过表达FOXO1对骨肉瘤细胞侵袭迁移能力的影响及机制研究

目的探讨FOXO1对骨肉瘤细胞侵袭迁移能力的影响及机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法检测人正常成骨细胞hFOB 1.19和人骨肉瘤细胞U2OS、MNNG/HOS中FOXO1的mRNA表达水平。利用pcDNA3.1-FOXO1重组质粒建立FOXO1过表达的细胞模型,空载质粒(pcDNA3.1-vector)作为对照,qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)验证转染效率。确定成功过表达FOXO1基因后利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验检测骨肉瘤细胞的增殖能力(吸光度值),Transwell实验体外检测骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力,并采用qRT-PCR和western blot的方法检测基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达变化。结果人骨肉瘤细胞MNNG/HOS、U2OS中FOXO1的mRNA的表达水平显著低于人成骨细胞hFOB 1.19(P0.05),且骨肉瘤细胞U2OS的FOXO1的表达水平较低。重组质粒pcDNA3.1-FOXO1转染后,骨肉瘤细胞U2OS的FOXO1表达水平显著升高。与对照组(pcDNA3.1-vector)比较,U2OS-FOXO1过表达组的细胞的增殖能力降低(P0.05),侵袭迁移和迁移能力降低,MMP9较对照组表达水平明显降低(P0.05)。结论骨肉瘤细胞中FOXO1表达水平明显低于正常成骨细胞。过表达FOXO1可能通过下调MMP9抑制骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力。     

过表达FOXO1对骨肉瘤细胞侵袭迁移能力的影响及机制研究

［摘要］ 目的 探讨FOXO1对骨肉瘤细胞侵袭迁移能力的影响及机制。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT?PCR）的方法检测人正常成骨细胞hFOB 1.19和人骨肉瘤细胞U2OS、MNNG/HOS中FOXO1的mRNA表达水平。利用pcDNA3.1?FOXO1重组质粒建立FOXO1过表达的细胞模型,空载质粒（pcDNA3.1?vector）作为对照,qRT?PCR和蛋白质印迹法（Western blot）验证转染效率。确定成功过表达FOXO1基因后利用Cell Counting Kit?8（CCK?8）实验检测骨肉瘤细胞的增殖能力（吸光度值）,Transwell实验体外检测骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力,并采用qRT?PCR和western blot的方法检测基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达变化。结果 人骨肉瘤细胞MNNG/HOS、U2OS中FOXO1的mRNA的表达水平显著低于人成骨细胞hFOB 1.19（P<0.05）,且骨肉瘤细胞U2OS的FOXO1的表达水平较低。重组质粒pcDNA3.1?FOXO1转染后,骨肉瘤细胞U2OS的FOXO1表达水平显著升高。与对照组（pcDNA3.1?vector）比较,U2OS?FOXO1过表达组的细胞的增殖能力降低（P<0.05）,侵袭迁移和迁移能力降低,MMP9较对照组表达水平明显降低（P<0.05）。结论 骨肉瘤细胞中FOXO1表达水平明显低于正常成骨细胞。过表达FOXO1可能通过下调MMP9抑制骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力。     

微小RNA-125a-5p负性调控基质金属蛋白酶11对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的检测微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)在骨肉瘤细胞及正常成骨细胞(NHOst)中的表达特征,并探讨其通过负性调控基质金属蛋白酶11(MMP-11)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法采用荧光定量PCR分析骨肉瘤细胞及正常成骨细胞中miR-125a-5p的表达情况。体外转染miR-125a-5p模拟物(mimics)至骨肉瘤细胞系(HOS和Saos-2),并观察其对细胞增殖及凋亡的影响。通过双荧光素酶报告基因试验及Western blot验证miR-125a-5p对MMP-11的负性调控作用。结果 miR-125a-5p在HOS和Saos-2细胞中的表达均显著低于NHOst细胞(P 0. 05)。HOS和Saos-2细胞中转染miR-125a-5p mimics可显著升高细胞内源性miR-125a-5p表达水平(P 0. 05)。过表达miR-125a-5p抑制HOS和Saos-2细胞的增殖,并促进细胞凋亡(P 0. 05)。miR-125a-5p与MMP-11信使RNA(mRNA) 3'-非编码区(3'-UTR)存在互补结合位点,其通过与MMP-11结合而抑制骨肉瘤细胞中MMP-11蛋白的表达(P 0. 05)。结论 miR-125a-5p在骨肉瘤细胞中呈现低表达,过表达miR-125a-5p可通过负性调控MMP-11抑制骨肉瘤细胞的增殖,并促进细胞凋亡,提示miR-125a-5p可作为骨肉瘤新的分子治疗靶点。     

GAS5对骨肉瘤U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:观察生长停滞特异性转录因子5(GAS5)对骨肉瘤U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响,探讨其机制。方法:在人骨肉瘤U2OS细胞和人正常成骨hFOB 1.19细胞中,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测GAS5和微小RNA (miR)-221的表达,Western blot检测基质金属蛋白酶抑制物-2 (TIMP2)蛋白的表达。转染pcDNA-GAS5重组质粒后,采用噻唑蓝(MTT)法和Trasnwell小室法检测GAS5对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响,qRT-PCR检测GAS5对miR-221表达的影响。利用Starbase软件预测和双荧光素酶报告基因实验验证GAS5与miR-221以及miR-221与TIMP2的靶向关系。转染miR-221模拟物和miR-221抑制剂后,观察miR-221过表达对GAS5调控的U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及miR-221对TIMP2蛋白表达的影响。结果:与正常hFOB 1.19细胞相比,U2OS细胞中GAS5和TIMP2蛋白的表达水平明显降低,而miR-221表达水平显著升高(GAS5:P=0.0001;TIMP2:P=0.0003;miR-221:P=0.0004)。GAS5过表达可抑制U2OS细胞增殖、迁移和侵袭(增殖48h:P=0.0005;增殖72h:P=0.0002;迁移:P=0.002;侵袭:P=0.001),而miR-221过表达可明显逆转GAS5对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(增殖48h:P=0.0002;增殖72h:P=0.0003;迁移:P=0.0001;侵袭:P=0.0001)。Starbase软件预测到miR-221存在能够与GAS5互补结合的位点,还存在能够与TIMP2 3′UTR互补结合的位点;双荧光素酶结果显示miR-221过表达后野生型GAS5(GAS5-WT)和野生型TIMP2 (TIMP2-WT)细胞的荧光素酶活性明显降低(P均为0.0003);同时,GAS5过表达后,U2OS细胞中miR-221表达水平明显降低(P=0.0001),反之miR-221明显升高(P=0.0001);miR-221过表达后,U2OS细胞中TIMP2蛋白的表达水平明显降低(P=0.0003),反之TIMP2蛋白的表达水平明显升高(P=0.0009)。结论:GAS5可通过靶向抑制miR-221促进TIMP2表达,进而抑制U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭。     

沉默LncRNA TUG1对骨肉瘤细胞放射敏感性影响

[目的]探讨沉默LncRNA TUG1对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响。[方法]采用qRT-PCR检测人成骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞HOS、放射抵抗的骨肉瘤细胞HOS-R中TUG1与miR-328-3p的表达量;采用不同方式检测沉默TUG1与miR-328-3p过表达对HOS-R细胞放射敏感性的影响;TUG1的靶基因miR-328-3p;沉默TUG1对HOS-R细胞中miR-328-3p表达量的影响;HOS-R细胞凋亡率;抑制miR-328-3p联合沉默TUG1对HOS-R细胞放射敏感性及细胞凋亡率的影响。[结果]与hFOB 1.19细胞相比,TUG1在HOS与HOS-R细胞中表达量较高(P0.05),miR-328-3p的表达量显著较低(P0.05),且在HOS-R细胞中显著低于HOS细胞(P0.05);沉默TUG1或过表达miR-328-3p显著降低HOS-R细胞存活分数(P0.05);并增加细胞放射敏感性;TUG1可吸附miR-328-3p并调节其表达水平;抑制miR-328-3p联合沉默TUG1可逆转沉默TUG1对HOS-R细胞放射敏感性的增强作用。[结论]本研究表明LncRNA TUG1可通过靶向调控miR-328-3p的表达促进骨肉瘤细胞凋亡,并抑制其存活,从而增加骨肉瘤细胞的放射敏感性。     

乳腺癌转移抑制蛋白1下调PI3K/AKT1通路抑制骨肉瘤细胞转移

目的 探讨乳腺癌转移抑制蛋白1(BRMS1)在骨肉瘤转移中的作用和机制。方法免疫组化检测骨肉瘤组织中BRMS1蛋白表达;荧光定量聚合酶链反应(Q-PCR)法检测8例骨肉瘤组织和8个骨肉瘤细胞系BRMS1 mRNA表达的变化;western blot检测正常成骨细胞系(HOSB)及人骨肉瘤细胞系(OS187、COL、LM7、SJSA、MG63、HOS、SAOS-2、CCH-D)和BRMS1蛋白和AKT1蛋白磷酸化的水平;侵袭小室(Transwell)法检测过表达BRMS1的HOS细胞转移能力的变化。结果 骨肉瘤组织中BRMS1蛋白表达较癌旁正常骨组织明显减少。骨肉瘤细胞OS187、COL、LM7、SJSA、MG63、HOS、SAOS-2和CCH-D BRMS1 mRNA和蛋白的表达水平较正常成骨细胞HOSB明显降低,而AKT1蛋白磷酸化水平明显升高。HOS细胞过表达BRMS1后,HOS细胞转移能力和AKT1蛋白磷酸化水平明显降低。运用AKT1蛋白磷酸化抑制剂LY294002明显抑制HOS细胞转移能力。结论 BRMS1可以抑制骨肉瘤细胞HOS细胞转移,其机制可能与抑制AKT1蛋白磷酸化有关。     

miR-133a靶向MMP-14抑制骨肉瘤细胞侵袭的作用及机制研究

目的 研究微小RNA(microRNA,miR)-133a靶向基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-14抑制骨肉瘤细胞侵袭的作用及机制.方法 培养正常成骨细胞株hFOB1.19及骨肉瘤细胞株MG63、U20S、SAOS2,采用荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain...     

阿霉素耐药细胞外泌体通过传递耐药性影响骨肉瘤细胞增殖和迁移的实验研究

目的探讨骨肉瘤阿霉素耐药细胞外泌体与MDR1、miRNAs的相关性及作用机制。方法选取骨肉瘤MG63和U2OS细胞株构建阿霉素耐药株, 通过MTT法检测耐药和敏感株的50%抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50), 于15～120 min中间隔15 min观察一次荧光染色检测荧光强度的变化, RT-PCR和Western Blot检测MDR1的mRNA和P-gp蛋白表达水平等验证骨肉瘤细胞耐药性;通过粒径分析及Western Bolt检测鉴定外泌体。观察PKH26标记的阿霉素耐药细胞外泌体的胞吞作用, 并采用MTT法和细胞划痕实验检测阿霉素耐药细胞外泌体与骨肉瘤细胞共培养后细胞的增殖水平、迁移能力及耐药性的变化。通过骨肉瘤源性外泌体测序及生物信息分析、RT-PCR验证miRNAs在骨肉瘤敏感和耐药细胞中的mRNA差异表达水平。观察MG63和U2OS中正常骨肉瘤细胞组与耐药细胞组、耐药细胞+正常外泌体组、耐药细胞+耐药外泌体组成瘤裸鼠肿瘤生长情况, 血清外泌体鉴定及其miR-21-5p的mRNA表达水平, RT-PCR、Weste...     

miR-96干扰NKD2表达对骨肉瘤MG63细胞株的增殖、凋亡的影响

目的探究miR-96通过干扰裸露角质蛋白同源物2(naked cuticle homolog 2,NKD2)的表达对骨肉瘤MG63细胞株的增殖、凋亡的影响。方法回顾性分析我院2013年9月至2018年2月收集的骨肉瘤标本57例临床资料作为研究组,同时收集距肿瘤边界5 cm的癌旁组织作为对照组,其中男39例,女18例;年龄21～49岁,平均(28.16±6.73)岁。将骨肉瘤MG63细胞株分为miR-96抑制组与空白对照组,其中miR-96抑制组细胞给予miR-96抑制剂转染,空白对照组细胞不作任何处理。培养48h后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法与Western blot法检测各组人骨肉瘤MG63细胞中miR-96与NKD2蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyltetrazolium assay, MTT)法检测各组细胞增殖情况;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况与细胞周期分布情况。结果骨肉瘤组织中miR-96表达水平明显高于正常骨组织(P0.05);骨肉瘤组织中NKD2蛋白表达水平明显低于正常骨组织(P0.05);miR-96抑制组骨肉瘤细胞中miR-96表达水平明显低于空白对照组(P0.05);miR-96抑制组骨肉瘤细胞中NKD2表达水平明显高于空白对照组(P0.05);miR-96抑制组骨肉瘤MG63细胞株经miR-96抑制剂转染48h后细胞相对吸光度明显低于空白对照组细胞(P0.05);miR-96抑制组骨肉瘤MG63细胞株细胞凋亡率明显大于空白对照组(P0.05);miR-96抑制组与空白对照组骨肉瘤MG63细胞株细胞周期情况差异明显(P0.05)。结论 miR-96在骨肉瘤组织中呈高表达,NKD2在骨肉瘤组织中呈低表达;miR-96通过抑制NKD2表达而促进骨肉瘤MG63细胞株生长,并抑制骨肉瘤MG63细胞株早期凋亡。     

lncRNA MEG3靶向调节miR-27a-3p抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:探究lncRNA MEG3对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:qRT-PCR检测人正常胃上皮细胞GES-1和GC细胞(BGC823、MGC803、SGC7901、AGS、MKN28、MKN451)中MEG3及miR-27a-3p表达差异;将AGS细胞分为对照组、GV144组、GV144-MEG3组、GV144-MEG3+miR-27a-3p NC组、GV144-MEG3+miR-27a-3p mimics组;比较各组AGS细胞中MEG3及miR-27a-3p表达情况;检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证MEG3与miR-27a-3p的靶向关系。结果:与GES-1细胞相比,GC细胞中MEG3水平降低,miR-27a-3p水平升高(P<0.05);与对照组相比,GV144-MEG3组MEG3水平升高,miR-27a-3p、ki-67、MMP-2、MMP-9水平及增殖、迁移和侵袭能力降低(P<0.05);上调miR-27a-3p表达可减弱MEG3过表达对AGS细胞恶性行为的抑制作用。miR-27a-3p是MEG3的靶基因。结论:过表达MEG3可能通过靶向下调miRNA-27a-3p表达抑制AGS细胞增殖、迁移及侵袭。     

右美托咪定对结直肠癌LOVO细胞侵袭和迁移影响的实验研究

目的:探讨右美托咪定对结直肠癌LOVO细胞侵袭和迁移的影响及其发生机制。方法:以0、50、100和200μg/mL右美托咪定处理48 h后,采用细胞计数(CCK-8)法检测细胞活力,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测细胞中微小RNA(miR)-196a-5p的表达水平。将miR-196a-5p抑制剂转染至LOVO细胞后,观察下调miR-196a-5p表达对右美托咪定作用下的LOVO细胞活力、侵袭和迁移的影响。结果:与0μg/mL组比较,50、100和200μg/mL组右美托咪定可增强LOVO细胞活力、促进细胞侵袭和迁移并上调细胞中miR-196a-5p表达水平(P<0.05),且呈现一定的浓度依赖性。转染miR-196a-5p抑制剂后,右美托咪定对LOVO细胞活力、细胞侵袭和迁移的促进作用明显减弱(P<0.05)。结论:右美托咪定可通过上调miR-196a-5p表达促进结直肠癌LOVO细胞侵袭和迁移。     

miR-18a-3p在肝癌中的表达及其调控ADCY1表达对肝癌细胞侵袭及增殖的影响

背景与目的 研究表明多种microRNA（miRNA）可能在肝癌的发生发展中发挥重要作用,其作用机制仍值得进一步研究和探讨。因此,本研究从已报道的肝癌差异表达miRNA中进一步筛选关键miRNA,并验证和探讨其作用机制。方法 从已发表的研究中筛选出肝癌组织及肝癌患者血清/血浆中与正常肝组织及正常血清/血浆中共同的差异表达miRNA;用qRT-PCR在正常肝细胞与肝癌细胞中对筛选出的目标miRNA表达情况进行验证;用过表达和抑制的方法观察目标miRNA对肝癌细胞侵袭能力（Transwell实验）与增殖能力（MTT实验）的影响,以及在30例临床标本中检测目标miRNA的表达并通过KM plotter网站分析其对肝癌患者生存的影响;通过miRDB和GEPIA数据库预测和分析目标miRNA的靶基因,并用逆转实验和双荧光素酶报告实验进一步验证。结果 在肝癌组织（vs.正常肝组织）及肝癌患者血清/血浆（vs.正常人血清/血浆）中共同高表达的miRNA有4个（miR-18a-3p、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-224-3p）,共同低表达的miRNA有2个（miR-26a-3p、miR-125b-3p）。qRT-PCR实验证实,与正常肝细胞比较,miR-18a在肝癌细胞中高表达,miR-26a在肝癌细胞中低表达（均P<0.05）。过表达/抑制miR-18a-3p表达能促进/降低肝癌细胞的侵袭及生长能力（均P<0.05）,而过表达/抑制miR-26a-3p对肝癌细胞的侵袭及生长能力影响无不法确定。分析结果显示,ADCY1是miR-18a-3p的靶基因,过表达ADCY1能部分逆转miR-18a-3p对肝癌细胞的上述作用,同时,表达上调的miR-18a-3p能通过结合到ADCY1 mRNA 3''UTR抑制ADCY1的表达。结论 miR-18a-3p可能在肝癌的发生发展中起了关键作用,其在肝癌中表达上调,并能通过抑制下游靶基因ADCY1的表达增强进肝癌细胞的侵袭和增殖能力。     

miR-200a-3p在胆囊癌中的表达及其作用与机制

背景与目的 miR-200a-3p参与了多种肿瘤的生物学过程的调控,但在不同肿瘤中起着不同的作用（促癌基因或抑癌基因）。目前,其在胆囊癌中的作用尚不清楚。因此,本研究探讨miR-200a-3p在胆囊癌中的表达及其对胆囊癌细胞生物学功能的影响与机制。方法 采用qRT-PCR法测定32例胆囊癌及癌旁组织、胆囊癌细胞系（GBC-SD、SGC-996、NOZ）及正常人胆囊上皮细胞系HGBEC中miR-200a-3p的表达。采用Lipofectamine? 3000试剂盒将GBC-SD及NOZ细胞系分别转染miR-200a-3p模拟物（miR-200a-3p过表达组）、miR-200a-3p抑制物序列（miR-200a-3p沉默组）及阴性对照序列（阴性对照组）。MTT实验测定细胞增殖能力,Transwell实验测定细胞侵袭能力,MiRBD/Targetscan7.2/starBase2.0/miRtarbase网站预测miR-200a-3p的下游靶基因,并采用荧光素酶实验验证。Western blot检测上述3组细胞中靶基因与上皮间质转化（EMT）相关分子蛋白（E-cadherin、vimentin）的表达。结果 qRT-PCR结果显示,胆囊癌组织中miR-200a-3p表达量低于癌旁组织,所有胆囊癌细胞系中miR-200a-3p表达量低于正常人胆囊上皮系HGBEC（均P<0.05）。GBC-SD及NOZ细胞系转染后,与各自的阴性对照组比较,两种细胞的miR-200a-3p过表达组miR-200a-3p表达量明显升高、增殖与侵袭能力明显减弱,两种细胞的miR-200a-3p沉默组miR-200a-3p表达量明显降低、增殖与侵袭能力明显增强（均P<0.05）。在线网站预测显示,miR-200a-3p和Notch2存在潜在结合位点;荧光素酶实验显示,miR-200a-3p导致Notch2野生型质粒pmirGLO-Notch2-3''UT WT荧光素酶活性明显降低,而miR-200a-3p对Notch2突变型质粒pmirGLO-Notch2-3''UTR MUT的荧光素酶活性没有影响。Western blot结果显示,两种细胞的miR-200a-3p过表达组与各自的阴性对照组比较,E-cadherin蛋白表达量升高、vimentin蛋白与Notch2蛋白表达量降低,而3种蛋白在两种细胞的miR-200a-3p沉默组则呈相反的变化（均P<0.05）。结论 miR-200a-3p在胆囊癌中表达降低,并可能起了抑癌基因的作用,其抑制胆囊癌细胞增殖和侵袭的机制可能与靶向下调Notch2从而抑制EMT过程有关。     

上调lncRNA SNHG12与miR-199a-5p/FZD6轴对肝细胞癌细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化的影响

背景与目的:肝细胞癌(HCC)是临床上常见的恶性肿瘤之一,侵袭、转移和术后复发是导致HCC患者死亡的主要原因.目前认为长链非编码RNA (lncRNA)的失调可能与各类癌症的发生和转移有关.有研究显示lncRNA SNHG12在HCC组织表达明显上调,但其具体功能尚不清楚.故本研究探讨lncRNA SNHG12在HCC...     

Circ_0000069 contributes to the growth,metastasis and glutamine metabolism in renal cell carcinoma (RCC) via regulating miR-125a-5p-dependent SLC1A5 expression

BackgroundCircular RNAs (circRNAs) have emerged as critical mediators in various cancers, including renal cell carcinoma (RCC). In the present research, the functions of circ_0000069 in RCC were explored.MethodsQuantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) assay, western blot assay and immunohistochemistry (IHC) assay were performed for the expression of circ_0000069, microRNA-125a-5p (miR-125a-5p) and solute carrier family 1 member 5 (SLC1A5). Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay and 5′-ethynyl-2′-deoxyuridine (EdU) assay were performed for cell proliferation. Flow cytometry assay was manipulated for cell apoptosis. Transwell assay and wound-healing assay were utilized for cell invasion and migration. Glutamine metabolism level was evaluated by examining glutamine consumption, α-ketoglutarate production and glutamate production. Dual-luciferase reporter assay was used to analyze the relationships of circ_0000069, miR-125a-5p and SLC1A5. Murine xenograft model assay was conducted to analyze the function of circ_0000069 in vivo.ResultsCirc_0000069 level was abnormally upregulated in RCC tissues and cells. Knockdown of circ_0000069 inhibited the proliferation, invasion, migration and glutamine metabolism and promoted the apoptosis in RCC cells in vitro and restrained tumor growth in vivo. Circ_0000069 served as the sponge for miR-125a-5p. MiR-125a-5p inhibition ameliorated the effects of circ_0000069 knockdown on RCC cell malignant behaviors. SLC1A5 was identified as the target gene of miR-125a-5p. Moreover, miR-125a-5p overexpression repressed the progression of RCC cells, while SLC1A5 elevation abrogated the effect.ConclusionCirc_0000069 knockdown inhibited the carcinogenesis of RCC by regulating miR-125a-5p/SLC1A5 axis.     

miR-7856-5p通过靶向作用3对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响

目的探索微小RNA(miRNA,miR)-7856-5p对EPH受体A3(EPHA3)基因表达的调控作用及对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测结直肠癌组织和细胞系中miR-7856-5p的表达。脂质体转染法分别将miR-7856-5p模拟物和miR-NC转入结直肠癌细胞SW480,分别定义为miR-7856-5p组和miR-NC组。Real-time PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后细胞迁移和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-7856-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中EPHA3的表达。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-7856-5p在结直肠癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。miR-7856-5p在结直肠癌细胞系的表达明显低于正常肠黏膜上皮细胞(P<0.05),在SW480细胞中表达最低(P<0.01)。miR-7856-5p组miR-7856-5p的表达明显高于miR-NC组,差异有统计学意义[(9.49±1.09)比(1.06±0.18),P<0.01]。miR-NC组和miR-7856-5p组迁移细胞数量分别为(125.70±14.05)个和(42.01±8.98)个,miR-7856-5p组细胞迁移能力明显下降(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。生物信息学软件显示miR-7856-5p的靶基因是EPHA3。双荧光素酶报告基因系统证实miR-7856-5p可靶向结合EPHA3基因(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组SW480细胞中EPHA3的表达明显降低(P<0.05)。结论miR-7856-5p可通过靶向调控EPHA3的表达,抑制结直肠癌细胞SW480的迁移和增殖能力。     

lncRNA FOXP4-AS1通过miR-507调控甲状腺乳头状癌细胞生物学行为的作用机制研究

背景与目的 长链非编码RNA（lncRNA）可通过结合mircoRNA（miRNA）来间接调控下游mRNA的转录及降解,从而调控肿瘤发生与发展。lncRNA FOXP4-AS1是近年来发现的一种新的肿瘤相关生物标志物,在不同的肿瘤中发挥着不同的调控作用,笔者前期研究发现,FOXP4-AS1在甲状腺乳头状癌（PTC）中呈低表达,发挥抑癌作用。此外,笔者通过数据库预测miR-507可与FOXP4-AS1互补结合。因此,本研究探讨FOXP4-AS1通过调控miR-507及其下游靶mRNA抑制PTC细胞的生长的作用与机制。方法 通过TCGA数据库分析miR-507在甲状腺癌（TC）中的表达水平及其在TC中的临床意义。qRT-PCR检测PTC细胞系（TPC-1、K1）和正常甲状腺滤泡上皮细胞（Nthy-ori3-1）中miR-507的表达水平,以及过表达及敲低FOXP4-AS1后检测miR-507表达水平的变化。用双荧光素酶报告基因实验验证FOXP4-AS1与miR-507靶向关系。分别在FOXP4-AS1过表达及敲低稳转株上转染miR-507的模拟物、抑制物,并分别用CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验、划痕愈合实验以及流式细胞术检测细胞功能的变化。用生物信息学方法分析miR-507下游靶点并用qRT-PCR验证。结果 TCGA数据库分析结果显示,miR-507在TC中高表达,且其表达水平TC患者与临床病理分期、T分期、腺外浸润等临床病理特征有关（均P<0.05）。qRT-PCR结果显示,与Nthy-ori3-1细胞比较,miR-507在两种PTC细胞中呈高表达,且过表达和敲低FOXP4-AS1后,两种PTC细胞中miR-507的表达水平随之反向改变（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,FOXP4-AS1与miR-507靶向结合,并抑制miR-507的表达。细胞功能实验及功能回复实验显示,FOXP4-AS1过表达后,PTC细胞的增殖活力、迁移能力和抗凋亡能力明显减弱,同时加入miR-507的模拟物后,PTC细胞以上功能回复（均P<0.05）;敲低FOXP4-AS1后,PTC细胞的增殖活力、迁移能力和抗凋亡能力明显升高,同时加入miR-507的抑制物后,PTC细胞以上功能回复（均P<0.05）。数据库预测与GO、KEGG富集分析结果显示,miR-507下游可能涉及CAMK4,qRT-PCR验证结果显示,CAMK4的表达水平随FOXP4-AS1表达水平的上调、下调呈同向改变,且其表达水平随miR-507模拟物和抑制物的加入而反向改变（均P<0.05）。结论 FOXP4-AS1可以靶向结合miR-507,并可能通过海绵作用抑制miR-507表达水平调控PTC细胞的增殖、迁移及细胞凋亡。CAMK4可能是FOXP4-AS1/miR-507通路发挥抑癌作用的下游靶点之一。