瘦素对HTR8-SVneo细胞增殖的影响及调控机制

目的研究瘦素(Leptin)对HTR8-SVneo滋养细胞系增殖的影响及对DNA结合和分化抑制剂(ID)分子表达水平的影响,探讨Leptin对HTR8-SVneo细胞增殖作用的调节机制。方法体外培养HTR8-SVneo滋养细胞,MTT法检测Leptin不同质量浓度(0、10、50、100、250、500 ng/mL)刺激后细胞增殖情况。HTR8-SVneo细胞培养体系中加入Leptin(0、100、500 ng/mL),RT-PCR检测瘦素受体(Leptin R)各亚型表达,实时定量PCR检测ID分子表达,Western Blot检测ID2表达。SiRNA干扰ID2分子后,分为Leptin(0 ng/mL)、Leptin(100 ng/mL)、Leptin(500 ng/mL)、Leptin(0 ng/mL)+ID2-siRNA、Leptin(100 ng/mL)+ID2-siRNA、Leptin(500 ng/mL)+ID2-siRNA,MTT检测Leptin对HTR8-SVneo滋养细胞增殖的影响。结果与Leptin(0 ng/mL)比较,高质量浓度Leptin(100、250、500 ng/mL)促进HTR8-SVneo细胞增殖(P<0.05);HTR8-SVneo细胞表达除HuB219.2外的全部受体亚型;Leptin以剂量依赖方式促进HTR8-SVneo细胞ID2分子及OB-RL表达(P<0.05);ID2-siRNA抑制ID2表达并逆转Leptin对滋养细胞增殖的促进作用。结论 Leptin可能通过Leptin R-ID2途径促进HTR8-SVneo细胞增殖,为阐明滋养细胞增殖调控机制提供了新的基础数据。     

瘦素通过调控细胞周期蛋白促进人肝癌细胞增殖

目的：观察瘦素对人肝癌细胞株Huh 7增殖活性的影响,并初步探讨其可能的机制。方法：在培养液中加入不同浓度的瘦素后,采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量PCR和免疫细胞化学法检测细胞周期调控蛋白Cyclin D1和P21^waf1的表达。结果：MTT检测显示,瘦素可促进Huh 7细胞的增殖,有一定的时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示,瘦素能明显降低G0/G1期细胞比例并提高S期细胞比例;瘦素（100 ng/ml）处理24 h后,实时荧光定量PCR检测发现Cyclin D1 mRNA表达量增高至对照组的3.15倍,P21^waf1mRNA表达量则为对照组的55%,两者均有显著性差异（P〈0.01）。免疫细胞化学染色结合图像分析系统分析也发现100 ng/ml的瘦素处理24 h后,与对照组相比,Cyclin D1蛋白的表达明显增高（P〈0.01）,P21^waf1蛋白的表达明显降低（P〈0.01）。结论：瘦素可通过促进Cyclin D1表达、抑制P21^waf1表达,使人肝癌细胞Huh7由G0/G1期向S期转换,从而促进其增殖。     

G31P对人肝癌细胞增殖 黏附及侵袭作用的影响

目的 探讨原发性肝细胞癌中CXCR1、CXCR2和CXCL8的表达及CXCR1/2受体阻断剂G31 P对Hep-G2细胞体外增殖、黏附和侵袭作用的影响.方法 选取2018年12月至2020年12月在安徽医科大学第四附属医院普通外科和肿瘤科接受部分肝切除手术的50例肝癌患者,用免疫组织化学方法,检测癌组织和癌旁组织中CXCR1、CXCR2、CXCL8的表达水平,分析比较CXCR1、CXCR2及CXCL8在肝癌不同临床病理特征中的表达情况.采用Spearman相关分析CXCR1、CXCR2及CXCL8表达与pAKT、pERK、CyclinD1、Bcl-2、VEGF、MMP-9表达量之间的相关性;分别用0、10、50 ng/mL的G31P处理肝癌细胞Hep-G2,每个浓度5个孔,用CCK-8法、ECM实验以及Transwell小室侵袭实验,观察其对Hep-G2增殖、黏附以及侵袭能力的影响.结果 肿瘤组织中CXCR1、CXCR2和CXCL8的阳性率高于相应正常癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);且不同肝癌TNM分期的患者,CXCR1、CXCR2及CXCL8表达差异有统计学意义(P<0.05);相关分析显示CXCR1与pAKT、pERK、CyclinD1、Bcl-2、MMP-9的表达呈正相关(r=5.824、6.752、6.445、10.503、11.480,P均<0.05),CXCR2与pAKT、pERK、CyclinD1、Bcl-2、MMP-9的表达呈正相关(r=5.219、8.140、5.992、8.672、11.757,P均<0.05),CXCL8与pAKT、pERK、CyclinD1、Bcl-2、MMP-9的表达正相关(r=7.219、6.349、7.018、8.000、8.671,P均<0.05),CXCR1,CXCR2与CXCL8与VEGF的表达无相关性(r=0.095、0.157、0.104,P均>0.05).体外实验结果显示,与0 ng/mL组相比,50 ng/mL G31P作用24小时后肝癌细胞Hep-G2数量减少(P<0.05);与0 ng/mL G31P组相比,10 ng/mL G31P组和50 ng/mL G31P组细胞黏附率降低(P<0.05);与0 ng/mL G31P组以及10 ng/mL G31P组相比,50 ng/mL G31P组穿膜细胞数减少(P<0.05),差异均有统计学意义.结论 原发性肝癌中CXCR1/2和CXCL8的表达明显增加,体外实验表明CXCR1/2受体阻断剂G31 P可以明显抑制Hep-G2的增殖、黏附以及侵袭.     

IL-17A可以促进卵巢癌的腹腔转移

目的:探讨白细胞介素（IL）-17A对卵巢癌（OvCa）腹腔转移的影响。方法:以C57BL/6为遗传背景的野生型 （WT）小鼠和IL-17A 缺陷（IL-17A-/-）小鼠为研究对象，腹腔注射同基因小鼠OvCa细胞系ID8，检测内源性IL-17A对 OvCa腹腔种植瘤生长的影响。应用MTT法检测不同浓度的重组小鼠IL-17A（rmIL-17A）对ID8细胞增殖的影响；应用划 痕实验检测不同浓度的rmIL-17A对ID8细胞迁移能力的影响；应用Transwell侵袭实验检测不同浓度的rmIL-17A对ID8细 胞侵袭能力的影响。结果:与IL-17A-/-小鼠相比，WT小鼠腹腔内肠系膜、腹膜后淋巴结、脾脏和肾脏表面等处均见密 集瘤结节转移灶，且腹腔内瘤结节数量显著增多（均P＜0.01）。体外实验结果显示，与对照组相比，不同浓度的 rmIL-17A对ID8细胞增殖无影响（均P>0.05）；与对照组相比，10 ng/mL的rmIL-17A作用6 h后可促进ID8细胞迁移，1 ng/mL和10 ng/mL的rmIL-17A作用12 h后可显著促进ID8细胞迁移（均P＜0.05）；与对照组相比，干预24 h后，1 ng/mL和10 ng/mL的rmIL-17A对ID8细胞的侵袭能力均有促进作用（均P＜0.05）。结论:IL-17A可以促进卵巢癌的腹腔 转移。     

miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞系SLK细胞迁移、侵袭的影响

目的 通过脂质转染miR-181b-5p模拟物及抑制物到卡波西肉瘤细胞系SLK,研究miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞SLK细胞增殖、迁移、侵袭生物学功能的影响。方法 应用脂质体对人卡波西肉瘤细胞株SLK进行转染,转染miR-181b-5p模拟物及抑制物后应用MTT测定细胞增殖曲线,应用流式细胞仪行检测细胞周期。利用Transwell小室试验后行苏木素染色观察细胞迁移、细胞侵袭生物学特性。结果 miR-181b-5p模拟物促进细胞增殖,促进S期的转变,加速细胞周期进程;miR-181b-5p抑制物抑制细胞增殖,诱导细胞发生G₀/G₁期阻滞,延缓细胞周期进程。Transwell小室迁移实验结果显示,与阴性对照组迁移实验下室面细胞数目151±11个相比,miR-181b-5p模拟物组184±9个,细胞数目明显数量增多,迁移能力均明显提高,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell小室侵袭实验结果显示,与阴性对照组侵袭实验下室面细胞数目35±6个相比,miR-181b-5p模拟物组48±5个,细胞数目明显数量增多,侵袭能力均明显提高(P<0.05)。结论 miR-181b-5p在SLK细胞中高表达,其对SLK细胞的增殖、侵袭和迁移能力可能存在正向调控作用,可能成为卡波西肉瘤的潜在治疗靶点。     

瘦素对胃癌细胞系SGC7901增殖和凋亡的影响

目的观察人胃癌细胞系SGC7901瘦素及瘦素受体的表达及瘦素对SGC7901增殖及凋亡的影响。方法免疫组化和RT-PCR检测SGC7901瘦素和瘦素受体的表达,噻唑蓝比色实验观察瘦素对SGC7901的增殖作用,流式细胞仪检测瘦素对细胞周期及凋亡的影响,RT-PCR方法半定量检测瘦素对促凋亡基因bax mRNA表达的影响。结果SGC7901既表达瘦素又表达瘦素受体,重组瘦素呈剂量依赖性地促进细胞的增殖,并明显抑制细胞的凋亡,瘦素可抑制促凋亡基因bax mRNA的表达。结论瘦素可能以自分泌方式调节人胃癌细胞系SGC7901的增殖及凋亡。     

趋化因子CCL19在结直肠癌中的表达和作用

目的 观察趋化因子CCL19在结直肠癌组织中的表达,探讨其对结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力的影响。 方法 收集确诊为结直肠恶性肿瘤并手术切除患者（n=85）的肿瘤组织及癌旁正常组织,运用实时定量PCR和组织微阵列免疫组化技术检测CCL19的表达水平;以实时定量PCR、蛋白质印迹技术筛选高表达CCL19受体CCR7的人结直肠癌细胞株SW620细胞作为研究对象,并给予重组人CCL19（rh-CCL19）刺激,通过细胞增殖实验、划痕实验、Transwell实验来检测SW620细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化。 结果 结直肠癌组织中的CCL19表达要明显低于癌旁正常组织（P<0.05）,且CCL19表达量与肿瘤大小和浸润深度有关（P<0.01）。在CCR7高表达的SW620细胞中,加入rh-CCL19后,其细胞增殖、迁移及侵袭能力下降（P<0.05）。 结论 CCL19在结直肠癌组织中的表达量低于癌旁正常组织,且与肿瘤大小和浸润深度有关;CCL19可抑制人结直肠癌细胞株SW620细胞增殖、迁移和侵袭能力,提示CCL19具有抑制结直肠癌的作用。     

瘦素及瘦素受体在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达

[目的]探讨胃癌细胞株和胃癌组织是否有瘦素和瘦素受体表达,以及瘦素对胃癌细胞株的增殖作用.[方法]免疫组化和RT-PCR检测胃癌细胞株及胃癌组织中瘦素和瘦素受体表达,MTT法测定瘦素对胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖作用.[结果]胃癌细胞株SGC7901、MGC803及MKN45均有瘦素及瘦素受体表达;47例胃癌组织石蜡切片标本检测有瘦素表达20例,有瘦素受体表达23例,两者共同表达17例;19例新鲜胃癌组织标本,有瘦素mRNA表达13例,瘦素受体mRNA表达12例,两者共同表达10例;与对照组相比,100ng/mL的瘦素可使胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖率分别为1.45、1.56及1.54.[结论]胃癌细胞株及胃癌组织普遍存在瘦素和瘦素受体表达,瘦素可促进胃癌细胞株增殖.     

环状RNA circSP3（hsa-circ-0002642）促进肝细胞癌细胞增殖及迁移

目的 探讨环状RNA circSP3（hsa-circ-0002642）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其对HCC细胞增殖及迁移的影响。方法 收集重庆医科大学附属第一医院肝胆外科2017年6月至2018年12月收治的42例HCC患者手术切除的癌组织和癌旁组织标本,采用实时定量PCR检测组织中circSP3的表达,分析癌组织中circSP3表达与患者临床病理学指标的关系。培养人HCC细胞系Hep-3B、Huh7、SMMC-7721、Bel-7402及人正常肝细胞系HL-7702,采用实时定量PCR检测细胞中circSP3的表达。使用circSP3过表达及干扰质粒分别转染Hep-3B和Huh7细胞后,采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞增殖情况,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,蛋白质印迹法检测上皮-间质转化（EMT）相关标志物波形蛋白、E-钙黏蛋白的表达。结果 HCC患者癌组织中circSP3的表达高于癌旁组织（P<0.01）,并且circSP3的表达与HCC肿瘤最大径及TNM分期呈正相关（P均<0.05）。circSP3在4种HCC细胞系中的表达均高于正常肝细胞系（P均<0.01）。circSP3过表达可以促进HCC细胞的增殖、侵袭和迁移（P<0.05、P<0.01）,而干扰circSP3表达则抑制HCC细胞的增殖、侵袭和迁移（P<0.05、P<0.01）。波形蛋白表达在circSP3过表达的HCC细胞中高于对照细胞（P<0.05）,而在干扰circSP3表达的HCC细胞中低于对照细胞（P<0.05）。E-钙黏蛋白表达在circSP3过表达的细胞中低于对照细胞（P<0.01）,而在干扰circSP3表达的HCC细胞中高于对照细胞（P<0.01）。结论 circSP3的异常表达与HCC肿瘤大小及TNM分期呈正相关,有助于评价病情及预后。circSP3能促进HCC细胞的增殖,并且可能通过促进EMT进程进而促进HCC细胞的迁移和侵袭。     

Msp对人非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力影响的 实验研究

目的 探讨巨噬细胞刺激蛋白(macrophage stimulating protein, Msp)对人非小细胞肺癌细胞株PC14增殖、迁移和侵袭能力影响的研究。方法 构建Msp编码基因st1 真核表达载体,将st1 导入Msp（-）和RON（-）人非小细胞肺癌细胞株PC14,并用G418筛选出稳定表达的细胞株。通过RT-PCR方法检测已转染st1 载体PC14细胞中st1 的表达,用Western blot检测Msp在PC14、PC14-st1 -pEGFP-N1、PC14-pEGFP-N1中的表达水平,同时检测RON在PC14和RON(+)细胞SKBR-3中的表达情况。通过计算RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞）和SKBR-3细胞在各转染组细胞培养上清液的刺激下穿过Transwell 微孔膜的细胞数来评价Msp的生物学活性。利用MTT法检测Msp对PC14细胞增殖力的影响,采用Transwell小室和基质胶侵袭实验观察Msp对PC14细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 转染st1 基因后,形成PC14-st1 -pEGFP-N1,稳定表达st1 mRNA及蛋白,其本身的增殖能力被明显抑制,迁移能力和侵袭能力均较PC14和PC14-pEGFP-N1降低。它还通过旁分泌的方式对RON (+)阳性的癌细胞RAW264.7和SKBR-3的迁移起促进作用。结论 Msp表达可降低人非小细胞肺癌细胞PC14的增殖、迁移和侵袭能力,却对RON (+)阳性的癌细胞迁移通过旁分泌的方式有促进作用。     

CCR10的表达对非小细胞肺癌细胞在增殖、迁移和侵袭的影响

目的 本研究旨在探讨趋化因子受体10（chemokine receptor 10,CCR10）的表达对NSCLC细胞在增殖、迁移和侵袭方面的影响。方法 应用基因工程技术将CCR10siRNA导入NSCLC细胞中,干扰CCR10的正常表达,进而研究CCR10对NSCLC细胞在增殖、迁移和侵袭等功能方面的影响。结果 转染了CCR10siRNA的人NSCLC腺癌细胞A549的细胞增殖率明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,空白对照组与阴性对照组的细胞增殖率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组及阴性对照组比较,转染了CCR10siRNA的人NSCLC腺癌细胞A549的细胞迁移率明显低于空白对照组及阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,空白对照组和阴性对照组的细胞迁移率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。转染了CCR10siRNA的人NSCLC腺癌细胞A549的细胞侵袭率明显低于空白对照组及阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,空白对照组及阴性对照组的细胞侵袭率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 CCR10促进NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力,CCR10可能参与非小细胞肺癌的发生、发展、侵袭及转移过程。     

HUVEC-EVs通过JAK2/STAT3通路促进乳腺癌细胞增殖和迁移

目的: 探讨人脐静脉内皮细胞来源胞外囊泡(human umbilical vein endothelial cell-derived extracellular vesicles, HUVEC-EVs)对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法: 采用不同浓度(0、10、20、40 μg/mL) HUVEC-EVs分别处理乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞24 h，通过MTT实验和平板克隆形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力，Transwell实验检测乳腺癌细胞迁移和侵袭能力，划痕实验检测乳腺癌细胞迁移能力，蛋白质印迹实验检测乳腺癌细胞JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的表达。结果： 与0 μg/mL HUVEC-EVs空白对照组相比，10、20、40 μg/mL HUVEC-EVs处理组乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖能力明显提高(P<0.05)，平板克隆形成能力、迁移和侵袭能力也明显增强(P<0.05)，总JAK2、STAT3蛋白无明显变化(P>0.05)，而p-JAK2、p-STAT3蛋白表达升高(P<0.05)。结论： HUVEC-EVs可能通过JAK2/STAT3信号通路的磷酸化促进乳腺癌细胞增殖及迁移。     

Twist调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨增强或降低Twist表达对不同恶性程度的骨肉瘤细胞体外增殖、迁移、侵袭及体内成瘤的作用。方法Real-time PCR 及Western blot检测Twist在143B、MG63及TE85三种不同骨肉瘤中的基础表达。采用Ad-Twist及Ad-siTwist腺病毒感染 细胞,细胞生长曲线检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞的平行迁移能力,Transwell实验检测细胞的垂直迁移及侵袭能力。 Ad-Twist及Ad-siTwist感染Luc标记的143B细胞,制备胫骨近端骨肉瘤模型,活体成像动态观察细胞在体内的生长。结果在 骨肉瘤细胞中Twist 的基础表达显著高于C3H10 细胞（P<0.05）,其中在143B细胞表达最高,MG63 细胞次之,TE85 细胞中最 低,Twist的表达水平与骨肉瘤细胞的恶性程度呈正相关。Ad-Twist及Ad-siTwist感染细胞分别能显著提高或降低骨肉瘤细胞 中Twist的mRNA及蛋白水平的表达（P<0.05）。生长曲线结果显示Twist过表达能显著促进骨肉瘤细胞的增殖,而抑制Twist的 表达后,骨肉瘤细胞的增殖能力降低（P<0.05）。Transwell实验发现Twist过表达后,3种骨肉瘤细胞迁移或侵袭至小室的细胞 数明显增多,而抑制Twist的表达可降低骨肉瘤细胞的迁移侵袭能力（P<0.05）。143B细胞具有良好的体内成瘤能力,Twist过表 达促进143B细胞在裸鼠体内生长,活体成像动态观察荧光信号显著高于对照组,抑制Twist表达可显著抑制细胞在裸鼠体内生 长,信号明显弱于对照组。结论Twist可增强骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及体内成瘤能力。     

Leptin Regulated Insulin Secretion via Stimulating IRS2-associated Phosphoinositide 3-kinase Activity in the isolated Rat Pancreatic Islets

Leptin,theproductofob gene,isa peptidehor-mone secreted by adipocytes thatacts in the hypotha-lamus and playsa centralrole in regulation of feedingbehavior and energy homeostasis[1] .It has recentlybeen confirmed that leptin receptor(OB- R) m RNAand protein were expressed in rat pancreaticβ- cells,indicating thatleptin may directly regulate insulin se-cretion.Several groups have addressed this question,but the results were controversial[2 ,3] .Up to now,the molecular mechanism by which lept…     

shRNA干扰MIPU1基因对脑星形细胞瘤U251细胞生物学行为的影响

目的： 探讨特异性短发夹RNA(shRNA) 干扰心肌缺血预适应上调基因1(myocardial ischemia preconditioning upregulated gene 1,MIPU1)对人脑星形细胞瘤U251 细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的影响。方法： 采用瞬时转染MIPU1 shRNA干扰质粒,蛋白质印迹检测其干扰效率,MTT法检测各组细胞的增殖情况,Hoechest 染 色法和caspase-3 活性检测细胞凋亡程度,划痕实验及Transwell 实验检测细胞迁移及侵袭能力。结果： 转染MIPU1 shRNA 可明显降低MIPU1 蛋白的表达(P<0.05);与对照组比较,MIPU1 shRNA 组的U251 细胞增殖能力下降,凋亡 明显增加,细胞迁移及侵袭能力减弱(均P<0.05)。结论： MIPU1 shRNA能有效降低U251 细胞中MIPU1 蛋白的表达, 干扰MIPU1的表达可促进U251细胞凋亡,抑制U251细胞的增殖、迁移及侵袭。     

SNHG17对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖及迁移的影响

目的 探讨SNHG17在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系和组织中的表达及对肿瘤细胞增殖及迁移的影响.方法 收集2018年1月至2019年12月深圳市人民医院病理科40例三阴性乳腺癌组织标本,通过碱性磷酸酶原位杂交检测癌和癌旁正常组织中SNHG17的表达情况.构建过表达SNHG17质粒,经一代测序验证质粒.采用荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测转染SNHG17过表达质粒后过表达组和对照组SNHG17 RNA表达水平.使用CCK8检测过表达SNHG17对MDA-MB-231细胞增殖的影响.通过平板克隆形成实验观察过表达SNHG17对MDA-MB-231细胞克隆能力的影响.进行Transwell小室实验观察过表达SNHG17对肿瘤细胞的迁移能力及侵袭能力的影响.结果 原位杂交显示SNHG17在乳腺癌组织表达水平高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05).构建SNHG17过表达质粒,经过一代测序验证碱基序列完全匹配.通过qRT-PCR发现,SNHG17过表达组与对照组相比,细胞中SNHG17RNA表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05).CCK8检测表明SNHG17过表达组MDA-MB-231细胞增殖活性较对照组增加,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);不同检测时间之间MDA-MB-231细胞增殖活性差异有统计学意义(P<0.05);组间与时间之间存在交互作用,组间差异随时间变化而增加,差异具有统计学意义(P<0.05).平板克隆形成实验结果显示,SNHG17过表达组克隆细胞数较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05).进一步Tr-answell细胞迁移和侵袭实验结果显示,SNHG17过表达组MDA-MB-231细胞迁移和侵袭数目均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 SNHG17在MDA-MB-231细胞系及乳腺癌组织中高表达,过表达SNHG17后可促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

Expression of Leptin Long-form Receptor mRNA in Luteinized Granulosa Cells of Obese Women with Polycystic Ovary Syndrome

To investigate the expression of mRNA of leptin long-form receptor(OB-Rb) in lu-teinized granulosa cells of obese women with polycystic ovary syndrome(PCOS),and to determine the role of leptin in the physiopathology of PCOS,luteinized granulosa cells were collected from the follicle fluid of 10 obese women who met the diagnostic criteria for PCOS and their BMI was equal to or greater than 25 kg/m2,and at the same time,granulosa cells were collected from 10 normal women undergoing IVF-ET who served as the control group.Some luteinized granulosa cells were taken from normal women for in-vitro culture,into which human leptin of different concentrations was added(0,10,100 and 1000 ng/mL).After stimulation with leptin for 48 h,RT-PCR was em-ployed for the detection of the expression of OB-RLmRNA in the luteinized granulosa cells.Our re-sults showed that the level of OB-RLmRNA in luteinized granulosa cells of obese PCOS women was higher than those in the control(P<0.05).In luteinized granulosa cells cultured in vitro and stimulated by human leptin for 48 h,the level of OB-RLmRNA was higher than those without leptin stimulation(P<0.01),and when leptin concentration was at 100 ng/mL,and the level of OB-RLmRNA reached a peak.It is concluded that in obese PCOS women,the level of serum leptin is increased,which pro-motes the expression of OB-RL in luteinized granulosa cells and increases the sensitivity of the granulosa cells to leptin.Leptin may contribute to anovulation in obese women with PCOS     

Let-7d通过靶向调控Rhotekin基因抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨let-7d在骨肉瘤组织中的表达,并研究let-7d及其靶基因对人骨肉瘤细胞U2OS增殖、迁移和侵袭的影响。方法 收集2010年至2015年于我科行手术切除的25例骨肉瘤患者的肿瘤组织和癌旁组织（距肿瘤组织边缘>5 cm）,并用qPCR检测let-7d的表达情况。构建稳定过表达let-7d的U2OS细胞,用qPCR验证let-7d过表达情况,以转染pCDH空病毒载体的U2OS细胞作为对照组细胞,并分别采用CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验检测过表达let-7d对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。通过微RNA靶基因预测软件和双荧光素酶实验明确let-7d的下游靶基因,检测过表达let-7d的U2OS细胞中靶基因的表达水平,并通过小干扰RNA技术研究抑制靶基因表达对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 骨肉瘤组织中let-7d表达水平低于癌旁组织（P<0.01）。与人成骨细胞hFOB1.19相比,U2OS细胞中let-7d表达水平下调（P<0.01）。与对照组相比,过表达let-7d能抑制U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。微RNA靶基因预测软件和双荧光素酶实验结果显示,Rhotekin（RTKN）基因是let-7d的直接靶基因,且过表达let-7d导致U2OS细胞中RTKN mRNA表达水平较对照组降低（P<0.01）。干扰RTKN表达能抑制U2OS细胞增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。结论 Let-7d通过靶向调控RTKN抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为骨肉瘤治疗一个新的靶点。     

MicroRNA-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的  探讨microRNA-222（miR-222）对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法  将miR-222和对照分别转染入肺腺癌细胞系A549进行活细胞计数法试剂盒（CCK-8）增殖实验、Transwell迁移及Matrigel侵袭实验,观察miR-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。运用荧光素酶报告实验、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及Western blot验证miR-222靶向下调ETS1的过程。结果  CCK-8增殖实验,Transwell迁移及Matrigel侵袭实验发现,与对照组相比miR-222能够促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。荧光素酶报告实验、qRT-PCR及Western blot实验发现,miR-222可以靶向下调ETS1的表达,且ETS1参与调节上述过程。结论  miR-222通过靶向下调ETS1,促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。