多重耐药鲍曼不动杆菌的β内酰胺酶基因型研究

目的了解临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌β内酰胺酶基因的存在情况。方法采用MicroScan40微生物全自动鉴定系统微量肉汤稀释法测定菌株的耐药性。采用聚合酶链反应(PCR)方法检测β-内酰胺酶基因型。结果 30株鲍曼不动杆菌除对阿米卡星和左氧氟沙星耐药率分别为23.3%和30.0%外,对其他抗菌药物均达80.0%以上。检出β-内酰胺酶基因26株(86.7%),OXA-23样阳性20株(66.7%),OXA-51样阳性18株(60.0%),AMPC酶阳性18株(60.0%),TEM阳性5株(16.6%),SHV阳性4株(13.3%),PER阳性3株(10%),14株(46.6%)同时携带2种以上基因,未检出IMP、VIM、CTX-M-9,DHA、OXA-24、OXA-58。结论我院多重耐药鲍曼不动杆菌携带多种β-内酰胺酶基因,而且同时携带3种以上β-内酰胺酶基因比率高。     

70株鲍曼不动杆菌耐药性及β-内酰胺酶基因型检测

目的调查和研究南京地区70株鲍曼不动杆菌耐药性及β内酰胺酶基因型。方法用KB法测定临床分离的70株鲍曼不动杆菌对5种抗生素的耐药性,采用PCR法检测β-内酰胺酶耐药基因型。结果70株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮／舒巴坦耐药率为7．1％,头孢吡肟和头孢他啶的耐药率分别为61．4％和64．3％,头孢唑啉和头孢呋肟的耐药率均在80．0％以上;有40株菌检测到TEM型β-内酰胺酶基因,且均对头孢吡肟等抗生素耐药,2株为GES型,1株是VEB型,未检出CARB、DHA和PER基因。结论南京地区鲍曼不动杆菌以TEM型为主,其对β-内酰胺类的高耐药率与TEM型基因有直接的关系。     

肺炎克雷伯菌临床分离株产广谱和超广谱β-内酰胺酶的基因型研究

目的 了解产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性及其基因型分布特征,指导临床进行抗感染治疗,更好地控制耐药菌株的播散.方法 对38株经双纸片试验确认为ESBLs表型阳性的肺炎克雷伯菌采用纸片扩散法进行药物敏感性试验;采用PCR法对ESBLs阳性株进行TEM型、SHV型、CTX-M型、VEB型和PER型ESBL基因检测,对PCR阳性产物进行测序确定基因型别;同时采用PCR法检测整合酶基因,对PCR产物进行测序确定整合酶类别.结果 38株产ESBLs的肺炎克雷伯菌对青霉素类和头孢菌素类耐药性十分严重,对庆大霉素和复方磺胺甲嚼唑的耐药率也均＞90%,未检测到耐亚胺培南和美罗培南的菌株.38株ESBLs阳性菌株检测到3种ESBLs型,分别为TEM型、SHV型和CTX-M型,VEB型和PER型没有被检出.CTX-M型、TEM型和SHV型阳性率分别为92.1%(35/38)、84.2%(32/38)、76.3%(29/38).整合酶基因阳性率为94.7%(36/38).经测序,所有TEM型均为TEM-1广谱β内酰酶.29株SHV型阳性的PCR产物经测序证实,SHV-12有19株,SHV-11有4株,SHV-2有3株,SHV-28有2株及SHV-1有1株.35株CTX-M型中,CTX-M-14有22株,CTX-M-15有13株.同时检测到3种基因的有22株(57.9%),同时检测到2种基因的有14株(36.8%).整合酶基因PCR产物经测序为Ⅰ类整合子.结论 产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性及多重耐药性严重,Ⅰ类整合子是其多重耐药和耐药性传播的主要原因;CTX-M-14及SHV-12为肺炎克雷伯菌产ESBLs的主要基因型.     

临床分离鲍曼不动杆菌产β-内酰胺酶的研究

目的:了解临床分离鲍曼不动杆菌多重耐药株产β-内酰胺酶的情况。方法:采用K-B纸片法和梯度琼脂平板法测定细菌敏感性;鲍曼不动杆菌产β-内酰胺酶用Nitrocefin定性后,以市售试剂盒抽提质粒和染色体,PCR法扩增β-内酰胺酶基因,并对扩增产物进行基因测序和同源性比较。结果:研究所用的12株鲍曼不动杆菌均产β-内酰胺酶,对头孢菌素类高度耐药,但对碳青霉烯类和加酶头孢菌素较敏感;其中6株细菌经PCR扩增和产物序列分析表明其质粒上携带有β-内酰胺酶AmpC基因。结论:质粒介导的AmpC酶是临床分离的鲍曼不动杆菌对头孢菌素类药物产生严重耐药性的主要因素。     

天津地区呼吸道感染肠杆菌科细菌质粒介导ESBLs基因型分析

目的:研究天津地区呼吸道分离肠杆菌科细菌中产质粒介导超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株基因分布情况.方法:收集天津市胸科医院2004年临床分离产ESBLs肠杆菌科细菌,选取携带质粒菌株,提取其质粒DNA作为模板.采用聚合酶链反应(PCR)和序列分析确定ESBLs的基因型.结果:40株接合试验阳性产ESBLs菌株中TEM型、SHV型、CTX-M型阳性率分别为50.0%、20.0%和67.5%,PCR阳性菌株中同时产2种以上酶者高达61.3%.随机抽取5株ESBLs的PCR产物进行序列分析,其中2株TEM型的序列均属TEM-1型,1株SHV型的序列属于SHV-12型,2株CTX-M型的序列分属CTX-M3、CTX-M14型.结论:天津地区呼吸道肠杆菌科细菌ESBLs基因分型以CTX-M型为主,同时产2种以上酶的菌株居多数.     

多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白基因研究

目的 检测分析鲍曼不动杆菌的耐药性、全面了解多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺类耐药机制;方法 药敏试验为Kirby-Bauer法、基因检测采用PCR对20株多药耐药鲍曼不动杆菌进行了22种β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白carO基因检测;结果 20株鲍曼不动杆菌耐药率除亚胺培南外,其余药物耐药率均在95％以上、共有TEM、PER、ADC等3种β-内酰胺酶基因呈阳性,阳性率分别为95.0.0％(19/20)、25.0％(5/20)、100.0％(20/20).膜孔蛋白carO基因突变率达100.0％;结论 本组MDR-ABA菌多种β-内酰胺类药物耐药与产TEM、PER、ADC等3种β-内酰胺酶相关外,还与膜孔蛋白编码基因carO突变有关.     

多重耐药鲍曼不动杆菌流行病学及耐药机制的调查研究

目的调查我院鲍曼不动杆菌的流行情况、临床分布特征及其耐药性,并对其耐药表型及基因型进行分析,研究β-内酰胺酶基因及I型整合子携带情况,为本地区治疗及预防鲍曼不动杆菌的流行提供实验室依据。方法收集临床标本中检出的66株鲍曼不动杆菌株病原菌,用纸片扩散法（K-B法）测定鲍曼不动杆菌对18种抗生素的敏感性。PCR扩增分析β-内酰胺酶基因、整合子基因。结果鲍曼不动杆菌主要分离自ICU及呼吸内科病房,标本以来源于呼吸道标本最为常见。大多数菌株显示出多重耐药性,对第三代头孢菌素、氨曲南、复方新诺明、哌拉西林、环丙沙星耐药率较高,对亚胺培南及含酶抑制剂较敏感。I型整合子基因的检出率为54.5%。结论鲍曼不动杆菌是一种多重耐药菌,可普遍存在于医院环境中,亚胺培南和含酶抑制剂可作为该菌感染的治疗药物。β-内酰胺酶基因及I型整合子基因是导致鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因。     

产ESBLs鲍曼不动杆菌的耐药特性、质粒谱及耐药基因型

目的了解并研究产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）鲍曼不动杆菌的流行、耐药特点及质粒图谱，对产ESBLs菌株进行基因分型。方法先后用nitrocefin纸棒、最低抑菌浓度（MIC）初筛法和纸片扩散确认法从临床分离的鲍曼不动杆菌中检测产ESBLs菌株，用凝胶电泳分析其质粒图谱，并用聚合酶链反应（PCR）对产ESBLs基因进行分型。结果93株鲍曼不动杆菌中，对β-内酰胺酶类抗菌药物耐药47株（79．66％），中度敏感12株（20．34％）；产ESBLs菌株有16株，占17．20％。产ESBLs鲍曼不动杆菌对头孢曲松、头孢他啶、头孢唑肟、头孢吡肟、氨曲南、庆大霉素、妥布霉素、磺胺甲曝唑、环丙沙星和阿米卡星的耐药率均显著高于非产ESBLs菌株（P〈0．05）。保留的15株产ESBLs菌具有4种质粒谱，主要为Ⅰ型和Ⅲ型；它们均携带1～2种TEM型或SHV型或PER型β-内酰胺酶基因，且80％携带OXA-23型碳青霉烯酶基因。结论产ESBLs鲍曼不动杆菌常为多重耐药菌，耐药率与产ESBLs密切相关；同一克隆株在同一病房有流行趋势；本院流行株均携带2—3种耐药基因型，主要为TEM型、PER型β-内酰胺酶基因和OXA-23型碳青霉烯酶基因。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药机制研究

目的 研究鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药机制。方法 对临床分离的3株耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌，采用KB纸片扩散法（CLSI／NCCLS2004年标准）进行药敏试验，三维试验检测ESBLs和AmpC酶，PCR方法检测TEM、SHV、PER、VEB、AmpC、IMP、VIM、OXA-23和OXA-24等9种耐药基因型，PCR阳性产物进行基因测序，结果在GenBank基因库中比对分析。结果 3株鲍曼不动杆菌为多重耐药菌株，三维试验均产生ESBLs，1株产生AmpC酶，耐药基因型检测3株TEM阳性，2株PER阳性，2株AmpC酶阳性及SHV、VEB和IMP、VIM、OXA-24型等均为阴性；3株OXA-23型均阳性；另外27株对亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌IMP、VIM，OXA-23和OXA-24型检测结果均阴性。结论 耐亚胺培南鲍曼不动杆菌携带TEM、PER、非诱导AmpC酶、OXA-23型碳青霉烯酶基因，产生OXA-23型碳青霉烯酶是主要耐药机制。     

38株多重耐药鲍曼不动杆菌超广谱酶基因的研究

目的:了解辽宁医学院附属第一医院38株多重耐药鲍曼不动杆菌超广谱酶基因存在状况。方法:用微量稀释法测定临床分离的38株多重耐药鲍曼不动杆菌对14种抗生素的耐药性,采用多重聚合酶链反应(PCR)、基因测序技术对鲍曼不动杆菌进行超广谱酶基因测定。结果:38株多重耐药鲍曼不动杆菌对14种抗生素高度耐药。检出TEM基因阳性33株(86.84%)、PER-1基因阳性5株(13.16%)、SHV基因阳性1株(2.63%),未检出CTX、GES和VEB基因;其中5株TEM、PER-1基因均阳性,1株TEM、SHV基因均阳性。结论:我院分离的多重耐药鲍曼不动杆菌携带多种超广谱酶基因;应重视合理使用抗生素,减少多重耐药的产生。     

惠东地区产ESBLs大肠埃希菌中TEM型β-内酰胺酶临床研究

目的探讨惠东地区产ESBLs大肠埃希菌中TEM型β-内酰胺酶分型、耐药性及基因突变类型。方法收集86例产ESBLs大肠埃希菌菌株,分析其基因类型;对产ESBLs大肠埃希菌TEM型进行耐药试验及基因突变类型的相关检测。结果 86例产ESBLs大肠埃希菌菌株中,TEM基因型49株(57.0%),SHV基因型16株(18.6%),CTX-M基因型21株(24.4%);TEM分型主要有TEM-1、TEM-2、TEM-105、TEM-116和TEM-128,其中TEM-1和TEM-2型例数最多,分别为18例和17例;TEM基因突变类型主要为缺失和碱基置换;产ESBLs大肠埃希菌菌株TEM型仅对亚胺培南/西司他丁和美罗培南敏感。结论探讨惠东地区产ESBLs大肠埃希菌基因突变分型及药敏试验对抗菌药物的选择具有重要的临床价值。     

佳木斯地区产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药基因型分析

目的 检测佳木斯地区产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药基因型的流行状况,分析ESBLs的产生情况,为临床的合理用药提供参考.方法 采用全自动微生物鉴定系统对肺炎克雷伯菌进行鉴定和药敏分析;双纸片扩散法对产ESBLs菌株进行确证,应用PCR基因扩增技术及双脱氧DNA测序方法 ,分别对TEM、SHV、CTX-M编码基因进行分析.结果 肺炎克雷伯菌对16种抗生素的耐药性检测结果 显示,对亚胺培南、阿米卡星的耐药率较低,对酶抑制剂类抗生素较敏感,对第一、二代头孢菌素耐药率较高.在67株产ESBLs菌株中有57株为CTX-M型(85.1%),36株为TEM型(53.7%),47株SHV型(70.9%).结论 随着抗菌药物的持续使用,产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药情况日趋严重,主要临床流行基因型是CTX-M型,耐药性基因型监测对临床合理应用抗生素具有指导意义.     

鲍曼不动杆菌耐药基因及插入序列遗传标记的研究

目的通过对鲍曼不动杆菌的耐药基因和插入序列遗传标记进行研究来了解鲍曼不动杆菌的耐药机制,为临床治疗性用药、提供临床疗效提供实验依据。方法通过细菌药物敏感试验检测鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药情况,通过PCR方法检测鲍曼不动杆菌的携带β-内酰胺类药物耐药基因的状况以及插入序列遗传标记的情况。结果细菌药物敏感试验检测结果是鲍曼不动杆菌对多种抗菌药物均耐药,共检出TEM、OXA-2、ADC、CTX—M-1、CTX—M-2、IMP、OXA-24等耐药基因,插入序列遗传标记ISabal、IS26、tnp513检出率分别为80．43％和47．82％、52．17％。结论β-内酰胺酶基因广泛存在于鲍曼不动杆菌中,是鲍曼不动杆菌对目前临床常用的β-内酰胺类药物存在多重耐药的主要原因。多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性与插人序列遗传标记有一定的相关性。     

产"超-超广谱"β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的耐药表型及基因分析

目的 首次分析本地区产超-超广谱β-内酰胺酶(super-spectrum β-lactamase,SSBLs)菌株的耐药性及分子流行病学现状.方法 收集自2008年1月～2009年6月本院从临床分离的对头孢西丁和头孢他啶耐药的革兰阴性杆菌105株,采用改良三维试验与质粒结合实验筛选产SSBLs菌株,通过药敏试验鉴定其耐药表型,运用PCR扩增检测其ESBLs基因型与AmpC酶基因型.结果 筛选出的2株产SSBLs菌株(1株阴沟肠杆菌和1株大肠埃希菌)均表现为多重耐药,仅对亚胺培南敏感.阴沟肠杆菌质粒编码的ESBLs基因型为TEM、CTX-M,AmpC酶基因型为ACT;大肠埃希菌质粒编码的ESBLs基因型为SHV、CTX-M,AmpC酶基因型为ACT.结论 本院存在产SSBLs革兰阴性杆菌引起的感染,但此类菌株尚未在本院传播流行,ACT型是SSBLs菌株质粒AmpC酶主要基因型.     

一种新β-内酰胺酶亚型SHV-56的发现及其临床意义

目的 分析产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)鲍曼不动杆菌SHV型β-内酰胺酶(BLA)的编码基因并确定其亚型。方法 采用聚合酶链反应(PCR)扩增BLA编码基因片段，双脱氧链终止法测定核苷酸序列、确定亚型。结果 临床分离的鲍曼不动杆菌HZ29株产生SHV型BLA，其扩增片段含825个核苷酸，核苷酸及相应的氨基酸序列经GenBank查询无相同序列，为新发现的一种BLA亚型，其序列已以SHV-56名称在美国核酸数据库GenBank成功登录(GenBank注册号：AY352599)。结论 临床分离的鲍曼不动杆菌HZ29株所产SHV型BLA为一种新发现的BLA亚型。     

51株鲍曼不动杆菌耐药表型及外排蛋白基因表达研究

目的:探讨鲍曼不动杆菌耐药表型以及adeB外排泵基因的表达情况。方法:收集2004年2月～2005年2月北京协和医院51株非重复鲍曼不动杆菌,应用聚合酶链反应法测定鲍曼不动杆菌主动外排系统adeB结构基因及序列分析。结果:受试菌株对常用广谱抗生素均不敏感;多重耐药鲍曼不动杆菌携带adeB主动外排泵基因。结论:本研究中鲍曼不动杆菌多重耐药性与产生β-内酰胺酶无关,另有其它耐药机制存在,主动外排作用可能是鲍曼不动杆菌多重耐药的重要机制之一。     

泛耐药鲍曼不动杆菌中发现β-内酰胺酶基因新的变异型ADC-65、ADC-66

目的 调查一组泛耐药鲍曼不动杆菌(PDR-ABA)中β-内酰胺酶基因存在和变异情况.方法 收集2010年7月至2010年12月某医院住院患者之痰液标本中分离的泛耐药鲍曼不动杆菌共20株,用分子鉴定法鉴定菌种,再用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析A类～D类共34种β-内酰胺酶基因.结果 本组20株泛耐药鲍曼不动杆菌共检出TEM-1型20株(100.0％)、PER-1型16株(80.0％)、OXA-23型20株(100.0％)、OXA-66型20株(100.0％)、ADC-30型16株(80.0％)、ADC基因新的变异型ADC-65型3株(15.0％)(GenBank登录号:JX109941)、ADC-66型1株(5.0％)(GenBank登录号:JX109942).结论 本组鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药主要与产TEM-1、PER-1、OXA-23型、OXA-66型、ADC等β-内酰胺酶基因相关,OXA-23型β-内酰胺酶基因阳性是泛耐药菌耐碳青霉烯类药物的原因.发现ADC基因存在新变异型:ADC-65、ADC-66是国内外首次报道.     

临床分离鲍曼不动杆菌耐药性及qnr基因检测

目的了解临床分离鲍曼不动杆菌中qnr基因和ESBLs基因的分布及其耐药特征。方法采用PCR法对115株鲍曼不动杆菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因筛查,并用PCR法检测qnr阳性菌株SHV、TEM、CTX-M-14及CTX-M-3型ESBLs基因;用琼脂对倍稀释法测定15种抗菌药物对qnr阳性株的MIC值。结果115株鲍曼不动杆菌中,2株(1.74%)细菌检出qnrB基因;qnr阳性菌株同时检出SHV、CTX-M-14、TEM、CTX-M-3型ESBLs基因。1株qnr阳性菌株对4种喹诺酮类耐药,1株对左氧氟沙星及莫西沙星中介,对环丙沙星和洛美沙星耐药;2株阳性菌除对亚胺培南和头孢哌酮/舒巴坦敏感外,对其他的β-内酰胺类抗菌药物均耐药。结论临床分离鲍曼不动杆菌中存在qnrB基因,qnr阳性株同时含有ESBLs基因,且呈多重耐药,临床应加强监测。     

β—内酰胺酶研究进展

细菌主要是通过产生质粒介导的超广谱β-内酰胺酶,染色体介导的ClassC酶、增加广谱酶的产量及降低外膜的通透性等而对头孢他定、头孢噻肟等第三代头孢菌素耐药。其酶的种类繁多,特性各异。目前从临床产酶耐药菌中得到的TEM型酶已报道到TEM-68,SHV型酶到SHV-24,ClassC酶有AmpC酶和OXA酶等。随着β-内酰胺酶抑制剂与β-内酰胺类抗生素的联合应用,近年来又发现了耐抑制剂的β-内酰胺酶（inhibitor-resistant TEM β-lactamase）,简称IRT-β-内酰胺酶。它们是通过TEM型酶变异而使抑制剂的抑酶作用减弱。大多数耐抑制剂的β-内酰胺酶都是TEM-1和TEM-2的衍生酶。另外,有报道说,近年来抑制剂耐药的β-内酰胺酶在SHV型酶的家族也出现了。     

耐药鲍曼不动杆菌ADC型β-内酰胺酶基因分子流行病学研究

目的 了解临床分离的92株耐药鲍曼不动杆菌ADC型β-内酰胺酶基因存在状况以及其基因进化分析.方法 92株耐药鲍曼不动杆菌分离自某省级医院痰液标本,药敏纸片法检测其药物敏感性,聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析ADC型β-内酰胺酶基因.结果 92株鲍曼不动杆菌对头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、哌拉西林/三唑巴坦、阿米卡星、左氧氟沙星、米渃环素、复方磺胺甲噁唑的耐药率分别为:91.3％、91.3％、91.3％、89.1％、89.1％、90.2％、67.4％、83.7％、58.7％、84.7％; ADC型β-内酰胺酶的阳性率为93.5％; ADC型β-内酰胺酶基因分子进化显示,可分为4个簇群.结论 ADC型β-内酰胺酶基因在多重耐药的鲍曼不动杆菌中广泛存在,这有可能是造成青霉素、第一至第三代头孢类药物和单环类β-内酰胺类药物耐药的主要原因.