抗菌肽17BIPHE2通过阻滞肺腺癌A549细胞周期促进其凋亡

目的探讨抗菌肽17BIPHE2抑制人肺腺癌A549细胞增殖机制。方法 MTT比色法检测0~40μmol·L-1的抗菌肽17BIPHE2对A549细胞和正常肺上皮BEAS-2B细胞增殖的影响;流式细胞仪检测17BIPHE2对A549细胞细胞周期、线粒体膜电位、细胞内钙离子的影响;TUNEL染色和流式细胞仪检测17BIPHE2诱导的A549细胞凋亡。结果抗菌肽17BIPHE2可选择性抑制肺腺癌A549细胞增殖(P0.05),对正常肺上皮BEAS-2B细胞无明显抑制作用;A549细胞经不同浓度抗菌肽17BIPHE2处理24 h后,细胞周期阻滞于S期(P0.05);同时抗菌肽17BIPHE2能够明显降低A549细胞中线粒体膜电位(P0.05),随着17BIPHE2浓度不断增加,A549细胞内钙离子浓度也明显升高(P0.05);结论抗菌肽17BIPHE2可能通过阻滞A549细胞细胞周期,降低线粒体膜电位、升高细胞内钙离子浓度从而诱导A549细胞凋亡。     

二十碳五烯酸联合依托泊苷对人肺腺癌A-549细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究二十碳五烯酸(EPA)联合依托泊苷对人肺腺癌A-549细胞株增殖与凋亡的影响.方法 分别用终浓度为40 μg/ml EPA、10 μg/ml依托泊苷、40 μg/ml EPA+ 10μg/ml依托泊苷、20μg/ml依托泊苷、40 μg/ml EPA+ 20μg/ml依托泊苷孵育A-549细胞,采用MTT法、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭双染法、吖啶橙/溴化乙锭双染法及流式细胞术研究细胞增殖抑制率、细胞形态学及凋亡情况.结果 EPA联合依托泊苷对A-549细胞的增殖抑制率显著高于依托泊苷单独的作用(P均＜0.05).细胞荧光染色显示:EPA联合依托白苷组的凋亡细胞数量多于依托泊苷单独作用组.EPA联合依托泊苷组的S期及G2/M期细胞显著多于依托泊苷单独作用的细胞(P均＜0.05).结论 EPA可能具有增强依托泊苷抑制人肺腺癌A-549细胞增殖、促进A-549细胞凋亡的作用.     

MMP-9ASODN对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响及其机制初步探讨

目的 探讨基质金属蛋白酶-9反义寡核苷酸(MMP-9ASODN)对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其机制.方法 MTT法检测MMP-9ASODN转染对A549细胞生长增殖的影响;流式细胞术检测MMP-9ASODN转染对A549细胞周期和凋亡比率的影响;RT-PCR法与Western blot法分别检测MMP-9ASODN转染对A549细胞内MMP-9mRNA及蛋白表达的影响.结果 在一定范围内,MMP-9ASODN对A549细胞生长抑制呈浓度和时间依赖性,反叉寡核苷酸浓度为600 nmo/L作用48 h时其抑制作用最明显;MMP-9ASODN转染A549细胞48 h后G1期细胞数明显增多,S期细胞数明显减少,G2期细胞数则无明显变化,其凋亡百分比明显升高;与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);细胞内MMP-9mRNA及其蛋白的相对表达量明显低于对照组(P＜0.01).结论 MMP-9ASODN转染能够有效能够抑制肺腺癌A549细胞的增殖同时诱导其凋亡,其机制可能是通过下调MMP-9mRNA及蛋白的表达.     

ω-3多不饱和脂肪酸廿烷五烯酸单剂以及联合卡铂对人肺腺癌A-549细胞系增殖和凋亡的影响

目的观察廿烷五烯酸（EPA）单剂以及与卡铂联合应用对人肺腺癌A-549细胞系增殖和凋亡的影响。方法分别用100μg／ml卡铂、80μg／mlEPA以及100μg／ml卡铂联合80μg／mlEPA孵育A-549细胞48h后,采用MTr法检测药物对h-549细胞增殖的抑制率,HE染色观察细胞形态学,流式细胞术定量分析细胞凋亡率。结果100μg／ml卡铂联合80μg／mlEPA对A-549细胞系的增殖抑制率为85．20％±5．00％,显著高于80μg／mlEPA（32．85％±3．00％,P=0．0001）或100μg／ml卡铂（53．25％±3．00％,P=0．0013）单独的作用。HE染色显示：药物干预后部分A-549细胞出现凋亡形态学改变。卡铂联合EPA组A-549细胞凋亡率为17．05％4-4．00％,显著高于单用卡铂组（9．49％±1．00％,P20．0252）。结论EPA可能具有增强卡铂抑制人肺腺癌A-549细胞系增殖、促进A-549细胞系凋亡的作用。     

杨梅素对人肺腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的研究杨梅素(myricetin,Myr)对人肺腺癌(A549)细胞增殖的影响及其作用机制。方法以人肺腺癌系A549细胞为离体研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法研究不同浓度的Myr对A549细胞生长的抑制作用并测定其半数抑制浓度(IC50);采用Westernblot法检测Myr对蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平的影响。结果Myr对A549细胞具有明显的增殖抑制作用,随着Myr浓度的增加,细胞的存活率明显降低。Myr作用72h的IC50值为41.7μg/ml。32μg/ml杨梅素无血清作用A54912h即可显著抑制AktSer473的磷酸化水平。结论Myr能够剂量依赖性抑制A549细胞增殖,Akt的活性下调可能是Myr体外诱导人A549肺腺癌细胞增殖抑制作用的分子靶点。     

大蒜素影响子宫颈癌Hela细胞增殖的实验研究

目的探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化,采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果 MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人宫颈癌Hela细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

双氢青蒿素对三氧化二砷在肺腺癌细胞的敏感性研究

目的探讨双氢青蒿素(DHA)是否能增加肺腺癌A549细胞对三氧化二砷(ATO)的敏感性及可能的机制。方法以人肺腺癌A549细胞为研究对象,按处理方式分为对照组、单独DHA或ATO处理组及二者联合组,采用MTT比色法检测DHA和ATO对细胞增殖的影响,彗星实验检测DNA损伤情况,荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果与ATO单独处理相比,DHA和ATO联合处理可以显著降低A549细胞存活率,同时显著增加细胞尾部DNA百分率和Olive尾距(OTM)、ROS水平和凋亡率(P0.05);另外,2种处理方式均可以阻滞细胞于G2/M期,但差异无统计学意义(P0.05)。结论 DHA可以增强ATO杀死肺腺癌A549细胞的敏感性,其机制可能是DHA和ATO联合处理诱导了细胞内ROS的产生与蓄积,ROS可以引起DNA链断裂,进而阻滞细胞周期进行修复,修复失败的细胞最终走向凋亡。     

沙利度胺联合顺铂对A549肺腺癌细胞株的体外实验

目的观察沙利度胺与顺铂（DDP）联合应用对A549人肺腺癌细胞凋亡的影响,观察沙利度胺对肺腺癌A549细胞VEGF、BFGF蛋白表达的影响。方法采用PI单染法流式细胞检测细胞凋亡率;采用免疫细胞化学方法检测沙利度胺处理后肺腺癌A549细胞VEGF、BFGF蛋白表达的变化。结果在一定浓度范围内,沙利度胺联合DDP处理组细胞凋亡率明显高于单药组;沙利度胺（7.5mg/L）作用于人肺腺癌A549细胞后,处理组的VEGF、BFGF蛋白表达与未加药组比较差异显著。结论沙利度胺DDP联合,可增加A549人肺腺癌细胞的凋亡率;沙利度胺可抑制A549人肺腺癌细胞VEGF、BFGF的蛋白表达。     

大蒜素对子宫颈癌Hela细胞增殖的影响

目的:探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化;采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,采用流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果:MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度的大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论:大蒜素对人宫颈癌Hela细胞的生长有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

海鞘醇类似物抗肿瘤活性的研究

目的探讨海鞘醇类似物002抗肿瘤活性。方法采用MTS法检测不同浓度的海鞘醇类似物对HepG2、A549和NIH3T3等细胞增殖的抑制作用;流式细胞、Annexin V-FITS/7-AAD等技术检测海鞘醇类似物对HepG2、A549和NIH3T3等细胞凋亡的影响。结果海鞘醇类似物对HepG2和A549的增殖有明显抑制作用,抑制率分别为73.67%和62.4%;海鞘醇类似物在浓度为2.0μg/ml时,引起HepG2和A549细胞的早期凋亡率分别为25.72%和25.46%。而对NIH3T3细胞影响不大。结论海鞘醇类似物对人肝癌和肺癌细胞的增殖有较强抑制作用,且能促进人肝癌和肺癌细胞的早期凋亡。     

Plant-Derived Protease Inhibitors LC-pi (Lavatera cashmeriana) Inhibit Human Lung Cancer Cell Proliferation In Vitro

The objective of this study was to check the anticancer activity of purified protease inhibitors of Lavatera cashmeriana viz LC-pi I, II, III, and IV (Lavatera cashmeriana protease inhibitors) on A549 (lung) cell. It was found that LC-pi I and II significantly inhibited the proliferation of A549 cells with IC₅₀ value of 54 μg/ml and 38μg/ml, respectively, whereas inhibition by LC-pi III and IV was negligible. LC-pi I and II were further found to inhibit formation of colonies in a dose-dependent manner. Also, both inhibitors were found to induce apoptosis causing chromatin condensation and DNA fragmentation, without loss of mitochondrial membrane potential. Cell cycle revealed a significant increase of subG₀/G₁ phase cells that are apoptotic cells. We also demonstrated a dose-dependent decrease in migration of A549 cells on cell migration assay by both inhibitors. Taken together, we demonstrate that LC-pi I and II inhibited proliferation through arresting cells before apoptosis, inducing apoptosis and inhibiting cell migration in human lung cancer cells, but the study warrants further investigation. Our results support the notion that plant protease inhibitors may have the potential to advance as chemopreventive agents.     

c-FLIP反义寡核苷酸对肺癌A549细胞抑制作用

目的探讨细胞型自杀相关因子(Fas)相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)反义寡核苷酸(ASODN)对肺癌细胞系A549生长、凋亡的作用。方法设计合成c-FLIP ASODN,按不同浓度转染肺癌A549细胞,另设置空白对照组、脂质体转染组、无义寡核苷酸(NSODN)转染组,采用台盼蓝拒染法计数活细胞绘制细胞生长曲线,免疫组化链霉素抗生素过氧化物酶(SP)法检测细胞c-FLIP蛋白和Ki-67抗原表达、噻唑蓝法测定细胞增殖抑制率、流式细胞仪分析细胞凋亡情况。结果c-FLIPASODN转染A549细胞后,各ASODN组A549细胞生长受到抑制,随着ASODN浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐升高、c-FLIP蛋白和Ki-67抗原表达逐渐下降,而细胞凋亡率逐渐升高,与其他各组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。而其余各组之间上述指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论c-FLIP ASODN能有效地干扰肺癌A549细胞c-FLIP基因表达,并可抑制癌细胞生长增殖,促进其凋亡,并且存在量效关系,有望成为治疗肺癌的基因药物。     

青蒿琥酯联合热疗诱导肺腺癌A549细胞凋亡作用

目的 探讨青蒿琥酯联合热疗诱导肺腺癌A549细胞凋亡的线粒体途径作用机制。方法 150μmol/L青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗(43℃,1h)作用A549细胞24h,流式细胞技术检测细胞周期和凋亡率情况。荧光显微镜观察线粒体膜电位变化。免疫组化、western blot检测细胞色素c、Bcl-2和caspase-3表达,CaspACETM检测试剂盒检测活性caspase-3表达。结果 青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗作用A549细胞24h后,G0/G1期细胞数增多,S期和G2/M期细胞数减少(P<0.01);凋亡率分别是16.77%和28.90%(P<0.01)。线粒体膜电位下降率分别为18.05%,50.98%(P<0.01)。细胞色素c蛋白、caspase-3表达增加而Bcl-2蛋白表达减少(P<0.01)。活性caspase-3蛋白水平增加A值分别为0.2641±0.0027,0.3613±0.0019,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗可诱导肺腺癌A549细胞凋亡,激活线粒体途径可能是诱导凋亡重要作用机制。     

腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA抑制肺癌的实验研究

[目的]探讨研究腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA对肺癌的抑制作用。[方法]选择肺癌细胞A-549,采用人鸟氨酸脱竣酶的基因序列扩增引物和扩增腺病毒基因组E1区的引物,对ODC基因片段的克隆,并构建重组体现病毒载体。测定病毒的滴度,并采用MTT法测定病毒对肺癌细胞A-549的抑制作用。[结果]克隆得到了含起始密码ATG的ODC外显子上的一段基因,并可经序列测定,再将这一段基因反向插入腺病毒载体后,也可通过PCR进行初步的鉴定。另外测得病毒的滴度为2.5×108pfu/ml,且通过MTT法测得该病毒对A-549肺癌细胞随作用时间的延长和病毒浓度的增高,抑制作用越强。[结论腺病毒介导的鸟氨酸酶反义RNA对肺癌具有明显的作用,但对其基因治疗的应用还应通过进一步的研究。     

大豆异黄酮对A549细胞化疗协同作用

目的探讨大豆异黄酮(ISF)联合长春瑞滨(NVB)化疗对A549肺癌细胞增殖影响。方法采用噻唑兰法观察ISF和NVB联用对A549肺癌细胞增殖影响,采用Weeb系数法判定联合用药相互作用,同时采用透射电镜检测A549细胞形态学变化。结果ISF和NVB单独使用均可时间和浓度依赖性地抑制肺癌A549细胞增殖;20～80 mg/L ISF作用48 h,A549细胞增殖抑制率为15%～23%;8～32 mg/L NVB作用48 h,A549细胞增殖抑制率为53%～80%;ISF浓度在40 mg/L时,ISF和NVB联用后抗A549细胞增殖作用增强,对肺癌细胞生长抑制作用呈量效关系;且NVB浓度在8～32 mg/L时,抑制率为71%～93%,二者有相加或协同作用。结论ISF和NVB联用可增强对肺癌A549细胞增殖抑制,二者具有协同作用。     

茶氨酸对人肺癌A549细胞株作用机制的研究

目的观察茶氨酸在体内外对肺癌A549细胞株生长的抑制、凋亡效应、抗肿瘤生成及抗血管生成作用。方法观察茶氨酸对肺癌A549细胞生长的影响,通过FCM检测茶氨酸对肺癌细胞凋亡的作用,以及茶氨酸在裸鼠移植瘤模型上对瘤体生长的抑制作用,免疫组化法检测肿瘤组织中CD34和血管内皮生长因子（VEGF）表达,观察茶氨酸对肺癌生长的抑制作用。结果茶氨酸显著抑制A549肺癌细胞生长,具有时间依赖性和浓度依赖性。茶氨酸使A549细胞出现明显凋亡,凋亡率17．8％。茶氨酸组治疗2周后,移植瘤瘤体体积变化和瘤体重量变化差异均有统计学意义,抑瘤率为47．2％。茶氨酸组瘤体组织中VEGF的表达与PBS组比较差异有统计学意义,瘤体组织中CD34标记的微血管密度（MVD）降低,因此,茶氨酸显著抑制肿瘤血管形成。结论茶氨酸通过促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤生长及抑制肿瘤血管生成的作用。     

DNA氧化损伤修复基因HOGG1低表达细胞株的建立及其生物学特性鉴定

目的为研究肺癌发生机制中DNA氧化损伤修复基因HOGG1的可能作用,利用携带有HOGG1特异性锤头状核酶基因的载体与肺腺癌A549细胞株,建立HOGG1低表达细胞株并观察其生物学效应。方法HOGG1特异性锤头状核酶真核表达载体[pcDNA3.1(+)RZ]经脂质体介导转染A549细胞;G418筛选;Neo基因的RTPCR法鉴定阳性克隆细胞;RTPCR半定量检测核酶对HOGG1基因的抑制效应。同时比较转染细胞与正常A549细胞的生长情况、细胞周期、软琼脂克隆形成率以及超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果转染后G418成功筛选出了阳性转化克隆,经传代形成稳定细胞株。核酶可持续抑制A549细胞HOGG1基因的表达,RTPCR结果显示转染细胞HOGG1mRNA的表达比正常A549细胞低61.5%(P<0.05);转染后,细胞株形态无明显改变;其群体细胞倍增时间为2.05天,稍短于正常A549细胞(2.17d);细胞周期各时相及细胞凋亡率以及细胞增殖指数没有明显改变(P>0.05);软琼脂克隆形成抑制率接近50%(P<0.05);SOD活力比正常A549细胞显著增加(P<0.05)。结论成功建立HOGG1低表达细胞株,所观察的生物学效应多数指标与正常A549细胞无显著差异。