2单独作用,分为正常对照组和实验组（Slit2蛋白浓度分别为：50、75、100、125、150 ng／mL）;第二部分：Slit2与TNF‐α共同作用,分为正常对照组、阳性对照组（含TNF‐α10 ng／mL）和实验组（TNF‐α10 ng／mL＋Slit250 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit275 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit2100 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit2125 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit2150 ng／mL）。分别采用CCK‐8及transwell小室法检测各组细胞的增殖及迁移能力。结果第一部分：实验组与对照组OD值及迁移细胞数目比较差异均无统计学意义（P＝0．516,P＝0．52）。第二部分：正常对照组与阳性对照组比较细胞迁移数目差异有统计学意义（P＝0．00）,实验组细胞迁移数较阳性对照组明显减少;CCK‐8结果显示实验组和阳性对照组与正常对照组OD值比较差异有统计学意义（P＜0．05）,而实验组与阳性对照组OD值比较差异无统计学意义（P＝0．173）。结论 Slit2对VSMCs增殖无影响,但能抑制TNF‐α诱导的VSMCs迁移。     

激活素A、抑制素A对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟培养的影响

目的探讨激活素A(activin A,ACTA)、抑制素A(inhibin A,INHA)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)及早期胚胎发育的影响。方法①分别将ACTA、INHA分3个浓度水平(50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL)进行卵母细胞体外成熟培养,寻找ACTA、INHA最佳的卵母细胞体外成熟培养浓度;②比较ACTA、INHA、ACTA+INHA与对照组对卵母细胞体外成熟的影响;③比较对照组与ACTA组、INHA组和ACTA+INHA组对小鼠卵母细胞受精率及囊胚形成率的影响。结果不同浓度组之间相较,无论是ACTA还是INHA,100ng/mL和200ng/mL组的卵母细胞成熟率均比50ng/mL组高(P<0.05);100ng/mL、200ng/mL浓度间差异无统计学意义。ACTA组(100ng/mL)、INHA组(100ng/mL)和ACTA(100ng/mL)+INHA(100ng/mL)组的卵母细胞成熟率、成熟卵母细胞受精率、囊胚形成率均高于对照组(P<0.05),但各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ACTA和INHA均对卵母细胞体外成熟、受精及胚胎发育潜能具有明显的促进作用。卵母细胞体外成熟培养的添加浓度以100ng/mL为宜。     

联合检测血清胃蛋白酶原和抗HpIgG抗体在消化溃疡诊断中的价值探讨

目的：探讨联合检测血清胃蛋白酶原和抗 Hp IgG 抗体在消化溃疡诊断中的价值。方法方便选取2010年4月—2015年8月在该院消化科就诊的消化性溃疡患者150例,纳入病例组,另外选择同期在该院门诊行健康体检者100各作为健康对照组。对比两组对象血清PGⅠ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ比值及Hp阳性情况。比较消化溃疡患者中Hp阳性者与阴性者的血清PGⅠ、PGⅡ及PGⅠ/PGⅡ比值情况。结果病例组血清PGⅠ、PGⅡ水平及PGⅠ/PGⅡ值分别为(181.36±20.72)ng/mL、(24.81±9.65)ng/mL、(7.62±1.15)ng/mL,对照组分别为(53.67±19.64)ng/mL、(13.97±6.83)ng/mL、(4.57±1.46)ng/mL,病例组血清PGⅠ、PGⅡ水平及PGⅠ/PGⅡ值明显高于对照组差异有统计学意义(P﹤0.05)。病例组、对照组Hp阳性率分别为77.33%、24.00%,病例组Hp阳性率明显高于对照组(P﹤0.05)。 Hp阳性患者血清PGⅠ、PGⅡ水平及PGⅠ/PGⅡ值分别为(217.82±29.47)ng/mL、(28.53±10.81)ng/mL、(8.91±1.20),Hp阴性患者分别为(68.35±20.54)ng/mL、(17.02±7.15)ng/mL、(5.76±1.38)ng/mL, Hp阳性患者血清PGⅠ、PGⅡ水平及PGⅠ/PGⅡ值明显高于阴性患者差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论检测血清PG及Hp IgG抗体能对消化溃疡进行早期筛查,当两者出现异常时再行胃镜检查以明确诊断,从而一定程度提高了体检患者的检查依从性。     

可替宁单克隆抗体的制备及其在免疫学检测中的应用

目的: 研制可替宁单克隆抗体（单抗）,并建立检测人体尿液样本中可替宁的免疫检测方法。方法: 利用人工合成的可替宁-牛血清白蛋白（COT-BSA）免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术筛选一种对可替宁具有高特异性和敏感性的单抗,并将该单抗用于建立间接竞争ELISA（ic-ELISA）和胶体金免疫层析试纸,检测人体尿液中可替宁的含量。结果: 所研制的可替宁单抗经ic-ELISA鉴定,半数有效抑制浓度为21 ng/mL,经胶体金免疫层析试纸鉴定,截断值为100 ng/mL。所建立的ic-ELISA方法检测限为0.1 ng/mL,回收率为99.41%~117.98%,批间和批内变异系数分别小于等于15.31%和15.07%。所建立的胶体金免疫层析试纸稳定性和重复性检测准确率均为100%。结论: 以制备的可替宁单抗为基础开发的ic-ELISA和胶体金免疫层析试纸可快速、可靠地检测人体尿液中可替宁含量,可作为环境烟草烟雾在人体内暴露程度的有效检测方法。     

原发性醛固酮增多症筛查诊断影响因素的分析

目的：比较卧立位对血浆醛固酮／肾素比值（ARR）及原发性醛固酮增多症（PA）的影响,并通过盐水确诊试验研究较有效的筛查条件。方法将排除其他继发性高血压病因,严格换药后完成盐水确诊试验的84例高血压患者根据盐水试验结果分为PA组（52例）和原发性高血压（PH）组（32例）,统计立卧位血浆醛固酮、肾素（PRA）数值,计算立卧位ARR比值,测定尿醛固酮。结果 PA组立位 AAR＞240（pg／mL）／（ng·mL－1·h－1）者42例（80．77％）,PH 组立位 AAR＞240（pg／mL）／（ng · m L －1· h－1）者14例（43．75％）,尿醛固酮中位数14．34μg／24 h ,P H组A A R＞240（pg／m L ）／（ng · m L －1· h－1）且卧位血浆醛固酮大于150 pg／mL者1例（3．13％）。PA组立位AAR＞240（pg／mL）／（ng·mL－1·h－1）且卧位血浆醛固酮大于150 pg／mL者34例（65．39％）,此方法诊断PA的特异性为96．88％。PA组立位AAR＞240（pg／mL）／（ng·mL－1·h－1）且卧位血浆醛固酮大于150 pg／mL及尿醛固酮大于10μg／24 h者31例（59．62％）,此方法诊断 PA特异性为100．00％。结论以立位ARR＞240（pg／mL ）／（ng·mL－1·h－1）且卧位血浆醛固酮大于150 pg／mL及尿醛固酮大于10μg／24 h为标准是有效筛查原发性醛固酮增多症的方法。