顺铂作用下卵巢癌敏感细胞A2780与耐药细胞A2780/DDP凋亡与自噬水平的变化及意义

目的:通过分析自噬对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响,探讨自噬与卵巢癌顺铂耐药性的关系,为卵巢癌治疗提供依据。方法:培养卵巢癌细胞株A2780和A2780/DDP,进行卵巢癌细胞系A2780及A2780/DDP顺铂敏感性的测定,流式细胞仪测定顺铂作用下A2780和A2780/DDP细胞的凋亡率;将10μM顺铂作用48h的A2780细胞和40μM顺铂作用48h的A2780/DDP细胞经处理,采用Western blot法检测Beclin1蛋白的表达;电镜下观察10μM顺铂作用48h的A2780细胞和40μM顺铂作用48h的A2780/DDP细胞经固定染色处理的自噬细胞活性。结果:顺铂主要通过诱导凋亡对卵巢癌耐药细胞A2780/DDP及敏感细胞A2780发挥细胞毒效应;顺铂作用下,耐药细胞的自噬活性明显增强,而敏感细胞自噬活性无明显增强。结论:顺铂诱导耐药卵巢癌细胞发生凋亡的能力较亲代敏感细胞降低,在其发生过程中,反应性自噬活性增强可能与其顺铂耐药性的形成有关,提示对肿瘤细胞的自噬水平进行监测及调控可能为逆转卵巢癌铂耐药提供新的思路。     

米非司酮合用顺铂对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP增殖及凋亡的影响

目的:探讨米非司酮合用顺铂对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP增殖及凋亡率的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的米非司酮合用顺铂对COC1/DDP细胞株增殖活力的影响,采用流式细胞术观察不同浓度的米非司酮合用顺铂对COC1/DDP细胞株凋亡率的影响。结果:对照组和顺铂组比较,米非司酮加顺铂组细胞增殖活力OD值明显下降,细胞凋亡率明显升高,且随着米非司酮浓度的升高变化愈加显著(P<0.05和P<0.01)。结论:米非司酮联合顺铂对COC1/DDP细胞增殖活力均具有显著抑制作用,米非司酮可提高顺铂化疗的敏感性,其增敏作用与促进细胞凋亡有关,且与米非司酮的浓度呈剂量依赖关系。     

抑制ClC-3表达促进顺铂诱导人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡的作用机制

目的:探讨抑制ClC-3基因表达对顺铂(DDP)复制的人卵巢癌SKOV3/DDP细胞损伤促进作用过程中的具体作用机制,为应用DDP治疗卵巢癌提供实验依据。方法:转染pSH1-siRNA-ClC-3重组质粒到人卵巢癌SKOV3/DDP细胞,Western blotting方法观察热休克蛋白(HSP70)、溶酶体组织蛋白酶D(cathepsin D)蛋白表达。结果:与SKOV3细胞比较,SK-OV3/DDP细胞中HSP70蛋白表达增加(P<0.05)。转染pSH1-siRNA-ClC-3重组质粒联合DDP作用后,SKOV3/DDP细胞中HSP70蛋白表达降低(P<0.05),cathepsin D蛋白表达增加(P<0.05)。结论:抑制ClC-3基因表达促进顺铂诱导SKOV3/DDP细胞凋亡的可能作用机制与溶酶体膜通透性(LMP)增加有关。     

白毛藤多糖对人卵巢癌A2780/DDP细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨白毛藤多糖(Solamum lyratum Thunb polysaccharide,SLTP)对人卵巢癌A2780/DDP细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究.方法 采用MTT法检测白毛藤多糖对各组A2780/DDP细胞生长的影响.同时应用荧光显微镜观察白毛藤多糖对A2780/DDP细胞凋亡的影响.并用RT-P...     

抑制自噬基因Beclin 1的表达对耐药卵巢癌细胞A2780/DDP顺铂敏感性的影响及相关机制研究

[目的]观察抑制自噬基因Beclin1的表达对卵巢癌耐药细胞A2780/DDP顺铂敏感性的影响并探讨其中机制。[方法]利用脂质体将自噬基因Beclin1RNA干扰质粒pSUPER-Beclin1和对照质粒pSUPER-non分别转染耐药卵巢癌细胞A2780/DDP,筛选稳定表达株,检测顺铂作用下各组细胞(pSUPER-Beclin1组、pSUPER-non组和未转染组)生长抑制率、半数抑制浓度(IC50)、自噬和凋亡率的变化。[结果]A2780/DDP细胞转染干扰质粒pSUPER-Be-clin1后,细胞内Beclin1蛋白的表达明显下降;比较3组细胞顺铂48hIC50,pSUPER-Beclin1转染组最低(P﹤0.01);对3组细胞自噬与凋亡水平的检测显示,抑制Beclin1蛋白表达,在顺铂作用下,细胞自噬水平明显下降,而凋亡细胞比例明显升高,凋亡蛋白Caspase-3的表达亦明显上调,实验组与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.01)。[结论]抑制耐药细胞A2780/DDP自噬基因Beclin1的表达,可通过抑制自噬,增强凋亡提高耐药细胞对顺铂的敏感性。     

塞来昔布联合顺铂对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP生长和凋亡的影响

目的探讨塞来昔布联合顺铂对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP生长和凋亡的影响及其机制。方法采用MTT法检测不同浓度(0、0. 625、12. 5、25、50及100μmol/L)塞来昔布对COC1/DDP细胞生长的影响,计算出24、48及72h的IC50。将对数生长期的COC1/DDP细胞随机分为对照组(未做处理)、顺铂组(给予2μg/ml顺铂)、塞来昔布组(给予25μg/ml塞来昔布)及联合组(给予25μg/ml塞来昔布+2μg/ml顺铂)。MTT法检测各组细胞的生长情况,FCM检测各组细胞的凋亡情况,Western blot检测各组细胞中增殖细胞核抗原(Ki67)、细胞周期素D1 (Cyclin D1)、生存素(Survivin)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白的表达。结果塞来昔布能够呈时间-浓度依赖性抑制COC1/DDP细胞生长,其在24、48和72 h的IC50分别为47. 05、25. 86和16. 11μmol/L。与对照组相比,顺铂组、塞来昔布组和联合组中COC1/DDP细胞的OD值以及Ki67、Cyclin D1、Survivin及Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低,凋亡率均显著升高;但顺铂对COC1/DDP细胞的作用较弱,塞来昔布对COC1/DDP细胞的作用较强,联合用药能够增强两者对COC1/DDP细胞的作用且高于两者之和。结论塞来昔布联合顺铂能够协调抑制COC1/DDP细胞生长并诱导细胞凋亡,降低COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性,其分子机制可能与下调Ki67、Cyclin D1、Survivin及Bcl-2蛋白表达有关。     

DIM联合顺铂诱导人卵巢癌细胞SK-OV-3凋亡机制的研究

目的:探讨顺铂(cis-diamminedichlorop latinum DDP)和3,3-二吲哚基甲烷(3,3-diindolylmethane,DIM)联合应用诱导人卵巢癌细胞SK-OV-3凋亡的机制。方法:采用免疫组化技术观察细胞内caspase3蛋白的表达,利用RT-PCR和western blot检测bcl-2、caspase3和caspase9基因和蛋白表达变化。结果:细胞培养及免疫化学染色可见各给药组与对照组比较均有不同程度抑SK-OV-3细胞增殖并诱导其凋亡作用;RT-PCR结果显示各给药组均能使caspase3和caspase9基因表达上调,bcl-2表达下调;westernblot结果表明各给药组与对照组相比caspase3和caspase9蛋白表达上调,bcl-2表达下调,且0.4mg.L-1DDP+60μmol.L-1DIM联合应用与10倍剂量DDP(4mg/L-1)单独应用效果相同。结论:DIM与DDP均可抑制PC-3细胞增殖并诱导其凋亡;其细胞凋亡机制可能与上调caspase3、caspase9基因表达,下调bcl-2表达有关;DIM与DDP联合抗瘤具有明显的减毒增效作用。     

人参皂苷Rh2联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2联合顺铂对于人卵巢癌细胞株SKOV-3的影响。方法:采用MTT比色法检测人参皂苷Rh2与DDP联合应用对SKOV-3细胞株增殖的影响,利用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡情况,并计算细胞平均凋亡率,利用Western-blot技术观察SKOV-3细胞内HER-2蛋白的表达。结果:①Rh2与DDP联合应用分别作用于SKOV-3卵巢癌细胞株,单独应用DDP 350μmol/L和600μmol/L IC50降为DDP 250μmol/L和300μmol/L。②流式细胞术检测显示,DDP+Rh2组凋亡率在SKOV-3细胞系中为32.2%,SKOV-3细胞被阻止于G1期,在SKOV-3 DDP细胞中为12.5%,均显著高于仅应用DDP组细胞(P<0.05),SKOV-3 DDP细胞亦被阻止于G1期。③Western blotting结果显示,SKOV-3细胞中DDP+Rh2组HER-2蛋白表达较对照组、DDP组、Rh2组显著降低(P<0.05)。结论:人参皂苷Rh2与DDP联合应用对SKOV-3卵巢癌细胞株有促凋亡作用,并改善卵巢癌细胞株SKOV-3 DDP对DDP的敏感性。     

拟线粒体促凋亡多肽N7在人卵巢癌细胞对顺铂增敏作用中的研究

目的:探讨拟线粒体促凋亡多肽N7(SmacN7)能否增加人卵巢癌细胞对顺铂的敏感性及其与Caspase-3表达的关系。方法:通过细胞增殖抑制率测定及平板克隆形成试验研究顺铂单独应用组(A组),50μg/L SmacN7+顺铂组(B组)、100μg/L SmacN7+顺铂组(C组)及200μg/L SmacN7+顺铂组(D组)的细胞增殖抑制率和细胞克隆形成率;采用细胞免疫化学法检测上述分组中Caspase-3的表达。结果:单独应用顺铂时,24、48、72 h的增殖抑制率分别为(6.12±1.16)%、(13.47±1.15)%及(28.91±1.08)%。SmacN7(50～200μg/L)联合顺铂应用时,随着SmacN7浓度的增加或作用时间的延长,细胞增殖抑制率明显增加,药物作用24、48、72 h后增殖抑制率分别为(9.34±1.78)%～(49.81±2.11)%、(25.24±2.11)%～(65.54±2.27)%、(44.45±1.21)%～(82.36±2.19)%。肿瘤细胞存活率明显降低,分别为(25.13±0.52)%、(21.17±0.55)%、(18.23±0.54)%和(15.27±0.56)%。SmacN7联合顺铂应用后,Caspase-3的表达比单独应用顺铂明显增加(P=0.000)。结论:SmacN7能够明显增加人卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。     

caspase-3和caspase-9在甘氨鹅脱氧胆酸钠诱导肝癌细胞SMMC7721细胞凋亡中的影响

[目的]观察甘氨鹅脱氧胆酸钠(glycochenodeoxycholate,GCDCA)诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡过程中caspase3,9活性变化,探讨GCDCA诱导肝癌细胞凋亡的机制。[方法]体外培养SMMC7721细胞,GCDCA为处理因素,Annexin V—FITC/PI双染色法结合流式细胞技术仪检测细胞凋亡率,比色法测定caspase3,9活性。[结果]200μmol/L的GCDCA处理SMMC7721细胞24h,48h,72h后,其细胞凋亡率明显增加;caspase3,9活性表达水平明显升高,并与GCDCA呈浓度依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]GCDCA可明显诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡,caspase3,9参与GCDCA诱导SMMC7721细胞凋亡调控。     

内耳免疫反应中细胞凋亡及Caspase-3表达的研究

目的研究内耳免疫反应过程中是否存在细胞凋亡，以及细胞凋亡是否与Caspasr-3信号转导有关方法选用雌性白色豚鼠16只，随机分为实验组和对照组各8只，以钥孔虫戚血蓝蛋白(kryhole limpet hemoryanin．KLH)全身免疫后，实验组以相同抗原进行内耳免疫，对照组内耳注射等量的磷酸盐缓冲生理盐水(PRS)，在内耳免疫5tl后处死动物，取内耳免疫侧耳蜗做石蜡切片。通过TUNEL法检测内耳凋亡细胞，免疫组化检测内耳Caspase-3的表达结果实验组Corti器，血管纹、螺旋韧带和螺旋神经节存在TUNEL染色阳性细胞，而对照组仅在支持细胞、血管纹和螺旋神经节中发现极少数TUNEL染色阳性细胞免疫组化染色实验组Caspase-3表达阳性，而对照组表达阴性结论内耳免疫反应可以诱导细咆凋亡的发生；内耳免疫反应诱导细胞凋亡的发生中有Caspase-3的激活。     

三氧化二砷对卵巢癌细胞端粒酶活性及hTERT蛋白表达的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对卵巢癌细胞株A2780端粒酶活性的影响。方法应用端粒酶多聚酶联反应-酶联免疫测定(PCR-ELISA)方法检测As2O3作用后卵巢癌细胞系A2780细胞端粒酶活性的变化并使用流式细胞仪检测hTERT蛋白表达。结果0.25μmol/LAs2O3(24~72h)可抑制卵巢癌细胞系A2780的端粒酶活性及hTERT蛋白表达,抑制作用呈时间依赖性效应。结论AsO可以通过降低hTERT蛋白表达进而抑制卵巢癌细胞的端粒酶活性。     

醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的探讨醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性的影响。方法醋酸铅染毒人股动脉内皮细胞后,用Hochest 33258染色法检测细胞形态学变化,用细胞免疫化学法检测caspase-3、P53、Bax、Bc l-2的表达;用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L醋酸铅处理24、48 h后,Hochest 33258-PI染色显示醋酸铅组细胞呈凋亡形态学改变。动脉内皮细胞的细胞免疫化学结果都显示醋酸铅组的caspase-3、P53和Bax阳性表达升高,而Bc l-2的阳性表达下降。其流式细胞仪检测结果表明醋酸铅组细胞凋亡率较对照组显著升高（P〈0.05）。结论醋酸铅可促进动脉内皮细胞凋亡,其机制可能与capase-3的活化有关。     

脓毒症大鼠脾细胞凋亡、凋亡相关蛋白表达及中药血必净的影响

目的观察血必净对脓毒症大鼠脾脏淋巴细胞凋亡、凋亡相关蛋白表达以及半胱天冬酶(caspase)3活性的影响。方法96只Wistar大鼠随机分为正常对照组(8只)、假手术组(8只)、模型组(40只)和血必净治疗组(40只),以盲肠结扎穿孔法(CLP)制备脓毒症模型;TUNEL法检测脾细胞凋亡情况、分光光度法测定脾组织半胱天冬酶3活性、流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞中CD3+细胞比例以及免疫组化法检测脾脏FasL、Bcl-2蛋白表达水平。结果假手术组大鼠脾脏FasL表达的IOD值为4.54±1.41,模型组较之明显增多,至48 h达757.96±188.10,假手术组大鼠脾脏Bcl-2表达的IOD值为594.05±183.32,模型组表达下降,于48 h仅为22.71±9.22,假手术组仅有少量细胞凋亡(0.87±0.51),半胱天冬酶3活性较低(4.34±1.34),CD3+细胞比例为63.49%;模型组于造模后4 h起脾组织细胞凋亡数增多达8.88±3.68,半胱天冬酶3活性升高至12.22±3.15,而脾细胞中CD3+细胞比例明显下降为52.09%;血必净干预后可明显降低脾脏FasL表达、促进Bcl-2表达,减轻脾组织半胱天冬酶3活化程度,减少脾细胞凋亡,并使CD3+细胞比例恢复正常。结论脓毒症时凋亡途径的活化使脾细胞过度凋亡,引起了免疫失衡的发生,血必净可以通过调节凋亡相关蛋白的表达,减轻脾细胞凋亡,恢复脓毒症的免疫平衡。     

Caspase-3及Survivin与心肌细胞凋亡的研究进展

Caspase-3是细胞凋亡的关键元件,Survivin具有抑制细胞凋亡的功能,而细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤发病机制中的重要环节。本研究对Caspase-3及Survivin与细胞凋亡进行综述,以期在分子水平控制细胞凋亡,达到保护心肌的目的。     

Caspase-3和Caspase-8在氟化钠致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用

目的探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-3和Caspase-8对氟化钠(NaF)致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法先用不同浓度NaF(20、40、80μg/ml)对SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后检测细胞存活率、凋亡率、Caspase-3活性以及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平;再选择适宜的40μg/mlNaF染毒剂量组,观察在Fas受体激动剂CH11或拮抗剂ZB4作用下其细胞凋亡率、Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平的改变。结果与对照组比较,40、80μg/ml染毒组细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率随染毒剂量的升高呈上升趋势,且40、80μg/ml染毒组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);40、80μg/ml染毒组Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);激动剂CH11与NaF共培养对细胞凋亡显示出协同效应,拮抗剂ZB4可部分阻断NaF致SH-SY5Y细胞的凋亡。结论NaF可通过上调死亡受体Fas途径的关键酶Caspase-3和Caspase-8的表达,促进SH-SY5Y细胞凋亡。     

RNA干扰Caspase-3基因对镉诱导转化人胚肾293细胞凋亡的影响

目的 研究RNA干扰Caspase-3基因对镉致转化人胚肾293细胞凋亡的影响,探讨Caspase-3基因在镉致细胞凋亡中的作用.方法 选择转化人胚肾293细胞进行体外培养,以小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)处理细胞36 h后,再以40 μmol/L氯化镉分别处理12～24 h,以四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot法分别检测Caspase-3基因表达水平和蛋白表达水平,以流式细胞仪Annexin-V-PI双染法检测细胞凋亡率.结果 40μmol/L氯化镉处理转化人胚肾293细胞12 h后,Caspase-3基因mRNA水平显著增高,相对分子质量为20 kDa的活性亚单位条带显著增强;24 h后,细胞凋亡率显著增加(n=4,P＜0.01),RNA干扰显著抑制镉诱导的细胞Caspase-3基因mRNA和相对分子质量为20 kDa的蛋白表达水平,使细胞凋亡率显著降低(n=4,P＜0.01).结论 体外实验表明,RNA干扰Caspase-3基因对镉诱导转化人胚肾293细胞凋亡具有明显的抑制作用,Caspase-3基因在镉诱导转化人胚肾293细胞凋亡过程中起着重要的作用.     

邻苯二甲酸二乙基己酯在体外对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡Caspase通路的影响

目的通过对原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexylphthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP在体外对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡通路Caspase-3和Caspase-9基因表达以及细胞凋亡的影响。方法分离和培养原代未成熟大鼠的卵巢颗粒细胞,用不同浓度的DEHP(0、10、50、100 nmol/L)染毒24 h。荧光定量PCR法检测颗粒细胞的Caspase-3和Caspase-9基因mRNA表达水平,Weastern blot检测颗粒细胞Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平,流式细胞术检测颗粒细胞凋亡率。结果与对照组相比,各DEHP处理组卵巢颗粒细胞Caspase-3基因mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05),Caspase-9基因mRNA和蛋白表达水平也降低(P<0.05),同时细胞凋亡率增加(P<0.05),呈浓度依赖关系。结论 DEHP可通过激活Caspase通路而诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵巢功能。     

Survivin和Caspase-3在卵巢上皮性癌中的表达

目的:探讨Survivin和Caspase-3在上皮性卵巢癌发生发展中的作用。方法:采用免疫组织化学SP法,检测Survivin蛋白和Caspase-3蛋白在100例上皮性卵巢肿瘤中的表达。结果:①Survivin蛋白和Caspase-3蛋白在良恶性两组上皮性卵巢肿瘤中阳性表达率差异有显著性(P<0.05);②Survivin蛋白与恶性上皮性卵巢肿瘤的病理分级、临床分期有关(P<0.05),而与组织学类型无关(P>0.05),Caspase-3蛋白与恶性上皮性卵巢肿瘤的病理分级、临床分期及组织学类型均无关(P>0.05);③Survivin与Caspase-3两种蛋白在恶性上皮性卵巢肿瘤中的表达呈负相关关系。结论:①Survivin可能参与了上皮性卵巢癌的发生、发展过程,可成为具有潜在价值的肿瘤标志物。②Caspase-3可能在上皮性卵巢癌发生过程中起重要作用。③Survivin可能通过直接或间接抑制Caspase-3的活性阻断细胞凋亡过程从而导致上皮性卵巢癌的发生、发展。     

马钱子碱中毒脑神经细胞Bcl-2和Caspase-3表达的研究

目的观察马钱子碱中毒后不同时间、不同剂量Bcl-2和Caspase-3表达的变化。方法选用20只Wistar大鼠为正常对照组,44只Wistar大鼠复制马钱子中毒模型,应用免疫组织化学和图像分析方法研究大鼠脑神经细胞马钱子中毒后Bcl-2与Caspase-3蛋白表达的变化规律。结果大鼠在马钱子中毒低、中剂量后的1~7 d不同时间段内,脑神经细胞Bcl-2与Caspase-3蛋白阳性表达细胞数均高于正常对照组,与相应的对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论Bcl-2与Caspase-3参与了马钱子中毒的病理生理过程。