BMP9和VEGF联合诱导小鼠间充质干细胞成骨分化的体外研究

目的:探讨重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)共感染对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响。方法:将重组腺病毒介导的BMP9和VEGF分5组感染小鼠间充质干细胞C3H10T1/2,Ad-BMP9组、Ad-VEGF组、AdVEGF+Ad-BMP9组、空载体腺病毒组和空白组,感染7 d后,real-time PCR检测BMP9和VEGF的m RNA水平,real-time PCR检测成骨指标骨钙蛋白(osteocalcin,OC)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的m RNA水平,Western blot检测OPN蛋白的表达,各组细胞行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的定量检测、ALP染色和钙盐沉积的检测。结果:BMP9和VEGF在Ad-VEGF+Ad-BMP9组高效共表达,OC、OPG、OPN m RNA水平和OPN蛋白水平在Ad-BMP9组和Ad-VEGF+Ad-BMP9组的表达明显高于其他各组(P﹤0.05),且在Ad-VEGF+Ad-BMP9组表达最高(P﹤0.05)。Ad-VEGF+AdBMP9组的ALP活性、ALP染色和钙盐沉积明显高于其他各组(P﹤0.05)。结论:联合VEGF可明显增强BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化能力。     

过表达NICD通过下调基因JunB的表达抑制BMP9

目的：研究Notch信号通路在骨形态发生蛋白9（bone morphogenetic protein 9,BMP9）诱导小鼠间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化过程中的作用及其机制。方法：将细胞分为5组：空白组（Blank,n=3）,BMP9处理组（BMP9,n=3）,空白质粒对照组（BMP9+Control,n=3）,过表达Notch1胞内段质粒（Notch1 intracellular domain,NICD）处理组（BMP9+NICD,n=3）,DAPT处理组（BMP+DAPT,n=3）。通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色和钙盐染色分别验证过表达NICD对成骨分化早晚期情况的影响。进一步采用定量逆转录PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-RCR）和Western blot检测基因NICD、Hey1及成骨相关基因Smad-1/5/8、p-Smad-1/5/8、OPN、Runx2、OCN、JunB的表达。结果：早期ALP活性及染色结果显示,NICD组较Control组能显著抑制C3H10T1/2细胞成骨分化过程中ALP的形成[5 d：（33 167.66±2 018.45） vs. （146 451.00±14 889.67）,P=0.000;7 d：（58 981.33±4 724.70） vs. （89 588.66±5 928.32）,P=0.000],γ-分泌酶抑制剂（N-[N-（3,5-difluorophen-acetyl）-L-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl ester,DAPT）完全抑制Notch通路时得到相同的结果[5 d：（44 812.66±4 174.94） vs. （146 451.00±14 889.67）,P=0.000;7 d：（64 622.93±4 724.70） vs. （89 588.66±5 928.32）,P=0.000]。茜素红S染色结果显示,NCID抑制钙盐结节的形成,而DAPT阻断Notch通路明显促进钙盐结节形成。qRT-PCR结果表明,NCID组中NICD及靶基因Hey1的表达较Control组明显增加[（3.90±0.02） vs. （0.35±0.01）,P=0.000;（19.79±0.01） vs. （11.80±0.02）,P=0.000],Western blot得到相同结果[（1.32±0.01） vs. （0.19±0.01）,P=0.000],且NICD明显抑制成骨分化相关基因JunB、Runx2、OCN、OPN等的表达[（0.10±0.01） vs. （0.53±0.01）,P=0.000;（0.18±0.01） vs. （0.30±0.02）,P=0.000;（0.36±0.01） vs. （0.62±0.02）,P=0.000;（0.07±0.01） vs. （0.48±0.01）,P=0.000],而转录因子Smad-1/5/8、p-Smad-1/5/8的表达不受影响[（0.74±0.02） vs. （0.73±0.03）,P=0.000;（0.63±0.01） vs. （0.58±0.04）,P=0.000],DAPT阻断Notch通路后上述相关基因的表达明显增加。结论：本实验结果首次证明,NICD激活Notch通路对BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化的抑制作用可能是通过抑制JunB基因发挥作用,而非调控BMP9/Smad（bonemorphogenetic protein 9/drosophila mothers against decapentaplegic）信号通路。     

不同时期外源性清蛋白输入对ARDS小鼠肺血管通透性的影响

目的研究急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠液体复苏时给予外源性清蛋白对肺血管通透性和含水量的影响。方法 144只昆明种小鼠,随机分为正常对照组和致伤组,致伤组分为未治疗组、体积分数0.1清蛋白治疗组、体积分数0.2清蛋白治疗组。采用脂多糖(LPS)15mg/kg腹腔注射制备小鼠模型,应用改良伊文思蓝渗出法测定模型制备后4、8、16、24h各组肺组织伊文思蓝渗出量及肺湿质量/干质量(W/D)比值的变化。结果各致伤组小鼠各时间点肺组织伊文思蓝渗出量与正常对照组比较差异均有显著性(F=2 124.232～8 642.934,q=64.601～176.626,P<0.05)。各致伤组小鼠各时间点肺W/D比值与正常对照组比较,差异均有显著性(F=32.434～173.547,q=9.601～27.651,P<0.05)。与未治疗组和体积分数0.1清蛋白治疗组比较,体积分数0.2清蛋白治疗组肺W/D比值明显减小(q=2.865～9.897,P<0.01)。结论体积分数0.2清蛋白能降低ARDS小鼠早期肺含水量,不增加肺血管通透性,有助于ARDS早期的治疗。     

异丙酚预处理对ARDS大鼠多器官Gq/11蛋白表达的影响及其保护作用的研究

目的探讨异丙酚预处理对急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)大鼠多器官Gq/11蛋白表达的影响及其保护作用。方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为油酸组、预处理组和对照组。油酸组由大鼠尾静脉注射油酸0.2 ml/kg(2 min内)复制ARDS模型。预处理组经左颈静脉输注异丙酚80 mg.kg-1.h-1,30 min后再以相同方式注射油酸。对照组从尾静脉注射同剂量的生理盐水。测定各组大鼠平均动脉压(MABP)、血气、血浆和各器官乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)含量。免疫印迹法检测各器官Gq/11蛋白含量。结果油酸组和预处理组的pH、PaO2较对照组下降(P<0.05)。与对照组相比,油酸组血浆与肺、脑、心、肾、肝、小肠以及预处理组心、肾、小肠LDH活性明显升高(P<0.05)。预处理组血浆、肺、脑、心、肾、肝LDH活性较油酸组降低(P<0.05)。与对照组相比,油酸组血浆、肺、脑、心、肾、肝、小肠以及预处理组血浆、心、肾MDA含量明显升高(P<0.05)。预处理组血浆、肺、脑、心、肾、肝、小肠MDA含量较油酸组降低(P<0.05)。与对照组相比,油酸组和预处理组血浆、肺脏ACE活性明显降低(P<0.05),而肾脏、小肠ACE活性升高(P<0.05)。与油酸组比较,预处理组血浆ACE活性升高(P<0.05),肺脏、小肠ACE活性降低(P<0.05)。油酸组肺、脑、心、肾、肝、小肠以及预处理组肺、脑、心、肾、小肠中Gαq/11蛋白表达较对照组明显升高(P<0.05)。与油酸组比较,预处理组肺、脑、肾、肝中的Gαq/11蛋白表达有所降低(P<0.05),心、小肠的变化无明显差异(P>0.05)。结论异丙酚预处理能减轻ARDS时多器官损伤程度,其抑制Gq/11蛋白高表达变化可能是其保护途径之一。     

低温对内毒素性ARDS大鼠肺脂质过氧化的影响

目的　探讨低温对大鼠内毒素性急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)肺脂质过氧化的影响。方法　采用大鼠腹腔注射内毒素 (LPS ,1mg·kg- 1 ) ,16h后再气管内滴注LPS(3mg·kg- 1 )建立ARDS模型。 2 4只雄性SD大鼠被随机分为 3组 :对照组 (C组 )、ARDS组 (A组 )、低温组 (H组 )。ARDS后 3h处死动物 ,检测肺组织中丙二醛 (MDA)含量和超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果　 3组各时间点平均动脉压 (MAP)、中心静脉压 (CVP)相比无统计学差异 (P >0 .0 5 )。A组氧合指数 (PaO2 FiO2 )在ARDS时及ARDS后 1、2、3h与C组相比显著下降 (P <0 .0 1)。A组与C组相比大鼠肺组织中MDA含量明显增高、SOD活性显著下降 (P <0 .0 5 ) ;而H组与A组相比 ,大鼠肺组织中MDA含量明显降低、SOD活性显著升高 (P <0 .0 5 ) ,但与C组相比无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论　低温可减轻内毒素性ARDS大鼠肺组织脂质过氧化。     

体外循环术后ARDS的肺保护性通气治疗

目的:探讨体外循环术后急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的早期诊断和呼吸机"肺保护性"通气治疗.方法:手术病人分成传统机械呼吸 终末正压通气(positive end expiratory pressure,PEEP)组(13例)和呼吸机"肺保护性"通气组(21例).回顾分析两组病人体外循环术后ARDS的诊治过程.结果:传统机械通气 PEEP组带机时间(7.2±3.6)d,死亡8例,病死率61.5%;呼吸机"肺保护性"通气组带机时间(4.8±2.1)d,死亡5例,病死率23.8%,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:早期诊断和及时治疗是该病治疗的关键,呼吸机"肺保护性"通气治疗ARDS比传统机械呼吸 PEEP效果更优越,同时积极处理原发损伤和预防各种并发症也很重要.     

血浆ESM-1对脓毒症ARDS发生预测价值的研究

目的 探讨血浆内皮细胞特异性分子-1（endothelial cell specific molecule-1, ESM-1）对脓毒症性急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)发生的预测价值。方法 本研究共纳入符合脓毒症诊断标准患者54例,根据在72h内是否并发ARDS将患者分为非ARDS组（n=42例）与ARDS组（n=12例）。分别检测入组第1、2、3、7天患者血浆ESM-1、白细胞（white blood cell, WBC）、C反应蛋白（C-reactive protein, CRP）、白介素6（interleukin 6, IL-6）、降钙素原（procalcitonin, PCT）水平,并计算氧和指数（oxygenation index, OI）。结果 入组第1天的ARDS组患者血浆ESM-1浓度水平明显低于非ARDS组（t=2.778,P=0.009）。血浆ESM-1浓度与OI相关性好。经Logistic回归分析,入组第1天的血浆ESM-1与CRP、IL-6为预测脓毒症患者ARDS发生的独立危险因素,ESM-1的AUC为0.750,cut-off为5.865ng/mL,CRP的AUC为0.736,IL-6的AUC为0.736。结论 第1天的血浆ESM-1与CRP、IL-6为脓毒症患者ARDS发生的独立危险因素,血浆ESM-1作为脓毒症ARDS的预测标记物,有较好的价值。     

BMP4蛋白及其受体在不同发育期大鼠胃肠道的表达分布

目的 观察骨形态发生蛋白4(BMP4)及其受体BMPR1B在不同发育阶段大鼠胃肠道的表达分布,探讨BMP4可能对不同发育阶段大鼠胃肠功能维持及肠动力产生的调控作用.方法 采用免疫荧光双标检测BMP4及其受体BMPR1B在8周龄大鼠胃肠道全层的分布特点.采用Western blot检测BMP4及其受体BMPR1B在5日龄...     

BMP6在乳腺癌组织的表达及意义

目的 探讨骨形态发生蛋白6(bone morphogenetic proteins,BMP6)在乳腺癌组织的表达及与临床病理特征的关系。方法 应用实时荧光定量RT-PCR方法检测BMP6 mRNA在36例配对乳腺癌组织及癌旁组织中的表达情况;免疫组织化学染色方法检测BMP6蛋白在80例乳腺癌组织中的表达,并结合组织临床病理资料进行统计分析。结果 实时荧光定量RT-PCR结果显示,BMP6 mRNA在乳腺癌组织中的表达水平低于相对的癌旁组织（P <0.01）。BMP6 mRNA在雌激素受体阳性(ER+)乳腺癌组织中的表达高于ER－乳腺癌组织,同时BMP6 mRNA表达随乳腺肿瘤分化程度的增高而降低（P <0.01）。免疫组化染色结果显示,BMP6蛋白在不同ER、孕激素受体(progestogen receptor,PR)表达、增殖细胞核蛋白Ki-67表达指数及病理分级间的差异有统计学意义（P <0.05）,在不同乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、人表皮因子受体2(Her2)表达状况以及乳腺癌分子亚型间的差异无统计学意义（P >0.05）。结论 BMP6分子在乳腺癌组织的低表达与乳腺癌的发生、发展有关,提示BMP6有可能成为鉴别乳腺良、恶性病变的重要分子指标,对乳腺癌的内分泌治疗等具有重要意义。     

红景天对OSAHS相关的PAH患者心功能的辅助治疗作用

目的观察红景天胶囊治疗后,阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(Obstructive sleep apnea syndrome,OSAHS)相关的肺动脉高压(Pulmonary hypertension,PAH)患者心功能及睡眠相关指标等方面的改变。方法选择2016年7月~2017年4月60例我院住院患者,经多导睡眠图(PSG)或睡眠初筛检查及心脏彩超检查确诊为OSAHS合并有PAH,随机分为治疗组及对照组各30例。对照组患者给予OSAHS相关治疗,治疗组在对照组的基础上给予红景天胶囊口服,治疗时间为4周。4周后观察患者肥胖指数(Body mass index,BMI)、睡眠监测的呼吸暂停低通气指数(Apnea hypopned index,AHI)及脑钠肽(Brain natriuretic peptide,BNP)指标改变情况。结果治疗后治疗组BNP为(246.9±98.6)pg/m L,对照组为(679.8±108.8)pg/m L,差异有统计学意义(P0.05)。而治疗后,两组患者的BMI值分别为(28.3±8.0)kg/m~2和(28.8±9.8)kg/m~2,AHI分别为(27.0±7.6)次/h和(25.7±7.2)次/h,差异无统计学意义(P0.05)。结论红景天胶囊可以通过改善血流变指标,改善心脏对缺氧的耐受性,使心功能好转。     

低氧状态下红景天通过上调缺氧诱导因子1α促进人脐静脉内皮细胞肾上腺髓质素及其受体的表达

 目的  探讨低氧状态下红景天对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)、降钙素受体样受体(calcitonin receptor-like receptor,CRLR) 、缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1 alpha,HIF-1α)表达的影响以及这一过程中HIF-1α的调控作用。方法HUVECs常规培养并设立正常氧、低氧对照组和低氧红景天组。CCK8法观察低氧状态不同浓度红景天干预不同时间的促细胞增殖作用;实时定量PCR和Western blot法测定ADM、CRLR、HIF-1α基因表达的情况;通过小干扰RNA方法敲低HIF-1α基因,实时定量PCR和Western blot法检测ADM、CRLR基因表达的变化。结果 红景天促进低氧状态下HUVECs增殖,促进低氧状态下内皮细胞ADM、CRLR以及HIF-1α的表达,HIF-1α siRNA可以显著抑制红景天对ADM及CRLR表达的促进作用。结论 低氧状态下红景天通过上调HIF-1α促进HUVECs ADM及其受体CRLR的表达。     

红景天对应激小鼠睾丸NO、NOS和总抗氧化能力的干预作用

【目的】研究红景天提取物对应激雄性小鼠睾丸一氧化氮（NO）、一氧化氮合成酶（NOS）及总抗氧化能力（T-AOC）的作用。【方法】束缚应激诱发小鼠睾丸过氧化损伤,灌胃给与3个剂量的红景天提取物（2,1,0．5g／kg）,1次／d,15d后,断头处死,摘取睾丸匀浆,分别测定睾丸组织中NO含量、NOS活性及T-AOC。【结果】应激模型组小鼠睾丸组织中NO、NOS均有明显的升高（P〈0．01）,T-AOC显著降低（P〈0．001）。高、中、低剂量的红景天提取物可以显著升高应激小鼠睾丸组织的T-AOC,且中高、中剂量的红景天提取物能逆转因应激引起的小鼠睾丸组织NO含量和NOS活性的升高（P〈0．05）,但各组小鼠睾丸重量未见明显变化。【结论】红景天提取物对束缚诱发的小鼠睾丸过氧化状态具有一定的改善作用。     

异丙酚预处理对Gq蛋白在ARDS时肝脏表达的影响

目的观察异丙酚预处理后Gq蛋白在ARDS时肝脏中的动态变化,以探讨其对肝脏的保护作用。方法油酸法复制大鼠ARDS模型,实验组经异丙酚预处理,免疫印迹法检测肝脏Gq蛋白的含量。结果异丙酚预处理后肝脏Gq蛋白的表达显著下降。结论异丙酚预处理能降低Gq蛋白在ARDS时肝脏的表达,对肝脏有一定的保护作用。     

急性呼吸窘迫综合征患者右心室功能不全的研究

目的　研究急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)患者右心室功能的变化规律 ,为临床治疗提供理论依据。方法　选择 1996年 5月～ 2 0 0 1年 5月我科加强监护病房 (ICU)收治的ARDS患者 3 0例 ,分为存活组 (A组 ,2 1例 )和死亡组 (B组 ,9例 ) ,对照组为 18例右心室功能正常志愿者。采用REF 1TM 右心功能监测仪和HP监护仪 ,结合超声心动图观察右心室射血分数 (RVEF)、右心室室壁应力 (RVWS)、充盈早期最大流速 (E)与晚期最大流速 (A)之比 (E/A)、充盈早期最大流速减速时间 (Dte)、动脉压 (AP)、平均肺动脉压 (mPAP)、肺血管阻力指数(PVRI)、中心静脉压 (CVP)、右心室舒张末期容积指数 (RVEDVI)、右心室收缩末期容积指数 (RVESVI)、心排指数 (CI)、肺动脉嵌压 (PAWP)、肺毛细血管楔压 (PCWP)、右心室每搏作功指数 (RVSWI)和右心室作功指数(RCWI)的变化。结果　A组患者RVEF、E/A、Dte、RCWI和RVSWI分别为 ( 0 .3 6± 0 .0 8) %、0 .68± 0 .0 9、( 142 .5 6± 16.2 5 )s、( 2 9.81± 6.5 3 ) g/m2 和 ( 1.5 9± 0 .44 ) g·m-1·m-2 ,均较对照组显著下降 (P均 <0 .0 5 ) ;B组患者分别为 ( 0 .2 8± 0 .0 7) %、0 .61± 0 .0 7、( 12 9.3 7± 18.95 )s、( 2 7.2 4± 5 .92 ) g/m2 和 ( 1.3 8± 0 .41) g·m-1·m-2 ,均较     

ARDS16例诊治分析

目的：探讨急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的诊断和治疗。方法：对16例ARDS患者的临床资料进行回顾性分析。结果：16例患者,治愈12例,死亡4例。结论：一旦考虑ARDS诊断,应立即给予以机械通气为中心的综合治疗。     

急性呼吸窘迫综合征40例治疗体会

目的:探讨急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的治疗方法,达到提高抢救成功率的目的。方法:对40例患者的诊断和治疗进行回顾性总结。结果:40例ARDS患者,死亡16例,治愈24例。结论:ARDS治疗难度仍较大,早期诊断可以降低死亡率,治疗是一个综合性治疗,其中原发疾病的处理、机械通气、液体管理、糖皮质激素的使用尤为重要。     

红景天提取物对小鼠记忆获得性障碍的改善作用

目的:研究红景天(Rhodiola rosea L.)各提取部位在体外对胆碱酯酶的抑制活力,及其对阿尔茨海默症(AD)模型动物脑内胆碱酯酶水平和空间识别障碍与学习记忆能力的影响.方法:通过体外Ellman比色法检测其胆碱酯酶抑制活力;用东莨菪碱致小鼠记忆获得性障碍模型,以行为学实验(水迷宫法)、大脑皮层乙酰胆碱酯酶活性为指标,检测红景天提取物的促智作用.结果:红景天提取物(尤其是HJ-5)能有效抑制胆碱酯酶活性,并能显著降低AD模型动物大脑皮层内胆碱酯酶活力,改善模型动物的学习记忆能力.结论:红景天对东莨菪碱所引起的小鼠学习记忆能力障碍有改善作用,其作用机制可能与抑制胆碱酯酶活性有关.     

肺及肺循环在ARDS临床诊疗中的研究进展

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是以非心源性肺水肿、低氧血症及弥漫性肺实变为主要特征的一类复杂综合征,可由多种原因引起,临床病死率高。目前,ARDS尚缺乏循证医学证据支持的疗效较确切的治疗方法。通过一系列相关的试验研究发现肺及肺循环改变、血流动力学改变、全身炎性反应等在ARDS的发生、发展及诊疗中有着重要的作用。     

BMP9诱导可逆永生化小鼠瓣膜间质细胞成骨能力研究

目的：建立具有快速增殖能力的可逆永生化主动脉瓣膜间质细胞系。方法：体视显微镜下利用弹簧剪夹取瓣膜组织,胶原酶消化后加入逆转录永生化病毒,利用免疫荧光鉴定细胞是否属于间质细胞,显微镜观察细胞形态,结晶紫、CCK-8和流式细胞周期技术检测细胞增殖能力,碱性磷酸酶染色和茜素红钙盐沉积实验检测细胞成骨能力,q-PCR及Western blot检测细胞成骨标志物。结果：经光镜观察和免疫荧光鉴定,成功取到瓣膜间质细胞。加入永生化病毒后,经光镜观察和免疫荧光确认瓣膜间质细胞未发生表型改变,且在永生化的细胞中能够检测到大量SV40T(P<0.001)。结晶紫染色、CCK-8(P<0.001)和流式细胞周期结果提示永生化后的瓣膜间质细胞增殖速度变快。加入成骨诱导因子骨形态发生蛋白-9(bone morphogenetic protein9,BMP9)后永生化瓣膜间质细胞表现出较好的成骨能力,多数成骨标志物在分子层面的RNA和蛋白水平明显升高。去永生化后瓣膜间质细胞形态无明显改变,q-PCR结果显示SV40T明显降低（P<0.001）,细胞增殖能力明显下降,且细胞周期被阻滞在G0/G1期...