血清型登革热病毒PCR方法学评估与应用

目的建立登革热病毒Real-time RT-PCR筛检方法,用以评估登革热于某地区流行期间对输血安全性的影响。方法随机取样收集2013年10月至12月登革热高峰期某地区一般捐血人9 618例的试管血浆样本,总捐血人次为63 654例,占15.0%。取样,无菌分装1 mL血浆备存检测。结果利用Real-time PCR核酸筛检系统检验登革热最高峰时期9 618位捐血人及回访发烧血浆133例,检测结果并无发现阳性案例。另外,采用商用化Dengue NS1 Ag试剂套组,筛检登革热高峰期1 703位捐血人血浆及发烧捐血人血浆133例,结果 1例阳性、22例未确认;阳性案例经RT-PCR确认后结果为阴性反应。因Dengue NS1Ag检测未确认的比例高达1.0%,推论此方法并不适用于捐血人登革热筛检。结论本研究检测样本数为抽样筛检,但依初步结果推论该地区登革热并不会造成输血安全的影响。     

福建省登革病毒感染的型别鉴定

[目的]应用RT－PCR方法鉴别福建省登革热感染及型别的判断。[方法]从血清中提取病毒RNA，行RTPCR，再用型特异性引物扩增出特异性片段，电泳后观察判断其型别。[结果]从6份早期病人血清扩增出4份登革热2型特异性条带。[结论]该方法可用于登革热感染的鉴别诊断并判断其血清型。     

登革热实验室诊断研究进展

近年来登革热病例增长迅猛,实验室诊断对登革热防控意义重大。对目前登革热实验室诊断方法进行综述,概括为两大类:病原学检测及血清学检测。前者主要包括病毒分离及核酸检测;后者包括针对抗原抗体的6种不同检测方法:NS1抗原检测、IgM抗体检测、IgG抗体检测、血凝抑制试验、中和试验及免疫斑点法。对不同检测方法的适合范围及利弊进行分析,为选择合适的检测方法,实现快速准确的实验室诊断提供参考。     

登革热的实验室诊断方法

为防止登革热的暴发流行,对登革病毒作出准确、快速的诊断具有十分重要的意义。本文对实验室诊断的三种基本方法：常规血清诊断、快速诊断和病毒分离进行了综述。     

多重荧光定量PCR测定登革热Ⅰ～Ⅳ型方法的建立

目的建立能同时检测登革热4种血清型的一步法多重荧光定量PCR检测方法,用于登革热病毒分型的早期实验室诊断。方法针对病毒Ⅰ~Ⅳ型使用优化的引物探针,调整反应温度和条件,稀释阳性样本,进行特异性、灵敏度、重复性检测,评估该反应体系的性能。结果 16份样本中,6份经抗体确证的登革热阳性样本使用自建方法检测全为阳性,且1型3份,2、3、4型各1份,均与预期结果一致。流感、乙脑、诺如阳性样本以及健康人血清检测未见特异性扩增曲线,特异性高。登革热病毒2、3、4型最低检测限为10~2 copies/ml。1型最低检测限为10~3 copies/ml。不同型别各浓度梯度检测变异系数小于10%。结论本实验设计的登革热单管多重荧光定量PCR检测体系特异性、灵敏度、重复性都较好。     

首次从福建省登革热患者血清中分离登革Ⅰ型病毒

[目的]查明2004年夏秋季福州市部分地区发生疑似登革热暴发流行的病原。[方法]采用C6/36细胞对患者血清标本进行病毒分离,应用免疫荧光、RT-PCR方法进行鉴定。[结果]从27份患者血清标本中分离出16株病毒,经鉴定为登革Ⅰ型病毒。[结论]福州市本次暴发流行由登革Ⅰ型病毒所致,系福建省首次从暴发流行患者血清中分离出登革Ⅰ型病毒,为登革热流行的防治提供科学依据,同时对进一步研究其流行特点和诊断试剂奠定了基础。     

2014年广东省登革热流行期间实验室诊断评价

目的 本研究旨在评估登革热NS1抗原、病毒RNA和IgM抗体检测在登革热病毒感染早期实验室诊断中的应用.方法 2014年6-11月,连续采集广东省疑似登革热患者432份血清样本,所有样本同时进行了4项商用诊断试验,包括NS1快速诊断试验(RDT)、NS1酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时定量RT-PCR(qRT-PC...     

广东地区蝙蝠携带登革热病毒、寨卡病毒以及狂犬病病毒的流行病学调查

目的 了解广东地区蝙蝠携带狂犬病病毒、寨卡病毒以及登革热病毒情况。方法 2014-2016年分别在广州市和湛江市部分地区采集蝙蝠,取其血清和脑组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法（real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR）、巢式聚合酶链反应（nested polymerase chain reaction,Nested PCR）,酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）和细胞培养分离检测所采标本中的狂犬病病毒、登革热病毒和寨卡病毒的感染情况。结果 采集蝙蝠共174只,分属2科3个种：果蝠科的犬蝠属（Cynopterus sphinx）33只、蝙蝠科的普通伏翼属（Pipistrellusabramus）9只及高头蝠属（Scotophiluskuhlii）132只。分别取得血清、脑组织各174份。在犬蝠脑标本中检出登革热病毒阳性1份,阳性率0.06%（1/174）,寨卡病毒、狂犬病病毒均未检出。结论 广东两个地区的3种蝙蝠作为寨卡病毒、登革热病毒和狂犬病病毒宿主的可能性较小。     

2000-2004年广州市登革热血清学和病原学分析

目的 对2000-2004年广州市登革热（DEN）病原体分离鉴定及流行特点分析，为该病的诊断、预防和治疗提供依据。方法 采用间接酶联免疫（ELISA）法、免疫斑点法、免疫层析法、对疑似患者的血清特异性抗体IgM、IgG进行检测。用C6／36细胞对早期病例血清进行病毒分离，以间接免疫荧光（McAb-IFA）、RT-PCR方法鉴定。RT-PCR法检测成蚊、蚊幼。结果 病毒分离株经用单克隆抗体间接免疫荧光（McAb-IFA）、RT-PCR检测鉴定为Ⅰ级登革病毒。检出幼蚊有登革病毒Ⅰ型。结论2001-2004年广州市的登革热流行是由Ⅰ型登革病毒感染所致，2002年出现暴发与流行并延伸到2003年。     

深圳登革热患者血清中2型病毒株的分离鉴定

目的:对深圳市2004年-2006年登革热病原体进行分离鉴定。方法:采用酶链免疫吸附试验和胶体金免疫层析法检测疑似登革热患者血清中的特异性IgM、IgG抗体。用C6/36细胞对早期病例血清进行病毒分离,以MGB荧光PCR方法鉴定。并用逆转录-半套式PCR(RT-semi-nested-PCR)方法和荧光PCR方法对其进行型别鉴定。结果:从10份抗体阳性的病人血清标本中成功分离到一株登革病毒,经鉴定为登革2型病毒,将其命名为DEN2-SZ0521。结论:首次从深圳市登革患者血清中分离到一株登革2型病毒,为进一步研究和控制该地区登革热提供了科学依据。     

首次从深圳市登革热患者血清中分离到一株登革4型病毒

目的:对深圳市2005年登革热病原体进行分离鉴定.方法:采用酶链免疫吸附试验法和胶体金免疫层析法检测登革热疑似患者血清中的特异性IgM和IgC抗体.用C6/36细胞对早期病例血清进行病毒分离,以MGB荧光PCR方法鉴定.用逆转录-套式PCR方法对其进行型别鉴定.结果:从8份标本中成功分离到一株登革病毒,经逆转录-套式PCR方法鉴定为登革4型病毒,将其命名为DEN4-SZ0524.结论:首次从2005年登革热患者血清中分离到一株登革4型病毒,为进一步研究和控制该地区登革热提供了科学依据.     

福州市2004年登革热疫情监测与分析

目的分析2004年福州市登革热疫情监测结果，为控制登革热流行提供科学依据。方法采集各监测点正常人群血清、发热病人血清及疫点的密切接触者血清检测登革热抗体，调查媒介白纹伊蚊布雷图指数。结果正常人群血清登革热IgG抗体阴性；发热病人IgG、IgM阳性94例；密切接触者血清IgG抗体阳性率为5．99％，其中台江为7．R7％，连江为10．7l％，闽侯为2．460％。各监测点年平均布雷图指数除马尾外均超过5，且疫点连江、闽侯9、10两月最高，大大超过了20。结论2004年出现登革热疫情，仅部分人群有免疫力，布雷图指数又较高，必须做好监测和防制工作，严防登革热和登革出血热在福州市的流行。     

广州市荔湾区2006年登革热疫情流行病学特征分析

目的 分析广州市荔湾区2006年登革热疫情流行病学特征,探讨预防控制措施.方法 对各医院报告的病例进行流行病学个案调查;采集病例血样作血清学或病原学检测;对疫点进行蚊媒调查,在疫点周围开展病例搜索.共接报350例病例(包括疑似病例),采集336份血标本进行血清学检测,检出登革热IgM和(或)IgG阳性296份,其中12例分离到登革热病毒;共对176个疫点进行处理.结果 广州市荔湾区2006年共报告登革热病例310例,发病率为43.66/10万(按户籍人口计算),无死亡病例;疫情涉及20个行政街,有4个暴发点;流行季节为7月上旬至11月中旬,高峰在8月下旬和9月上旬;病毒为登革Ⅰ型;男性177例,女性133例,性别比1.33∶1;发病年龄最大为78岁,最小为3岁,以青壮年为主,20～39岁136例,占43.87%.结论 该区存在有利登革热流行的自然、社会因素,预防控制是一项长期、复杂的工作,今后要加强疫情预测预报,加快老城区和城中村的改造.     

登革热的流行及控制

登革热是由登革热病毒引起的一组急性传染病，它包括登革热(Dengue Fever DF)、登革出血热(Dengue Haemorrhagic Fever DHF)、登革休克综合症(Dengue Shock Syndrome DSS)。     

登革热病毒四个型单克隆抗体在型别鉴定上的实际应用

本文应用登革病毒型特异性的单克隆抗体,通过间接免疫荧光法对1978--1981年我国登革热流行时期分离的14株登革病毒进行型别鉴定。结果表明1--4型的单克隆抗体,用于登革病毒鉴定具有型特异性和快速简便的优点。     

登革热病毒SCID-LO2人鼠嵌合模型的建立与评价

目的构建登革热病毒(DENV)感染的小动物模型,为阐明其致病机制提供实验材料。方法向严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠腹腔内接种人正常肝细胞(LO2)构建"人鼠嵌合体"动物模型,进而腹腔注射DENV,通过检查病毒在体内分布和主要器官的组织学改变,对DENV感染的动物模型进行评价。结果 SCID小鼠成功移植LO2,并且嵌合小鼠感染DENV后出现病毒血症及严重的器官损伤等表现,但无后肢麻痹等无关症状。结论成功构建了SCID-LO2人鼠嵌合模型,嵌合小鼠能够支持DENV复制,并表现出部分人类感染DENV的临床症状,该小鼠感染模型为研究DENV的致病机制提供了有价值的实验材料。     

2010年林芝地区健康人群登革热IgG抗体水平调查

[目的]了解林芝地区健康人群登革热抗体水平,为制定登革热防治对策提供依据。[方法]2010年7～8月,在林芝地区所属墨脱县和察偶县的4个乡镇对部分当地0～67岁的健康人群进行血清登革热病毒IgG抗体水平检测。[结果]合计检测350人,登革热病毒IgG抗体阳性的6人,阳性率为1.70%。登革病毒IgG抗体阳性率,男性为2.13%,女性为1.44%(P>0.05);0～16岁为1.28%,17～46岁为1.54%,47～67岁为2.60%(P>0.05);墨脱县为0.80%,察隅县为3.96(P>0.05)。[结论]林芝地区健康人群中存在登革热病毒感染。     

几种登革热抗体检测试剂的比较

目的比较2种登革热抗体ELISA检测试剂盒以及1种ICT(免疫层析法)试剂盒对于登革热抗体检测的差异,筛选出更适合群体血清流行病学检测的试剂盒。方法按照所选择的试剂盒的说明,用盲法对出入境人员血清进行检测。结合检测和流调结果进行分析。结果登革热IgG阳性检出率分别是NOV16.67%、中山10.12%、Cotez0.6%,总体上检出率差异有统计学意义(P<0.05),中山和NOV之间检出率差异没有统计学意义(P>0.05);登革热IgM阳性检出率分别是NOV0%、中山1.19%、Cotez3.57%,三者检出率差异均有统计学意义(P<0.05)。分析三种试剂检测阳性与黄热、乙脑接种、病史的关系,提示Cortez-IgG呈现弱相关趋势。检测成本测算,中山试剂成本最低。结论对于开展人群登革热血清流行病学调查和监测,中山-IgG试剂相对较优。不同检测原理、不同工艺的试剂盒,其检测特性需要进一步研究和评估。     

登革热预警技术研究进展

登革热是一种经蚊媒传播的病毒性传染病,患者以突然高热、剧烈头痛、眼眶后痛、肌肉和关节痛为主要表现,部分可有皮疹、出血倾向和淋巴结肿大等症状,严重者可能出现登革出血热或登革休克综合征[1].登革热广泛流行于热带、亚热带的非洲、美洲、东南亚、西太平洋和欧洲个别境域的100多个国家和地区.     

福建口岸首次截获输入性登革热病例实验室诊断

〔目的〕通过实验室检测发现福建口岸首次截获输入性登革病例,并进行分子追踪溯源。〔方法〕采用实时荧光RT-PCR和RT-PCR检测方法,并对RT-PCR扩增产物进行核苷酸序列分析。〔结果〕从血清样本中检出登革病毒1型核酸,序列分析表明,该病毒株与来自太平洋群岛分离株在系统进化树上最为接近,序列同源性高。〔结论〕福建口岸首次截获输入性登革热病例,病毒株来源于太平洋群岛地区。