白桦脂酸调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对冠心病大鼠血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响

目的 探究白桦脂酸通过调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/Unc-51样自噬激活激酶1(ULK1)信号通路对冠心病大鼠血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响。方法 原代培养冠心病大鼠血管平滑肌细胞,将其随机分为正常组(Control组)、模型组(Model组)、低浓度(20μmol/L)白桦脂酸组(BA-L组)、高浓度(40μmol/L)白桦脂酸组(BA-H组)和高浓度(40μmol/L)白桦脂酸+AMPK抑制剂(10μmol/L)Compound C组(BA-H+CC组)。CCK-8法检测大鼠血管平滑肌细胞的细胞活力。流式细胞术检测细胞凋亡。mRFP-GFP-LC3双荧光体系示踪大鼠血管平滑肌细胞的自噬小体。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测大鼠血管平滑肌细胞中AMPK、mTOR、ULK1 mRNA的表达。Western blot实验检测大鼠血管平滑肌细胞中AMPK、mTOR、ULK1、LC3、Bax、Bcl-2、Beclin-1蛋白表达水平。结果 与Control组相比,Model组血管平滑肌细胞的细胞活力(48 h、72 h)、Bcl-2蛋白...     

七氟醚麻醉对子代大鼠海马神经元自噬的影响

目的探讨七氟醚麻醉对子代大鼠海马神经元自噬的影响。方法孕5~7 d的SD雌鼠18只,采用随机数字表法将其分为3组(n=6):对照组(C组)、七氟醚组(S组)、七氟醚+自噬抑制剂wortmannin组(SW组)。C组母鼠仅置于麻醉箱内,通入相同流量氧气暴露4 h,S组和SW组母鼠给予2.8%七氟醚吸入麻醉4 h。SW组子代大鼠于出生后1~3 d腹腔注射0.5 mg/kg自噬抑制剂wortmannin,C组和S组于相同时点腹腔注射等量的生理盐水对照。于出生后22 d,对各组子代大鼠进行水迷宫实验,测定其学习记忆功能,出生后28 d,完成水迷宫测试后处死子代大鼠,并取其海马组织。采用TUNEL染色测定子代大鼠海马组织内神经元的凋亡率,采用Western blot法检测子代大鼠海马组织内微管相关蛋白l轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ比值作为自噬活性的指标。结果 S组、C组子代大鼠逃避潜伏期较C组,穿越平台次数比较差异无统计学意义(P>0.05),SW组子代大鼠逃避潜伏期较C组延长,穿越平台次数较C组减少(P<0.05)。与C组比较,S组和SW组子代大鼠海马神经元的凋亡率和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均升高(P<0.05);与S组比较,SW组子代大鼠海马神经元的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05)。结论大鼠孕期七氟醚麻醉对子代学习记忆功能无影响,其机制与激活生理性自噬对抗神经元凋亡有关。     

Cdk5介导的凋亡与自噬交互作用对脑缺血的调控

细胞周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)作为神经元凋亡的关键调控子颇受关注,前期实验亦初步证实了Cdk5信号途径对脑缺血后神经元凋亡调控的重要性。据文献研究,凋亡还与另一细胞死亡的双向调控途径"自噬"发生信号交互作用,且自噬在脑缺血中具有"双刃剑"身份。此外,Cdk5与蛋白激酶B(Akt,又称PKB或RacAkt)之间存在信号传导,且Akt激酶对凋亡和自噬具有双重调控作用,因此,明确凋亡与自噬的关系对脑缺血后神经元的调控具有重要意义。在前期研究基础和充分的文献调研基础上,基于Cdk5对神经元调控的关键性,针对凋亡与自噬的交互作用方式在脑缺血调控中存在的不同观点,该文重点阐述Cdk5介导的凋亡与自噬交互作用方式对脑缺血后神经元损伤的潜在影响,为后续深入研究提供参考。     

五味子甲素通过SIRT1/PGC-1α通路对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 探讨五味子甲素对血管性痴呆(VD)大鼠沉默信息调节因子1/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(SIRT1/PGC-1α)通路及海马神经元凋亡的影响.方法 50只大鼠双侧颈总动脉永久性结扎法制备VD模型,造模大鼠按照随机数字表法分为模型组、五味子甲素(20、40、80 mg/kg)组、阳性对照组,每组1...     

柴胡皂苷A对脑外伤大鼠海马神经元自噬及AMPK-mTORC1通路的影响

目的 探讨柴胡皂苷A对脑外伤大鼠腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)–雷帕毒素靶蛋白复合物1(mTORC1)信号通路及海马神经元自噬的影响.方法 60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及柴胡皂苷A低剂量(5 mg/kg)、中剂量(10 mg/kg)、高剂量(20 mg/kg)组,和阳性对照(自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤,15 m...     

藏花酸通过激活LKB1/AMPK通路改善妊娠糖尿病大鼠的胰岛素敏感性

摘要：目的:探索藏花酸（CRO）通过激活肝激酶B1（LKB1）/腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）通路对改善妊娠糖尿病（GDM）大鼠的胰岛素敏感性的作用。方法:选取雌、雄SD大鼠在发情期进行交配,孕鼠通过尾静脉注射链脲佐菌素（STZ）建立GDM大鼠模型。造模后,将大鼠随机分为正常对照组、模型组、CRO低(CRO-L,20 mg·kg-1)、中(CRO-M,40 mg·kg-1)、高(CRO-H,60 mg·kg-1)剂量组、Radicicol组(LKBI抑制剂,40 mg·kg-1)、CRO-H+Radicicol组(60 mg·kg-1?CRO+40 mg·kg-1?Radicicol),每组10只。药物组、抑制剂组分别以尾部注射相应剂量的药物、抑制剂干预,其余各组给予生理盐水。干预结束后,分别检测大鼠空腹血糖（FPG）、胰岛素（FINS）水平、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）以评价胰岛素抵抗情况;检测总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、三酰甘油（TG）含量以及血清中炎症因子白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平以评价血脂及全身炎症变化;最后分离大鼠胰岛组织,观察其病理改变并检测AMPK通路相关蛋白LKB1、p-LKB1、组蛋白去乙酰化酶4（HDAC4）、p-HDAC4、AMPK、p-AMPK的蛋白表达及炎症因子IL-6、TNF-α水平变化。结果:模型组和Radicicol组大鼠胰岛组织炎性浸润及病理损伤严重,IL-6、TNF-α、病理评分、FPG、FINS、HOMA-IR、TC、LDL-C、TG、p-HDAC4/HDAC4较正常对照组均显著增加（P＜0.05）,p-AMPK/AMPK、p-LKB1/LKB1显著降低（P＜0.05）;经CRO干预后,大鼠IL-6、TNF-α、病理评分、FPG、FINS、HOMA-IR、TC、LDL-C、TG、p-HDAC4/HDAC4较模型组均显著降低（P＜0.05）,p-AMPK/AMPK、p-LKB1/LKB1显著增加（P＜0.05）。给与Radicicol可逆转CRO对GDM大鼠的保护作用（P＜0.05）。结论:CRO可增强GDM大鼠胰岛素敏感性,改善大鼠胰岛组织病理损伤以及全身炎症水平,该作用可能依赖于激活LKB1/AMPK信号通路。     

姜黄素对糖尿病大鼠心肌自噬,凋亡及AMPK-mTOR信号通路的影响

目的:基于心脏组织AMPK/mTOR信号通路、自噬和凋亡来探讨姜黄素(curcumin,Cur)对糖尿病大鼠心脏损伤的保护作用。方法:50只雄性SD大鼠被随机分为3组:正常对照组(Con,n=10)给予正常饮食以及等量生理盐水腹腔注射;糖尿病模型组(DM,n=40)大鼠给予高糖高脂饮食联合连续5 d腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ) (35 mg·kg^-1·d^-1),给药组(Cur+DM),部分糖尿病大鼠(n=20)在其饮用水中给予Cur(300 mg·kg^-1·d^-1)进行干预16周。HE染色观察大鼠心脏组织形态改变;透射电镜观察大鼠心脏组织粒体形态变化;TUNEL染色,免疫组织化学和蛋白印迹等方法检测心脏组织自噬、凋亡,AMPK/mTOR信号通路等相关蛋白的表达情况。结果:与正常对照组相比,糖尿病模型组大鼠心肌肥大,线粒体嵴稀疏、断裂,自噬及相关蛋白表达水平下降(P<0.05),细胞凋亡及相关蛋白表达水平显著增加(P<0.05),P-AMPK/AMPK蛋白表达水平降低(P<0.05)而P-mTOR/mTOR增加(P<0.05)。与糖尿病模型组比较,给药组大鼠心肌肥大水平和线粒体断裂程度减轻,自噬及相关蛋白表达水平增加(P<0.05),细胞凋亡及相关蛋白表达水平减轻(P<0.05),P-AMPK/AMPK蛋白表达水平增加(P<0.05),而P-mTOR/mTOR减少(P<0.05)。结论:姜黄素可能通过活化AMPK/mTOR信号通路增强糖尿病大鼠心脏组织自噬水平,减轻心脏组织细胞凋亡,从而改善糖尿病大鼠心脏损伤。     

茶黄素调节CaMKK2/AMPK信号通路对脑出血大鼠神经元凋亡和血脑屏障的影响

目的:探讨茶黄素(TFs)通过调节钙调蛋白激酶激酶2(CaMKK2)/单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)信号通路对脑出血大鼠神经元凋亡和血脑屏障(BBB)的影响。方法:选取90只大鼠随机分为假手术组、模型组、TFs低剂量组(20 mg/kg TFs)、TFs高剂量组(40 mg/kg TFs)、TFs高剂量+STO-609组(40 mg/kg TFs+10μL CaMKK2抑制剂-STO-609)、阳性对照组(2 mg/kg尼莫地平注射液),每组15只。采用VII型胶原酶诱导脑出血大鼠模型。对大鼠行为学以及脑组织含水量进行检测;分离大鼠血清,检验炎症因子-血管黏附因子-1(VCAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附因子-1(ICAM-1)水平;取血肿周围脑组织,检测神经元凋亡、BBB通透性参数-伊文思蓝(EB)水平以及p-CaMKK2/CaMKK2、p-AMPK/AMPK和凋亡相关蛋白Bax表达情况。结果:模型组大鼠神经行为学评分(mNSS评分)、ICAM-1、TNF-α、VCAM-1、脑组织含水量、凋亡率、EB水平以及Bax蛋白表达较假手术组均增加,p-CaMKK2/...     

芦荟大黄素对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬及p53/AMPK/mTOR信号通路的影响

摘 要 目的：探讨芦荟大黄素（AE）对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬及p53蛋白（p53）/磷酸腺苷蛋白激酶（AMPK）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。 方法: 实验分为对照组（AE 0 μmol·L-1）、AE低（10 μmol·L-1）、中（30 μmol·L-1）、高（50 μmol·L-1）剂量组和自噬阻断剂3 甲基腺嘌呤（3 MA）+ AE组（20 μmol·L-1+50 μmol·L-1）。CCK 8法检测各组细胞增殖抑制率,采用透射电镜及单丹磺酰尸胺（MDC）染色观察各组细胞自噬体及自噬溶酶体的变化,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定（TUNEL）法观察各组细胞凋亡率变化,Western blot法检测各组细胞p53、AMPK、mTOR信号通路蛋白及自噬标致蛋白Beclin 1蛋白（Beclin 1）、微管相关轻链蛋白Ⅰ（LC3Ⅰ）及微管相关轻链蛋白Ⅱ（LC3Ⅱ）表达情况。 结果: 与对照组相比,AE各剂量组及3 MA+AE组细胞的增殖抑制率、凋亡指数（AI）显著升高（P<0.05）,且呈剂量依赖性;AE中、高剂量组的增殖抑制率和AI与3 MA+AE组相比差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,AE各剂量组细胞自噬体、自噬空泡增多,溶酶体积分光密度（IOD）/所选区域面积（Area）值及p53、AMPK、Beclin 1表达显著升高,mTOR表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值显著降低（P<0.05）,且呈剂量依赖性;3 MA+AE组细胞自噬体、自噬空包等超微结构减少,IOD/Area值及p53、AMPK及Beclin 1表达显著降低,mTOR表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值显著升高（P<0.05）。 结论: AE可通过提高胃癌SGC-7901细胞自噬水平,诱导SGC-7901细胞凋亡,其机制可能与促进p53/AMPK/mTOR信号通路表达有关。     

黄芪注射液对肺结核大鼠免疫功能、自噬和凋亡的影响

目的 研究黄芪注射液对肺结核大鼠免疫功能、自噬和凋亡的影响及机制。方法 将SD大鼠分成对照组、模型组（注射结核杆菌）、实验组(注射结核杆菌,8 mL·kg^-1黄芪注射液处理)、实验+LY294002组[注射结核杆菌,8 mL·kg^-1黄芪注射液和磷脂酰肌醇-3激酶蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号抑制药LY294002处理]。以蛋白质印迹（Western blot）法检测肺组织中磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、Beclin1蛋白表达,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）水平,以流式细胞术检测T细胞亚群,以脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果 对照组、模型组、实验组、实验+LY294002组PI3K蛋白表达水平为0.59±0.05,0.23±0.03,0.46±0.05和0.33±0.02,p-Akt/Akt表达水平为0.40±0.04,0.22±0.02...     

黄芪注射液对肺结核大鼠免疫功能、自噬和凋亡的影响

目的 研究黄芪注射液对肺结核大鼠免疫功能、自噬和凋亡的影响及机制。方法 将SD大鼠分成对照组、模型组（注射结核杆菌）、实验组(注射结核杆菌,8 mL·kg^-1黄芪注射液处理)、实验+LY294002组[注射结核杆菌,8 mL·kg^-1黄芪注射液和磷脂酰肌醇-3激酶蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号抑制药LY294002处理]。以蛋白质印迹（Western blot）法检测肺组织中磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、Beclin1蛋白表达,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）水平,以流式细胞术检测T细胞亚群,以脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果 对照组、模型组、实验组、实验+LY294002组PI3K蛋白表达水平为0.59±0.05,0.23±0.03,0.46±0.05和0.33±0.02,p-Akt/Akt表达水平为0.40±0.04,0.22±0.02...     

沙参麦冬汤通过调节EGFR/MEK/ERK信号通路对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响

摘要：目的:探讨沙参麦冬汤（ROD）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、凋亡和自噬的影响,并分析其潜在机制。方法:制备ROD含药血清,体外培养人NSCLC细胞株A549,MTT法检测不同浓度的ROD含药血清对A549细胞活力的影响,筛选合适的干预浓度;将A549细胞随机分为空白组、阿法替尼组、20%ROD组、20%ROD+EGFR激活剂NSC 228155组;给予相应的干预后,采用细胞集落形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术分析细胞凋亡情况,GFP-LC3转染检测细胞自噬情况,蛋白质印迹（Western blot）检测细胞增殖、凋亡、自噬和表皮生长因子受体（EGFR）/丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）通路相关蛋白表达。结果:ROD含药血清可抑制A549细胞增殖,且20%ROD含药血清对A549细胞活力的抑制作用最显著（P＜0.05）。20%ROD含药血清可显著减少细胞集落数,升高细胞凋亡率,增加GFP-LC3斑点数,并降低Ki-67、p62蛋白水平和p-EGFR/EGFR、p-MEK/MEK和p-ERK/ERK比值,升高Cleaved Caspase-3/Caspase-3和LC3II/LC3I比值（P＜0.05）;EGFR抑制剂Afatinib对A549细胞增殖、凋亡、自噬和EGFR/MEK/ERK通路的作用与ROD含药血清相似;使用NSC 228155激活EGFR/MEK/ERK通路可显著减弱ROD含药血清对A549细胞凋亡和自噬的诱导作用以及对细胞增殖的抑制作用（P＜0.05）。结论:ROD含药血清可有效抑制A549细胞增殖,并诱导细胞凋亡、自噬,其作用机制可能与抑制EGFR/MEK/ERK通路有关。     

艾司洛尔对缺氧复氧诱导的心肌细胞AMPK/GSK-3β通路及凋亡的影响

目的 探讨艾司洛尔对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响,并初步研究其作用机制.方法 体外培养大鼠心肌细胞(H9c2),并建立缺氧/复氧(I/R)损伤模型,随机分为对照组、H/R组和艾司洛尔低、中、高剂量(0.2、5.0、25.0μmol/L)组;噻唑蓝(MTT)法检测各组H9c2细胞存活率变化情况;膜联蛋白V-异硫氰酸荧...     

阿江榄仁酸由AMPK/mTOR/HO-1信号通路调控自噬对糖尿病视网膜病变影响

目的 探讨阿江榄仁酸(arjunolic acid, AA)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)大鼠视网膜细胞自噬及AMPK/mTOR/HO-1信号通路的影响。方法 以健康SD大鼠为研究对象,构建链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型,随机分为对照组(Con)组、模型(STZ)组、AA低剂量(AAL,10 mg/kg)组和AA高剂量(AAH,10 mg/kg)组。连续给药10周后,HE染色检测视网膜组织病理结构;qRT-PCR检测视网膜组织白介素(IL)-1β、IL-6和线粒体丙酮酸转运载体(MPC)-1的mRNA表达;二氢乙锭(DHE)染色评估视网膜组织ROS产生;Western blot检测自噬和AMPK/mTOR/HO-1信号通路相关蛋白表达。结果 与Con组比较,STZ组大鼠视网膜出现肿胀和空泡样变化等病理变化,中央视网膜ONL层厚度和细胞核计数明显降低(P<0.01);IL-1β、IL-6和MCP-1的mRNA水平显著增高(P<0.05);视网膜外核层(ONL)、内核层(INL)和神经节细胞层(GCL)中ROS产生增加(P<...     

经前期综合征肝气郁证大鼠血清对海马神经元5-HT1AR信号转导通路的影响

目的:研究经前期综合征(PMS)肝气郁证大鼠血清对大鼠原代海马神经元的5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)信号转导通路相关基因5-羟色胺转运蛋白(SERT)、单胺氧化酶(MAO)-A、MAO-B表达的影响。方法:采用慢性束缚应激法复制PMS肝气郁证大鼠模型;高效液相色谱(HPLC)法检测血清中5-HT的含量;运用RT-PCR半定量和Westernblot法检测正常、模型、经前舒干预大鼠的血清对海马神经元中5-HT1AR、SERT、MAO-A、MAO-B表达的影响。结果:加入模型大鼠血清的大鼠海马原代神经细胞中MAO-A表达较正常大鼠显著升高(P<0.05),5-HT1AR、SERT表达显著降低(P<0.05),MAO-B表达无显著性差异。而加入经前舒干预大鼠血清后,5-HT1AR、SERT、MAO-A表达均趋于正常。结论:PMS肝气郁证的发生与海马神经元中MAO-A、SERT、5-HT1AR表达异常相关,可能是PMS肝气郁证发病的微观机制。     

灵芝酸对痫样放电海马神经元ERK1/2磷酸化水平的影响

目的:探讨灵芝酸对癫痫样放电海马神经元ERK1/2磷酸化水平的影响。方法:以24h内新生Wistar大鼠为细胞源,用Neurobasal培养液培养海马神经元。①应用激光共聚焦显微镜检测培养神经元的纯度及其鉴定。②应用MTT法测灵芝酸的最适无毒浓度。③在研究最大无毒浓度的灵芝酸对痫样放电海马神经元ERK1/2磷酸化水平影响的实验中,将细胞随机分为:①正常对照组:将培养至第9天的海马神经元全液换成正常细胞外液处理3h,然后恢复正常培养3h后取材;②模型组:将培养至第9天的海马神经元全液换成无镁细胞外液处理3h,然后恢复正常培养3h后取材;③治疗组:将培养至第9天的海马神经元根据灵芝酸浓度不同,分为低、中、高三个浓度组(浓度分别为20μg/mL、80μg/mL、320μg/mL),将各组的维持培养液全液换成无镁细胞外液处理3h,然后全液换成维持培养液配制不同浓度灵芝酸混悬液处理3h后取材。ELISA方法检测ERK1/2磷酸化水平的表达。结果:成功离体培养海马神经元,并用酶联免疫分析ERK1/2磷酸化水平的表达。各实验组中均有ERK1/2的表达并且各治疗组均能降低ERK1/2磷酸化水平,浓度为80μg/mL时结果最明显。结论:海马神经元癫痫样放电后ERK1/2被激活,在有效浓度的灵芝酸能显著抑制此反应中ERK1/2的磷酸化水平。     

隐丹参酮调节HIF-1α/BNIP3信号通路对兔膝骨关节炎模型软骨细胞自噬和凋亡的影响

目的 探究隐丹参酮调节缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3(BNIP3)信号通路对兔膝骨关节炎（KOA）模型软骨细胞自噬和凋亡的影响。方法 取新西兰兔并以改良Videman法构建兔KOA模型,随机分为模型组、空载组、隐丹参酮组、HIF-1α敲低组、隐丹参酮+HIF-1α敲低组,每组9只;另取9只新西兰兔为对照组。分组干预后以Lequesne MG的膝关节级别评估法对兔膝关节临床症状（局部疼痛、步态、关节活动、关节肿胀）进行评分;HE染色检测兔膝关节软骨组织的退变情况并进行改良Mankin’s评分;TUNEL染色检测兔膝关节软骨组织细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测兔血清炎性因子白细胞介素（IL）-6、IL-18、IL-10水平;蛋白免疫印迹实验检测兔膝关节软骨组织自噬（LC3、Beclin-1）、凋亡（Bax、Cleaved Caspase-3）和HIF-1α/BNIP3信号通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组兔膝关节软骨组织出现明显退变症状,局部疼痛、步态、关节活动及关节肿胀评分、改良Mankin’s评分、凋亡率、血清IL-1...     

缬沙坦对颈动脉粥样硬化大鼠AT1R/PI3K/Akt/mTOR通路及血管内皮细胞自噬的影响

目的 探讨缬沙坦对颈动脉粥样硬化大鼠血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路及血管内皮细胞自噬的影响.方法 采用高脂饲料饲喂结合颈动脉球囊损伤法制备颈动脉粥样硬化大鼠模型,随机分为模型组(生理盐水),缬沙坦低、中、高(10、20、30 ...     

黄芪甲苷通过CaMkkβ/AMPK通路对急性心力衰竭大鼠心肌细胞线粒体自噬的作用机制研究

目的 探讨黄芪甲苷(Astragaloside IV,AsIV)通过钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶β(CaMkkβ)/腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)通路对急性心力衰竭(心衰)大鼠心肌细胞线粒体自噬的影响及作用机制。方法 50只SD大鼠分为对照组(羧甲基纤维素钠)、急性心衰组(羧甲基纤维素钠)、AsIV低、中、高剂量组(20、40、80 mg/kg AsIV羧甲基纤维素钠溶液),每组10只,1次/d,连续灌胃给药7 d,第8天一次性腹腔注射盐酸阿霉素10 mg/kg建立急性心力衰竭模型,24 h后处死,检测各组血清脑钠肽(BNP)、心肌肌钙蛋白T(cTn-T)、丙二醛(MDA)水平,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,透射电镜观察自噬体数目,Western blot法检测自噬相关蛋白(Beclin1、LC3、p62)及CaMkkβ/AMPK信号通路相关蛋白表达量。结果 与对照组比较,急性心衰组血清BNP、cTn-T、MDA水平、心肌细胞凋亡率、心肌细胞线粒体内自噬体数目及心肌组织Beclin1、LC3蛋白表达量及p-CaMkkβ/CaMkkβ、p-AMPK/AMPK均升高(P<0....     

栀子苷介导GLP-1R/Akt信号通路改善大鼠脑缺血再灌注损伤和神经元凋亡的研究

目的 观察栀子苷对脑缺血再灌注损伤（CIRI）模型大鼠的神经保护作用及对胰高血糖素样肽-1受体（GLP-1R）/蛋白激酶B（Akt）信号通路的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,栀子苷低、高剂量组及尼莫地平片组,每组10只。采用线栓法制备CIRI大鼠模型,缺血2 h再灌注24 h后,栀子苷低、高剂量组大鼠分别ig给予10、40 mg·kg^-1的栀子苷,尼莫地平片组大鼠ig给予8.1 mg·kg^-1尼莫地平,假手术组和模型组大鼠ig等体积生理盐水,每天1次,连续7 d。造模后及给药结束后,分别对各组大鼠进行神经功能缺损评分;给药结束后,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）及白细胞介素-6（IL-6）水平,苏木素-伊红（HE）染色检测脑组织病理学变化,尼氏染色检测神经元与尼氏小体变化,免疫组化染色检测脑组织B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2关联X蛋白（Bax）表达,蛋白质印迹法（Western blotting）检测脑组织细胞色素C（Cyt-C）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶-9（Caspase-9）、胰高血糖素样肽-1受体（GLP-1R）及磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高（P＜0.05）,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高（P＜0.05）;皮质细胞间质疏松、增宽,有大量神经元细胞质萎缩和细胞核损伤;脑神经元皱缩,尼氏小体变小,数目明显减少。大鼠脑组织Bcl-2表达显著降低（P＜0.05）,Bax表达显著升高（P＜0.05）;脑组织中Cyt-C、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,GLP-1R和p-Akt蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与模型组比较,栀子苷高剂量组和尼莫地平片组大鼠神经功能缺损评分均显著降低（P＜0.05）,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著降低（P＜0.05）,皮质细胞较为整齐,神经元细胞和尼氏小体损伤减小,Bcl-2表达显著升高（P＜0.05）,Bax表达显著降低（P＜0.05）,同时,Cyt-C、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著下降（P＜0.05）,GLP-1R和p-Akt蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。结论 栀子苷能够改善大鼠CIRI,减少神经元凋亡,其作用机制可能与激活GLP-1R/Akt信号通路有关。