lncRNAENST00000484679促进肝癌索拉菲尼耐药细胞迁移侵袭的机制研究

目的探讨差异表达的长链非编码RNA（lncRNA）对肝癌索拉菲尼耐药细胞迁移、侵袭的影响。方法采用ln-cRNA芯片微阵列分析肝癌索拉菲尼耐药细胞Huh7SR和亲本细胞Huh7中的lncRNA,筛选出差异表达lncRNA;荧光定量PCR法进一步验证差异表达的lncRNA。将转染后的肝癌索拉菲尼耐药细胞Huh7SR分为ENST00000484679-小干扰RNA（siRNA）组和阴性对照（siNC）组。ENST00000484679-siRNA组加入lncRNAENST00000484679-siRNA转染,siNC组加入无关序列NC-siRNA转染。Transwell实验观察肝癌索拉菲尼耐药细胞株迁移侵袭能力的变化;Westernblot法检测肝癌索拉菲尼耐药细胞株的上皮-间质转化（EMT）标记蛋白钙黏蛋白N（N-cadherin）、钙黏蛋白E（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达水平。结果芯片筛选出lncRNAENST00000484679在肝癌索拉菲尼耐药细胞株中高表达,荧光定量PCR进一步验证了Huh7SR细胞ENST00000484679mRNA表达水平高于Huh7细胞（P＜0.01）。ENST00000484679-siRNA组ENST00000484679mRNA表达水平低于siNC组,迁移细胞数和侵袭细胞数均低于siNC组,N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平均低于siNC组,E-cadherin蛋白表达水平高于siNC组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论lncRNAENST00000484679促进肝癌索拉菲尼耐药细胞的迁移和侵袭能力可能与EMT有关。     

UBQLN1诱导上皮-间质转化促进食管鳞癌细胞的迁移和侵袭

目的分析泛醌蛋白1（UBQLN1）及上皮-间质转化（EMT）标志分子在食管鳞癌（ESCC）组织中的表达及其相关性,探讨UBQLN1对ESCC细胞迁移和侵袭的影响。方法 RT-qPCR和western blot检测ESCC癌组织及对应癌旁组织中UBQLN1的mRNA和蛋白表达;RT-qPCR检测ESCC癌组织及对应癌旁组织中EMT标志分子（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）的mRNA表达;构建UBQLN1 siRNA和过表达重组质粒,分别转染ESCC细胞系EC9706、HET-1A和TE-1;采用划痕试验和Transwell试验检测各细胞的迁移和侵袭能力;RT-qPCR和western blot检测各组EC9706细胞中EMT标志分子的mRNA和蛋白表达。结果 ESCC癌组织中UBQLN1的mRNA和蛋白表达均高于癌旁组织（均P<0.05）;ESCC癌组织中E-cadherin mRNA的表达低于癌旁组织（P<0.05）,而N-cadherin和Vimentin mRNA的表达均高于癌旁组织（均P<0.05）;ESCC组织中UBQLN1与E-cadherin的mRNA表达呈负相关（r=-0.517 3,P<0.001）,而与N-cadherin和Vimentin的mRNA表达呈正相关（r=0.780 3、0.685 6,P<0.001）。下调UBQLN1表达增加EC9706、HET-1A和TE-1细胞中E-cadherin的表达,降低N-cadherin和Vimentin的表达,抑制其迁移和侵袭,而过表达UBQLN1下调E-cadherin的表达,上调N-cadherin和Vimentin的表达,促进细胞迁移和侵袭。结论 UBQLN1能诱导EMT,促进ESCC细胞的迁移和侵袭。     

FCN3调控肝细胞癌细胞增殖、迁移和上皮间质化

目的：探讨纤维胶凝蛋白3(FCN3)在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及对HCC细胞增殖、迁移和上皮-间质转化（EMT）的影响。方法：首先利用生物信息学技术分析FCN3在HCC中的表达及与患者预后的关系;然后通过qRT-PCR、免疫组化进一步检测FCN3在HCC细胞和组织中的表达。构建过表达FCN3的Huh7稳转细胞株,通过CCK-8实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测FCN3对HCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响;通过Western Blot实验检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达水平;通过裸鼠皮下成瘤实验,在体内探究FCN3对HCC增殖的影响。结果：生物信息学分析表明FCN3在HCC组织中的表达水平显著低于癌旁组织,高表达FCN3的HCC患者具有更长的总体生存时间。qRT-PCR表明,与正常肝细胞相比,HCC细胞株Huh-7、Hep3B和SNU-449中FCN3 mRNA表达水平显著降低。免疫组化表明,FCN3在HCC组织中染色阳性细胞的比例显著低于癌旁组织。选取FCN3相对表达量最低的Huh-7细胞株进行慢病毒稳转FCN3基因,得到稳定OE-H...     

LncRNA SNHG3对宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探究长链非编码RNA（lncRNA）小核仁RNA宿主基因3（SNHG3）对人宫颈癌细胞系SiHa增殖、迁移及侵袭的影响。方法 利用 GEO 数据库芯片分析 lncRNA SNHG3 在正常宫颈组织和宫颈癌样本中的表达;通过实时定量 PCR 检测LncRNA SNHG3、上皮-间质转化标志物 N-cadherin、Snail、Vimentin 和 E-cadherin 基因表达水平;通过 Western blot 检测 N-cadherin、Snail、Vimentin和E-cadherin蛋白表达水平;在SiHa细胞中转染siRNA干扰片段来敲低lncRNA SNHG3,并采用qRT-PCR验证转染效率;通过CCK8实验检测细胞增殖能力,划痕愈合实验检测细胞横向迁移能力,Transwell小室实验检测细胞纵向迁移及侵袭能力。结果 LncRNA SNHG3在宫颈癌组织及细胞系中高表达;敲低lncRNA SNHG3后,明显抑制SiHa细胞的增殖能力（P<0.001）、迁移能力（P<0.01）和侵袭能力（P<0.001）;qRT-PCR和Western blot结果显示敲低lncRNA SNHG3可下调N-cadherin、Snail和Vimentin表达水平（P<0.001）,同时上调E-cadherin表达水平（P<0.001）。结论 LncRNA SNHG3可通过激活EMT通路促进宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移及侵袭能力。     

姜黄素对肝细胞癌耐药细胞上皮间质转化的影响及分子机制研究

目的探讨姜黄素对肝细胞癌耐药细胞HepG2/ADM上皮-间质转化（EMT）的影响及分子机制。方法取人肝细胞癌耐药细胞HepG2/ADM,以预实验确定的姜黄素合适浓度20μmol/L处理细胞。采用噻唑蓝溴化四唑法、划痕实验、Transwell实验分别检测姜黄素对细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,Westernblot法检测姜黄素对EMT标志物及NF-κB/Snail通路相关蛋白表达的影响。结果相较于HepG2/ADM组,HepG2/ADM+姜黄素组细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱（均P＜0.05）,E-cadherin蛋白表达上调（P＜0.05）,N-cadherin、Vimentin、NF-κBp65、Snail蛋白表达均明显下调（均P＜0.05）。HepG2/ADM细胞过表达Snail后,由姜黄素诱导的E-cadherin表达上调、N-cadherin和Vimentin表达下调均被逆转（均P＜0.05）,细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显增强（均P＜0.05）。结论姜黄素能够抑制HepG2/ADM细胞增殖、迁移和侵袭能力,并通过NF-κB/Snail通路抑制细胞的EMT过程。     

长期索拉菲尼暴露促进Huh7肝癌细胞上皮间质变的实验研究

目的探讨索拉菲尼耐药肝癌细胞发生上皮间质变(EMT)及侵袭、转移能力增强的机制。方法通过药物连续诱导人肝癌细胞株Huh7建立索拉菲尼耐药肝癌细胞株Huh7R,显微镜下观察细胞形态学变化;CCK-8细胞增殖试验检测Huh7R细胞增殖能力;荧光定量PCR检测ABC家族耐药基因ABCB1、ABCC1、ABCG2及EMT相关调控锌指蛋白转录因子Snail、Slug基因表达水平;Westernblot检测耐药蛋白ABCG2,EMT标记分子E-cadherin、Vimentin及N-cadherin,转录因子Snail、Slug蛋白表达水平;Transwell小室侵袭试验检测Huh7R细胞迁移、侵袭能力。结果Huh7R细胞呈细长形,伴纤维状突起,形态学上符合EMT改变;CCK-8细胞增殖试验显示在索拉菲尼作用下,Huh7R细胞生存率高于Huh7细胞;荧光定量PCR结果显示,Huh7R细胞ABCB1、ABCC1、ABCG2及Snail、Slug基因表达水平均高于Huh7细胞（均P＜0.05）;Westernblot显示,Huh7R细胞上皮标记蛋白E-cadherin表达水平低于Huh7细胞（P＜0.05）,而间质标记蛋白Vimenti、N-cadherin及Snail、Slug蛋白表达水平均高于Huh7细胞（均P＜0.05）;Transwell小室侵袭试验显示Huh7R细胞迁移、侵袭能力均较Huh7细胞增强。结论长期低剂量索拉菲尼暴露会促进肝癌细胞Snail和Slug表达,诱导肿瘤细胞发生EMT,增强其侵袭、转移能力。     

SHP-2对人绒毛膜滋养层细胞增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响

目的 探讨Src同源物2磷酸酶2（SHP-2）对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。方法 用定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）检测SHP-2在子痫前期（PE）组胎盘组织中的表达水平。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、克隆形成实验、划痕闭合和Transwell分析检测敲低或过表达SHP-2对人绒毛膜滋养细胞（HTR-8/SVneo）增殖、集落形成、迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测侵袭相关蛋白的表达和磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）的磷酸化水平。结果 HP-2在PE组胚胎组织中低表达。敲低SHP-2显著抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、集落形成、侵袭和迁移,此外,基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin)的表达显著下调,E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达显著上调,PI3K和AKT的磷酸化水平显著降低,然而,过表达SHP-2具有相反的效果。结论 SHP-2在PE胎盘组织中低表达,SHP-2过表达可促进滋养层细胞的增殖、侵袭和迁移能力,提示SHP-2可能是临床治疗PE的潜在靶点     

CTHRC1在结直肠癌中的表达及作用机制

目的：检测胶原三股螺旋重叠蛋白（CTHRC1）在结直肠癌组织及细胞中的表达,探讨CTHRC1对结直肠癌细胞生物学特性的影响和作用机制。方法应用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测CTHRC1在结直肠癌组织和5株结直肠癌细胞的表达;将靶向作用于CTHRC1的shRNA和NC转染进LOVO细胞;CCK-8、Transwell、平板克隆检测细胞的增殖、迁移、侵袭、克隆形成能力。Western blotting检测转染后CTHRC1、ERK1/2、P-ERK1/2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、β-catenin表达的变化。结果与正常黏膜组织相比,20例癌组织中的CTHRC1 mRNA的平均表达量为0.0411±0.054,显著高于正常黏膜组织P=0.016,蛋白水平的结果与之一致;同时,CTHRC1在SW620和LOVO细胞里的表达（mRNA水平和蛋白水平）均显著高于HT29细胞株;较之对照组,CTHRC1敲低组抑制了LOVO细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力,差异均具有统计学意义P<0.05。当CTHRC1在mRNA和蛋白水平的表达均被明显抑制时,总ERK1/2在保持基本不变的的前提下,P-ERK1/2明显降低,EMT出现逆转（即MET,E-cadherin升高,N-cadherin、Vimentin、β-catenin降低）。结论 CTHRC1在结直肠癌组织及高转移潜能的人结直肠癌细胞株SW620和LOVO中高表达。敲低CTHRC1抑制了结直肠癌细胞株LOVO的增殖、迁移、侵袭、克隆形成能力。CTHRC1通过增强ERK1/2的磷酸化所介导的EMT促进结直肠癌的侵袭转移。     

ZNF384调控GCLM对肝细胞癌转移的机制研究

目的 探讨ZNF384通过调控GCLM对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）增殖和转移的影响及具体调控机制。方法 分别在HCC细胞系HepG2和HuH7中转染si-ZNF384和pcDNA-GCLM。Western blot检测ZNF384和GCLM蛋白表达以及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）标志物Ncadherin、Vimentin、E-cadherin的表达,CCK-8检测细胞增殖活力,Transwell检测细胞迁移。双荧光素酶报告基因实验验证ZNF384和GCLM结合关系。荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）技术检测ZNF384和GCLM在HepG2细胞中的定位。结果 ZNF384和GCLM在HepG2和HuH7细胞中表达升高（P <0.05）,敲降ZNF384抑制HepG2和HuH7细胞增殖（P <0.001）、迁移（P <0.001）以及间质标志物N-cadherin(P <0.01)和Vimentin(...     

长链非编码RNA SNHG6在结肠癌中的表达及其生物学意义

目的 探索核仁小分子RNA宿主基因6(SNHG6)在结肠癌组织中的表达特点,以及其对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 采用荧光定量PCR检测25例患者结肠癌组织及对应癌旁组织中SNHG6 mRNA的表达水平.将LoVo细胞分成Blank组、NC组、siRNA-1组和siRNA-2组,其中Blank组不作任何处理,另外3组依次使用Lipofectamine 2000转染NC-siRNA、SNHG6-siRNA-1及SNHG6-siRNA-2;通过CCK-8实验测定细胞增殖能力,通过Transwell实验测定细胞迁移及侵袭能力;通过荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测上皮-间质转化(EMT)标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Snail的mRNA及蛋白表达水平.结果 患者结肠癌组织SNHG6 mRNA表达水平高于对应癌旁组织(U=138.0,P=0.000 7).siRNA-1组和siRNA-2组细胞增殖活性较Blank组明显下降(P＜0.05);siRNA-1组和siRNA-2组细胞的迁移和侵袭数量较Blank组明显减少(P＜0.05);siR-NA-1组、siRNA-2组与Blank组比较,E-Cadherin mRAN及蛋白表达上调,N-Cadherin、Vimentin及SnailmRNA及蛋白表达下调,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SNHG6在结肠癌组织中高表达,敲低SNHG6表达能够抑制结肠癌细胞EMT进程,进而抑制细胞的增殖、迁移及侵袭能力.     

ORP8对结直肠癌DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 观察和分析氧化固醇结合蛋白相关蛋白8(ORP8)蛋白对人结直肠癌DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探究其影响机制.方法 通过在结直肠癌DLD-1细胞中转染ORP8表达质粒或特异性沉默siRNA上调和下调ORP8的表达,采用CCK-8、Transwell实验检测干扰或过表达ORP8对DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot检测了 ORP8对DLD-1细胞细胞外蛋白调节激酶(ERK1/2)的总蛋白及其磷酸化(p-ERK1/2)水平和上皮-间质转化(EMT)相关分子标志物蛋白上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达的影响.结果 干扰DLD-1细胞ORP8表达,细胞增殖、迁移和侵袭能力均升高(P＜0.01),EMT相关分子标志物中上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平下降,间质标志物Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平升高,ERK1/2蛋白的磷酸化水平也升高;相反,过表达ORP8,细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05),上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平升高,间质标志物Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平降低,p-ERK1/2水平也降低.结论 ORP8蛋白能够抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与阻断EMT和抑制ERK1/2磷酸化有关.     

环状RNA MYLK对子宫内膜癌细胞生长 凋亡和侵袭及上皮间质转换的影响

【摘要】 目的 探讨环状RNA MYLK干扰对子宫内膜癌HEC 1A细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化（EMT）的作用及对小鼠异种移植瘤生长的影响。 方法 MYLK shRNAs转染HEC 1A细胞,构建MYLK干扰细胞模型。将转染后的HEC-1A细胞皮下注射裸鼠,建立移植瘤裸鼠模型。体外实验分为对照组、shRNA-NC组、circMYLK-shRNA1组、circMYLK-shRNA2组和circMYLK-shRNA3组,小鼠实验取shRNA-NC组和circMYLK-shRNA1组。RT-qPCR检测MLYK的表达并筛选出干扰效率高的干扰链;克隆形成实验检测细胞克隆形成情况;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭;Western Blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达;免疫组化检测肿瘤组织的Ki67和Vimentin的表达。 结果 三种shRNAs干扰MYLK,shRNA1干扰效率最佳,用于后续实验。与对照组比较,circMYLK- shRNA1组的克隆形成率显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,侵袭细胞数量显著减少（P＜0.05）,E-cadherin的表达显著上调（P＜0.05）,N-cadherin和Vimentin的表达显著下调（P＜0.05）。体内实验中,与shRNA-NC 组比较,circMYLK- shRNA1组肿瘤体积显著减小（P＜0.05）,肿瘤重量显著减轻（P＜0.05）,组织MYLK的表达显著下调（P＜0.05）,组织Ki67和Vimentin的表达显著下调（P＜0.05）。 结论 MYLK干扰抑制了子宫内膜癌HEC-1A细胞的增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化,也阻碍了小鼠异种移植瘤的生长。     

高表达的eEF-2K基因沉默对肝细胞癌增殖、侵袭和凋亡的影响

目的：检测eEF-2K基因在肝细胞癌（HCC）组织内的表达并分析其表达水平对HCC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法：用RT-qPCR及Western blot方法检测了64例肝癌组织及癌旁肝组织、五种HCC细胞系LM3, Hep3B, Huh7, 97H, HepG2及人正常肝细胞系 LO2中eEF-2K基因在mRNA及蛋白水平的表达。用eEF-2K 特异性siRNA沉默LM3及Hep3B细胞性中eEF-2K基因后，经qPCR检测确认。随后用CCK-8，Transwell方法与流式细胞技术检测eEF-2K基因沉默对增殖、侵袭与凋亡的影响。结果：相较癌旁组织，HCC组织内eEF-2K mRNA与蛋白表达显著上调（P＜0.05）；与正常人肝细胞系LO2相比，肝癌细胞系LM3, Hep3B, 97H, HepG2, Huh7中的eEF-2K mRNA和蛋白表达分别升高（Ｐ＜0.05）。在LM3及Hep3B细胞系中用特异性siRNA沉默eEF-2K后，与非特异性siRNA对照组相比，细胞增殖活性和侵袭能力显著降低（P＜0.05），凋亡率显著升高（P＜0.05）。TCGA数据库分析结果表明eEF-2K高表达与肝癌预后不良相关（P＜0.05）。结论：eEF-2K蛋白在肝癌组织和细胞中高表达且与预后不良相关；沉默eEF-2K后肝癌细胞增殖和侵袭能力降低并诱发凋亡，提示eEF-2K可用作HCC潜在的预后标志物和治疗靶点。     

CCN5在子宫内膜异位症患者组织的表达及其作用机制

目的 分析CCN5在卵巢子宫内膜异位囊肿组织中的表达情况,探究其对子宫内膜基质细胞（HESCs）增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 收集并比较卵巢子宫内膜异位症患者组织与正常对照组在位子宫内膜组织中CCN5的表达水平;利用重组腺病毒Ad-CCN5构建过表达CCN5的人子宫内膜基质细胞;采用si-RNA构建敲低CCN5的人子宫内膜基质细胞。利用CCK-8实验检测不同表达水平CCN5对HESCs细胞增殖能力的影响;划痕实验、Transwell小室侵袭实验检测不同表达水平CCN5对HESCs细胞迁移与侵袭能力的影响;Western blot检测不同处理组 HESCs中上皮-间充质转化（EMT）标记物 E-cadherin、N-cadherin,snail-1和vimentin的表达水平。结果 卵巢子宫内膜异位组织中CCN5的表达水平较正常对照组在位子宫内膜显著降低（P<0.01）;过表达CCN5可以抑制HESCs的增殖、迁徙及侵袭能力;EMT标记物E-cadherin表达升高,N-cadherin、Snail-1 和Vimentin表达降低,EMT受到显著抑制（P<0.01）。而敲低CCN5的表达可以显著增强HESCs的增殖、迁移及侵袭（P<0.01）,降低E-cadherin表达,升高N-cadherin、Snail-1和Vimentin表达,促进HESCs发生EMT转化。结论 CCN5在卵巢子宫内膜异位组织中的表达水平显著降低,可能通过调控HESCs的增殖、迁移与侵袭能力及影响EMT,在卵巢子宫内膜异位症的发生发展中发挥重要作用。     

敲低ACTL8基因对子宫内膜癌细胞增殖与迁移的影响

目的探讨采用携带shRNA特异序列的载体转染子宫内膜癌细胞敲低肌动蛋白样蛋白8(ACTL8)基因对细胞增殖、侵袭迁移能力的影响及其机制。方法选取人子宫内膜癌Ishikawa细胞株进行实验研究,以携带shRNA特异序列的载体及空载质粒分别转染Ishikawa细胞株,形成敲低ACTL8基因的shACTL8组和以空载质粒转染的对照组。荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测两组细胞中ACTL8 mRNA表达,Western blot法检测两组细胞ACTL8蛋白表达,Transwell迁移和侵袭实验分析Ishikawa细胞侵袭和迁移能力,CCK8细胞增殖实验及平板克隆实验检测细胞的增殖情况,Western blot法检测两组细胞的E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、P21蛋白的表达情况。结果shACTL8组的ACTL8 mRNA、ACTL8蛋白相对表达强度均低于对照组(P＜0.05);shACTL8组的Ishikawa细胞侵袭、迁移水平均低于对照组(P＜0.05);在细胞培养后1天、2天、3天,shACTL8组的Ishikawa细胞数目测定OD值显著低于对照组(P＜0.05);平板克隆实验培养3天,可见shACTL8组培养皿中细胞生长数目明显少于对照组(P＜0.05);shACTL8组E-cadherin蛋白、P21蛋白表达强度高于对照组(P＜0.05);shACTL8组N-cadherin蛋白、MMP-9蛋白表达强度低于对照组(P＜0.05)。结论敲低ACTL8基因抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭。     

miR-122通过AXL/HIF-1α通路抑制子宫内膜癌细胞增殖和上皮间质转化

【摘要】 目的 探讨miR-122对子宫内膜癌细胞（RL-952）增殖、上皮间质转化(EMT)及受体酪氨酸激酶(AXL)/缺氧诱导因-1α(HIF-1α)信号通路的影响。方法 体外培养人子宫内膜癌细胞株RL-952,将细胞分为空白对照组(仅用培养基)、阴性对照组(转染miR-122 NC)、miR-122 mimics组(转染miR-122 mimics),采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组细胞miR-122水平,利用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白印迹（WB）法检测AXL、HIF-1α蛋白以及EMT相关蛋白E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin的表达变化。结果 与空白对照组、阴性对照组相比,miR-122 mimics组RL-952细胞转染后48小时细胞增殖能力、细胞迁移数、细胞侵袭数、AXL、HIF-1α、N-cadherin和Vimentin蛋白表达均显著下降（P＜0.05）,E-cadherin、α-catenin蛋白表达、细胞凋亡率均明显升高（P＜0.05）,空白对照组与阴性对照组比较,细胞增殖能力、细胞迁移数、细胞侵袭数、细胞凋亡率、细胞AXL、HIF-1α、E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论 过表达miR-122可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化,促进细胞凋亡,可能是通过抑制AXL/HIF-1α通路而实现。     

非小细胞肺癌组织中肥胖基因FTO的表达水平及其对肿瘤细胞血管生成的影响

目的 观察脂肪和肥胖相关蛋白（FTO）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其对非小细胞肺癌（NSCLC）血管生成的作用并探讨机制。方法 RT-qPCR检测45个NSCLC组织和癌旁组织中FTO的表达水平,蛋白免疫印迹观察组织中FTO的蛋白表达,分为癌旁和NSCLC组。使用shRNA敲低FTO,分为sh-NC和sh-FTO组。RT-qPCR检测5个肺癌细胞系和气道上皮细胞中FTO的表达水平,蛋白免疫印迹观察细胞中FTO的蛋白表达。细胞计数试剂盒8（CCK-8）和荷瘤实验分别检测FTO对NSCLC细胞在体外和体内增殖能力的影响。Tube形成实验观察小管形成的长度。结果 FTO在45例NSCLC组织中的mRNA和蛋白表达高于癌旁组织（均P＜0.05）。FTO的体外肺癌细胞表达同样高于气道上皮细胞（均P＜0.05）。敲低FTO（sh-FTO）抑制NSCLC细胞在体内和体外的增殖（均P＜0.05）,且敲低FTO抑制NSCLC细胞的小管形成长度（P＜0.05）。结论 FTO在NSCLC组织中的表达高于癌旁组织。低表达FTO通过抑制增殖和血管新生影响NSCLC的发生和发展。     

过表达Cx32对肝细胞癌细胞Huh7增殖、迁移、侵袭能力的影响及其机制

目的：揭示缝隙连接蛋白32(connexin 32, Cx32)对肝细胞癌（heptocellular carcinoma, HCC）细胞Huh7增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法：首先，利用生物信息学技术分析Cx32在癌组织与正常肝组织中的表达差异及其与HCC重要临床病理特征之间的关系；其次，在细胞水平检测Cx32的表达在4种HCC细胞株与正常肝脏上皮细胞株中的差异，构建稳定过表达Cx32的Huh7细胞株，并采用MTT法、细胞划痕实验和Transwell实验检测过表达Cx32对Huh7细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响；最后，使用蛋白质免疫印迹法（westernblot）和免疫荧光法（immunofluorescence,IF）检测上皮-间质转化（epithelialmesenchymal transition, EMT）标志物表达水平的变化。结果：生信分析显示，相较于正常肝组织，Cx32mRNA和蛋白质表达水平在HCC组织中降低，且mRNA表达水平随着HCC患者T分期、组织学分级及临床分期的进展而降低（P<0.05）。细胞实验结果示，Cx32蛋白表达在不同HCC细胞株中均呈现一...     

Runx3对人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨Runt域转录因子3（Runx3）对人骨肉瘤细胞143B细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法构建Ruxn3的RNA干扰（Ad-siRunx3）和过表达Runx3（Ad-Runx3）的重组腺病毒质粒;MTT和克隆形成实验检测143B细胞的增殖;划痕实验和Transwell小室实验分别检测143B细胞的迁移和侵袭;RT-qPCR和Western blot检测上皮-间质转化（EMT）关键分子E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail的表达;Western blot检测PI3K/AKT和丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信号通路关键分子的表达。结果下调Runx3表达可促进143B细胞的增殖、迁移和侵袭,增强N-cadherin、Vimentin和Snail表达,但抑制E-cadherin表达;过表达Runx3则可抑制143B细胞增殖、迁移和侵袭,抑制N-cadherin、Vimentin和Snail表达,但促进E-cadherin表达;同时,下调Runx3表达可增加AKT、p38和ERK1/2磷酸化水平,而过表达Runx3则能够降低AKT、p38和ERK1/2的磷酸化水平。结论 Runx3能抑制143B细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与Runx3阻止EMT进程、抑制AKT信号以及p38和ERK1/2 MAPKs信号途径有关。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白2对非小细胞肺癌细胞株H1299的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响

目的：观察肿瘤坏死因子α诱导蛋白2（TNF-α-induced protein 2,TNFAIP2）在非小细胞肺癌（non-small cell lung can－cer,NSCLC）中的表达以及对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法：RT-PCR检测NSCLC中TNFAIP2 mRNA表达情况;免疫组化检测NSCLC中TNFAIP2蛋白表达情况。构建TNFAIP2基因短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）干扰慢病毒载体（shRNA-TNFAIP2）和阴性对照慢病毒载体（shRNA-NC）分别感染H1299细胞后采用RT-PCR和Western blot检测感染效率。用Transwell实验检测细胞的迁移、侵袭能力;用CCK-8检测细胞的增殖能力;用流式细胞术检测细胞的凋亡能力;用Western blot检测细胞蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达的变化。结果：TNFAIP2 mRNA和蛋白质在NSCLC癌组织中的表达明显高于癌旁组织中的表达。慢病毒下调TNFAIP2表达后,shRNA-TNFAIP2组细胞迁移数（170±11）较shRNA-NC组（329±31）明显减少（P=0.001）;侵袭细胞数（75±10）较shRNA-NC组（135±8）明显减少（P=0.001）。CCK-8结果提示,shRNA-TNFAIP2组的吸光度值明显低于shRNA-NC组（P=0.000）;流式细胞术结果显示,shRNA-TNFAIP2组的凋亡率（18.730±0.490）%明显高于shRNA-NC组（6.570±0.870）%（P=0.000）;Western blot结果显示,shRNA-TNFAIP2组较shRNA-NC组细胞蛋白N-cadherin、Vimentin表达降低,E-cadherin表达增加。结论：TNFAIP2在NSCLC中存在高表达,下调能够抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,逆转上皮间质转化。