外用8-甲氧补骨脂素诱导的黄褐斑动物模型研究

目的采用综合造模法创建小鼠皮肤黄褐斑动物模型。方法 30只KM雌性小鼠随机分为空白组、造模1组、造模2组。除空白组外,造模1组和造模2组根据文献均每日用波长320 nm的中波紫外线（UVB）照射小鼠背部皮肤1次,照射时间30 s,并每日定时肌肉注射1%黄体酮注射液2 mL/kg体重,两腿交替注射;同时每日将小鼠置于特制的束缚桶内束缚30 min;造模2组同时局部外涂8-甲氧补骨脂素（8-MOP）,每日1次。造模4周后,HE染色和免疫组化染色观察皮肤黑色素细胞病理形态学。结果 （1）HE染色结果 :造模1组和造模2组小鼠皮肤黑色素细胞的上皮层增生数、真皮血管数和真皮炎性细胞数高于空白组（P<0.01）;造模2组小鼠皮肤黑色素细胞的上皮层增生数、真皮血管数和真皮炎性细胞数高于造模1组（P<0.01）。（2）免疫组化染色结果:造模1组和造模2组小鼠皮肤黑色素细胞的HIS、平均光密度和积分光密度高于空白组（P<0.01）;造模2组小鼠皮肤黑色素细胞的HIS、平均光密度和积分光密度高于造模1组（P<0.01）。结论采用小鼠皮肤局部黄体酮注射+慢性束缚+局部紫外线照射+外涂8-甲氧补骨脂素的综合实验方法建立的黄褐斑小鼠模型,更加接近人类黄褐斑病变特征。     

卤米松乳膏联用补骨脂素治疗白癜风疗效观察

0 引言 白癜风是一种获得性进行性皮肤色素障碍性疾病,治疗时间长,疗效不理想. 我科2004-09/2005-10外用卤米松加8-甲氧补骨脂素(8-MOP)冶疗白癜风,收到满意疗效.     

8-甲氧基补骨脂素柔性纳米脂质体不同研制方法的比较

目的:筛选制备8-甲氧基补骨脂素(MOP)柔性纳米脂质体的合适方法。方法:根据正交实验设计及预试验,确定基本配方大豆磷脂∶胆固醇∶MOP∶胆酸钠=20∶10∶3∶10。分别采用逆相蒸发法、乙醚注入法、薄膜法、薄膜-超声法等方法制备MOP柔性纳米脂质体,比较脂质体包封率、平均粒径和Zeta电位。结果:逆相蒸发法制备的脂质体包封率低,粒径大;乙醚注入法包封率低且平均粒径小;薄膜法包封率高,粒径大;薄膜-超声法包封率高,平均粒径适中,且Zeta电位负值较高;超声15min获得的脂质体包封率较高,平均粒径大小合适,Zeta电位的负值也比较高。结论:采用薄膜-超声法,超声时间15min是制备补骨脂素柔性纳米脂质体比较适宜的方法。     

制备方法对甲氧沙林脂质体体外性质的影响研究

目的考察不同制备方法对甲氧沙林脂质体（LMOP）体外质量的影响,从而优选较好的制备方法。方法分别以薄膜分散法、逆相蒸发法、高压乳匀法、冻融法制备LMOP,用透射电镜观察其形态,用凝胶柱层析法结合HPLC测定其包封率,粒度分析仪测其粒径。结果不同方法制备的脂质体形态均较圆整,分布较均匀;包封率顺序为冻融法〉薄膜分散法〉高压乳匀法〉逆相蒸发法：粒径大小顺序为冻融法〉薄膜分散法〉逆相蒸发法〉高压乳匀法。结论该脂质体体外质量与制备方法密切相关。     

8－甲氧基补骨脂素对兔肺主动脉收缩的影响

用家兔离体肺主动脉环标本观察８－甲氧基补骨脂素（８－ＭＯＰ）对去甲肾上腺素、氯化钾及新福林收缩的影响。结果发现８－ＭＯＰ有舒张肺动脉，抑制肺动脉收缩的作用，抑制去甲肾上腺素和新福林收缩的作用较抑制氯化钾收缩的作用强，８－ＭＯＰ使去甲肾上腺素的浓度反应曲线呈浓度依赖性右移。ｐＡ＝５．１９±０．０６。     

8-甲氧补骨脂素和长波紫外线在细胞光老化中对端粒缩短机制的影响

目的 探讨8-甲氧补骨脂素(8-MOP)和长波紫外线(UVA)对人真皮成纤维细胞光老化模型中端粒缩短机制的影响.方法 研究对象分为对照组、8-MOP组、UVA组及8-MOP+UVA组,对上述各组采用流式细胞仪检测细胞周期G1期阻滞率、酶组织化学染色法检测老化相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)、免疫荧光检测光产物8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-oxo-dG)、实时定量PCR检测端粒相对长度,以及用Western印迹检测老化相关蛋白P53,P21WAF-1及P16INK-4a表达水平.结果 8-MOP+UVA组在照光后24、48、72 h及7 d时的G1期阻滞率均高于对照组(61.4%±1.5%比32.8%±1.5%、69.5%±2.2%比44.9%4±2.3%、88.2%±1.6%比59.8%±1.4%、90.7%±2.5%比68.5%±2.6%,均P＜0.01);8-MOP+UVA组在照光后24、48、72 h及7d时的SA-β-Gal阳性细胞比率均明显高于对照组(34.87%±0.59%比7.11%±0.78%、59.38%±0.46%比10.57%±0.47%、72.46%±0.98%比11.67%±0.87%、94.33%±0.13%比12.04%±0.12%,均P＜0.01);8-MOP+UVA组照光后即刻产生的8-oxo-dG的水平(阳性细胞核百分数:95.78%±0.14%)也高于对照组(7.69%±0.09%,P＜0.01)、8-MOP组(9.76%±0.11%,P＜0.01)和UVA组(35.29%±0.14%,P＜0.05);8-MOP+UVA组在照光后7 d时端粒相对长度数值明显低于对照组(2.57±0.05比6.63 ±0.12,P＜0.01),而该组老化相关蛋白P53,P21WAF-1及P16INK-4a水平明显高于对照组(3.00±0.88比0.54±0.10、2.50±0.51比0.42±0.06、2.21±0.34比0.38 ±0.05,均P＜0.01).结论 8-MOP和UVA可通过对端粒基因的氧化应激损伤而加快端粒缩短,影响下游老化相关蛋白表达水平,最终加速细胞老化进程.     

8-甲氧补骨脂素和长波紫外线在细胞光老化中对端粒缩短机制的影响

Objective To investigate the mechanism of telomere shortening through 8-methoxypsoralen(8-MOP)and subsequent ultraviolet A(UVA)irradiation-induced photoaging model in human dermal fibroblasts(HDFs).Methotis Photoaging model was established by 8-MOP+UVA in skin HDFs.Flow cytometer.enzyme eytochemistry,immunofluorescence,Westem blot and Real-time PCR were employed.Results The percentage of G1 blockage of 8-MOP+UVA group were higher than that of control group at 24、48、72 h and 7 d(61.4%±1.5% vs 32.8%±1.5%.69.5%±2.2% vs 44.9% ±2.3%.88.2%±1.6% vs 59.8%±1.4%,90.7%±2.5% vs 68.5%±2.6%.all P＜0.01).The expression of SA-β-Gal of 8-MOP+UVA group were higher than that of control group at 24、48、72 h and 7 d(34.87%±0.59% vs 7.11%±0.78%,59.38%±0.46% vs 10.57%±0.47%.72.46%±0.98% vs 11.67%±0.87%,94.33%±0.13% vs 12.04%±0.12%,all P＜0.01).8-MOP+UVA treatment could significantly aggravate the oxidative DNA damages,the percentage of 8-oxo-dG positive cell of 8-MOP+UVA group(95.78%±0.14%)were significantly higher than that of control group(7.69%±0.09%,P＜0.01),8-MOP group(9.76%±0.11%,P＜0.01)and UVA group(35.29%±0.14%,P＜0.05).8-MOP+UVA treatment could accelerate the telomere shortening.the relative length of telomere of 8-MOP +UVA group were 2.57±0.05 lower than that of control group(6.63±0.12.P＜0.01).The levels of P53,P21WAF-1 and P16INK-4a of 8-MOP+UVA group were higher than that of control group(3.00±0.88 vs 0.54±0.10,2.50±0.51 vs 0.42±0.06,2.21±0.34 vs 0.38±0.05,all P＜0.01).Conclusion 8-MOP+UVA-induced photoaging of HDFs can be mediated though the regulation of telomere and subsequent P53-dependent signaling pathways.     

8-甲氧补骨脂素和长波紫外线在细胞光老化中对端粒缩短机制的影响

Objective To investigate the mechanism of telomere shortening through 8-methoxypsoralen(8-MOP)and subsequent ultraviolet A(UVA)irradiation-induced photoaging model in human dermal fibroblasts(HDFs).Methotis Photoaging model was established by 8-MOP+UVA in skin HDFs.Flow cytometer.enzyme eytochemistry,immunofluorescence,Westem blot and Real-time PCR were employed.Results The percentage of G1 blockage of 8-MOP+UVA group were higher than that of control group at 24、48、72 h and 7 d(61.4%±1.5% vs 32.8%±1.5%.69.5%±2.2% vs 44.9% ±2.3%.88.2%±1.6% vs 59.8%±1.4%,90.7%±2.5% vs 68.5%±2.6%.all P＜0.01).The expression of SA-β-Gal of 8-MOP+UVA group were higher than that of control group at 24、48、72 h and 7 d(34.87%±0.59% vs 7.11%±0.78%,59.38%±0.46% vs 10.57%±0.47%.72.46%±0.98% vs 11.67%±0.87%,94.33%±0.13% vs 12.04%±0.12%,all P＜0.01).8-MOP+UVA treatment could significantly aggravate the oxidative DNA damages,the percentage of 8-oxo-dG positive cell of 8-MOP+UVA group(95.78%±0.14%)were significantly higher than that of control group(7.69%±0.09%,P＜0.01),8-MOP group(9.76%±0.11%,P＜0.01)and UVA group(35.29%±0.14%,P＜0.05).8-MOP+UVA treatment could accelerate the telomere shortening.the relative length of telomere of 8-MOP +UVA group were 2.57±0.05 lower than that of control group(6.63±0.12.P＜0.01).The levels of P53,P21WAF-1 and P16INK-4a of 8-MOP+UVA group were higher than that of control group(3.00±0.88 vs 0.54±0.10,2.50±0.51 vs 0.42±0.06,2.21±0.34 vs 0.38±0.05,all P＜0.01).Conclusion 8-MOP+UVA-induced photoaging of HDFs can be mediated though the regulation of telomere and subsequent P53-dependent signaling pathways.     

α和β-熊果苷对共培养小鼠黑素细胞黑素生成的影响研究

目的 比较观察熊果苷分子苯环侧链上的糖苷基团α和β-构象对共培养小鼠黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量的影响.方法 体外melan-a小鼠黑素细胞(MC)与SP-1小鼠角质形成细胞(KC)共培养体系,两种细胞的初始接种比例为1:5.共培养细胞分别用含有0.04、0.2、1 mg/ml的α-熊果苷、β-熊果苷、烟酰胺及10、50、100 μmol/L的甲氧沙林(8-MOP)新鲜培养基换液,药物处理共4 d.用相差倒置显微镜观察细胞表型的改变;用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖率;用放射性核素L-[14C]-酪氨酸底物标记法测定酪氨酸羟化酶与多巴氧化酶活性;用分光光度计法测定细胞总黑素含量.结果 除8-MOP能明显促进共培养细胞(主要是MC)发生增殖外,其他3种化合物对细胞增殖率均无影响.两种熊果苷均能剂量依赖地抑制酪氨酸酶活性和黑素含量.1 ms/mlα-熊果苷对酪氨酸酶活性的抑制作用比同等浓度的β-熊果苷强(酪氨酸酶活性:37%±4%vs54%±9%,P=0.034).经两种熊果苷(1 mg/ml)处理的MC树状突延长纤细,黑素产生较对照组明显减少,以α-熊果苷更为明显.相反,100 μmol/L 8-MOP处理组的MC数目较对照组显著增加,树状突增加,胞质与树状突内有大量黑褐色黑素堆积.结论 α-熊果苷能明显抑制共培养小鼠黑素细胞的黑素生成,其临床应用价值有待体内实验进一步确认.     

甲氧滴滴涕对雌性小鼠子宫内膜促血管生成素-1表达的影响

目的：探讨甲氧滴滴涕（MXC）对雌性小鼠子宫内膜促血管生成素。1表达的影响。方法：成年雌性小鼠经口染毒MXC,随机分为50,100,200mg／（kg·d）3个染毒组和溶剂芝麻油组（对照组）。采用免疫组织化学及电子计算机图像分析技术,检测染毒后小鼠子宫内膜中ANGPT-1的表达情况。结果：MXC染毒组与正常内膜相比,ANGPT-1呈高表达状态,差异有显著性（P〈0.01）。MXC50,100,200mg／（kg·d）组内膜与正常内膜均随月经周期呈周期性改变,MXC100,200mg／（kg·d）组内膜ANGPT-1在增殖期的表达强度高于分泌期,与正常内膜相比,差异有显著性（P〈0.01）;而MXC50mg／（kg·d）组内膜与正常内膜相比,ANGPT-1在增殖期的表达强度无差异（P〉0.05）。结论：MXC染毒后小鼠子宫内膜中ANGPT-1的高表达可能在子宫内膜疾病的发生、发展中起重要作用。     

蟛蜞菊乙醇提取物促进黑色素生成及其机理的初步研究

目的观察中药蟛蜞菊乙醇提取物促进黑色素生成的作用,并初步探讨其作用机理。方法 MTT法、L-Dopa氧化法、NaOH裂解法探讨不同浓度蟛蜞菊乙醇提取物作用于小鼠恶性黑色素瘤细胞(B16)72 h后,对细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素含量的影响。RT-PCR检测药物作用前后酪氨酸酶、小眼相关转录因子(MITF)等基因表达的影响。结果与对照组比较,蟛蜞菊乙醇提取物能促进B16细胞的增殖,促进酪氨酸酶活性增加和黑色素生成增多;可剂量依赖性上调酪氨酸酶和MITF的mRNA表达。结论蟛蜞菊乙醇提取物可促进B16细胞黑色素生成,其机制可能是通过促进B16细胞增殖、增强酪氨酸酶和MITF的基因表达来实现。     

重建型蓖麻蛋白脂质体的制备、性质及对肝癌细胞的毒性

目的:制备重建型蓖麻蛋白脂质体(RRL),并探讨其毒性作用.方法:通过正交法实验选择配方,并采用冷冻干燥脱水-再水化-囊泡化方法(DRV法)制备RRL;用体外细胞毒性试验和小鼠半数致死量(LD50)试验测定RRL毒性.结果:RRL的包封率可达59.63%(含50 g/L的甘露醇),粒径为0.50～0.79 μm(占90%以上),经4 ℃ 0.5 a贮存,其粒径和粒度分布无明显变化.RRL对7 721人肝癌细胞的半数细胞抑制浓度(IC50)与游离蓖麻蛋白的IC50之比为1∶2.47;RRL的LD50为(55.61±19.71) μg/kg,毒性下降27.66%.结论:本法所得RRL性质稳定,药物包封率较高,并提高了对肝癌细胞的毒性,降低了对小鼠的毒性,为临床研制蓖麻蛋白的新剂型提供了理论依据.     

白黎芦醇脂质体的制备工艺改进

目的: 制备白黎芦醇脂质体,优选最佳处方及最佳制备工艺. 方法: 以大豆磷脂、胆固醇为载体,采用薄膜超声分散法制备白黎芦醇脂质体,设计正交实验,以包封率、形态为考察指标选择最优处方. 结果: 按最优处方制得的白黎芦醇脂质体均匀圆整,平均粒径范围80～100 nm,包封率为96.52%,载药量为19.81%. 结论: 选择薄膜超声分散法优化工艺制备白黎芦醇脂质体处方合理,工艺可行,包封率及载药量高.     

丹皮酚脂质体体外透皮试验

目的制备丹皮酚脂质体,考察其作为经皮给药载体的透皮特性。方法薄膜-超声法制备丹皮酚脂质体;采用透皮扩散仪,以小鼠皮肤进行体外经皮渗透实验,考察丹皮酚脂质体的经皮渗透行为及皮内滞留药物量。结果制得的丹皮酚脂质体主要为单室脂质体,平均包封率为72.8%,平均粒径为163.8 nm。体外经皮渗透试验表明,与50%的乙醇溶液相比,脂质体透皮速率较慢,但皮肤中药物滞留量明显增加。结论丹皮酚脂质体制备工艺可行,能使药物在皮肤中蓄积,持续平稳释药。     

齐墩果酸脂质体的制备研究

目的：制备齐墩果酸（oleanolic acid,OA）脂质体,优选最佳处方及制备工艺。方法：以氢化大豆卵磷脂、胆固醇为载体,采用薄膜超声分散法制备齐墩果酸脂质体,设计正交实验。以包封率、形态为考察指标选择最优处方。结果：按最优处方制得的齐墩果酸脂质体均匀圆整,平均粒径82.1nm。包封率在90%以上。结论：选择薄膜超声分散法优化工艺制备齐墩果酸脂质体处方合理,工艺可行,有比较满意的包封率。     

和厚朴酚对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖以及黑色素合成的影响

目的探讨和厚朴酚对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖以及细胞内黑色素合成的影响。方法体外培养小鼠B16细胞,MTT法检测和厚朴酚对B16细胞增殖的影响;DAPI染色法观察和厚朴酚对B16细胞细胞形态的影响;NaOH裂解法检测和厚朴酚对黑色素含量的影响。结果和厚朴酚浓度为51、0、204、0、80μmol/L作用B16细胞,在不同的用药时间122、4和48 h,和厚朴酚对B16细胞增殖的IC50分别为23.41、3.1和11.4μmol/L;同时和厚朴酚作用B16细胞12 h后,经DAPI染色,B16细胞呈现典型的凋亡形态;另外采用204、0、80μmol/L的和厚朴酚分别作用B16细胞,B16细胞内黑色素合成量也呈现降低的趋势。结论和厚朴酚能有效地抑制B16细胞增殖,且其抑制作用具有时间和浓度依赖性;药物作用后的B16细胞呈现凋亡形态并出现凋亡小体;和厚朴酚对B16细胞内黑色素合成也呈现抑制作用但不明显。     

小分子化合物I942对黑素细胞黑素合成的促进作用

目的 研究小分子化合物I942对黑素细胞黑素合成的作用及相关机制。方法 采用多巴染色法对正常人永生化黑素细胞系PIG1进行鉴定,用不同浓度的小分子化合物I942处理黑素细胞PIG1。用CCK-8法检测小分子化合物I942对细胞活力的影响,用氢氧化钠裂解法检测细胞中黑素含量,用多巴氧化反应法检测细胞中酪氨酸酶活性,用qRT-PCR检测细胞中黑素合成相关蛋白小眼畸形相关转录因子（MITF）、酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相关蛋白1（TRP1）、酪氨酸酶相关蛋白2（TRP2）mRNA的表达量,用蛋白质印迹法检测TYR、TRP2的蛋白表达情况。结果 在0～50 μmol/L的浓度范围内,小分子化合物I942对黑素细胞PIG1细胞活力的影响差异无统计学意义（P>0.05）。小分子化合物I942可增加黑素细胞PIG1中黑素含量（P<0.01）,升高细胞内酪氨酸酶活性（P<0.01）。使用小分子化合物I942处理后,黑素细胞PIG1中MITF、TYR、TRP1、TRP2 mRNA表达均上升（P<0.01,P<0.05）,TYR、TRP2蛋白表达无明显变化。结论 小分子化合物I942在对细胞活力无明显抑制作用的基础上,可通过升高酪氨酸酶活性增加黑素细胞PIG1中黑素含量,同时黑素合成相关蛋白MITF、TYR、TRP1、TRP2的mRNA表达也升高。     

靶向长循环脂质体造影剂体内外靶向性研究

目的通过测定肿瘤新生血管靶向的长循环脂质体造影剂与体外细胞的结合能力及在其体内的代谢、分布情况,研究其对肿瘤的靶向能力。方法薄膜超声法制备包载核磁共振造影剂钆喷酸葡胺注射液（Gd-DTPA）的靶向神经纤毛蛋白-1受体的长循环脂质体造影剂（T-PEG-Gd-LP）和非靶向的长循环脂质体造影剂（NT-PEG-Gd-LP）,并观察测定物理性质。实验共设3组,游离组Gd-DTPA、非靶向组NT-PEG-Gd-LP和靶向组T-PEG-Gd-LP,分别测定与人脐静脉内皮细胞（HUVECs）和人肺腺癌细胞（A_（549）cells）的结合能力及注射荷瘤裸鼠模型后的血液和各组织器官中的钆含量。结果靶向组T-PEG-Gd-LP与细胞的结合能力优于其他组别（P〈0.05）。与游离组Gd-DTPA相比,NT-PEG-Gd-LP和T-PEG-Gd-LP在血中的清除速率明显减慢,肿瘤、肝、脾、肌肉组织中的药物含量明显增加,心、肺、肾组织中明显降低。与非靶向组NT-PEG-Gd-LP相比,靶向组T-PEG-Gd-LP在肿瘤组织中的药物含量显著增加。结论肿瘤新生血管靶向的长循环脂质体造影剂在体外结合和体内分布情况都表现出良好的肿瘤靶向性。