Periodontal regeneration enhanced by the application of cancellous bone matrix scaffolds seeded with periodontal ligament cells

目的 观察牙周膜细胞(PDLCs)接种松质骨基质(CBM)支架复合移植对牙周组织再生修复的影响和意义.方法 将体外培养的狗自体PDLCs接种到CBM三维支架上,体外进行细胞计数和扫描电镜观察,并植入狗人工牙周组织缺损处,表面覆盖聚四氟乙烯膜(e-PTFE),以单纯翻瓣组和只覆盖e-PTFE组作为对照.术后8周对动物组织标本进行组织学观察和测量,分析比较各组牙周组织的再生情况.结果 PDLCs在CBM支架材料上形成良好的贴附并增殖,扫描电镜可见CBM具有良好的多孔网状结构,细胞在CBM上生长旺盛,伸展充分.自体PDLCs/ CBM / e-PTFE膜复合植入组较单纯翻瓣组和e-PTFE组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成,且未见上皮长入.结论 PDLCs接种松质骨基质支架复合移植能更有效地促进牙周组织再生和重建,CBM有望用作牙周组织工程的支架材料.     

细胞-支架构建方式的牙周组织工程实验研究

目的　观察评价细胞 支架构建方式的组织工程方法对牙周组织再生修复的影响和意义。方法　体外培养动物自体牙周膜细胞 (PDLCs) ,传代扩增后接种到纳米羟基磷灰石材料 (nHAC)三维支架上 ,扫描电镜观察PDLCs在nHAC支架上的附着及生长情况 ;同时 ,将PDLCs nHAC复合物植入动物牙周组织缺损中 ,术后 8周观察 ,评价其牙周组织的再生情况。结果　扫描电镜显示 ,nHAC具有良好的多孔网状结构 ,PDLCs在nHAC上贴附牢固 ,生长旺盛。动物实验可见 ,PDLCs nHAC植入组较对照组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成 ,缺损处牙周组织几乎完全再生 ,且未见上皮长入。结论　应用细胞 支架构建方式的牙周组织工程方法能获得理想的牙周组织再生和重建。     

牙周膜细胞松质骨基质支架复合移植促进牙周组织再生的研究

目的观察牙周膜细胞（PDLCs）接种松质骨基质（CBM）支架复合移植对牙周组织再生修复的影响和意义。方法将体外培养的狗自体PDLCs接种到CBM三维支架上,体外进行细胞计数和扫描电镜观察,并植人狗人工牙周组织缺损处,表面覆盖聚四氟乙烯膜（e-PTFE）,以单纯翻瓣组和只覆盖e-PTFE组作为对照。术后8周对动物组织标本进行组织学观察和测量,分析比较各组牙周组织的再生情况。结果PDLCs在CBM支架材料上形成良好的贴附并增殖,扫描电镜可见CBM具有良好的多孔网状结构,细胞在CBM上生长旺盛,伸展充分。自体PDLCs／CBM／e-PTFE膜复合植入组较单纯翻瓣组和e—PTFE组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成,且未见上皮长入。结论PDLCs接种松质骨基质支架复合移植能更有效地促进牙周组织再生和重建,CBM有望用作牙周组织工程的支架材料。     

纳米羟基磷灰石材料复合碱性成纤维细胞因子促进牙周组织再生的实验研究

目的:探讨新型纳米羟基磷灰石材料—纳米羟晶/胶原仿生骨材料(nHAC)作为生长因子载体和牙周组织工程支架材料应用的可行性,观察评价其对牙周组织再生修复的影响和意义。方法:将人牙周膜细胞(HPDLCs)接种于nHAC三维支架上复合培养,体外扫描电镜观察HPDLCs在nHAC支架上的附着、生长情况,并将碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与nHAC复合植入动物人工牙周组织缺损,表面覆盖聚四氟乙烯(e-PTFE)膜,以空白对照组和单纯置膜组作为对照。术后8周进行组织学观察和测量,分析评价其牙周组织的再生情况。结果:扫描电镜可见nHAC具有良好的多孔网状结构,PDLCs在nHAC支架上贴附紧密,生长旺盛,伸展充分,动物实验结果显示nHAC/bFGF/膜复合植入组较空白对照组和单纯置膜组有更多新生的牙槽骨、牙周膜和牙骨质生成,结果具有显著性差异。结论:nHAC具有良好的三维空间结构和细胞相容性,与bFGF复合植入牙周缺损后可显著促进牙周组织再生,提示nHAC有望成为理想的生长因子载体和牙周组织工程支架材料。     

应用细胞-支架构建方式的组织工程方法促进牙周组织再生的实验研究

目的:观察评价细胞 -支架构建方式的组织工程方法对牙周组织再生修复的影响和意义,探讨自体牙周膜细胞(PDLCs)和纳米羟基磷灰石材料 -纳米羟晶 -胶原仿生骨材料 (nHAC)分别用作牙周组织工程种子细胞和支架材料的可行性。方法:改良组织块法体外培养动物自体PDLCs,传代扩增后接种到nHAC三维支架上,再植入动物人工牙周组织缺损,表面覆盖聚四氟乙烯 (e-PTFE)膜,以单纯翻瓣组和单纯GTR组作为对照。术后 8周进行组织学观察和测量,分析评价其牙周组织的再生情况。结果:自体PDLCs-nHAC-膜复合植入组较单纯翻瓣组和单纯GTR组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成,且未见上皮长入。结论:应用细胞-支架构建方式的牙周组织工程方法能更有效地促进牙周组织再生和重建,而自体PDLCs可作为牙周组织工程的种子细胞,nHAC可作为牙周组织工程的支架材料。     

应用生长因子-支架构建方式的组织工程方法再生牙周组织的实验研究

目的：观察评价生长因子-支架构建方式的组织工程方法对牙周组织再生修复的影响和意义，探讨纳米羟基磷灰石材料(nHAC)和重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)用于牙周组织工程的可行性。方法：将rhBMP-2与nHAC复合植入动物人工牙周组织缺损，表面覆盖聚四氟乙烯(e-PTFE)膜，以卒白对照组和单纯GTR组作为对照。术后8周进行组织学观察和测量，分析评价其牙周组织的再生情况。结果：rhBMP-2-nHAC-膜复合植入组较空白对照组和单纯GTR组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成，且未见上皮长入。结论：应用生长因子-支架构建方式的牙周组织工程方法能更有效地促进牙周组织再生和重建，而rhBMP-2和nHAC有望用作牙周组织工程的生长因子和支架材料。     

一种新型纳米羟基磷灰石材料应用于牙周组织工程的可行性研究

目的:对一种新型纳米羟基磷灰石材料 -纳米羟晶 -胶原仿生骨材料 (nHAC)进行细胞相容性和细胞毒性的研究,以初步探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法:将体外培养的人牙周膜细胞(PDLCs)接种于nHAC三维支架上复合培养,采用细胞计数和扫描电镜观察PDLCs在nHAC支架上的附着、生长情况,并通过MTT测试法和碱性磷酸酶(ALP)活性检测法研究nHAC浸提液对PDLCs增殖和功能表达的影响。结果:人PDLCs在nHAC支架上形成良好贴附并增殖,扫描电镜可见nHAC具有良好的多孔网状结构,细胞在nHAC上生长旺盛,伸展充分,而PDLCs在不同浓度的材料浸提液中的生长、增殖及ALP活性与空白对照组相比无显著性差异。结论:nHAC具有良好的三维空间结构和细胞相容性,且无细胞毒性,有望成为牙周组织工程的支架材料。     

人牙周膜细胞在透明质酸/胶原支架上的黏附与生长

目的研究人牙周膜细胞（PDLC）在胶原、透明质酸及透明质酸/胶原支架上的黏附、生长情况,以初步探讨透明质酸/胶原支架应用于牙周组织工程的可行性。方法将体外培养的人牙周膜细胞接种到碳化二亚胺交联的胶原、透明质酸及透明质酸/胶原支架上;MTT法检测支架对人牙周膜细胞黏附、生长的影响;并用倒置相差显微镜和扫描电镜观察形态变化。结果MTT结果显示胶原、透明质酸及透明质酸/胶原支架上人PDLC的黏附、生长情况,在第1、2、4天组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）,第7天组间差异无统计学意义（P>0.05）,且人牙周膜细胞数量透明质酸/胶原组均高于对照组;人牙周膜细胞在支架上生长良好。结论相对于胶原支架和透明质酸支架,透明质酸/胶原支架更有利于人牙周膜细胞的黏附,提示该材料具备成为牙周组织工程理想支架材料的潜力。     

小型猪牙周膜细胞体外培养及与三维支架材料的生物相容性研究

目的建立小型猪牙周膜细胞的体外培养方法,研究其与三维支架材料的生物相容性,为牙齿再生和牙周组织工程研究提供依据.方法无菌条件下,拔除12月龄小型猪上颌尖牙,剥离牙根外牙周组织,用3g/LⅠ型胶原酶和4g/L Dispase 37℃消化1 h,用70μm滤网收集细胞,1000 r/min离心10 min,培养液重新悬浮成单细胞悬液,α-MEM(α-modification of Eagle's medium)培养基培养.每天用倒置显微镜观察细胞生长情况,流式细胞仪检测抗Stro-1抗体的表达情况.取第3代牙周膜细胞接种于HA/TCP上,扫描电镜观察培养3天和5天后细胞在三维支架材料上的生长情况.结果原代培养的小型猪牙周膜细胞生长良好,呈多角形或梭性.流式细胞仪结果显示,分离培养的牙周膜细胞中有7.6%抗Stro-1抗体表达阳性.扫描电镜观察结果表明,牙周膜细胞在HA/TCP三维支架上生长良好.结论小型猪牙周膜细胞可被成功的分离培养,在三维支架材料HA/TCP上表现出良好的生长状态,有望为牙齿再生和牙周组织工程研究提供有用的细胞来源.     

应用牙周膜干细胞—牙囊干细胞复合细胞膜片同种异体移植修复比格犬牙周组织缺损的研究

目的 拟构建比格犬牙周缺损模型,观察牙周膜干细胞—牙囊干细胞复合细胞膜片修复牙周组织缺损的效果.方法 分离培养比格犬牙囊干细胞、牙周膜干细胞,制备牙囊干细胞细胞膜片、牙周膜干细胞细胞膜片以及以上2种细胞的复合细胞膜片,将膜片混合支架材料同种异体植入成年雄性健康比格犬牙周缺损模型,对照组只植入支架材料.分别于移植后1周、2周、4周、6周、8周、12周检测探诊深度、牙龈退缩、附着丧失情况.12周后观察分析牙周再生的组织形态学变化.结果 牙周临床检查及组织学形态学分析显示,3个膜片移植组牙周再生效果较对照组效果明显,其中复合细胞膜片移植组明显高于其余两个单一膜片移植组(P<0.05).结论 牙周膜干细胞—牙囊干细胞复合膜片同种异体移植更有利于修复比格犬牙周缺损.     

狗牙周膜细胞三维立体培养的体外实验研究

目的 :探讨异体脱矿松质骨基质 (CBM )和纳米羟基磷灰石材料 (nHAC)两种支架材料应用于牙周组织工程的可行性 ,为建立牙周组织工程的动物模型及下一步进行牙周组织工程的动物实验奠定实验基础。方法 :组织块法培养狗牙周膜细胞 ,传代扩增后 ,接种于CBM和nHAC 2种三维支架上 ,体外继续培养 3d ,进行细胞计数和扫描电镜观察。结果 :狗牙周膜细胞在 2种支架材料上均能形成良好贴附并增殖 ,扫描电镜可见 2种支架材料均具有良好的多孔网状结构 ,细胞在支架材料上生长旺盛 ,伸展充分。结论 :CBM和nHAC均有望成为牙周组织工程的支架材料     

鼠根端乳头条件培养基诱导下的牙周膜细胞膜片与牙本质管和煅烧骨间的牙周膜再生

目的 利用鼠根端乳头条件培养基(APTG-CM)与牙周膜细胞(PDLCs)建立间接共培养体系,探讨牙周组织再生的研究.方法 胶原酶联合组织块法获得人PDLCs,用波形蛋白和角蛋白鉴定PDLCs的来源.APTG-CM诱导PDLCs 28d,通过免疫细胞化学法检测PDLCs中骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原(COL Ⅰ)、骨涎蛋...     

聚己内酯电纺纤维支架培养人牙周膜细胞的体外研究

目的：研究聚己内酯（PCL）电纺纤维支架上人牙周膜细胞的生物学行为，初步探讨PCL电纺纤维支架材料应用于牙齿再生和牙周组织工程研究的可行性。方法：采用静电纺丝法制备PCL电纺纤维支架。组织块法培养人牙周膜细胞（PDLC），传代扩增后接种于PCL电纺纤维支架上。激光共聚焦显微镜、扫描电镜观察人PDLC在支架材料上的黏附、生长情况，MTT法检测PCL电纺纤维支架对PDLC增殖的影响。结果：PCL电纺纤维支架呈无纺多孔网状结构，直径范围为338～424nm，纤维形态光滑均一。激光共聚焦显微镜、扫描电镜显示PDLC在支架上贴附牢固，伸展充分，增殖旺盛并分泌大量的细胞外基质。MTT法检测显示：PCL电纺纤维支架材料对PDLC生长增殖的影响与对照组培养板相比无统计学差异（P〉0．05）。结论：PCL电纺纤维支架具有良好的生物相容性，有望作为一种新型的支架材料应用于牙周组织工程。     

犬牙周膜细胞和骨髓基质细胞相互作用的体外实验研究

目的:研究牙周膜细胞(PDLCs)和骨髓基质细胞(BMSCs)共培养是否更利于牙周组织再生。方法 :用组织块法培养PDLCs,用全血贴壁法培养BMSCs,检测它们的成骨、成脂诱导分化能力。用Transwell小室共培养这两种细胞,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测共培养后这两种细胞的增殖能力及部分基因的表达变化。结果:PDLCs和BMSCs具有多向分化潜能。共培养能促进它们各自增殖,上调Ⅰ型胶原(COLI)、碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)、核心结合因子2(RUNX2)的表达。结论:PDLCs和BMSCs共同运用作为种子细胞可能更有利于牙周组织再生。