共刺激分子-中药免疫调节作用及机理研究的新靶点

免疫活性细胞的活化是机体免疫系统产生免疫应答的重要环节。已有的研究表明：T细胞的活化必需双信号，即T细胞抗原识别受体(TCR)识别抗原递呈细胞(APC)表面的MHC-抗原肽复合物，产生第一信号；两者之间的其它分子相互作用提供第二信号——共刺激信号，如果仅有第一信号而缺乏共刺激信号，则导致T细     

免疫共刺激分子与自身免疫性疾病的研究进展

正常机体的免疫系统具有区别"自己"和"非己"的能力,对非己抗原能够发生免疫应答,对自身抗原则是处于无应答或微弱应答状态,时刻处于"免疫激活-免疫耐受"的动态平衡状态。然而,如果正常的免疫耐受被打破,将"自己"识别成"非己",处于非正常免疫激活状态的T细胞就会持续迁延的对自身抗原产生异常的免疫应答,结果会导致自身免疫性疾病(ADS)的发生。因此,"无效"的免疫识别和免疫应答成为自身免疫性疾病的发病的主要致病机制。免疫共刺激分子(co-stimulatory molecule)作为连接抗原递呈细胞(APC)和免疫细胞(T细胞,B细胞)的重要纽带,有研究已经证实,正性免疫共刺激分子的高表达和负性免疫共刺激分子的低表达都会导致自身免疫耐受的缺陷,进而引发自身免疫性疾病。依据中医药"纠偏","扶正"的治疗特色。本文通过对4种典型性的自身免疫性疾病:系统性则是以红斑狼疮(SLE)和类风湿性关节炎(RA)为代表;器官特异性则是以多发性硬化症(MS)和Ⅰ型糖尿病(T1DM)发病机制进行探讨,依赖于这4种疾病发病过程中免疫共刺激分子对免疫识别与免疫应答的重要影响,并且依托于中医药对自身免疫平衡调节的作用,结合近十年来的相关文献,对免疫共刺激分子与自身免疫性疾病之间的关系进行论述,探寻不同的免疫共刺激分子在不同的自身免疫病中的共性,并初探中药以PD1-PDL1为药物靶点治疗自身免疫病的可行性。     

PD-1/PD-L1信号通路与类风湿关节炎病理机制的研究进展

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种由T细胞介导的自身免疫性疾病,T细胞过度活化是其免疫反应的重要始动环节,其确切病因和发病机制迄今仍未完全明了。近年来的研究表明,共刺激分子在免疫调节中发挥着重要作用,程序性死亡因子1及其配体作为T细胞活化的关键负性共刺激分子,在RA病理发生发展过程中具有重要意义。故综述近年来关于PD-1/PD-L1信号通路在RA病理机制中的相关研究进展,为艾灸治疗RA的作用机制提供新的研究思路。     

非小细胞肺癌患者中医证型与外周血树突状细胞功能的相关性分析

正自1973年加拿大学者Steinman发现树突状细胞(DC)以来,大量研究表明DC是目前已知的体内抗原提呈功能最强的专职抗原提呈细胞(APC)~([1-2]),其表面能高表达MHC-Ⅱ类分子和共刺激因子CD80、CD83、CD86、CD40等,对T细胞免疫产生免疫应答~([3]),有效激发机体的抗肿瘤免疫应答或激发细胞毒T细胞产生抗肿瘤效应,在机体抗肿瘤免疫中发挥重要作用。近年来一些研     

雷公藤甲素对小鼠淋巴细胞体外活化的抑制作用

目的:研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL-2及IFN-γmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据.方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1 h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆体双染技术,流式细胞仪检测TRD对小鼠T细胞CD69、CD25表达的影响;采用半定量RT-PCR技术从mRNA水平检测TRD对细胞因子IL-2、IFN-γ mRNA的表达的影响.结果:TRD能抑制T细胞早期活化标志CD69和CD25,同时TRD也能抑制IL-2及IFN-γmRNA的表达.结论:TRD对T细胞早期活化分子及细胞因子表达的抑制作用可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一.     

雷公藤治疗类风湿关节炎细胞和分子生物学机制的研究与进展

雷公藤治疗类风湿关节炎(RA)至今已40余年,其对RA具有显著疗效〔1〕。现认为〔2〕RA是易感机体由不明病因激活免疫系统后,在综合因素作用下,产生一种以破坏关节为主要特征的自身免疫性疾病,即便病因不复存在,但因分子模拟机制作用于自身抗原而发生的自身免疫反应性。研究表明〔3〕,雷公藤具有抗炎、免疫抑制及抗增殖等作用,从细胞基因水平更深入地揭示其治疗RA作用机制已成为雷公藤研究中较为活跃的领域,现将雷公藤治疗RA分子生物学机制研究与进展介绍如下。1对免疫活性细胞的影响1·1对T细胞影响1·1·1抑制激活T细胞双信号系统T细胞激活需要双信号系统的作用,而雷公藤对激活T细胞的双信号均具有不同程度抑制作用。雷公藤甲素(TP)在高剂量条件下可阻止树突状细胞(DC)发育,引起细胞死亡;对成熟DC,中剂量可诱导半数以上细胞发生凋亡〔4〕。雷公藤多苷能显著抑制DC表面HLA-DR和CD80表达,使T细胞不能活化,同时还能抑制DC内白细胞介素(IL)-12 P40分泌和mRNA转录,从而抑制Th1细胞分化〔5〕。1·1·2抑制T细胞活化、增殖与分化T细胞特异性识别抗原后,在黏附分子和细胞因子协同作用下活化、增殖、分化为效应T细...     

落新妇苷对小鼠骨髓来源树突状细胞成熟及免疫功能的抑制作用

目的:探讨落新妇苷对小鼠骨髓来源树突状细胞(dendritic cell,DC)成熟和免疫功能的影响。方法:采用体外条件培养法得到小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞,加入脂多糖刺激细胞成熟。落新妇苷(低浓度25μg/mL、中浓度50μg/mL、高浓度100μg/mL)处理细胞后,流式细胞仪分析各组细胞凋亡,细胞表面主要组织相容性抗原复合物分子Ⅰa和共刺激分子CD40、CD80和CD86表达;异硫氰酸荧光素标记葡聚糖内吞实验分析各组DC抗原吞噬功能;酶联免疫吸附测定法检测各组DC培养液上清白细胞介素12亚单位p40(p40 subunit of interleukin-12,IL-12p40)水平;氚-胸腺嘧啶核苷掺入法检测体外混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)中各组DC刺激同种反应性T细胞的增殖能力,酶联免疫吸附测定法检测MLR上清IL-2、IL-4、IL-10、γ干扰素水平。结果:各组DC凋亡率差异无统计学意义(P0.05)。与脂多糖组相比,高、中、低浓度落新妇苷组细胞表面主要组织相容性抗原复合物分子Ⅰa和共刺激分子表达明显降低,抗原吞噬能力明显升高,分泌IL-12p40明显减少,刺激同种反应性T细胞增殖的能力显著下降(P0.05)。与脂多糖组相比,高、中、低浓度落新妇苷组MLR上清中IL-2和γ干扰素水平明显降低(P0.05),而IL-4、IL-10水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:落新妇苷(25、50、100μg/mL)能够剂量依赖性地抑制体外培养小鼠骨髓来源DC的成熟,并对其免疫功能具有一定的负性调节作用。     

慢性乙型肝炎中医证型与外周血T细胞共刺激分子关系的研究

由T细胞介导的细胞免疫反应在慢性乙型病毒性肝炎（chronic viral hepatitis B，CHB）的肝细胞损伤机制中起主导作用。其活化需要两个协同作用的信号，如缺乏共刺激分子提供的信号，T细胞便不能激活。CD80／CD28是主要共刺激分子。本研究通过检测不同中医辨证分型CHB患者的外周血T淋巴细胞CD80／CD28表达率，同时予以肝活检，观察组织炎症程度，探讨中医证型与组织炎症程度和CD80／CD28之间的相互关系，为中医证型在CHB发病中细胞免疫的作用提供实验依据。     

类风湿性关节炎热证"药-证对应"机制的网络药理学研究

以热证类风湿性关节炎(RA)为切入点,通过构建、分析其对应的分子网络及药物靶标网络,初步探讨“药-证对应”的机制.综合运用定向文本挖掘、PubChem小分子化合物数据库检索、临床典型热证RA患者外周血CD4+T细胞基因组学检测以及Ingenuity Pathway Analysis(IPA)网络构建等研究方法.通过定向文本挖掘,筛选出治疗RA热证的常用中药:黄柏、知母、苍术及牛膝4味中药.通过检索PubChem数据库,找到RA热证的对证中药共有靶蛋白123个.通过基因芯片技术,得到RA热证与正常人比较的差异基因21个.通过IPA软件分别构建RA热证和对证中药靶蛋白的分子相互作用网络.两个网络共有4条相同的生物学通路:GM-CSF(粒细胞巨噬细胞刺激因子)信号通路,CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4)信号通路,T细胞受体信号通路及辅助T细胞中的CD28信号通路.这些细胞免疫反应相关的生物学通路,共同干预了细胞存活、细胞免疫及炎症反应等细胞生命活动.结果表明:RA热证的分子网络和对证中药靶点的分子网络所涉及的共同的生物学通路:GM-CSF信号通路,CTLA4信号通路,T细胞受体信号通路及辅助T细胞中的CD28信号通路可能就是对证中药治疗RA热证“药-证对应”的分子生物学机制之一,具体机制需要进一步验证.     

黄芩苷对T淋巴细胞增殖与活化的影响

目的:研究黄芩苷对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并探讨其免疫调节机制。方法:以刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PMA) 离子霉素(ionomycin,Ion)诱导小鼠淋巴细胞中T细胞增殖,用MTT法测定细胞增殖;利用ConA或PMA诱导T细胞激活,流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子与CD25分子表达情况。结果:在ConA或PMA Ion刺激48h后,小鼠淋巴细胞MTT吸光度显著高于对照组(P<0.01)。黄芩苷(10~40uM)显著降低了ConA或PMA Ion引起的MTT吸光度增加(P<0.01)。在ConA或PMA刺激18h后,小鼠T细胞CD69表达率显著提高(P<0.01),ConA或PMA刺激36小时后,T细胞CD25表达率显著提高(P<0.01),黄芩苷(10~40uM)能显著降低活化(P<0.01)。结论:黄芩苷可以显著抑制多克隆刺激剂ConA或佛波醇酯(PMA)介导的小鼠T细胞的活化和增殖。     

树突状细胞疫苗在消化道肿瘤免疫治疗中的研究进展

树突状细胞(DCs)是指具有典型树突状或伪足样突起,膜表面高表达MHC-Ⅱ类分子,能移行至淋巴器官和刺激初始型T细胞增殖活化,并具有一些相对特异性表面标志的一类专职抗原提呈细胞(APCs),是目前已知功能最强大的APC,具有摄取、加工和提呈抗原的能力,是启动、调控和维持免疫应答的中心环节。DCs具有作为抗肿瘤疫苗的优势:①DCs是抗原提呈能力最强的细胞,除了通过吞噬、胞饮方式摄取抗原外,DCs还具有摄取和转运抗原的特殊膜受体,因此,DCs能够高效地捕捉到浓度很低的相应抗原。②巨噬细胞能捕获外源性抗原,但不能对抗原进行I类途径加工处理,而DCs在成熟过程中则能对外源性抗原进行Ⅰ、Ⅱ类途径的加工和     

黄芩苷对不同刺激剂诱导的小鼠T淋巴细胞体外活化的影响

目的分析黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外活化的影响,探讨其对免疫系统的作用,阐明其免疫抑制作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以不同终质量浓度的黄芩苷预孵育淋巴细胞4 h,再以刀豆蛋白A(Con A)或佛波醇酯类多克隆刺激剂(PDB)诱导小鼠淋巴细胞活化,利用流式细胞术分别结合双色免疫荧光单克隆抗体染色技术检测CD3 T细胞早期活化标志CD69和中期活化标志CD25分子的表达。结果黄芩苷(10、20、30 mg/L)能明显抑制Con A或PDB诱导T细胞活化分子CD69和CD25的表达,且呈浓度依赖性。结论黄芩苷能够明显抑制多克隆刺激剂Con A或PDB诱导的T细胞早期和中期活化,且呈明显的量效关系。提示黄芩苷在T细胞活化过程的信号转导中有抑制作用,从而可以通过抑制T淋巴细胞的活化,发挥免疫抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。     

中药对佐剂性关节炎大鼠细胞因子影响的研究进展

类风湿关节炎(RA)是一种以对称性、慢性进行性、侵蚀性多关节炎为临床表现的自身免疫性疾病,其发病机制不明.目前认为,RA启动始于致病因子被T细胞识别,抗原递呈激活CD4淋巴细胞,继而T、B淋巴细胞活化增殖,产生特异性细胞免疫及体液免疫释放大量细胞因子,关节滑膜炎性细胞浸润,成纤维细胞过度增生,导致新生血管翳形成,软骨以及骨质破坏.     

百令胶囊对小鼠树突细胞影响的实验研究

目的与经典免疫抑制剂做比较,了解冬虫夏草在体外对树突细胞的分化、成熟及功能的影响,进一步研究冬虫夏草的免疫抑制作用机理。方法百令胶囊提取液、他克莫司（FK506）和雷帕霉素（Ra-pamycin,Rapa）分别与小鼠髓源性树突细胞培养。流式细胞仪分析免疫抑制剂对树突细胞表型的影响。经过与不同药物培养的树突细胞作为刺激细胞与异体淋巴细胞进行混和培养,观察树突细胞刺激增殖能力的变化。结果百令胶囊在体外对树突细胞表型标记物及共刺激分子没有影响,与他克莫司差异无显著性。雷帕酶素可以降低树突细胞表型标记物及共刺激分子的表达;对白细胞增殖的刺激作用,百令胶囊有明显的抑制效果,并表现为剂量依赖。结论百令胶囊可以影响树突细胞刺激增殖的能力,其机理可能是通过抑制抗原递呈细胞的功能,阻断外来信号刺激的呈递,达到免疫低反应状态,最终实现免疫抑制的效果。     

SIVmac感染恒河猴诱发猴艾滋病模型的免疫学特征

目的:研究猴免疫缺陷病毒感染所致的猴艾滋病(SAIDS)模型的免疫学特性.方法:采用ELISA方法检测血浆中SIVp27抗原水平,流式细胞仪检测法分析细胞周期及ELISA方法测定IL-2水平.结果:感染2周时血浆病毒滴度达到高峰,4周后病毒滴度下降.CD4 细胞在感染后2周下降到最低,4周时开始部分升高.此外,在感染早期SIV感染启动了T细胞对ConA刺激的强反应,活化的SIV感染T细胞不能产生IL-2,显示感染的T细胞缺乏完整的增殖功能.然而在晚期T细胞对同样的刺激无反应,既无反应期,显示了极度的免疫缺陷.结论:提示在感染早期不仅CD4 细胞数量改变,而且显示感染的T细胞功能障碍,随后呈无反应状态.     

氧化苦参碱对慢性乙型病毒性肝炎Toll样受体9信号通路的影响

目的探讨氧化苦参碱抗乙型肝炎病毒(HBV)感染的作用机制。方法分离提取慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMCs),在体外加入氧化苦参碱刺激,检测其诱导抗病毒细胞因子产生的能力,及对Toll样受体9(TLR9)信号通路表达及功能的调节作用。结果氧化苦参碱可直接刺激PBMCs分泌大量干扰素α(IFN-α)和干扰素γ(IFN-γ),上调PBMCs细胞TLR9信号通路中TLR9、髓样分化因子88及肿瘤坏死因子受体相关因子6等信号传递分子,并诱导信号通路活化释放大量抗病毒细胞因子(IFN-α、IFN-γ和肿瘤坏死因子-α)。结论氧化苦参碱通过直接诱导抗病毒细胞因子释放及上调活化TLR9信号通路发挥其抗HBV作用。     

氧化苦参碱对慢性乙型肝炎外周血单个核细胞Toll样受体7信号通路的影响

目的:分析氧化苦参碱治疗慢性乙型肝炎的作用机制。方法:外周血单个核细胞(PBMCs)分离提取,在体外与氧化苦参碱共孵育48 h,检测Toll样受体7(TLR7)信号通路主要级联分子基因表达水平;TLR7配体刺激经氧化苦参碱预处理的PBMCs 24 h,检测在配体诱导下抗病毒细胞因子分泌水平。结果:氧化苦参碱上调并活化PBMCs细胞中TLR7信号转导通路,在TLR7特异性配体R848刺激下分泌抗病毒细胞因子。结论:氧化苦参碱可上调并活化PBMCs中TLR7信号通路,有利于其发挥其抗CHB作用。     

中药对抗再生障碍性贫血骨髓细胞凋亡研究现状

再生障碍性贫血(下简称"再障")的发生与免疫系统紊乱密切相关,其中T淋巴细胞在其免疫发病机制中具有重要作用。骨髓造血功能衰竭主要与活化的细胞毒性T细胞(CTL)有关,T细胞亚群和活化T细胞的变化,造成细胞因子的分泌失衡,可产生大量的造血负调控细胞因子,同时激活细胞凋亡系统,从而引起骨髓造血衰竭。大多数再障对免疫抑制剂治疗有效,     

中药多糖抗肿瘤免疫药理研究的新思路——对树突状细胞的影响

机体内存在多种免疫监视机制发挥着抗肿瘤作用 ,而免疫活性细胞致敏、激活和扩增又依赖于抗原提呈细胞 (ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌ,ＡＰＣ)提呈相应的抗原多肽以及共刺激信号。树突状细胞 (ｄｅｎｔｒｉｔｉｃｃｅｌｌ,ＤＣ)被确认为是目前发现的功能最强的ＡＰＣ ,它能摄取各类抗原 ,在机体细胞免疫和体液免疫调控中均起着重要作用。ＤＣ的发现和研究进展为中药多糖抗肿瘤免疫药理研究提供了新的视角 ,即中药多糖抗肿瘤的免疫药理学机制是否部分与影响肿瘤机体ＤＣ细胞增殖、成熟、表型及功能的改变有关 ?但目前有关此…     

从免疫负调节角度论述中医药治疗AIDS的研究进展

在HIV感染过程中,机体内特异性T细胞被携带病毒抗原的免疫负调节因子高度表达,导致T细胞免疫功能耗竭.负调节因子及其配体高表达的抗原持续刺激对AIDS的发病机制、进展均有重要影响.抑制负调节通路可提高特异性免疫,是艾滋病新的治疗靶点.中医药改善机体免疫具有独特优势,从免疫负调节角度阐释中医药改善HIV/AIDS患者免疫...