Gravin在瘢痕疙瘩中的表达

目的 探讨Gravin在瘢痕疙瘩形成中的可能作用机制。方法 荧光定量PCR法检测并比较Gravin在瘢痕疙瘩和正常皮肤中的表达情况,免疫荧光双标法分析Gravin在正常皮肤和瘢痕疙瘩中的定位。 结果 荧光定量PCR结果显示：Gravin在瘢痕疙瘩中的表达量明显降低（0.0953 ± 0.0664）,与正常皮肤相比（0.4565 ± 0.1728）差异有统计学差异（P < 0.01）。免疫荧光双标结果显示：正常皮肤组织中,Gravin主要定位于成纤维细胞;在瘢痕疙瘩中,Gravin定位于巨噬细胞和成纤维细胞,主要位于巨噬细胞。结论 瘢痕疙瘩中Gravin表达量明显下降且主要定位于巨噬细胞。这种表达和定位的改变可能通过影响瘢痕疙瘩中成纤维细胞和炎症细胞的增殖及活化,参与瘢痕疙瘩的形成。     

促纤维化细胞因子与瘢痕疙瘩

瘢痕疙瘩成纤维细胞是具有独特遗传素质的成纤维细胞亚群，对β－转化生长因子、血小板衍化生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子－Ⅰ、结缔组织生长因子等具有与正常成纤维细胞和增生性瘢痕成纤维细胞不同的反应。这种反应的差异极可能源自相关细胞因子受体水平的改变。     

促纤维化细胞因子与瘢痕疙瘩

瘢痕疙瘩成纤维细胞是具有独特遗传素质的成纤维细胞亚群 ,对 β 转化生长因子、血小板衍化生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子 Ⅰ、结缔组织生长因子等具有与正常成纤维细胞和增生性瘢痕成纤维细胞不同的反应。这种反应的差异极可能源自相关细胞因子受体水平的改变     

二聚糖对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移的影响

目的 探讨二聚糖(biglycan,BGN)在瘢痕疙瘩中的表达及其对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移的影响.方法 应用免疫组织化学及Western blot检测BGN在瘢痕疙瘩组织及瘢痕疙瘩成纤维细胞中的蛋白表达.采用siRNA的方法对BGN基因进行敲减,利用体外细胞划痕实验方法观察瘢痕疙瘩成纤维细胞的移行能力.结果 免疫组织化...     

瘢痕疙瘩治疗进展

瘢痕疙瘩是由于皮肤创伤后纤维组织过度增生而形成并超出原有损害范围的异常瘢痕.瘢痕疙瘩治疗方法很多,有手术切除、冷冻、激光照射、放射线照射、药物治疗等,但容易复发,迄今尚无非常满意的治疗方法.目前临床多采用外用(局部)药物治疗,现将其治疗进展作一综述.     

瘢痕疙瘩的治疗

瘢痕疙瘩发病机制不明,治疗比较困难,临床多采用综合疗法。外科手术切除联合放射治疗,或者联合瘢痕内注射糖皮质激素是治疗瘢痕疙瘩的一线疗法。放疗通常有浅层x线、电子束,其致癌性通常较小。硅凝胶片和压力疗法通常作为基础性辅助治疗,对不同病期的瘢痕疙瘩均有一定疗效,表现为瘢痕变软、变平,主观症状得到改善。抗瘢痕疙瘩药物主要包括积雪草苷和α-积雪草苷乳膏、5％咪喹莫特乳膏等。基因治疗和某些生物制剂可能是瘢痕疙瘩治疗的发展方向。个性化评估瘢痕疙瘩患者的病情,综合运用以上治疗方法可以较好地减轻皮损。     

瘢痕疙瘩的治疗

瘢痕疙瘩发病机制不明,治疗比较困难,临床多采用综合疗法.外科手术切除联合放射治疗,或者联合瘢痕内注射糖皮质激素是治疗瘢痕疙瘩的一线疗法.放疗通常有浅层X线、电子束,其致癌性通常较小.硅凝胶片和压力疗法通常作为基础性辅助治疗,对不同病期的瘢痕疙瘩均有一定疗效,表现为瘢痕变软、变平,主观症状得到改善.抗瘢痕疙瘩药物主要包括积雪草苷和α-积雪草苷乳膏、5%咪喹莫特乳膏等.基因治疗和某些生物制剂可能是瘢痕疙瘩治疗的发展方向.个性化评估瘢痕疙瘩患者的病情,综合运用以上治疗方法可以较好地减轻皮损.

Abstract：

The pathogenesis of keloids remains obscure, and its treatment is troublesome.Comprehensive therapy is usually applied for its management in clinical settings.Surgical removal combined with radiotherapy or intralesional glucocorticoids is the first-line treatment for keloids.Radiotherapy, which includes superficial X ray therapy, electron beam therapy, etc, often has little carcinogenicity.Sillicon gel sheet and pressure therapy usually serve as the basic adjunctive treatment of keloids, which can soften and flatten keloids and improve subjective symptoms and have shown favorable efficacy in all stages of keloids.Effective drugs for keloids mainly include asiaticoside, alpha asiaticoside cream, imiquimod 5% cream, etc.Gene therapy as well as biological preparations may have an inviting prospect for the management of keloids.Satisfactory outcomes may be achieved by combined modality therapy with the above regimens following individual evaluation of eonditions in patients with keloids.     

多配体蛋白聚糖-1对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及迁移的影响

目的 探讨多配体蛋白聚糖-1(syndecan-1,SDC-1)在瘢痕疙瘩组织及成纤维细胞中表达情况及其对细胞增殖及迁移的影响.方法 采用免疫组织化学方法、qRT-PCR方法及Western blot法检测瘢痕疙瘩组织及成纤维细胞中的SDC-1蛋白表达情况.接下来通过转染SDC-1 siRNA序列,使SDC-1的表达下...     

指状瘢痕疙瘩一例

患者男,50岁,农民,因左腹部指状增生物7年于2004年10月22日就诊。患者于1989年11月因膀胱结石行手术治疗。术后1年于切口顶端出现一约3 -4 cm长的指状增生物,无自觉不适,未予治疗,后自行脱落。至1997年又感瘢痕及针眼处轻微瘙痒,未予注意。后发现于左侧针眼处出现一指状增生物,逐渐     

瘢痕疙瘩发病机制研究的新进展

瘢痕疙瘩的发病机制参与因素众多,目前并未完全清楚,本文将近几年来国内外在细胞因子、细胞凋亡、细胞外基质及角质形成细胞的作用等方面有关研究的最新进展进行了报告和分析,希望能为下一步研究和治疗提供一些启示。     

4-羟苯基维胺在不同载体中对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡影响

目的 探讨4-羟苯基维胺(4-HPR)在不同载体中对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)增殖及凋亡的影响.方法 采用薄膜-超声分散法制备4-HPR脂质体溶液及4-HPR微泡溶液.用不同浓度(0～80 mg/L)4-HPR脂质体溶液作用原代HKF 6～48 h后,噻唑蓝(MTF)法检测细胞增殖情况.将部分HKF分成3组,分别用15 mg/L 4-HPR溶液、4-HPR脂质体溶液、4-HPR微泡处理,每组再分成两个亚组,一个亚组在给药后接受超声处理,另一亚组不做超声处理.作用24 h后,噻唑蓝(MTT)法检测HKF的增殖情况.流式细胞仪检测15 mg/L 4-HPR脂质体或4-HPR微泡处理24 h后HKF的凋亡情况.结果 成功制备4-HPR脂质体溶液及4-HPR微泡溶液.MTT检测显示,4-HPR脂质体溶液在1 ～ 80 mg/L浓度范围内对HKF增殖有抑制作用,且增殖抑制率与药物浓度呈正相关(r=0.633,P＜0.01).超声处理后4-HPR微泡组与4-HPR溶液及4-HPR脂质体组对HKF的增殖抑制作用差异均有统计学意义(P＜0.01).4-HPR脂质体组和4-HPR微泡组HKF凋亡率分别为(21.81±3.73)％和(39.79±1.61)％,较对照组(6.18±0.61)％均显著增加(均P＜0.01).结论 成功制备4-HPR微泡,不同载体中4-HPR可促进HKF凋亡,进而抑制增殖,其中4-HPR微泡结合超声抑制作用较4-HPR脂质体强.     

复方倍他米松注射液局部注射治疗瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的多中心研究

目的评价国产复方倍他米松注射液局部注射治疗瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的安全性和疗效,并与进口复方倍他米松注射液(得宝松)进行对照.方法本研究采用多中心、随机盲法、阳性药物平行对照的临床研究方法.受试者分别接受国产复方倍他米松注射液和得宝松注射液治疗.在治疗前、治疗3、6,9周,选择一处无破溃皮损作为观察的靶皮损,观察临床症状和体征.结果本临床试验共入组病例144例,完成试验病例133例,其中对照组64例,试验组69例.试验结束时FAS分析临床疗效有效率(对照组为61.11%,试验组为65.28%,x3=0.27,P=0.6071)、痊愈率(对照组为2.78%,试验组为0.00%,P=0.4965)提示试验组和对照组疗效相当,经检验差异均无统计学意义(P>0.05).安全性方面,试验组共有3例不良反应发生,不良反应发生率为4.17%,两组不良反应发生情况比较差异无统计学意义(P=0.2448).结论国产复方倍他米松注射液局部注射治疗瘢痕疙瘩和增生性瘢痕安全有效,与得宝松相当.

Abstract：

Objective To compare the safety and efficacy of home - made and imported (diprospan) compound betamethasone injection in the treatment of keloid and hypeiplastic scar. Methods A multi-center, randomized, blind, positive-controlled, parallel-group clinical study was conducted. Patients with keloid or hyperplastic scar were divided into test and control groups to receive intralesional injection of compound betamethasone made in China and Schering-Plough Labo N.V. Belgium, respectively. A lesion without ulceration was selected as the target lesion for the evaluation of symptom and signs of patients at the beginning of the treatment (DO), on day 21 (D21), 42 (D42) and 63 (D63) after the initiation of treatment. Results A total of 144 patients were enrolled, and 133 patients, including 64 in the control group and 69 in the study group, completed the trial. The improvement rate was 61.11% in the control group and 65.28% in the test group (x2 = 0.27, P = 0.6071), and the cure rate was 2.78% in the control group, 0.00% in the test group (P =0.4965), indicating that there was no statistically significant difference in the efficiency between the domestic and imported injection (P> 0.05). There were 3 (4.17%) cases of adverse reaction in the test group, and no statistical difference was noted in the occurrence of side effects between the two groups (P = 0.2448). Conclusion The local injection of domestic compound betamethasone shows a favorable efficacy and safety, which are comparable to those of diprospan, in the treatment of keloid and hyperplastic scar.     

Beclin1过表达对黑素瘤SK-MEL-2细胞生物学行为的影响

【摘要】 目的 探讨自噬标志基因Beclin1过表达对黑素瘤SK-MEL-2细胞生物学行为的影响。方法 Western印迹技术检测黑素瘤细胞A375、SK-MEL-2中Beclin1的蛋白表达水平,选取低表达 Beclin1蛋白的SK-MEL-2细胞株作为研究对象,将细胞分为空白组、阴性对照组、实验组,空白组不作处理,阴性对照组转染pcDNA.3.1/myc-His（-）A,实验组转染pcDNA3.1-Beclin1质粒。培养一定时间后,采用CCK8法分析Beclin1对细胞增殖的影响;Transwell实验和细胞划痕实验观察Beclin1过表达对SK-MEL-2细胞侵袭和迁移能力的影响。采用重复测量方差分析和完全随机设计方差分析检验各组间的指标差异,组间比较采用LSD-t检验。结果 SK-MEL-2细胞Beclin1蛋白相对表达水平（0.037 ± 0.010）显著低于A375细胞（0.670 ± 0.150）,F = 46.62,P＜0.05。实验组Beclin1蛋白相对表达水平（0.32 ± 0.04）显著高于阴性对照组（0.06 ± 0.02）和空白组（0.07 ± 0.02）,均P＜0.05。CCK8实验结果显示,不同组间、不同时间细胞增殖率差异均有统计学意义（F组间 = 1 077.36,F时间 = 4 903.04,均P＜0.05）,组别和时间之间有交互作用（F交互 = 205.20,P＜0.05）。Transwell实验显示,24 h后实验组高倍（× 200）视野下穿过小室的细胞数（18.67 ± 1.19）明显低于阴性对照组（87.89 ± 6.05）和空白组（86.78 ± 5.93）,均P＜0.05;划痕实验中24、48 h时实验组细胞迁移距离均显著低于空白组和阴性对照组（P＜0.05）。结论 Beclin1过表达可显著抑制SK-MEL-2细胞的增殖、侵袭和迁移。     

Adipose-derived mesenchymal stem cells-sourced exosomal microRNA-7846-3p suppresses proliferation and pro-angiogenic role of keloid fibroblasts by suppressing neuropilin 2

Background

Exosomes (Exos) and their contained microRNAs (miRNAs) have been emergingly recognized as key regulators in spanning biological processes, including proliferation and angiogenesis.

Aim of the study

This work investigates the function of Exos derived from adipose-derived mesenchymal stem cells (adMSCs) in viability of keloid fibroblasts (KFs).

Methods

Abnormally expressed miRNAs in keloid tissues were screened using the GEO dataset GSE113620. Meanwhile, miRNAs enriched in adMSC-Exos were predicted by bioinformatics system. Exos were extracted from acquired adMSCs and identified, which were co-incubated with KFs. Uptake of Exos by KFs was examined by fluorescence staining. Viability, proliferation, and apoptosis of KFs were analyzed by CCK-8, EdU labeling, and TUNEL assays. Conditioned medium of KFs was collected to stimulate angiogenesis of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Binding between miR-7846-3p and neuropilin 2 (NRP2) was validated by luciferase assay. Protein levels of NRP2 and the Hedgehog pathway molecules were analyzed by western blot analysis.

Results

miR-7846-3p was predicted as an exosomal miRNA aberrantly expressed in keloids. AdMSC-Exos reduced viability, proliferation, and apoptosis resistance of KFs, and they blocked the angiogenesis of HUVECs. miR-7846-3p targeted NRP2 mRNA. miR-7846-3p upregulation in KFs suppressed NRP2 expression and reduced the expression of Hedgehog pathway molecules SHH, SMO, and GLI1. Either miR-7846-3p inhibition in Exos or NRP2 overexpression in KFs blocked the effects of Exos and restored the viability, proliferation, and pro-angiogenic role of KFs.

Conclusion

This work unravels that adMSC-Exos-derived miR-7846-3p suppresses NRP2 and inactivates the Hedgehog signaling to reduce proliferation and pro-angiogenic role of KFs.     

肥大细胞在瘢痕疙瘩发病机理中作用的研究

为探讨肥大细胞在瘢痕疙瘩发病机理中的作用,用透射电镜观察活跃增生瘢痕疙瘩的超微结构。用组胺分别处理体外培养正常皮肤与瘢痕疙瘩成张纤维细胞,采用^3H-脯氨酸掺入、胃蛋白酶消化法检测其胶原合成量。结果：瘢痕疙瘩中有大量含有高度发达粗面内质网的成纤维细胞,还可见有脱颗粒的肥大细胞。瘢痕疙瘩成纤维细胞在胶原合成量已有增加的基础上,经一定浓度组胺作用,其胶原合成量仍有显著增加。结果示肥大细胞可有助于瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成功能的活化及其活化表型的维持。     

人瘢痕疙瘩成纤维细胞裸鼠荷瘤模型的建立

目的 建立一种简单、成功率高的人瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型。 方法 27只雌性BALB/c裸鼠随机分为5组,A、B、C组每组5只,在每只裸鼠腋窝下接种人瘢痕疙瘩成纤维细胞和Matrigel胶混悬液0.1 ml,细胞浓度分别为1.0 × 104个/μl Matrigel胶（A组）、3.0 × 104个/μl Matrigel胶（B组）、5.0 × 104个/μl Matrigel胶（C组）。取C组成形瘤块修剪成若干个5 mm × 5 mm × 5 mm大小的组织块移植于D组裸鼠（8只）的腋窝皮下;E组裸鼠（4只）皮下注射100 μl Matrigel胶作为对照组。A、B、C组出瘤后30 d、D组瘤块移植后30 d肉眼观察瘤体的形成过程及变化,并在第31天处死裸鼠进行组织病理学检查,分析其移植后成形的瘤体组织学变化及裸鼠的心、肝、脾、肺、肾组织的变化。 结果 A、B、C组裸鼠成瘤率为100%,出瘤时间分别为（90.20 ± 3.96） d、（61.00 ± 2.92） d、（39.60 ± 3.20） d。出瘤30 d时3组瘤体体积分别为（288.34 ± 25.29） mm3、（1 370.63 ± 105.24） mm3、（1 940.98 ± 184.37） mm3,3组差异有统计学意义（F = 138.74,P < 0.05）。D组裸鼠成形瘤块移植后瘤块体积先略增大后逐渐减小,移植第14天始持续增大,8只中7只成瘤。E组裸鼠未见瘤体形成。组织病理学检查,各组瘤体的组织形态在镜下一致,与人瘢痕疙瘩组织相似,未见其他脏器组织学改变及转移瘤灶。结论 裸鼠皮下接种人瘢痕疙瘩成纤维细胞可建立瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型,而且已成瘤组织修剪成一定体积再次移植于裸鼠皮下也可以建立瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型。     

Fam114A1蛋白对黑素细胞生物学功能影响的初步研究

【摘要】 目的 初步探讨Fam114A1对黑素细胞生物学功能的影响。方法 以黑素瘤细胞A375为工具细胞株,通过慢病毒转染的方式构建稳定过表达和抑制Fam114A1蛋白的细胞株,即过表达组和表达抑制组,以转染空载慢病毒的A375细胞作为对照组。实时荧光定量PCR检测Fam114A1对黑素合成相关基因酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相关蛋白1（TYRP1）、前黑素小体蛋白（PMEL）、小眼畸形相关转录因子（MITF）和多巴色素异构酶（DCT）mRNA表达的影响,Western印迹法检测TYR、MITF蛋白的表达,MTT法、Transwell迁移和黏附实验分别检测Fam114A1对A375细胞增殖活性、迁移细胞数及黏附能力的影响。统计分析采用单因素方差分析和Dunnett-t检验。结果 荧光显微镜观察慢病毒转染效率均在90%左右。与对照组A375细胞Fam114A1相对表达水平（0.850 ± 0.120）相比,过表达组显著升高（1.507 ± 0.170,t = 5.888,P = 0.001）,而表达抑制组显著降低（0.397 ± 0.120,t = 4.065,P = 0.007）,成功构建稳定过表达和抑制Fam114A1的A375细胞株。实时荧光定量PCR及Western印迹结果显示,表达抑制组TYR和MITF mRNA及蛋白表达均显著低于对照组（均P < 0.01）,而过表达组TYR和MITF mRNA及蛋白表达与对照组差异无统计学意义（均P > 0.05）。与对照组相比,表达抑制组细胞增殖活性和黏附能力显著增强（P = 0.009、0.001）,细胞迁移能力显著减弱（P = 0.005）,而过表达组仅细胞迁移能力显著增强（P = 0.021）。结论 Fam114A1可影响A375的增殖活性、迁移和黏附能力,且影响黑素合成相关蛋白TYR和MITF的表达,可能是一种参与调控黑素细胞生物学活性的功能蛋白。     

葡萄糖转运蛋白3在皮肤鳞状细胞癌中的表达及其对A431细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的探究葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)在皮肤鳞状细胞癌(cSCC)中的表达及其对cSCC细胞系A431的影响。方法收集2016年6月至2020年12月经北京大学第三医院皮肤科病理确诊为cSCC患者的石蜡组织标本22份, 皮肤科手术中废弃的正常皮肤组织20份作为对照, 采用免疫组化法检测cSCC和正常皮肤组织中GLUT3的表达。将A431细胞分为GLUT3过表达组和阴性对照组, 分别转染携带SLC2A3基因的慢病毒载体和慢病毒空载体。实时荧光定量PCR及Western印迹法检测各组细胞中GLUT3 mRNA及蛋白的表达水平, MTS法检测各组细胞增殖活力, 动态细胞成像分析系统Incucyte S3实时检测各组细胞的迁移和侵袭能力。分别用葡萄糖及乳酸试剂盒检测并比较各组细胞48 h葡萄糖消耗量及乳酸产生量。两组间比较采用两独立样本t检验, 多组间比较采用单因素方差分析。结果 cSCC组织中GLUT3的表达[免疫组化评分:(9.39 ± 2.56)分]显著高于正常皮肤组织[(2.30 ± 2.60)分], t = 8.91, P<0.05。与A431细胞阴性对照组相比, GLUT3过...     

Inhibition of vascular endothelial growth factor expression in keloid fibroblasts by vector-mediated vascular endothelial growth factor shRNA: a therapeutic potential strategy for keloid

Vascular endothelial growth factor (VEGF) plays important roles in the regulation of angiogenesis and inflammation in both pathological and physiological wound repair. Several strategies have been developed for keloid therapy; however, a universally effective treatment has not been explored to date. In this study, three potential short interfering RNA (siRNA) sequences for the VEGF gene were cloned into expression plasmids and transfected into keloid fibroblasts. PGC-VEGF shRNA 2 (short hairpin RNA 2) plasmid significantly inhibited VEGF expression determined by real-time polymerase chain reaction (PCR), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and fibroblasts growth was also significantly by (methyl thiazolyl tetrazolium) MTT assay and apoptosis detection, whereas the control transfection showed no obviously effects. Plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) expression in pGC-VEGF shRNA2 group was also obviously downregulated when compared to the pGC-VEGF shRNA negative control and mock group. These results suggest that modulation of VEGF production by vector-based RNAi in keloid fibroblasts may be a therapeutic potential strategy for keloid. Guo-You Zhang and Cheng-Gang Yi contributed equally to this work.     

辛伐他汀对缺氧黑素瘤细胞A375增殖凋亡及迁移的影响

目的 探讨辛伐他汀对缺氧黑素瘤细胞A375增殖、凋亡、迁移调控的分子机制.方法 在常氧或缺氧环境下体外培养A375细胞,细胞分为辛伐他汀处理的辛伐他汀组与二甲基亚砜处理的对照组,通过CCK-8细胞计数试剂盒检测细胞活力,Annexin V/PI凋亡实验检测细胞凋亡,插入式细胞培养皿transwell迁移实验检测细胞迁移.RT-PCR法、Western印迹法检测辛伐他汀组与对照组细胞低氧诱导因子(HIF)-1α、生存素、细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子(P27),以及沉默缺氧A375细胞的HIF-1α后的生存素、p27 mRNA与蛋白表达水平.结果 常氧或缺氧环境下,辛伐他汀组与对照组A375细胞增殖活力、凋亡细胞比例、细胞迁移数组间差异均有统计学意义(F值95.84、37.22、177.5,均P＜0.001),缺氧对照组A375细胞的增殖活力(1.391±0.129)、细胞迁移数(322.550±26.226)均高于常氧对照组(0.807±0.049、125.583±17.256)、缺氧辛伐他汀组(0.685±0.417、115.167±12.050)(P＜ 0.001);缺氧对照组细胞凋亡比例(6.167％±2.714％)均低于常氧对照组(11.833％±2.483％)、缺氧辛伐他汀组(17.833％±2.714％)(P＜0.01).缺氧辛伐他汀组HIF-1αmRNA与蛋白水平、生存素mRNA与蛋白水平均低于对照组(P＜ 0.05);P27mRNA与蛋白水平均高于对照组(P＜0.05).沉默缺氧A375细胞中HIF-1α后,生存素mRNA与蛋白水平均低于对照组(t值为5.346、8.281,P＜0.05),P27 mRNA与蛋白水平高于对照组(t值为31.37、9.954,P＜0.01).结论 辛伐他汀可抑制缺氧A375细胞的增殖及迁移,促进凋亡,其机制可能与HIF通路有关.