中药更年春含药血清对β淀粉样蛋白诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的：研究大鼠更年春含药血清对β淀粉样蛋白25-35（amyloid beta protein 25-35,Aβ_（25-35））导致的大鼠肾嗜铬细胞瘤细胞（pheochromocytoma cell,PC12）损伤的抗凋亡作用。方法：通过对去势雌性大鼠灌服中药更年春制备含药血清,细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）检测不同浓度含药血清对PC12细胞存活率的影响;不同浓度Aβ_（25-35）作用于PC12细胞,建立阿尔茨海默病细胞模型,CCK-8法检测含药血清对损伤细胞的保护作用,流式细胞术检测PC12细胞在Aβ_（25-35）和含药血清共同培养下的细胞凋亡率;蛋白印迹法检测各组细胞Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）的蛋白表达情况。结果：与空白血清相比,20%含药血清培养PC12细胞24 h或48 h后可促进其增殖（P〈0.05）。Aβ_（25-35）对PC12细胞有细胞毒性,并呈剂量依赖性地降低细胞存活率（P〈0.05）,导致细胞凋亡。CCK-8法和流式细胞术检测均显示,20%更年春含药血清对Aβ_（25-35）诱导的PC12细胞损伤有保护作用（P〈0.05）,其作用效果类似于阳性对照药神经生长因子。蛋白印迹法检测显示,与模型组比较,含药血清组Bax和Bcl-2蛋白表达的比值和caspase-3蛋白表达均降低。结论：更年春含药血清可提高Aβ25-35损伤的PC12细胞的存活率,并减少PC12细胞凋亡。其机制可能与调控Bcl-2家族蛋白的表达而实现抗凋亡作用有关。     

蜜环菌多糖含药血清对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤保护机制

目的 :探讨蜜环菌多糖含药血清对Aβ25-35诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)损伤保护的作用机制。方法 :在Aβ25-35诱导PC12细胞损伤模型的基础上加入蜜环菌多糖含药血清,采用比色法检测含药血清对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤培养液中乳酸脱氢酶的活力、丙二醛含量及超氧化物歧化酶活力的影响。结果 :不同浓度的含药血清对Aβ25-35损伤的PC12细胞的存活率有提高作用,含药血清浓度在5%时达最大值(P0.05或P0.01);5%浓度的含药血清可明显降低模型细胞培养液中LDH活力、MDA含量,提高SOD活力。结论 :蜜环菌多糖含药血清对Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能与提高细胞抗氧化能力有关。     

蜜环菌多糖含药血清对Aβ25—35诱导PC12细胞损伤保护机制

目的：探讨蜜环菌多糖含药血清对Aβ25—35诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）损伤保护的作用机制。方法：在Aβ25—35诱导PC12细胞损伤模型的基础上加入蜜环茵多糖含药血清,采用比色法检测含药血清对Aβ25—35诱导PC12细胞损伤培养液中乳酸脱氢酶的活力、丙二醛含量及超氧化物歧化酶活力的影响。结果：不同浓度的含药血清对Aβ25—35损伤的PC12细胞的存活率有提高作用,含药血清浓度在5％时达最大值（P〈0．05或P〈0．01）;5％浓度的含药血清可明显降低模型细胞培养液中LDH活力、MDA含量,提高SOD活力。结论：蜜环菌多糖含药血清对Aβ25—35损伤的PC12细胞有保护作用．机制可能与提高细胞抗氧化能力有关。     

HPLC法测定更年灵胶囊中淫羊藿苷的含量

更年灵胶囊为中西药复方制剂,由淫羊藿、女贞子、维生素B1、维生素B6、谷维素等组成.本方具有温肾益阴、调补阴阳之功效,用于妇女围绝经期综合征属阴阳两虚者.淫羊藿为方中君药,其有效成分主要为淫羊藿苷(icariin),《中华人民共和国药典》2000版一部中指出"淫羊藿"药材的质量评价指标亦为淫羊藿苷.本实验采用HPLC法对更年灵胶囊中淫羊藿苷含量测定方法进行了研究,为该中成药的质量控制提供了定量检测方法.     

二仙汤中总黄酮和淫羊藿苷的测定

二仙汤由淫羊藿、仙茅、巴戟天、当归、黄柏、知母6味中药组成，主要用于更年期综合征和骨质疏松的治疗，临床应用疗效确切。处方中淫羊藿为君药，具有补肾壮阳的功效，黄酮类成分为其主要有效成分，而淫羊藿苷为主要活性成分。淫羊藿苷的测定方法有毛细管电泳法、薄层扫描法和HPLC法。由于复方成分十分复杂，常用检测方法干扰较大。因此本实验采用紫外分光光度法和高效液相色谱法分别测定了二仙汤中总黄酮和淫羊藿苷，为复方质量控制和工艺研究提供了依据。     

仙茅-淫羊藿水提物入血成分的抗炎作用研究

目的：探究仙茅-淫羊藿水提物（EX）中入血成分的抗炎作用。方法：采用AutoDockTools软件将EX中5种入血成分（仙茅苷、淫羊藿苷、宝藿苷I、苔黑酚葡萄糖苷和朝藿定A）与靶蛋白髓细胞触发受体2(TREM2)进行分子对接;采用细胞计数试剂盒（CCK8）检测EX中5种入血成分在不同浓度下对小胶质细胞（BV2）细胞活力的影响;采用LPS刺激BV2或小鼠骨髓来源的巨噬细胞（BMDMs）及尼日利亚菌素（nigericin）刺激LPS预处理的BMDMs细胞建立炎症模型,并用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测5种入血成分对细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平的影响。结果：EX的入血成分仙茅苷、淫羊藿苷、宝藿苷I和朝藿定A与TREM2结合十分稳定,苔黑酚葡萄糖苷与TREM2结合较为稳定;仙茅苷、淫羊藿苷、宝藿苷I、朝藿定A和苔黑酚葡萄糖苷均可在一定浓度下减少BMDMs细胞产生的IL-1β水平,而仅高浓度的仙茅苷和淫羊藿苷可减少BMDMs细胞产生的TNF-α水平。结论：EX的5种入血成分均可与TREM2结合,抑制下游NF-κB、NLRP3炎症通路改善炎症,可...     

当归芍药散对β-淀粉样蛋白致PC12细胞损伤的保护作用

目的：观察当归芍药散(Danggui Shaoyao San，DSS)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的PCI2细胞损伤的保护作用。方法：制备含DSS脑脊液(CSF-DSS)与含DSS人工脑脊液(ACSF-DSS)，应用Aβ25-35诱导PC12细胞损伤，MTT法测定细胞活力和比色法测定细胞内过氧化氢酶(CAT)活性。结果：10μmol／L Aβ25-35可显著降低PC12细胞活力及CAT活性：5mg／L ACSF-DSS和0．93g／kg-0．5％、1．86g／kg-1．0％CSF-DSS均可显著提高细胞活力与CAT活性。结论：DSS可能通过提高CAT活性而对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤起到保护作用。     

中药逆转胃癌细胞多药耐药机制研究

胃癌多药耐药(MDR)是临床化疗失败的重要原因,其机制主要为激活相关信号通路诱导细胞内药物浓度降低或引起凋亡。中药有效成分单体如贝母毒乙、蟾蜍灵、粉防乙碱、芍药苷等及复方如参芪健胃汤、圣和散、二藤散对胃癌多药耐药细胞有逆转作用。     

补肾益精中药复方对内皮间质转化的影响

目的:探讨补肾益精中药复方对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的内皮间质转化的作用及机制。方法:TGF-β1诱导人脐静脉细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)构建内皮间质转化模型,分别用对照血清、补肾益精复方含药血清、黄芪甲苷、Fli1 siRNA+含药血清干预模型,显微镜检测HUVEC细胞内皮间质转化过程,实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,QPCR)法检测各组VE-cadherin、FSP1、Fli1的表达。结果:①经TGF-β1诱导后,细胞形态呈现纤维化改变,VE-cadherin表达降低,FSP1表达升高,提示内皮间质转化模型诱导成功;同时Fli1在内皮间质转化模型中为低表达。②采用Fli1 siRNA干扰设计Fli1 siRNA序列,显示Fli1 siRNA-1明显抑制Fli1 mRNA表达,同时VE-cadherin表达明显下降,FSP1表达明显上升。③黄芪甲苷组、补肾益精复方含药血清组中Fli1、VE-cadherin的表达较内皮间质转化模型组升高,FSP1表达降低,提示血管内皮间质得到改善;Fli1siRNA+含药血清组较含药血清组Fli1下降、VE-cadherin下降、FSP1上升,其改善不如单独含药血清组明显。结论:补肾益精法中药复方可改善硬皮病血管内皮间质转化,其机制可能与上调Fli1有关。     

芍药苷神经保护作用的实验研究

目的观察芍药苷(PF)的神经保护作用,为阿尔茨海默病(AD)的防治提供理论依据。方法体外培养PC12细胞,用Aβ1-40诱导α7nAChR缺失,建立AD早期细胞模型;用不同浓度(50、100和200μM)的芍药苷预处理,光镜观察细胞形态,MTT比色法测定细胞活性,MTB比色法测定细胞内Ca2+含量,免疫细胞化学法观察α7nAChR的表达情况。结果芍药苷预处理组细胞活性、α7nAChR平均灰度值(AVG)均随芍药苷浓度的增加而增加,且Aβ1-40+PF100μM组和Aβ1-40+PF200μM组增加明显(P<0.05);芍药苷预处理组细胞内Ca2+含量均降低(P<0.05)。结论芍药苷抑制细胞内Ca2+超载和Aβ1-4040的神经毒性作用,改善PC12细胞的活性,保护α7nAChR,是其防治AD的重要机制。     

Propofol may protect PC12 cells from induced apoptosis through the signaling pathway

Background There are two major pathological hallmarks of AIzheimer's disease.One is the progressive accumulation of beta-amyloid (Aβ) in the form of senile plaques; the other is hyperphosphorylated tau,causing neuronal apoptosis.Some inhalation anesthetics,such as isoflurane and desflurane,have been suggested to induce Aβ accumulation and cause AD-like neuropathogenesis.Whether intravenous anesthetics have similar effects is still unclear.We therefore set out to determine the relationship between propofol and AD-like pathogenesis.Methods PC12 cells were cultured in serum-free medium for 12 hours prior to drug treatment.Various concentrations from 5 μmol/L to 80 μmol/L of aggregated Aβ25-35 were added to determine a proper concentration for further study.After exposure to 10 μmol/L Aβ25-35 alone or with 20 μmol/L propofol for 6 hours,PC12 cell viability was determined by MTT assay.Western blotting and immunocytochemical staining were performed to observe the protein expression of the Bcl-2 family,tau phosphorylation at different sites,and tau protein kinases and phosphatases.Results Aβ25-35 induced a decrease in PC12 cell viability in a dose-dependent manner.Exposure to 10 μmol/L Aβ25-35 for 6 hours resulted in the mild cell survival,accompanied by a decline in Bcl-2,and an increase in phosphorylation of GSK-3β and tau at different sites.Compared with the Aβ25-35 group,cells treated with propofol alone showed no significant difference,while cells co-incubated with propofol and Aβ25-35 showed a significantly higher survival rate (P ＜0.01 or P ＜0.05).Tau phosphorylation at Ser396,Ser404 and Thr231 and the level of GSK-3β in PC12 cells increased after exposure to 10 μmol/L Aβ25-35.Co-incubation with propofol attenuated cellular apoptosis by inhibiting tau phosphorylation.Conclusions These data indicate that propofol may protect PC12 cells from Aβ25-35-induced apoptosis and tau hyperphosphorylation through the GSK-3β pathway,therefore it may be a safer anesthesia for AD and elderly patients.     

Aβ25-35诱导PC12细胞周期紊乱及对P53和Cyclin D1基因表达的影响

目的:探讨Aβ25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化及对P53和Cyclin D1基因表达的影响。方法:PC12细胞同步于G0期,采用终浓度为0-45μmol/L或浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,用MTT比色法分析细胞存活率;流式细胞仪检测分析细胞周期的改变;RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测P53和Cyclin D1基因的变化。结果:随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);流式细胞仪分析表明去血清培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8,16,24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P<0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);P53 mR-NA表达和P53蛋白表达降低、Cyclin D1 mRNA表达和Cyclin D1蛋白表达增高。结论:Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与下调P53的表达,上调Cyclin D1的表达有关。     

黄连素对TGF-β1诱导的肺癌A549细胞侵袭和迁移的影响

目的观察黄连素对转化生长因子（TGF）-β1诱导的肺癌A549细胞侵袭、迁移的影响。方法以肺腺癌A549细胞为研究对象,观察1.25、2.5、5、10 ng/mL TGF-β1分别在24、48 h对A549细胞形态的影响,采用划痕实验和Transwell法检测浓度下TGF-β1作用于A549细胞48 h后迁移和侵袭能力的变化,通过SRB法评价0~160 μmol/L黄连素体外对A549细胞毒活性以筛选出黄连素的安全浓度,观察安全浓度内的黄连素对TGF-β1诱导的肺癌A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果在5 ng/mL TGF-β1刺激48 h后,A549细胞株表现出明显的上皮-间充质转化形态学变化和更强的侵袭、迁移能力。10 μmol/L浓度范围内的黄连素对A549细胞无细胞毒性。与TGF-β1组相比,2.5、5、10 μmol/L黄连素可以显著抑制A549细胞的侵袭,10 μmol/L黄连素可以显著抑制A549细胞的迁移。结论黄连素对TGF-β1诱导的肺癌A549细胞的侵袭和迁移具有抑制作用。     

促红细胞生成素对β-淀粉样蛋白引起细胞损伤后坏死样凋亡的保护作用

目的探讨促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）对β-淀粉样蛋白（Aβ325—35）诱导的HT-22细胞损伤后坏死样凋亡（necroptosis）的保护作用及可能机制。方法四甲基偶氮唑蓝法（MTT）观察不同浓度的A[325—35（1-20μmol／L）作用于HT-22细胞24h,及不同浓度EPO（1—50U）预处理3h后再加入20μmol／LAβ25—3524h对HT-22细胞活力的影响;Hoechst33258核染色法观察细胞形态,蛋白免疫印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的表达。结果不同浓度的Aβ25—35作用HT-22细胞24h后均引起细胞活力的下降,且活力下降呈剂量依赖性;不同浓度的EPO对20μmol／LAβ25—35引起的细胞活力下降具有抑制作用。10μEPO可有效地抑制20μmol／LAβ25—35诱导的caspase-3的裂解片段表达增加。核染色表明EPO可抑制对细胞损伤后necroptosis。结论EPO对Aβ25—35诱导的细胞损伤后的neeroptosis具有保护作用,可能通过抑制caspase-3的裂解片段表达来实现。     

丁苯酞对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨丁苯酞(NBP)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 不同浓度的NBP(0.1、1.0、10、100 μmol/L)作用到经Aβ诱导或未经诱导的PC12细胞上,然后分别采用细胞存活率检测(MTT)及PI单染、透射电镜方法检测细胞凋亡,采用western印迹法检测Bcl-2和Cyt-C蛋白的表达,进而观察NBP对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用.结果 MTT显示不同浓度(0.1、1.0、10、100 μmol/L)NBP组细胞存活率分别为76.5%±1.1%、84.2%±1.3%、89.5%±1.3%、81.9%±1.9%,明显高于模型组(71.7%±1.4%),其中10 μmol/LNBP组最明显,差异有统计学意义(P＜0.05);流式细胞学结果显示10 μmol/L NBP组细胞凋亡率明显低于模型组(P＜0.05);电镜下模型组细胞凋亡特征明显,10 μtmol/L NBP组细胞形态接近正常;Western印迹显示:10 μmol/L NBP组Bcl-2蛋白表达增加,而模型组Bcl-2表达明显减少(P＜0.05);模型组胞质Cyt-C表达最强,而10μmol/L NBP组有较弱的Cyt-C表达(P＜0.05).结论 NBP对Aβ诱导的PC12细胞凋亡有保护作用,其机制可能和NBP增加Bcl-2蛋白水平,抑制Cyt-C从线粒体的释放有关.     

Aβ25-35对PC12细胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

目的：：观察Aβ25-35对PC12细胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法：采用10μmol/L Aβ25-35与PC12细胞共孵育48h建立阿尔茨海默病细胞模型,对照组细胞不加Aβ25-35。采用Hoechst 33258核染色法检测PC12细胞的凋亡情况,免疫细胞化学染色法检测PC12细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果：与对照组相比,实验组细胞Bcl-2的表达明显降低,细胞凋亡率、Bax蛋白的表达和Bax/Bcl-2比值明显升高(P＜0.05）。结论：Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2表达、上调Bax表达有关。     

二苯乙烯苷含药血清作用于老年性痴呆细胞模型的最佳条件筛选

目的确定二苯乙烯苷含药血清作用于老年性痴呆(AD)细胞模型的最佳条件。方法利用细胞计数、MTT方法确立β淀粉样蛋白(Aβ)25-35片段在建立AD细胞模型时的浓度及筛选二苯乙烯苷含药血清作用的最佳浓度,分别观察不同浓度血清及不同浓度Aβ25-35对AD细胞模型存活率的影响。结果各种血清以5%浓度组的细胞存活率最高。在5%血清浓度下,Aβ25-35 0μmol/L和5μmol/L浓度组中各含药血清组细胞存活率均明显高于正常大鼠血清组(P<0.05或P<0.01),但在10μmol/L Aβ25-35浓度时差异无显著性。结论选用5μmol/L Aβ25-35及5%血清浓度建立NG108-15 AD细胞模型及药效考察体系较为合适,在此条件下能客观地评价二苯乙烯苷含药血清的药效。     

Aβ诱导PC-12细胞凋亡建立阿尔茨海默病细胞模型

目的:用β-淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导PC-12细胞凋亡以建立阿尔茨海默病细胞模型。方法:体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC-12细胞,以不同浓度Aβ_(25-35)诱导并于不同时间收获细胞,应用MTT法观察细胞活力,Fura-2/AM荧光分析法检测细胞内游离Ca~(2+)浓度,Hoech-st33258及碘化丙啶复染分析细胞凋亡。结果:Aβ_(25-35)作用于PC-12细胞后,细胞活力逐渐下降,并呈时间和剂量依赖性;同时细胞内Ca~(2+)浓度显著上升;不同浓度Aβ_(25-35)作用后,PC-12细胞于不同时间出现凋亡的典型形态学特征,该时间比Ca~(2+)浓度上升约晚6-12 h。结论:Aβ_(25-35)诱导PC-12细胞活力下降、细胞内Ca~(2+)浓度上升及细胞凋亡,可作为较理想的阿尔茨海默病细胞模型。