土茯苓黄酮类成分一测多评方法的建立及含量变化规律研究

目的建立土茯苓Smilax glabra中新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷的一测多评测定方法(QAMS)并研究不同生长年限土茯苓中各成分含量的动态变化规律。方法采用高效液相色谱法,以土茯苓中的落新妇苷为内参物,计算该成分与新落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷的相对校正因子,用获得的相对校正因子计算各指标成分的含量并与外标法的测定结果进行对比,考察方法的准确性和可行性。采用建立的QAMS法测定不同生长年限土茯苓中各指标成分的含量,研究其动态变化规律。结果共测定不同生长年限样品5批23份,各指标成分一测多评法与外标法计算结果偏差均小于1.0%。各指标成分含量与生长年限具有一定相关性,落新妇苷的含量与生长年限呈负相关,新落新妇苷、新异落新妇苷和异落新妇苷的含量与生长年限呈正相关,两者的变化趋势相反。结论建立的QAMS法准确、可靠,可用于土茯苓中5个成分的定量分析。生长年限对土茯苓中4种落新妇苷类成分含量均具一定影响。     

土茯苓抑制黄嘌呤氧化酶活性的物质基础研究

目的:研究土茯苓抑制黄嘌呤氧化酶活性的物质基础。方法:系统分离土茯苓氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水层4个溶剂萃取部位,分光光度法测定土茯苓及4个溶剂萃取部位对黄嘌呤氧化酶活性的影响,建立亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定土茯苓及各溶剂部位黄酮含量,超高效液相-质谱仪联用技术(UPLC-MS)分析有效部位色谱峰成分,高效液相色谱法(HPLC)比对有效部位色谱峰与对照品,分光光度法测定有效部位中成分对黄嘌呤氧化酶活性的影响。结果:土茯苓中乙酸乙酯部位为抑制黄嘌呤氧化酶活性的有效部位,主要为黄酮类成分,质量分数为92.13%,鉴定出的成分有表儿茶素、落新妇苷、新落新妇苷、异落新妇苷、新异落新妇苷、槲皮素、柚皮素,其中表儿茶素、落新妇苷、槲皮苷、柚皮素均具有较强的抑制黄嘌呤氧化酶活性作用。结论:土茯苓黄酮类成分是抑制黄嘌呤氧化酶活性的物质基础。     

HPLC-MS与HPLC-1H-NMR联用鉴定土茯苓中的二氢黄酮醇苷异构体

目的：鉴定土茯苓中的二氢黄酮醇苷异构体。方法：采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)与高效液相色谱-核磁共振氢谱法(HPLC-¹H-NMR)对土茯苓提取液中的二氢黄酮醇苷类成分进行分析鉴定。结果：从土茯苓中鉴定出4个二氢黄酮醇苷异构体，分别为落新妇苷、新落新妇苷、异落新妇苷和新异落新妇苷。结论：该法能简单、快速地鉴别土茯苓中的二氢黄酮醇苷类成分。     

高效液相色谱法测定土茯苓药材中7种活性成分的含量

建立同时测定土茯苓中(-)-表儿茶素、5-O-咖啡酰基莽草酸、新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷含量的高效液相色谱法。采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温35℃,流动相为乙腈(B)-0.05%磷酸(A)梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,检测波长230 nm,对土茯苓、短柱肖菝葜、华肖菝葜药材进行分析。测定的84份土茯苓药材中(-)-表儿茶素、5-O-咖啡酰基莽草酸、新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷的含量范围分别为trace~1.381,trace~9.913,trace~3.673,0.670 6~27.08,trace~1.181,trace~4.833,trace~2.754 mg·g-1。用建立的方法对土茯苓常见混淆品短柱肖菝葜、华肖菝葜进行分析,结果显示短柱肖菝葜、华肖菝葜药材中(-)-表儿茶素的含量范围分别为0.011 63~0.060 07 mg·g-1和0.015 83~0.085 85 mg·g-1;而其他6种成分均未检测到。该方法简便、准确,可作为土茯苓药材的质量控制方法。短柱肖菝葜和华肖菝葜的成分显著不同于土茯苓,不宜与土茯苓混用。     

28个不同采集地土茯苓(断面红色、白色)中落新妇苷分析及抗炎作用的比较

目的:采用HPLC分析测定28个不同采集地土茯苓(断面红色、白色)中落新妇苷的含量,并通过对土茯苓(断面红色、白色)渗透型炎症的研究,拟对该品种进行药效与成分的评价.方法:RP-HPLC测定落新妇苷含量,采用依利特Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1％冰醋酸溶液(21∶ 79),流速1.0 mL·min-1,检测波长291 nm,柱温25℃,理论塔板数以落新妇苷计不得低于5 000.用毛细血管通透性试验比较不同断面颜色药的抗炎作用.结果:在选定的色谱条件下,落新妇苷在0.003 379 ～4.004 μg呈良好线性关系.加样回收实验加样80％,100％,120％,平均回收率分别为100.1％,101.9％,99.3％.断面白色土茯苓中落新妇苷质量分数为0.19％ ～2.46％,断面红色土茯苓中落新妇苷质量分数为2.10％ ～ 5.92％.药效学实验结果表明,断面白色土茯苓抗炎抑制率为32％,断面红色土茯苓抗炎抑制率仅为21％.结论:红、白2种断面土茯苓中落新妇苷的含量及抗炎作用均存在较大差异,土茯苓中落新妇苷的含量高低与其抗炎作用的强弱不呈正相关.     

不同断面颜色土茯苓UPLC特征图谱的多模式识别和灰色关联分析

目的 测定不同断面颜色土茯苓UPLC特征图谱,结合不同模式分析方法探究不同颜色土茯苓的质量差异。方法 采用回流提取法制备样品,建立UPLC特征图谱;运用相似度评价、灰色关联度分析、化学模式识别法等对断面类白色和红棕色的土茯苓进行基于特征图谱的质量分析。结果 建立了断面类白色、红棕色土茯苓特征图谱共有模式,确定了8个共有峰,并指认2、3、4、5、6号峰分别为新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷,相似度结果分别为0.948～0.999,灰色关联度(grey relation analysis,GRA)结果显示,红棕色土茯苓的质量优于类白色土茯苓,聚类分析(clustering analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)可将2种样品大致区分为两类,4种分析方法结果基本一致。结论 基于特征图谱的灰色关联度分析和化学模式识别研究,为不同规格土茯苓的质量对比评价和质量控制提供了基础研究资料。     

落新妇苷固体分散体的制备及理化鉴别

目的:制备落新妇苷(从土茯苓中萃取)固体分散体,并对其进行物相鉴别。方法:以PVPK30-吐温80为联合载体,采用溶剂法制备落新妇苷固体分散体,利用体外溶出度、溶解度、油水分配系数、显微观察、X-射线衍射、差热分析研究固体分散体的性质。结果:固体分散体能显著增加落新妇苷的溶解度和溶出速率,显著改变油/水分配系数,显微观察、X-射线衍射、差热分析研究表明落新妇苷在固体分散体中以分子状态、微晶状态分散。结论:固体分散体均能显著提高落新妇苷的体外溶出度及亲脂性,提示将落新妇苷制备成固体分散体可以促进药物的体内吸收。     

微波协助提取在中药饮片含量测定中的应用(3)——微波法与药典法测定土茯苓中落新妇苷含量比较

目的:建立微波协助提取法提取土茯苓中有效成分落新妇苷含量测定方法,比较微波协助提取法与药典法提取落新妇苷优势。方法:采用Dikma Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%冰醋酸水溶液(39∶61),检测波长291 nm,柱温30℃,流速1 mL.min-1。结果:微波提取时间10 min,提取温度60℃,提取溶剂60%乙醇。落新妇苷在0.04～0.8μg呈良好线性关系(r=0.999 9)。平均回收率99.80%(n=6)。结论:微波提取法较药典法提取落新妇苷更简便快速、结果准确,为一种符合环保绿色理念的含量测定方法,可用于检测土茯苓饮片中有效成分落新妇苷含量。     

黄酮类化合物的药物代谢研究进展

黄酮类化合物是食物和传统中药中所含的一类重要的天然植物成分。大多数黄酮具有很强的还原活性故在体内易被氧化代谢,该过程通常由CYP1A酶家族参与。此外,某些甲氧基黄酮在体内还可进行脱甲基代谢;黄酮类化合物的分子结构中往往含有1个或多个酚羟基,易和葡萄糖醛酸、硫酸或谷胱甘肽等结合,生成水溶性较大的化合物排出体外;天然黄酮类化合物多以苷类形式存在,口服后易被肠道菌群产生的水解酶代谢为苷元再吸收入血。不少黄酮类化合物对CYP酶有较强的抑制作用,该作用是某些黄酮类化合物预防和抑制肿瘤的重要机制之一。该文总结了黄酮类化合物药物代谢的特点,并对黄酮类化合物和CYP酶的代谢相互作用进行了综述。     

土茯苓及落新妇苷抗炎、镇痛、利尿作用研究

目的:探讨土茯苓及其有效成分落新妇苷除湿利关节作用.方法:采用利尿试验、炎症及疼痛模型进行药效学研究.结果:土茯苓时二甲苯所致小鼠耳肿胀、蛋清及角叉菜胶所致小鼠足肿胀均有明显抑制作用;落新妇苷能明显对抗尿酸钠所致大鼠痛风性关节炎,明显增加大鼠尿量,对醋酸所致小鼠扭体反应及热板引起的小鼠足痛有对抗作用.结论:土茯苓具有抗炎作用,落新妇苷具有利尿与镇痛作用.     

清开灵注射液及其主要成分黄芩苷和栀子苷对人肝微粒体CYP450酶6种亚型的体外抑制作用研究

 目的 研究清开灵注射液及其主要成分黄芩苷和栀子苷对人肝微粒体CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的体外抑制作用。方法 采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）同时测定对乙酰氨基酚、6α-羟基紫杉醇、4-羟基双氯芬酸、4-羟基美芬妥英、右啡烷、1-羟基咪达唑仑和6β-羟基睾酮,分别代表CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的活性;清开灵注射液、黄芩苷、栀子苷和7种混合探针底物在人肝微粒体中共同孵育,并计算其IC₅₀值表示对CYP450酶的抑制程度。结果 在人肝微粒体体外孵育体系中,清开灵注射液对CYP1A2的IC₅₀值为0.6%,对其他亚型的IC₅₀值从1.1%到6.0%;黄芩苷和栀子苷对CYP450酶6种亚型的IC₅₀值均大于100 μmol·L-1。结论 在正常剂量下,清开灵注射液对人肝微粒体CYP1A2可能有抑制作用,对人肝微粒体CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4无明显抑制作用;黄芩苷和栀子苷对CYP450酶6种亚型均无抑制作用。     

表小檗碱体外大鼠肝微粒体孵育代谢产物鉴定及对CYP2D6酶活性的抑制作用

表小檗碱是黄连中一种主要的异喹啉类生物碱,具有多种重要的药理活性。该实验利用体外大鼠肝微粒体孵育体系,采用LC-MS/MS分析鉴定表小檗碱体外大鼠肝微粒体(RLM)共孵育后的Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物,采用cocktail探针药物法,通过同时测定美托洛尔、氨苯砜、非那西丁、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲的含量变化,评价不同浓度表小檗碱对大鼠肝微粒体CYP2D6,CYP3A4,CYP1A2,CYP2E1,CYP2C9亚型活性的影响。结果表明,表小檗碱在大鼠肝脏可发生Ⅰ相和Ⅱ相代谢,从表小檗碱的大鼠体外肝微粒体温孵体系中鉴定出2个Ⅰ相代谢产物和3个Ⅱ相代谢产物;表小檗碱对肝脏CYP2D6酶呈显著抑制作用,半数抑制浓度IC50为35.22μmol·L-1,而对CYP3A4,CYP1A2,CYP2E1,CYP2C9酶的活性没有明显的影响,提示表小檗碱可能存在基于CYP2D6酶的药物相互作用。该研究可为合理开发利用表小檗碱提供实验依据。     

RP-HPLC同时测定金刚藤4个黄酮类成分含量

目的:建立PR-HPLC同时测定金刚藤中落新妇苷、新异落新妇苷、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷、黄杞苷4个黄酮类成分的含量。方法:Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.04%磷酸水溶液,检测波长290 nm,流速0.7mL·min-1;分别采用外标测定法(以落新妇苷、新异落新妇苷、槲皮素-3-O-α-L-Rha、黄杞苷为对照品),一测多评法(以落新妇苷为内标),测定金刚藤中4个黄酮类化合物的含量。结果:外标法测定4个黄酮类成分在标准曲线范围内均呈现良好线性关系(r>0.999 9);平均加样回收率分别为:落新妇苷100.8%、新异落新妇苷100.3%、槲皮素-3-O-α-L-Rha101.4%、黄杞苷101.4%,RSD分别为1.8%,2.0%,1.4%,1.6%。一测多评法,新异落新妇苷、槲皮素-3-O-α-L-Rha、黄杞苷相对落新妇苷对照品的校正因子f分别为0.726,0.264,0.801,RSD分别为0.62%,0.18%,0.66%。两种方法测得的4个黄酮化合物含量相对偏差无显著差异。结论:本实验建立HPLC外标法同时测定金刚藤中4个黄酮化合物含量简便、准确。同时以落新妇苷对照品为内标的一测多评法测得金刚藤中4个黄酮化合物的含量与外标法没有显著性差异,可替代外标法用于金刚藤的质量分析,为全面评价金刚藤药材的质量提供了依据。     

一测多评法测定贵州产切面红色土茯苓中3种活性成分的含量

目的:建立贵州产切面红色土茯苓中5-O-咖啡酰基莽草酸、黄杞苷及落新妇苷的一测多评分析方法,并验证该方法的可靠性和准确性。方法:以落新妇苷为内参物,通过方法学考察,建立贵州产切面红色土茯苓中5-O-咖啡酰基莽草酸、黄杞苷对落新妇苷的相对校正因子,根据建立的相对校正因子计算22批药材中5-O-咖啡酰基莽草酸、黄杞苷的含量,并比较外标工作曲线法、外标一点法与一测多评法的结果,验证一测多评法的准确性和科学性。结果:建立的5-O-咖啡酰基莽草酸、黄杞苷相对于落新妇苷的相对校正因子重复性和耐用性良好;一测多评法计算的22批贵州产切面红色土茯苓药材样品中5-O-咖啡酰基莽草酸、黄杞苷含量与外标工作曲线法、外标一点法的含量测定结果无明显差异(RSD4.0%);样品含量分析结果表明样品中5-O-咖啡酰基莽草酸、黄杞苷和落新妇苷的含量差异较大,分别为0.106 3%~2.692%,0.031 29%~0.677 1%,0.581 2%~4.897%。结论:建立的一测多评法准确可靠,可用于贵州产切面红色土茯苓的多成分质量评价。     

落新妇苷固体分散体的处方工艺及稳定性研究

目的 采用固体分散技术,提高落新妇苷的溶解度及体外溶出速率,并对影响落新妇苷固体分散体质量稳定性的因素进行研究.方法 对固体分散体制备方法、不同的载体、药物与载体间不同比例进行了考察.采用HPLC法检测落新妇苷含量,考察温度、湿度及光照对自制落新妇苷固体分散体的影响.结果 落新妇苷固体分散体能显著改善落新妇苷的溶出效果和溶解度,高温能降低落新妇苷固体分散体中落新妇苷的含量,而强光、湿度未影响落新妇苷固体分散体中落新妇苷的含量.结论 落新妇苷-吐温80-PVP K30比例为1:1.5:3,采用溶剂法制备落新妇苷固体分散体,自制落新妇苷固体分散体可常温保存.     

银屑灵计算机系统药理学研究

目的 运用化学信息学和系统生物学技术对银屑灵5种主要化学成分（绿原酸、芍药苷、异秦皮啶、阿魏酸、落新妇苷）的生理活性进行预测。方法 采用GeneGo公司Metadrug软件研究银屑灵主要化学成分的靶标与可能的分子作用机制。结果 绿原酸、芍药苷、阿魏酸和落新妇苷的预测靶标与银屑病的发病机制没有直接关系;异秦皮啶的预测靶标环氧合酶-2(Cyclooxygenae-2,COX-2)和5-脂加氧酶(Lipoxygenase,5-LOX)是炎症反应的关键酶。落新妇苷的预测靶标ABCG2与细胞的药物分子转运有关。结论 在银屑灵5种主要化学成分中,异秦皮啶与银屑病的发病机理相关,可能是活性成分;落新妇苷与细胞的药物分子转运有关,可能是辅助成分,其他3种成分可能是无效成分。     

应用大鼠肝微粒体筛选对细胞色素P4502D6有抑制作用的中药

目的从17种中药(单体、提取物和注射液)中快速筛选出对细胞色素P4502D6(CYP2D6)亚型有抑制作用的中药,建立高通量筛选对CYP2D6有抑制作用中药的技术平台。方法取大鼠空白肝微粒体,分别加入17种中药,HPLC法测定大鼠肝微粒体中CYP2D6的探针药物右美沙芬(DM)的代谢率,通过代谢率降低的现象初步筛选出能抑制肝微粒体中CYP2D6代谢的药物。结果槲皮素、黄芩苷、厚朴提取物、清开灵注射液、盐酸川芎嗪注射液可明显降低DM的代谢率(P<0.01)。结论初步筛选出槲皮素、黄芩苷、厚朴提取物、清开灵注射液、盐酸川芎嗪注射液这5种中药可抑制肝微粒体CYP2D6酶活性。此方法可作为高通量筛选对CYP2D6活性有抑制作用中药的技术平台。     

土茯苓降血尿酸乙醇提取物的提取工艺研究

目的:筛选土茯苓降血尿酸乙醇提取物的最佳提取工艺。方法:采用正交试验设计,以土茯苓所含落新妇苷为指标,考察乙醇浓度、提取时间、提取次数和乙醇用量的4种因素对提取结果的影响。落新妇苷和血尿酸含量均采用HPLC法测定。结果:提取次数、提取时间和乙醇浓度对以落新妇苷为指标的提取率都有显著的影响。结论:土茯苓降血尿酸乙醇提取物的最佳工艺是7倍药材量的90%乙醇提取2次,每次2.0h。该提取工艺合理、可行。     

银屑灵与土茯苓中落新妇苷大鼠体内的 药代动力学比较

目的:建立大鼠体内落新妇苷的SPE-HPLC分析方法,通过复方银屑灵与单味土茯苓中落新妇苷药代动力学参数的比较,探讨配伍对落新妇苷大鼠体内药代动力学行为的影响。方法:雄性SD大鼠分别灌胃银屑灵、土茯苓提取物后,于不同时间眼眶静脉丛采血,固相萃取(SPE)法处理。采用反相高效液相色谱法,以甲醇-乙腈-0.05%甲酸为流动相梯度洗脱;Phenomenex C18色谱柱,柱温24℃,流速0.8 mL.min-1。结果:落新妇苷在0.266～53.1 mg.L-1线性关系良好(r=0.996);提取回收率为79.0%～89.1%;用非隔室模型估算药物动力学参数t1/2,Cmax,AUC0-t,AUC0-∞,MRT,各参数具有统计学意义。结论:该法可用于落新妇苷的药代动力学研究;配伍可提高落新妇苷在大鼠体内的生物利用度。     

高效液相色谱法测定土茯苓中落新妇苷、阿魏酸、白藜芦醇含量

目的:确立土茯苓药材中阿魏酸、落新妇苷、白藜芦醇三种指标成分的含量。方法:应用高效液相色谱法(HPLC)测定,色谱条件为ODS-C18色谱柱(5μm,150x4.6mm),流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液(18:82),流速1.0mL/min,测定波长290nm。结果 :阿魏酸、落新妇苷、白藜芦醇分别在0.02088~0.1044ug、0.4284~2.142ug、0.0432~0.216ug范围内线性关系良好;样品中阿魏酸、落新妇苷、白藜芦醇评价含量分别为0.05964mg/g、0.01455mg/g、0.01839mg/g。结论:该方法操作简单、准确,可作为土茯苓质量控制方法。