酶标记抗人IgM McAb及其初步鉴定应用

采用辣根过氧化物酶(HRP),以改良过碘酸钠法标记了国内三个单位制备的6种抗人IgM单克隆抗体(McAb),并对其进行了初步鉴定和应用,结果显示这些HRP标记抗体的效价高低不一。分析表明McAb与多克隆抗体一样,其标记前的效价高低是决定HRP标记后效价高低的关键因素。选择高效价的HRP-抗人IgM McAb用于ELISA间接夹心法中检测病人血清特异性IgM抗体,其特异性和敏感性与采用HRP-羊抗人μ链免疫血清检测结果基本相同。     

流行性出血热IgM抗体检测(抗体捕捉ELISA法)

本文报道应用IgM-抗体捕捉酶联免疫吸附法(IgM antibody-capture ELISA,或称反向间接酶联免疫吸附法,Reverse indirect ELISA)检测流行性出血热(Epidemic hemorrhagic fever,EHF)患者血清特异性IgM抗体的结果。该方法能特异、敏感地测出EHF患者发病第2天的血清IgM抗体,阳性率为87.5(7/8),第4病日阳性率达95％(57/60),而病程第7天的38例患者血清全部阳性。15例非EHF发热病人及10例正常人血清无1例阳性,并经2-MB试验与加热试验证明了其特异性。另外,研究表明,对于类风湿因子(RF)干扰所致假阳性反应,本实验所采用的阴性抗原平行对照设计能成功地予以校正而排除。     

利用HRP-抗人μ链McAb组化法检测EHF-IgM抗体用于早期诊断的研究

本文用自制抗人μ链McAb标记辣根过氧化物酶(HRP),采用组化法检测EHF病人急性期血清IgM抗体共103例,阳性为101例,阳性率为98％,其它病人及正常血清40例均为阴性。同时与间接免疫荧光法(IAF)比较,获得一致结果。此法用于EHF病人早期诊断,具有染色标本可长期保存,便于复查。方法简便,敏感性高,特异性强,不需荧光显微镜,在普通元学显微镜下即可检出等优点,易于在一般基层医院等单位推广应用。     

用免疫转印技术检测流行性出血热病人特异性抗体的探讨

采用免疫转印技术检测了147份临床诊断为EHF病人血清中的特异性IgG抗体,结果133份血清可检出针对分子量在68和66kd左右两种病毒多肽的抗体,检出率为90.4％,略高于免疫荧光试验(88.4％),两种抗特异性多肽抗体的几何平均滴度分别为荧光法的4倍和2.1倍。本法具有特异性强、敏感性高和重复性较好等特点,并能检出针对不同抗原亚基成份的抗体,可作为EHF特异性诊断的方法之一。     

三种免疫学方法在EHF早期诊断中的比较

<正> 本文比较了捕获ELISA(Mac·ELISA)和2-ME·HI法检测流行性出血热(EHF)特异性IgM抗体的敏感性和特异性,并与经典法IFAT检测IgG作对照,结果报告如下: 材料和方法 一、临床诊断为EHF急性期住院病人66例,其中取得双份以上血清的34例,计97份血清,EHF     

类风湿关节炎患者血清IgG-IgM型类风湿因子免疫复合物检测的临床意义

目的 探讨血清IgM型类风湿因子与变性IgG抗原形成的复合物定量检测对类风湿关节炎诊断的临床意义.方法 收集类风湿关节炎(RA)患者36例、非RA患者41例和体检健康者40名作为研究对象.用包被有鼠抗人μ链抗体的ELISA孔板及HRP标记的兔抗人IgG对血清中IgM型类风湿因子(RF)与变性IgG抗原形成的免疫复合物水平进行检测,同时用胶乳凝集法检测RF,并对二者结果进行相关性分析;用ELISA试剂盒进行抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)的定性检测,并比较其与IgG-IgM型RF免疫复合物对于RA诊断的敏感性和特异性.结果 待检血清最佳稀释倍数为100倍.IgG-IgM型RF免疫复合物对于RA的敏感性为72.2％,特异性为95.3％.IgG-IgM型RF免疫复合物OD值与RF阳性程度相关系数为0.687(P ＜0.01).结论 血清IgG-IgM型RF免疫复合物水平对RA具有较高的敏感性和特异性,可作为RA诊断的参考指标.     

肾综合征出血热患者抗体的消长动态

<正> 肾综合征出血热(HFRS)的早期快速诊断国内已多报道,据认为IgM和IgG类特异性抗体均可作为早期诊断的依据。我们试用2-巯基乙醇(2-ME)处理待检血清,用血凝抑制试验检测IgM,籍以观察HFRS患者不同病期IgM和IgG类抗体的消长动态,结果如下。     

应用抗人μ链McAb和APAAP法检测HFRS患者血清中IgM抗体

<正> 肾综合征出血热(HFRS)患者的早期特异性诊断多采用免疫荧光法检测血清中IgM抗体。最近有报道采用抗人μ链McAb荧光结合物检测患者血清IgM抗体。本文以HFRS病毒陈株感染Wish细胞作为抗原     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究(简报)

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体对临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT)和免疫酶染色法虽已被广泛应用,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验主要检出IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(Mc Ab)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和IgG抗体,并与IFAT进行了比较。     

SP-RPHA的建立及其在EHF-IgM检测中的应用

<正> 固相免疫吸附血凝试验(SPISHA)在国内已经开展起来。它具有血凝试验使用方便、容易掌握、结果判断直观的特点,因而颇受欢迎。固相反向间接血凝(SP-RPHA)既可用于抗原检测,又可用于IgM抗体检测。反向间接血凝抑制试验(RPHI)已用于EHF的诊断。但所测IgM、IgG混合抗体持续时间很长,其临床诊断价值不如IgM。加之RPHI属液相反应系统,易受多种因素     

2019新型冠状病毒特异性IgM/IgG抗体检测假阳性回顾性分析1例

目的 回顾性分析新型冠状病毒特异性抗体IgM假阳性一例的影响因素.方法 通过采集患者血清进行类风湿因子(rheumatoid factor RF-IgM,RF-IgA,RF-IgG)、补体(complement C3,C4)、抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)及抗核抗体谱(antinuclear antibody spectrum,ENA)、核周因子(perinuclear factor,AFP)、抗环瓜氨酸肽(anti-cyclic citrullinate peptide,CCP)的测定以探讨造成新型冠状病毒特异性抗体IgM假阳性的因素.结果 除了酶联免疫吸附法检测该患者RF-IgM弱反应外其余均为阴性,再用散射比浊法测定同一份标本RF-IgM结果低于检测线.由于实验室条件限制没能将所有可能造成假阳性的外源性因素都探查一遍,所以最终没能查出真正的影响因素.结论 建议核酸测定最好联合胶体金法和化学发光法两种抗体检测方法.核酸检测与抗体检测的联合可提高诊断效率,当检测结果出现不一致情况时,一定要综合分析判断再进行结果解读,避免误诊.     

间接ELISA法检测轮状病毒

本文报道检测急性小儿腹泻患者粪便中轮状病毒的间接 ELISA 法。分别用兔抗 SA_(11)轮状病毒血清和正常兔血清的粗提 IgG 包板,检测抗体为豚鼠抗 SA_(11)抗体。酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗豚鼠 IgG 抗体。根据正常人标本结果为阴性,阻断试验成立,以及阳性标本用正常豚鼠血清检测为阴性,说明本试验具特异性。分析比较50份标本的电镜检查结果和间接 ELISA 试验结果,说明本试验的敏感性好。初步比较了抗牛轮状病毒(NCDV)抗体和抗 SA_(11)抗体检测的结果,两者基本一致。用硫酸铵粗提的 IgG 代替兔全血清,可减少非特异性显色。     

检测肺炎衣原体血清IgM抗体ELISA的建立和应用

特异性抗体测定是目前诊断肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,C.pn)感染较敏感的方法.主要外膜蛋白(MOMP)是C.pn重要的抗原成分,具有良好的免疫原性,与C.pn的感染密切相关,其特异性抗体具有免疫保护作用[1].机体感染C.pn后体内可出现特异性的IgM抗体,检测该IgM抗体可作为判断C.pn感染的标志.本研究利用特异性的MOMP抗原,建立检测血清中C.pn特异性IgM抗体的ELISA[2],以351例病原学确诊的临床血清标本和11例其他病原体感染的肺炎患者血清标本为对照,对其灵敏度和特异性进行了评价,现报告如下.     

抗体捕获ELISA检测包虫病人特异性IgM抗体及其应用的研究

用标记抗原、标记抗体、标记抗抗体及ABC四种形式的抗体捕获ELISA法检测包虫病人血清中特异性IgM抗体,结果以ABC-捕获ELISA法阳性率最高为52.5％,标记抗抗体法次之为39.6％,标记抗体法为22.5％,标记抗原法阳性率最低为20.7％。四种方法检测健康人血清均为阴性。手术前的包虫病人血清中特异性IgM抗体的阳性率明显高于手术后者,分别为52,2％和20％。不同寄生部位包虫病人特异性IgM抗体的阳性率没有明显差别。在入院就诊的病人中阳性率为35.4％,而在普查中发现的无症状病人中阳性率达70.5％,说明特异性IgM的检测在包虫病中也具有早期诊断的意义。     

肾综合征出血热(HFRS)病毒McAb在临床早期诊断中应用的研究

本研究用间接荧光抗体试验检测77例临床诊断为HFRS病人外周血白细胞中病毒抗原。阳性率为50.7％,在早期病例中(第2—5病日)阳性率为64.3％(27/42),并发现病日越早、病情越重,阳性率越高。在间接免疫荧光中应用了抗HFRS病毒MCAb 4B_9、4E_7、3H_4株。抗原阳性者与3种McAb表现为5种反应类型,不同McAb对抗原的检出率也不相同。将McAb组合可提高阳性检出率。在抗原阳性早期患者中,急性期血清特异性IgM抗体阳性率为96.3％。将HFRS抗原检测和急性期IgM测定联合应用,可提高HFRS早期诊断的阳性率和准确性。     

人μ链单克隆抗体的研制及临床应用

IgM是人血清中重要的免疫球蛋白之一,血清、组织及细胞中IgM检测与临床许多疾病的诊断有密切关系。特异性IgM抗体的检测对细菌、病毒感染早期快速诊断有重要价值。为此,我们用杂交瘤技术制备了抗人μ链单克隆抗体(MCAb),并已初步应用于临床。其主要步骤为: 一、人μ链McAb制备 从巨球蛋白血症患者血清中提取、纯化lgM(1.2g/L)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与同系小鼠SP2/0骨髓瘤细胞融合,用PHA及ELISA八二种方法筛选,结果获二个分泌抗人μ链杂交瘤细胞株(2D6、E4),具抗体效价分别为2~(-5)和蔼~(-4)(PHA)。选取2D6制备小鼠腹     

150例甲型肝炎患儿抗—HAV—IgM RIA

IgM抗体是一种早期抗体,系巨球蛋白,在甲型肝炎的急性期和感染早期,血清中HAV—IgM抗体的检测,是患儿肝病诊断和鉴别的重要指标。本文对150例甲型肝炎患儿进行了测定,现将结果报道如下。     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测家鼠型HFRS疫区人和动物血清中特异性抗体

用McAb-ELISA间接夹心法和IFAT或酶标SPA染色法平行检测山西地区(家鼠型HFRS疫区)的人及动物血清中HFRS病毒特异性IgM和/或IgG抗体。结果ELISA检测174份HFRS病人血清的阳性率及抗体滴度均明显高于IFAT。检测295份无明确HFRS病史的健康人血清,ELISA的阳性率也高于IFAT。检测215份鼠类血清,102份兔血清及108份猪血清,ELISA的阳性检出率与IFAT或酶标SPA染色法基本相同。用阻断试验等证明本ELISA检出的确是HFRS病毒特异性抗体。对ELISA的某些试验条件作了讨论,并认为,McAb-ELISA在帮助临床早期诊断及血清流行病学调查等方面均有实用价值。     

抗人μ链单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株。mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)采用ELISA及Westernblot法鉴定。以纯化的mAb包被建立ELISA捕捉法,并用于可疑乙脑患者标本中特异性IgM抗体的检测。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人μ链mAb的细胞株2E5。mAb腹水的ELISA效价为1×10-6,Ig亚类(型)为IgG1(κ),相对亲和力为1×10-5。Westernblot结果显示mAb2E5仅与IgM的μ链结合,Mr为75000。以辛酸硫酸铵法纯化的mAb2E5包被,建立了ELISA捕捉法,用于30份乙脑患者血清IgM的检测,敏感性及特异性良好。结论:成功地制备1株抗人μ链mAb2E5,建立了可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。     

应用MAC-ELISA方法检测呼吸道合胞病毒IgM抗体

建立酶联免疫吸附试验(MAC-ELISA)检测呼吸道合胞(RS)病毒特异性IgM抗体方法,并与中和试验(NT)进行对比。 取35例患毛细支气管炎婴幼儿的急性期及恢复期双份血清共70份标本进行研究。MAC-ELISA测得急性期血清中RS病毒特异性IgM抗体的阳性率为27/35(77.14％),而恢复期血清中和抗体呈≥4倍升高者为23/35(65.71％)。凡NT阳性病例,MAC-ELISA也呈阳性;凡MAC-ELISA阴性病例,NT也呈阴性。另4例NT阴性而MAC-ELISA呈阳性。两者阳性符合率为88.57％。 本研究也观察了IgM抗体与年龄的关系。在6个月龄以前,MAC-ELISA的阳性率远远高于NT。 实验说明采用MAC-ELISA检测RS病毒特异性IgM是可靠的快速诊断方法。