神经生长因子对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的:研究神经生长因子(NGF)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导鼠肾上腺嗜咯瘤细胞(PC12)凋亡的作用,从而探讨NGF对阿尔茨海默病的治疗作用。方法:以PC12细胞为神经元的细胞模型,将Aβ和NGF+Aβ分别加入培养的PC12细胞中,采用MTT法观察细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态改变,hochest33258观察细胞核变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较两组间差异。结果:Aβ组细胞存活率随作用时间延长而下降(P<0.01),胞体变小,轴突退化变形,可见特征性的凋亡细胞核,并检测到典型的凋亡峰;而NGF+Aβ组细胞存活率明显增高,凋亡率明显减少(P<0.01)。结论:一定浓度的Aβ2535能诱导PC12细胞凋亡,NGF对Aβ诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用。     

中药更年春含药血清对β淀粉样蛋白诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的：研究大鼠更年春含药血清对β淀粉样蛋白25-35（amyloid beta protein 25-35,Aβ_（25-35））导致的大鼠肾嗜铬细胞瘤细胞（pheochromocytoma cell,PC12）损伤的抗凋亡作用。方法：通过对去势雌性大鼠灌服中药更年春制备含药血清,细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）检测不同浓度含药血清对PC12细胞存活率的影响;不同浓度Aβ_（25-35）作用于PC12细胞,建立阿尔茨海默病细胞模型,CCK-8法检测含药血清对损伤细胞的保护作用,流式细胞术检测PC12细胞在Aβ_（25-35）和含药血清共同培养下的细胞凋亡率;蛋白印迹法检测各组细胞Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）的蛋白表达情况。结果：与空白血清相比,20%含药血清培养PC12细胞24 h或48 h后可促进其增殖（P〈0.05）。Aβ_（25-35）对PC12细胞有细胞毒性,并呈剂量依赖性地降低细胞存活率（P〈0.05）,导致细胞凋亡。CCK-8法和流式细胞术检测均显示,20%更年春含药血清对Aβ_（25-35）诱导的PC12细胞损伤有保护作用（P〈0.05）,其作用效果类似于阳性对照药神经生长因子。蛋白印迹法检测显示,与模型组比较,含药血清组Bax和Bcl-2蛋白表达的比值和caspase-3蛋白表达均降低。结论：更年春含药血清可提高Aβ25-35损伤的PC12细胞的存活率,并减少PC12细胞凋亡。其机制可能与调控Bcl-2家族蛋白的表达而实现抗凋亡作用有关。     

β淀粉样蛋白致PC-12细胞损伤的研究

目的 对β淀粉样蛋白致PC-12细胞的损伤进行初步研究.方法 体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC-12细胞,以不同浓度β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导PC-12细胞后,MTT法观察细胞活力,TUNEL法测细胞凋亡率,并用P-tau抗体检测异常磷酸化tau蛋白的表达.结果 Aβ25-35作用于PC-12细胞后,细胞活力逐渐下降,并呈时间和剂量依赖性,同时荧光显微镜观察到10μmol/L的Aβ25-35作用于PC-12细胞24h,TUNEL阳性细胞实验组多于对照组,有统计学意义,P-tau阳性细胞实验组多于对照组,有统计学意义.结论 Aβ25-35使PC-12细胞产生凋亡和tau蛋白异常磷酸化的形态学损伤.     

优选细辛醚组合对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的筛选石菖蒲有效成分α-细辛醚、β-细辛醚、丁香酚保护PC12细胞免受β-淀粉样蛋白毒性损伤作用的优化组合及其剂量。方法采用正交实验设计,以细胞存活率和凋亡率为指标,筛选3种成分联合作用的优化比例,并探讨此组合的优化剂量。结果优化组合为:α-细辛醚为0μM、β-细辛醚为10μM、丁香酚为3μM,较β-细辛醚、丁香酚单独发挥作用的所需浓度低(仅为各自单个成分剂量的1/5、1/20,但已能发挥显著作用)。结论石菖蒲有效成分的适当配比,能更有效地保护PC12细胞免受β淀粉样蛋白毒性损伤。     

当归芍药散对β-淀粉样蛋白致PC12细胞损伤的保护作用

目的:观察当归芍药散(Danggui Shaoyao San,DSS)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:制备含DSS脑脊液(CSF-DSS)与含DSS人工脑脊液(ACSF-DSS),应用Aβ25-35诱导PC12细胞损伤,MTT法测定细胞活力和比色法测定细胞内过氧化氢酶(CAT)活性。结果:10μmol/L Aβ25-35可显著降低PC12细胞活力及CAT活性;5 mg/L ACSF-DSS和0.93 g/kg-0.5%、1.86 g/kg-1.0%CSF-DSS均可显著提高细胞活力与CAT活性。结论:DSS可能通过提高CAT活性而对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤起到保护作用。     

β-淀粉样蛋白在老年痴呆症发生发展中的作用及其机制

0 引言 阿尔茨海默病(Alzheimers disease, AD)亦称老年性痴呆症,是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,主要临床表现为进行性记忆力减退、认知功能障碍以及人格改变等症状. 现在许多国家包括我国的人均预期寿命达到70岁. 由于老年痴呆与增龄有密切关系,随着人类寿命的普遍延长,老年痴呆的发病率也大大增加. 因此,对于AD发病机理和防治的研究近些年来已经成为国内外关注的热点. AD的主要病理特征有,在大脑皮层和海马出现β-淀粉样蛋白(amyloid-β protein, Aβ)聚集形成的老年斑(SP),Tau蛋白异常聚集形成的神经纤维缠结(NFT)以及脑皮层和海马区神经细胞减少. 随着研究的逐渐深入,越来越多的证据表明Aβ在AD的发生、发展中起到主导的作用. Aβ的神经毒性涉及到复杂的分子机制主要包括破坏细胞内的Ca2 稳态,促进自由基的形成,降低K 通道的功能,增强致炎细胞因子引起的炎症反应等. 因此,把现阶段对Aβ的研究成果进行综合分析和概述将对今后AD的防治有很大帮助.     

原儿茶酸对β淀粉样蛋白_(1-42)诱导PC12细胞毒性的保护作用及机制

【目的】探讨原儿茶酸(PCA)在阿尔茨海默病(AD)细胞模型中的保护作用及机制。【方法】采用免疫荧光法鉴定β淀粉样蛋白(Aβ_(1-42))纤维聚体,将Aβ_(1-42)作用于PC12细胞,并于不同时间点(0、3、6、9、12、24 h)观察细胞形态,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率以确定造模条件,并用MTT法检测原儿茶酸对PC12细胞的毒性条件。采用预保护的给药方式,检测不同浓度的原儿茶酸对PC12细胞的干预作用。采用Western-blot法检测自噬相关标记蛋白Beclin1的表达水平,以探究原儿茶酸的保护作用机制。【结果】显微镜下观察到12、24 h时,Aβ_(1-42)白色团块聚集基本稳定,无明显差异,MTT检测细胞损伤率均达40%,由此确定12 h和24 h均可做为AD的造模条件。原儿茶酸在200~800μmol/L浓度作用24 h的条件下,细胞活力显著上升(P0.01)。Western-blot结果显示:原儿茶酸可显著增加Beclin1的表达水平。【结论】原儿茶酸有助于改善Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞毒性,其机制可能与增加自噬水平有关。     

白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法用不同浓度的Aβ25-35处理PC12细胞,建立细胞毁损模型,然后加入不同浓度的白藜芦醇,在显微镜下观察PC12细胞形态的变化及突起生长情况。采用MTT检测技术观察PC12细胞的生长活性,采用酶标仪检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性,采用瑞士-吉姆萨染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果损伤组加入Aβ25-35,24 h后细胞形态不规整,突起出现不同程度的肿胀破裂,48 h后见不到完整的突起结构;保护组加入白藜芦醇预孵育后明显延缓突起损伤,24 h后仍能观察到比较完整的突起结构,48 h后远端发生轻微断裂。保护组细胞突起长度和D(λ)值明显大于损伤组(P<0.01),细胞凋亡数以及LDH活性明显低于损伤组(P<0.01)。结论白藜芦醇对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用。     

促红细胞生成素对β-淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的保护作用

目的探讨促红细胞生成素(Epo)对凝聚态β-淀粉样蛋白25~35片断(Aβ25-35)诱导细胞凋亡的影响。方法人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)体外传代培养,细胞进入对数生长期后进行实验。MTT比色法检测不同浓度Aβ25-35作用24 h后细胞活力变化;Hoechst 33258核染色和Western blotting法分别观察和检测20μmol/L Aβ25-35作用24 h后,细胞形态及细胞caspase-3、cleaved caspase-3水平的变化。运用同样方法检测不同浓度Epo预处理3 h,对20μmol/L Aβ25-35作用24 h所致细胞活力、细胞形态以及caspase-3和cleaved caspase-3水平改变的影响。结果结果显示不同浓度的Aβ25-35作用24 h后,SH-SY5Y细胞活力均明显下降,并呈剂量依赖性(P<0.05);10 UEpo预处理可明显抑制Aβ25-35诱导的细胞活力下降(P<0.05)。Hoechst 33258核染色发现10 UEpo预处理可明显减轻Aβ25-35诱导的细胞凋亡现象(P<0.05);Western blotting检测表明,10 U Epo可显著抑制Aβ25-35诱导的cleaved caspase-3表达增高(P<0.05)。结论Epo通过抑制Aβ25-35引起的cleaved caspase-3表达增高而对其诱导的细胞凋亡发挥保护作用。本实验为研究阿尔茨海默病的发病机制及探索新的有效治疗药物提供了重要的理论基础。     

促红细胞生成素对β-淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的保护作用

目的 探讨促红细胞生成素(Epo)对凝聚态β-淀粉样蛋白25～35片断(Aβ25-35)诱导细胞凋亡的影响.方法 人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)体外传代培养,细胞进入对数生长期后进行实验.MTT比色法检测不同浓度Aβ25-35作用24 h后细胞活力变化;Hoechst 33258核染色和Western blotting法分别观察和检测20 μmol/L Aβ25-35作用24 h后,细胞形态及细胞caspase-3、cleaved caspase-3水平的变化.运用同样方法检测不同浓度Epo预处理3 h,对20μmol/L Aβ25-35作用24 h所致细胞活力、细胞形态以及caspase-3和cleaved caspase-3水平改变的影响.结果 结果显示不同浓度的Aβ25-35作用24 h后,SH-SY5Y细胞活力均明显下降,并呈剂量依赖性(P＜0.05);10 U Epo预处理可明显抑制Aβ25-35诱导的细胞活力下降(P＜0.05).Hoechst 33258核染色发现10 U Epo预处理可明显减轻Aβ25-35诱导的细胞凋亡现象(P＜0.05);Western blotting检测表明,10 U Epo可显著抑制Aβ25-35诱导的cleaved caspase-3表达增高(P＜0.05).结论 Epo通过抑制Aβ25-35引起的cleaved caspase-3表达增高而对其诱导的细胞凋亡发挥保护作用.本实验为研究阿尔茨海默病的发病机制及探索新的有效治疗药物提供了重要的理论基础.