食管鳞癌中Langerhans细胞和浸润T淋巴细胞的关系

采用ＬＳＡＢ免疫组化染色方法对４１例食管鳞癌中ＣＤ１ａ阳性Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ）和ＣＤ４、ＣＤ８阳性Ｔ淋巴细胞进行标记。结果：６０．９８％（２５／４１）癌组织中可见ＣＤ１ａ阳性ＬＣ，６３．４１％（２６／４１）有ＣＤ４＋淋巴细胞，３９．０２％（１５／４１）有ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞浸润，经统计学处理发现ＣＤ１ａ＋ＬＣ与ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞浸润有相关性，与ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞无明显关系。结论：食管鳞癌组织中ＣＤ１ａ＋ＬＣ可能与ＣＤ４＋淋巴细胞的激活有关，但Ｔ细胞在肿瘤免疫中可能存在信号传递的异常，不能有效地激活ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞。     

慢性乙型肝炎患者干扰素治疗前后细胞免疫状态的变化及 …

目的 探讨细胞免疫在慢性乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染中的作用干扰素治疗对细胞免疫的影响。方法 ２５例慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）患者经干扰素（６ＭＩＵ／次，肌注，隔日１次）治疗６个月后，测定血清ＨＢＶ标志物变化及外周血ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋、ＣＤ８＾＋Ｔ细胞。结果 干扰素治疗前和干扰素治疗无反应组（ｎ＝１６）外周血ＣＤ４＾＋Ｔ细胞与正常人比显著降低（Ｐ〈０．０１），而ＣＤ８＾＋显著升高（Ｐ〈０．０１）；Ｃ     

抗原诱导T细胞受体(TCR)Vβ基因表达特征(之三)McAb共刺激PBLs在肿瘤免疫治疗中的应用

Ｔ淋巴细胞活化是一个涉及多种膜表面分子和受体以及一系列相关多肽复杂过程，为了使Ｔ细胞发挥更好的识别和杀伤癌细胞的功能，本研究采用抗ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ２、ＣＤ５８ＭｃＡｂ分别刺激健康人ＰＢＬｓ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬｓ...     

供者特异性抗原经外周输注诱导免疫耐受的研究

为探索诱导免疫耐受的途径和方法，作者采用大鼠异位心脏（颈部）移植模型，经外周途径输注不同品系供者的不同特异性抗原，包括供体特异性输血（ Ｄ Ｓ Ｔ）、供体特异性脾细胞（ Ｄ Ｓ Ｓ Ｌ）、供体特异性骨髓细胞（ Ｄ Ｓ Ｂ Ｍ）。结果显示： Ｄ Ｓ Ｔ、 Ｄ Ｓ Ｓ Ｌ和 Ｄ Ｓ Ｂ Ｍ 均能诱导受者对移植物产生特异性免疫耐受，其中以脾细胞和骨髓细胞效果最好，平均移植物存活时间分别达到 ４２９±６６７ 和 ４０３±１１６ 天。混合淋巴细胞反应（ Ｍ Ｌ Ｒ）和 Ｔ 亚群（ Ｃ Ｄ８＋ ）检测在一定程度上反映了机体 Ｔ 细胞免疫状态，有助于对耐受的评价。成分输注供者特异性抗原作为刺激抗原，可望成为较理想的临床耐受诱导途径。     

甲巯咪唑对鼠T细胞亚群及NK细胞杀伤活性的免疫抑制作用研究

以Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠为模型，研究了甲巯咪唑（ＭＭＩ）对小鼠脾Ｔ淋巴细胞亚群及ＮＫ细胞杀伤活性的影响。结果表明，ＭＭＩ使小鼠血清中甲状腺素Ｔ３，Ｔ４水平明显降低，使脾Ｔ淋巴细胞中Ｌ３Ｔ４＋细胞数量显著减少、Ｔｈｙ１．２＋细胞和Ｌｙｔ２＋细胞数量降低、Ｌ３／Ｌｙｔ２比值下降。而且实验鼠脾ＮＫ细胞对腹水型Ｓ１８０靶细胞的细胞毒活性明显降低。表明ＭＭＩ对小鼠的细胞免疫有非特异的免疫抑制作用。     

抗L_3T_4单克隆抗体对小鼠脾脏细胞发育的影响

孕鼠及新生鼠体内注射抗Ｌ３Ｔ４ＭｃＡｂ后，观察其对胎鼠及新生鼠脾脏细胞数量及功能的影响。结果显示：胎鼠脾脏细胞总数、ＣＤ４单阳性细胞（ＣＤ４ＳＰ）、膜表面免疫球蛋白阳性细胞（Ｓｍｌｇ＋Ｂ细胞）数量及血清Ｉｇ含量均明显减少；新生鼠脾脏细胞总数、ＣＤ４ＳＰ数量减少，但其ＳｍＩｇ＋Ｂ细胞数量无显著改变。两组小鼠脾细胞对ＣｏｎＡ、ＰＷＭ刺激的增殖反应明显减弱。胎鼠及新生鼠ＣＤ８ＳＰ数量几乎不变。提示ＣＤ４分子不单纯影响胸腺Ｔ细胞在中枢免疫器官及外周免疫器官的发育，而且对外周免疫器官中Ｂ淋巴细胞的发育及功能也有较大影响     

缺血性与扩张型心肌病二维超声心动图的Fisher判别诊断

本文旨在研究鉴别缺血性心肌病与扩张型心肌病的超声鉴别诊断方法。应用二维超声心动图对７０例ＩＣＭ及７０例ＤＣＭ的心脏形态学结构进行对比研究，优选７项指标建立鉴别ＩＣＭ与ＤＣＭ的Ｆｉｓｈｅｒ判别式。结果两组ＲＶＯＴ，ＡＯ，ＬＡ，ＲＶ，ＩＶＳｄ，ＬＶＰＷｄ放ＬＶＤｄ差别极为显著，以Ｆｉｓｈｅｒ判别式４．６＋２６．１ＬＡ／ＡＯ＋２８．８ＬＶＤｄ／（ＩＶＳｄ＋ＬＶＰＷｄ）－３７５．８〈０为ＩＣＭ，≥０与ＤＭ     

人类巨细胞病毒感染及肾移植排斥后HLA—DR抗原的表达

目的：探讨ＨＬＡ－ＤＲ抗原在人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感当和肾移植排斥患者外周血Ｔ淋巴细胞上的表达及临床意义。方法：Ｅ和流式细胞仪检测肾功能正常１０例、慢性排斥而无ＣＭＶ感染８例、ＣＭＶ活动性感染６例，对照组６例４组的ＨＬＡ－ＤＲ抗原的表达。结果：排斥组和活动性感染组ＨＬＡ－ＤＲＣＤ８＋细胞表达明显增高，４组ＣＤ４＋细胞的表达无显著差异，且ＨＣＭＶ感染组ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比率倒置。结论：ＣＤ８＋在     

食管鳞癌中Langerhans细胞和浸润T淋巴细胞的关系

采用ＬＳＡＢ免疫组化染色方法对４１例食管鳞癌中ＣＤｌａ阳性Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ）和ＣＤ４、ＣＤ８阳性Ｔ淋巴细胞进行标记。结果：６０．９８％癌组织 可见ＣＤｌａ阳性ＬＣ，６３．４１％有ＣＤ４淋巴细胞，３９．０２％有ＣＤ８Ｔ淋巴细胞浸润，经统计学处理发现ＣＤｌａＬＣ与ＣＤ４Ｔ淋巴细胞浸有相关性，与ＣＤ８Ｔ淋巴细胞无明显关系。结论：食管鳞癌组织中ＣＤｌａＬＣ可能与ＣＤ４淋巴细胞的激活有关，但Ｔ     

CD4分子对胸腺细胞发育的影响

本文应用小鼠体内注射抗Ｌ３Ｔ４ＭｃＡｂ封闭Ｔ细胞表现ＣＤ４分子，观察胸腺细胞数量及功能，结果显示：在一定抗Ｌ３Ｔ４ＭｃＡｂ剂量范围内，胸腺细胞总数与功能下降，胸腺双阳性细胞（ＤＰ），ＣＤ４单阳性细胞（ＣＤ４ＳＰ）数量下降，ＣＤ８单阳性细胞（ＣＤ８ＳＰ），数量增多。     

妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒素B对成年子代CD3+TCR Vβ8+T细胞的影响

目的观察妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒B（SEB）对成年子代CD3+ TCR Vβ8+ T细胞的影响。方法在妊娠16 d时给予
SD大鼠尾静脉注射15 μg SEB,同时设立PBS对照组。孕鼠自然分娩后子代鼠生长至成年,流式细胞仪检测成年子代鼠胸腺
及外周血中CD3+ TCR Vβ8+ T细胞;并观察成年子代鼠再次给予SEB时胸腺及外周血中CD3+ TCR Vβ8+ T细胞的应答变化。
结果妊娠期母鼠给予SEB可导致雌、雄性成年子代鼠胸腺CD3+ TCR Vβ8+ T细胞的比例（雌性：1.760,雄性：1.098）,较对照组
的（雌性：2.714,雄性：2.088）明显减少（P<0.05）,其外周血中CD3+ TCR Vβ8+ T细胞的变化与胸腺中类似。PBS组的雌雄性成
年子代鼠给予SEB后其胸腺及外周血中CD3+ TCR Vβ8+ T细胞较同窝对照组明显减少（P<0.05）;而SEB组的雌雄性成年子代
鼠给予SEB后与其同窝PBS对照组比较,胸腺中CD3+ TCR Vβ8+ T细胞无变化（P>0.05）,但外周血中CD3+ TCR Vβ8+ T细胞则
明显增加（P<0.05）。结论妊娠期母鼠给予SEB改变其成年子代大鼠CD3+ TCR Vβ8+ T细胞对再次SEB刺激的应答方式。
     

HBV转基因小鼠体内淋巴细胞表型特点及干扰素α对其的影响

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）转基因小鼠体内淋巴细胞表型特点及干扰素α对其病毒学指标和免疫细胞表型的影响。 方法选取HBV 转基因小鼠和野生型（WT）小鼠,采用ELISA检测HBV转基因小鼠血清HBsAg和HBcAb水平及两组小鼠血 清IL-21及IL-6水平,分离肝、脾以及外周血淋巴细胞,流式细胞术检测CD4+T和CD19+B细胞频数;给予9只HBV转基因小鼠 重组鼠源性干扰素α（rmIFN-α）皮下注射,同时9只HBV转基因小鼠相应注射PBS,观察其血清HBsAg、HBV DNA、IL-6、IL-21 水平的变化以及外周血CD4+T和CD19+B细胞频数变化。结果HBV转基因小鼠的血清HBsAg水平较高并能检测到HBcAb, 其血清IL-21及IL-6水平较WT小鼠显著升高（P<0.05）;HBV转基因小鼠外周血、肝脏以及脾脏淋巴细胞中CD4+T细胞频数较 WT小鼠均明显低下（P<0.05）,但其肝脏CD19+B细胞频数明显高于WT小鼠（P<0.05）;HBV转基因小鼠肝内CD4+T细胞频数 与血清HBsAg水平呈负相关,而肝内CD19+B细胞频数与血清HBcAb水平呈正相关;rmIFN-α处理可显著提高HBV 转基因小 鼠外周血CD4+T和CD19+B细胞频数以及血清IL-6水平（P<0.05）。结论HBV转基因小鼠体内淋巴细胞亚群频数异常,外源性 干扰素α可通过调节淋巴细胞亚群频数发挥免疫调节作用。     

孕鼠接触葡萄球菌肠毒素B对子代新生鼠TCR Vβ8+T细胞的影响

目的:观察孕鼠接触葡萄球菌肠毒素B(SEB)对其子代新生鼠胸腺及外周血 TCR Vβ8+ T细胞的影响.方法:在妊娠16 d时给予SD大鼠尾静脉注射15 μg SEB(SEB组),同时设立注射磷酸盐缓冲溶液对照组.孕鼠自然分娩后获取出生后0~5 d的 子代新生鼠胸腺及外周血,流式细胞仪检测其TCR Vβ8+ T细胞比例.结果:与对照组比较,SEB组出生后0~3 d的新生鼠胸腺中CD4+Vβ8+ T细胞比例均减少(P<0.05~P<0.01),出生后4~5 d 2组差异均无统计学 意义(P>0.05);出生后0~5 d,SEB组胸腺中CD8+Vβ8+ T细胞比例均低于对照组(P<0.05~P<0.01);出生后0~5 d,SEB组CD4+Vβ8+及CD8+V β8+ T细胞的绝对数均较对照组明显减少(P<0.01).新生鼠出生后0~5 d,SEB组外周血CD4+Vβ8+ T细胞比例均较对照组明显减 少(P<0.01);CD8+Vβ8+ T细胞比例亦均较对照组减少(P<0.05~P<0.01);出生后0~5 d,SEB组外周血CD4+Vβ8+及CD8+Vβ8+ T细胞绝对数均较 对照组明显减少(P<0.01).结论:妊娠期大鼠接触SEB可减少子代新生鼠胸腺及外周血TCR Vβ8+ T细胞,并保留至成年期.     

小鼠对大鼠异种皮肤移植耐受的诱导

目的探索更为温和的适合临床应用的诱导异种移植耐受的方案。方法给小剂量照射（ 300 rad）的 C57BL/6 (B6)小鼠静脉注射抗小鼠 CD4单抗 0.5 ml后输注 Lewis大鼠骨髓细胞 ,并联合应用腹腔注射环磷酰胺诱导耐受。于耐受诱导后 30 d对受体小鼠作耐受状态的检查,包括供体特异性皮肤移植、混合淋巴细胞反应（ MLR）及迟发型超敏反应（ DTH）。并通过过继转移实验、外源 IL- 2对耐受小鼠供体特异性 MLR的影响等进一步探讨耐受形成的机制。结果 Lewis大鼠的皮肤移植物在耐受 B6小鼠中存活期特异性延长, MLR及 DTH检查证明 B6小鼠对 Lewis大鼠的脾细胞产生特异性耐受,对无关第三者 DA大鼠及 BALB/c小鼠的脾细胞仍表现出强烈的免疫应答。体内外过继转移实验表明 ,耐受不能被转移 ,未发现抑制细胞的存在。耐受小鼠供体特异的 MLR可以被外源 IL- 2逆转 ,说明耐受主要不是克隆排除,而与克隆不应答有关。结论应用低剂量照射、骨髓移植、环磷酰胺及抗 CD4单抗等方法法可以有效诱导出小鼠对大鼠的移植耐受。     

MBP特异性T细胞系的建立

目的 建立MBP特异性自身反应性T细胞克隆,为进一步探讨EAE的发病机制和治疗奠定基础。方法 以MBP肽免疫C57BL／6小鼠,取其淋巴结细胞,加同系鼠脾细胞体外共同培养于含IL－2的培养液中,并以MBP肽反复刺激,收集培养细胞,以流式细胞仪进行鉴定。结果 流式细胞仪分析显示,90％以上的细胞为CD4^ T细胞。结论 成功地建立了C57BL/6鼠的MBP反应性T细胞克隆,该细胞克隆为MBP特异性自身反应性CD4^＋T细胞。     

肺癌模型小鼠肿瘤和主要免疫器官组织中调节性T细胞和NK细胞的数量变化及其意义

目的：探讨肺癌小鼠CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞（Treg）和自然杀伤细胞（NK）在外周免疫器官和肿瘤组织中数量的变化,阐明其对肿瘤发展的影响。方法：C57BL/6小鼠分为Lewis肺癌细胞系（LLC）注射组和正常对照组,LLC注射组小鼠采用LLC腋窝注射制备皮下肿瘤模型,正常对照组小鼠采用生理盐水等量注射。采用细胞表面和细胞内特异荧光抗体染色和流式细胞术检测肺癌小鼠脾脏、淋巴结和肿瘤组织中CD4⁺CD25⁺T细胞、Treg细胞及脾脏组织中NK细胞数量。结果：与正常对照组比较,LLC注射组小鼠脾脏和淋巴结中CD4⁺CD25⁺ T细胞占CD4⁺T细胞比例及Foxp3⁺在CD4⁺CD25⁺T细胞中的表达比例明显升高（P < 0.05）,CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ Treg细胞数量也明显升高（P < 0.05或P < 0.01）。LLC接种组小鼠肿瘤组织中CD4⁺CD25⁺ T细胞占CD4⁺T细胞比例及Foxp3⁺在CD4⁺CD25⁺T细胞中的表达比例明显高于脾脏和淋巴结（P < 0.05）。与正常对照组比较,LLC注射组小鼠脾脏组织中NK细胞比例明显降低（P < 0.05）。结论：肺癌小鼠主要免疫脏器官组织中Treg细胞比例和数量升高,NK细胞比例降低,其可促进肿瘤发展,抑制机体对肿瘤细胞的免疫应答。     

从黑色素瘤荷瘤小鼠中分离纯化髓系抑制性细胞

目的：从黑色素瘤荷瘤小鼠脾脏中分离得到CD11b＋Gr-1＋的髓系抑制性细胞（ Myeloid derived suppressor cells ,MDSCs）。方法给C57BL/6小鼠注射LPS或者小鼠黑色素瘤细胞株B16BL6后,取小鼠的脾脏细胞,检测其中CD11b＋Gr-1＋的MDSCs 细胞的比例。通过流式细胞仪（ flow cytometry, FCM）分选出CD11b＋Gr-1＋的细胞,培养24小时后,CBA（cytometric bead array）法检测其分泌IL-10的情况;提取CD11b＋Gr-1＋细胞的总RNA,利用RT-PCR的方法检测其表达IFN-β、TGF-β、iNOS、ARG-1和IDO的情况。结果与注射LPS相比,注射B16BL6细胞株的小鼠脾脏中CD11b＋Gr-1＋的MDSCs细胞的比例更高;利用FCM分选得到CD11b＋Gr-1＋的MDSCs,进一步鉴定发现其表达IL-10、IFN-β、TGF-β、iNOS、ARG-1和IDO。与先前报道的MDSCs的特征相一致。结论可从B16BL6荷瘤小鼠脾脏中获得高纯度的MDSCs用于实验研究。     

CD4+Foxp3+ regulatory T cells converted by rapamycin from peripheral CD4+CD25− naive T cells display more potent regulatory ability in vitro

Background Rapamycin （RAPA） is a relatively new immunosuppressant drug that functions as a serine/threonine kinase inhibitor to prevent rejection in organ transplantation. RAPA blocks activation of T-effector （Teff） cells by inhibiting the response to interleukin-2. Recently, RAPA was also shown to selectively expand the T-regulator （Treg） cell population. To date, no studies have examined the mechanism by which RAPA converts Teff cells to Treg cells. Methods Peripheral CD4＋CD25- naive T cells were cultivated with RAPA and B cells as antigen-presenting cells （APCs） in vitro. CD4＋CD25- T cells were harvested after 6 days and analyzed for expression of forkhead box protein 3 （Foxp3） using flow cytometry. CD4＋CD25＋CD127- subsets as the converted Tregs were isolated from the mixed lymphocyte reactions （MLR） with CD127 negative selection, followed by CD4 and CD25 positive selection using microbeads and magnetic separation column （MSC）. Moreover, mRNA was extracted from converted Tregs and C57BL/6 naive CD4＋CD25＋ T cells and Foxp3 levels were examined by quantitative real-time polymerase chain reaction （rt-PCR）. A total of 1×105 carboxyfluorescein succinimidyl ester （CFSE）-labeled naive CD4＋CD25- T cells/well from C57BL/6 mice were cocultured with DBA/2 or C3H maturation of dendritic cells （mDCs） （0.25×105/well） in 96-well round-bottom plates for 6 days. Then 1×105 or 0.25×105 converted Treg cells were added to every well as regulatory cells. Cells were harvested after 6 days of culture and analyzed for proliferation of CFSE-labeled naive CD4＋CD25- T cells using flow cytometry. Data were analyzed using CellQuest software.Results We found that RAPA can convert peripheral CD4＋CD25- naive T Cells to CD4＋Foxp3＋ Treg cells using B cells as APCs, and this subtype of Treg can potently suppress Teff proliferation and maintain antigenic specificity. Conclusion Our findings provide evidence that RAPA induces Treg cell conversion from Teff cells and uncovers an additional mechanism for tolerance induction by RAPA.     

滤泡调节性T细胞在肺癌移植瘤小鼠体内的变化及意义

［摘要］目的: 研究滤泡调节性T细胞（follicular regulatory T cells,Tfr）在肺癌移植瘤小鼠体内的变化,并探讨肿瘤微环境对Tfr细胞的影响。方法: 采用皮下注射Lewis肺癌细胞株的方式建立肺癌移植瘤小鼠模型,通过流式细胞术检测小鼠腹壁引流淋巴结和肿瘤组织中Tfr细胞以及CD4+CXCR5+T细胞的比例,分析Tfr/CD4+CXCR5+T细胞比值的变化。 结果： 肺癌移植瘤小鼠腹壁引流淋巴结中Tfr细胞的比例为（4.13±0.35）%,较正常对照组小鼠［（1.97±0.26）%］明显增加（t=4.985,P<0.01）,并且Tfr/CD4+CXCR5+T细胞比值为0.39±0.03,较正常对照组小鼠(0.21±0.02)明显增加（t=5.148,P<0.01）。在肿瘤发展的第14天,肺癌移植瘤小鼠肿瘤组织中Tfr细胞比例增加尤为显著,与第7天相比差异具有统计学意义（t=5.617,P<0.01）。结论： 肺癌移植瘤小鼠体内Tfr细胞比例的增加以及Tfr/CD4+CXCR5+ T细胞比值的失衡,预示着Tfr细胞可能参与小鼠肺癌移植瘤的发展进程。     

调节性T细胞和共刺激通路阻断剂抑制大鼠肝移植急性排斥反应的研究

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞、共刺激通路阻断剂CD154单抗及两者联合应用在抑制大鼠肝移植急性排斥反应中的作用。方法48例原位肝移植大鼠（DA→Lewis）分为A组：对照组;B组：术前7d回输经DA大鼠脾细胞体外激活的Lewis大鼠CD4^＋CD25^＋细胞;C组1术后第1、2d腹腔注射CD154单抗（15m/kg）;D组：联合应用CD4^＋CD25^＋细胞和CD154单抗。术后7d各组处死6只受体,观察移植肝病理变化,检测移植肝内T细胞亚群和细胞因子白细胞介素之（IL-2）、IL4、IL-10和转化生长因子B1（TGFβ1）表达情况;分离脾淋巴细胞与供体行单向混合淋巴细胞反应观察刺激指数。余大鼠观察生存情况。结果D组平均存活时间（52．00±10．64）d明显长于其他各组（P〈0．01）;移植肝内淋巴细胞浸润数量（2．47±0．61）×10^6和CD8^＋细胞百分比（14．2±3．0）％明显低于B、C组（P〈0．05、P〈0．01）,而CD4^＋CD25^＋细胞比例（16．4±4．3）％高于B、C组（P〈0．05,P〈0．01）。移植物内IL-2mRNA表达A组最高,D组最弱;IL4mRNA各组均弱表达;IL-10mRNAB、D组高表达,A、C组未表达;TGFβ1mRNAB、D组表达明显强于A、C组。单向混合淋巴细胞反应D组刺激指数最低（P〈0．05）。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞和共刺激通路阻断剂CD154单抗均能抑制大鼠肝移植急性排斥反应;联合应用CD154单抗明显增强CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对急性排斥反应的抑制作用。