125 I标记的抗p185抗体的体外代谢与体内生物学分布

目的：研究^125Ⅰ标记的抗p185抗体（鼠mAb A21、人鼠嵌合抗体A21 scFv-Fc及单链抗体A21 seFv）在体外的细胞代谢和在体内的生物学分布，为其在诊断和治疗高表达p185肿瘤的临床应用提供依据。方法：通过FACS检测抗体是否与高表达膜表面抗原p185的SKOV，特异结合。采用氯胺T法进行碘标记抗体，用细胞放射免疫分析实验，检测抗体在SKOV、细胞中的代谢。建立荷SKOV，裸鼠模型，以观察抗体的体内生物学分布。结果：体外细胞代谢实验表明，抗体在与细胞膜表面结合后，进而被内吞入细胞，在细胞内降解和脱碘，最后被分泌出细胞外。体内药物代谢实验表明，抗体在动物体内肿瘤部位出现选择性放射性浓聚，而无关抗体未出现放射性浓聚，呈全身分布。结论：mAb A21，A21 seFv-Fc和A21 scFv对于高表达p185的卵巢癌在体内和体外都具有亲和力，可单用作高表挟D185肿瘤的诊断和治疗。     

抗人p185单克隆抗体的体外直接抗癌效应

目的:对使用“表面表位包埋法”构建成功的抗人肿瘤抗原p185的单克隆抗体(mAb)的抑癌活性进行研究。方法:采用免疫荧光染色法、MTT法、软琼脂培养法及细胞长期增殖法等,测定3株mAb的对高表达p185的乳腺癌细胞及转染p185基因的成纤维细胞的抑制活性,以及mAb对提高癌细胞的化疗药物敏感性的效应。结果:这3株mAb均可特异性地明显抑制癌变细胞的生长,并不同程度上提高癌细胞对化疗药物的敏感性。结论:这几株mAb具有治疗p185高表达肿瘤的应用前景。     

血清p185蛋白与p185糖链测定方法的比较

c-erbB-2基因表达产物p185蛋白的细胞外区域可脱落进入细胞外基质,血清p185水平对于判断乳腺癌的发生发展、预后及复发具有重要意义。实验用BA-ELISA和凝集素ELISA分别检测血清p185蛋白和p185糖链,并对二者进行比较。     

抗p185单克隆抗体的制备及初步应用

抗ｐ１８５单克隆抗体的制备及初步应用许金华杜红杨蔚孙素莲（北京市肿瘤防治研究所，北京１０００３４）ｐ１８５是癌基因ｃ－ｅｒｂＢ－２（或称ＨＥＲ－２／ｎｅｕ）的表达产物，其分子量为１８５ｋＤ，故称ｐ１８５。已知ｐ１８５在腺癌类如乳腺癌、卵巢癌、胃癌及...     

分泌抗p185合成多肽McAb杂交瘤细胞系的建立

用多肽固相合成仪合成人癌基因产物ｐ１８５ＨＥＲ－２（即ｐ１８５）胞内区的肽段，以之与沙门氏裸菌偶联制成免疫原，经脾内、腹腔、静脉途径免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，获得具有高抗体活性的脾细胞，后者与ＳＰ２／０融合，筛选出５株杂交瘤细胞系并对其分泌的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）特性进行了初步分析，ＥＬＩＳＡ检测腹水效价为１０－４～１０－６，用多肽和沙门氏裸菌分别进行中和试验，多肽抑制率在５０％以上，而沙门氏裸菌则不能中和抗体反应。测定其中两株ＭｃＡｂ亲和常数（Ｋａ）分别为２．５×１０７Ｍ－１，５．０×１０８Ｍ－１。表位分析结果表明这两株ＭｃＡｂ针对同一抗原表位     

p185抗体可致小鼠流产的研究

目的通过体内实验进一步验证ｐ１８５蛋白的免疫原性，旨在研究该蛋白作为肿瘤疫苗的可能性。方法用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００层析柱分离的ｐ１８５蛋白组分与佐剂混合免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经ＥＬＩＳＡ验证血清中出现ｐ１８５抗体后与健康的同品系雄性鼠交配，以阴栓形成提示交配成功，观察雌鼠产仔率，子宫形态及免疫病理。结果免疫鼠产仔率明显低于仅用佐剂免疫的对照组（Ｐ＜０．０５），子宫内发现胚胎坏死，病检显示子宫组织有弥散性中性粒细胞浸润和局灶性坏死，并有免疫复合物沉积，提示ｐ１８５免疫能诱导小鼠流产。结论这一实验结果从体内进一步证实ｐ１８５的免疫原性。为该蛋白作为肿瘤疫苗提供实验资料，同时该模型可用于对胚胎性肿瘤抗原的免疫原性研究     

抗p185单抗5E12Fab段基因的克隆及表达

目的：克隆抗p185单抗5E12的Fab段基因并在原核细胞进行表达。方法：用逆转录．聚合酶链反应技术（RT-PER），以可变区第一骨架区的通用引物从分泌抗p185单抗的杂交瘤细胞系5E12中克隆Fd段和K链的基因，重组到Fab表达载体中，在大肠杆菌中表达噬菌体抗体和可溶性Fab；根据前导肽序列设计引物，通过PER介导的定点突变将V区基因氨基端序列恢复为5E12的原始序列；以NIH3T3／erbB-2细胞ELISA法、免疫组化法等进行特异性鉴定。结果：以第一骨架区的通用引物从小鼠杂交瘤细胞5E12中克隆到Fd段和k链的基因，在大肠杆菌中表达出Fab段抗体但无特异性抗原结合活性，分别将Fd段和k链V区基因的氨基端序列矫正为亲本单抗的原始序列后，恢复了Fab段的抗原结合活性。单独恢复Fd段可变区氨基端序列可恢复抗原结合活性。但同时恢复k链后活性却有所下降。结论：成功构建了抗p185小分子抗体Fab并进行功能性表达，为进一步构建抗p185鼠单抗其他小分子抗体及其人源化改造打下基础；进一步证实抗体氨基端序列对抗体活性的重要性，为今后以PER方法构建小分子抗体的工作提供了有益的借鉴。     

~(125)Ⅰ标记眼镜蛇毒组份Ⅲ在小白鼠体内的组织分布

目的 观察中华眼镜蛇(Naja naja atra)蛇毒组份III在小鼠体内的分布情况,探讨组份III在动物体内的分布特点。方法 用氯胺-T法对眼镜蛇毒组份III进行碘化标记,用放射性核素示踪动力法检测血液中的药物浓度,以放射性参与量(脏器与血液放射比)的比值作为组份III在组织中分布的依据。结果 小鼠尾静脉注射125I-组份III后,2h及4h放射性参与量大于1的器官为肝脏、肾脏、肺脏、心脏和肌肉,其中以肾脏分布最高,且4h放射性参与量高于2h。结论 小鼠静注组份III后2h,以肾脏分布最高,肝脏与肺脏的放射性参与量也较高,尿中含量很高。     

~(125)I标记的卵巢癌单克隆抗体在接种卵巢癌裸鼠体内的分布

卵巢癌是威胁妇女生命的恶性肿瘤之一。建立一些有效的体外诊断、监测以及体内定位技术以确定卵巢病变性质,从而决定治疗方案,是提高治疗效果的关键。     

抗人P185~(erbB_2)单克隆抗体的制备及特性分析

目的制备可特异识别 P185 erb B2 胞外区的单抗 ,选出亲和力较高并具有抑瘤作用的克隆。方法以高表达 erb B2 的人乳腺癌细胞系 SKBR3免疫 BABL / c小鼠 ,用纯化的重组 DNA表达的 P185胞外区蛋白作为抗原 ,以间接 EL ISA方法筛选阳性克隆。结果获得 10株稳定分泌抗 P185胞外区单抗的杂交瘤细胞株。 4株为 Ig G1、1株为 Ig G3、5株为 Ig M,分别可识别 P185胞外区 3个不同表位 ,且只与天然形式的 P185胞外区特异结合。其中 4株 Ig G1类抗体可明显抑制 SKBR3及 SKOV3细胞增殖。免疫组化实验可使 SKBR3及 SKOV3细胞膜特异性染色 ,且可检出乳腺癌、卵巢癌等石蜡切片标本中 erb B2 高表达的阳性细胞。结论所获单抗可特异识别 P185胞外区抗原 ,具有肿瘤诊断、判断预后及人源化改造后用于治疗的应用潜力。     

血清p185蛋白和CA153对乳腺癌患者的临床应用价值研究

目的检测乳腺癌患者血清p185蛋白表达及肿瘤标志物CA153水平,分析血清p185蛋白与肿瘤标志物CA153的相关性,探讨二者检测在乳腺癌患者中的临床应用价值。方法收集2010年至2012年间在我院住院治疗的乳腺癌55例患者术前、手术后一周血清各一份,应用免疫PCR法检测血清p185蛋白表达,化学发光法检测血清CA153水平。结果乳腺癌患者血清p185蛋白表达和血清CA153水平与临床分期均显著相关(P<0.05),血清p185蛋白表达与淋巴结转移情况无关系(P﹥0.05),血清CA153水平与淋巴结转移情况相关(P<0.05);乳腺癌患者血清p185表达与手术无关(P>0.05),手术前后血清p185蛋白表达无差异,乳腺癌患者血清CA153水平和手术相关(P<0.05),手术前血清CA153水平明显高于术后;乳腺癌患者术前血清CA153水平和p185蛋白表达相关(P<0.05),乳腺癌血清p185蛋白表达阳性患者,血清CA153水平高于阴性患者;乳腺癌患者复发或转移与血清p185蛋白表达及患者术前血清CA153水平相关(P<0.05),血清p185蛋白阳性患者复发或转移率明显高于阴性患者,术前CA153水平高的患者,复发或转移率高。结论乳腺癌患者血清p185蛋白表达与肿瘤标志物CA153水平有相关性,肿瘤标志物CA153可用于术后随访,术前检测乳腺癌患者血清p185蛋白表达与肿瘤标志物CA153水平可用于乳腺癌的预后判断。     

Shared antigenic epitopes and pathobiological functions of anti-p185(her2/neu) monoclonal antibodies.

We have studied two anti-p185 antibodies: the monoclonal antibody 7. 16.4 and rhuMAb 4D5, which were raised against the the ectodomain of rat (p185(neu)), and the human (p185(her2/neu)) homolog, respectively. Studies on the structure of these two antibodies indicate that they share structural similarity in the variable region, especially the CDR3 region, which determines the antibody-antigen interaction. Further studies by flow cytometry revealed that 7.16.4 can compete with rhuMAb4D5 for binding to the cell surface p185(her2/neu), suggesting that these two antibodies share an epitope on the p185 receptor. Furthermore, 7.16.4 can also inhibit proliferation and transformation caused by p185(her2/neu). Moreover the rhuMAb 4D5 binds to the rat p185(neu). With the observation that 7.16.4 positively stains human breast cancer tissues that overexpress p185(her2/neu), 7.16.4 may be useful for the pathological diagnosis and therapy of human tumors.     

血栓素B_2〔~(125)I〕放射免疫分析及其临床应用

本文报告~(125)I-血栓素B_2(TXB_2)放射免疫分析及其临床应用。TXB_2抗血清与其它前列腺素的交叉反应均小于0.42％,亲和常数为2.44×10~(10)M~(-1)。冷回收率94.7±7～106.0±13.1％,批内差异6.4％,批间差异11.8％,标准曲线测定范围2.5～160.0Pg/管。人血浆正常值143.5±8.8Pg/mL,尿正常值:229.9±14.4Pg/min。同一份样品用~(125)I和~3H两种放射免疫法测定,二者相关性良好。应用本法对冠心病、心肌梗塞患者及服阿司匹林前后的血浆和尿样品中TXB_2含量进行了探讨。     

表面表位包埋法制备肿瘤表面抗原P185neu/c-erbB-2单克隆抗体及其性质研究

目的 :细胞表面表位包埋法 (SEM)是一种选择细胞表面特定的表达分子制备单克隆抗体的新途径。由于P185 neu c erbB 2 是乳腺癌及其他肿瘤的一个重要表面标志 ,这个研究旨在应用SEM法制备特异性好 ,灵敏度高的P185单克隆抗体并分析其特性以便于临床。方法 :采用细胞表面表位包埋法免疫BALB C小鼠 ,常规杂交瘤技术进行细胞融合 ,ELISA法测定 ,有限稀释法克隆化。结果 :筛选得到 3株能稳定分泌抗人癌基因erbB 2产物P185蛋白的McAb杂交瘤细胞。经间接免疫过氧化物酶染色和流式细胞术分析证明该McAb特异性与P185阳性细胞膜结合 ,而不与结构类似的EGFR膜阳性细胞结合。免疫印迹实验证明这些McAb特异地与P185蛋白结合 ,病理切片免疫组化结果证明该单抗对乳腺癌组织呈特异膜阳性反应。结论 :SEM法制备的肿瘤表面抗原P185的McAb杂交瘤具有很好的用于临床诊断肿瘤抗原P185的价值及工程化改造的前景。     

肺癌组织中HSG、p21和PCNA的表达及意义

目的 探讨细胞增殖抑制基因(HSG)、p21WAF1、增殖细胞核抗原(PCNA)在肺癌中的表达及其相关性.方法 采用免疫组化SP法检测92例肺癌(鳞、腺癌)组织中HSG、p21WAF1和PCNA的表达.结果 HSG在肺癌组织中的表达与组织学分型、分化程度有关(P<0.01、P<0.001);p21WAF1在肺癌组织中的表达与分化程度、淋巴结转移有关(P<0.001、P<0.01);PCNA在肺癌组织中的表达与分化程度、淋巴结转移有关(P<0.001).HSG与p21WAF1在肺癌组织中的表达呈正相关(r=0.34,P<0.05);HSG与PCNA在肺癌组织中的表达呈负相关(r=-0.41,P<0.05);p21WAF1与PCNA在肺癌组织中的表达呈负相关(r=-0.49,P<0.05).结论 HSG、p21WAF1和PCNA的表达与肺癌的发生、发展密切相关.