乳腺癌HER-2基因荧光原位杂交检测的临床应用

目的研究荧光原位杂交(FISH)用于乳腺癌HER-2检测的临床应用及HER-2基因扩增与乳腺癌临床病理的相关性。方法应用FISH技术和免疫组化(IHC)技术检测40例乳腺浸润性导管癌石蜡包埋标本,对比分析。结果IHC检测CerbB-2(3+)/(2+)/(1+或0),其FISH阳性率分别为85.7%、50%、5.9%。24例腋窝淋巴结阳性者,其FISH检测HER-2基因扩增10例(P=0.0399)。ER/PR阴性8例,其HER-2基因扩增6例(P0.05)。结论IHC检测HER-2蛋白有很高的假阳性及假阴性,FISH有效性及准确性显著高于IHC,可在临床广泛推广应用。HER-2基因扩增与腋窝淋巴结阳性相关。     

乳腺癌HER-2基因荧光原位杂交检测的临床应用

目的研究荧光原位杂交（FISH）用于乳腺癌HER-2检测的临床应用及HER-2基因扩增与乳腺癌临床病理的相关性。方法应用FISH技术和免疫组化（IHC）技术检测40例乳腺浸润性导管癌石蜡包埋标本,对比分析。结果IHC检测CerbB-2（3＋）/（2＋）/（1＋或0）,其FISH阳性率分别为85.7%、50%、5.9%。24例腋窝淋巴结阳性者,其FISH检测HER-2基因扩增10例（P=0.0399）。ER/PR阴性8例,其HER-2基因扩增6例（P〉0.05）。结论IHC检测HER-2蛋白有很高的假阳性及假阴性,FISH有效性及准确性显著高于IHC,可在临床广泛推广应用。HER-2基因扩增与腋窝淋巴结阳性相关。     

荧光原位杂交hTERC基因扩增检测在宫颈癌早期诊断中的应用

目的探讨荧光原位杂交技术检测hTERC基因在子宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌中的烤贝数扩增情况,了解其在宫颈癌早期诊断应用。方法收集2008年6月至2010年6月在本院就诊的396例宫颈脱落细胞,以生理盐水制片和液基细胞学(TCT)低渗法制片,应用荧光标记探针GLP TERC/CSP 300 m,用荧光原位杂交(FISH)技术进行hTERC基因烤贝数的检测,并分析检测结果的临床效应性。结果在396例临床标本中,正常宫颈细胞中表达率为1.012%(阈值);宫颈癌组的阳性率为93.65%(59/63)、CIN总阳性率为65.82%(104/158),宫颈癌组分别与正常组和炎性反应/CINⅠ组3.01%(4/133)相比较,差异均有统计学意义(P0.01);CINⅡ组的阳性表达率为60.24%(50/83),CINⅢ组的阳性率为72.0%(54/75),CINⅡ组、CINⅢ组分别与正常和炎性反应/CINⅠ组比较,差异均有统计学意义(P0.01);CINⅢ组、CINⅢ组与宫颈癌组比较,差异也均有统计学意义(P0.01);hTERC基因在宫颈癌细胞株hela和正常骨髓淋巴细胞中基因扩增呈阳性。结论 hTERC基因参与宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的发生发展,作为宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的标志物,hTERC的阳性表达率与宫颈细胞癌前病变具有严重程度相关。hTERC基因的检测可作为提高宫颈癌早期诊断率的重要手段和癌前病变治疗的重要依据。     

乳腺癌HER-2基因检测的临床价值

目的:探讨乳腺癌HER-2基因在蛋白及基因水平的表达情况及其临床应用价值.方法:应用免疫组织化学法及荧光原位杂交法分别测定44例乳腺癌患者HER-2蛋白表达及基因扩增情况.结果:免疫组织化学检测HER-2蛋白,44例乳腺癌中(+++)11例(25%),(++)19例(43%),(+～0)14例(32%).荧光原位杂交检测HER-2基因,44例乳腺癌中(+)10例(23%),(一)34例(77%).免疫组织化学检测(+++),(++),(+～0)与荧光原位杂交检测符合率分别为64%(7/11),16%(3/16),100%(14/14),3组间差异有统计学意叉(P＜0.05).结论:免疫组织化学可作为乳腺癌HER-2是否过表达的初筛,但只有与荧光原位杂交检测方法结合,才能更准确客观地指导临床用药及预后判断.     

荧光原位杂交检测细胞中hTERC基因扩增在宫颈癌早期诊断中的意义

目的检测hTERC基因在子宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈癌中的拷贝数扩增情况,探讨其作为宫颈癌早期诊断标志物的可能性。方法采集在本院就诊的95例宫颈脱落细胞,经病理诊断确诊,其中正常10例,炎症／CINⅠ32例、CINⅡ20例、CINⅢ18例,宫颈癌15例。以生理盐水制片和TCT低渗法制片,应用荧光标记探针GLPTERC／CSP3米,用荧光原位杂交（FISH）方法进行hTERC基因拷贝数的检测。3号染色体着丝粒为对照,1株宫颈癌细胞和正常骨髓淋巴细胞为阳性对照,正常宫颈细胞为阴性对照。结果95例临床标本中,正常宫颈细胞中表达率为1．012％（阈值）;宫颈癌组的阳性率为93．3％（14／15）、CIN总阳性率为65．79％（25／38）,与正常和炎症／CINⅠ组3．13％（1／32）差异有统计学意义（P〈0．05）;CINⅡ组的阳性表达率为60％（12／20）,CINⅢ组的阳性率为72．2％（13／18）,与正常和炎症／CINI组差异有统计学意义（P〈0．05）;CINHI组与宫颈癌组差异无统计学意义（P〉0．05）;hTERC基因在宫颈癌细胞株hela和正常骨髓淋巴细胞中基因扩增呈阳性;hTERC的阳性表达率与宫颈细胞癌前病变的严重程度相关。结论hTERC基因参与宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的发生发展,作为宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的标志物,hTERC基因的检测可作为提高宫颈癌早期诊断率的重要手段和癌前病变治疗的重要依据。     

胃癌组织HER-2基因扩增和蛋白表达检测及临床意义

目的 探讨免疫组化（immunohistochemistry,IHC）法检测胃癌HER-2蛋白表达和荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）法检测HER-2基因扩增的临床意义.方法 收集256例胃癌患者手术切除及胃镜活检的胃癌组织标本,分别采用IHC法及FISH法检测胃癌组织HER-2蛋白表达及基因扩增状态,并对结果进行统计学分析.结果 256例胃癌组织标本中,有26例HER-2蛋白表达阳性,阳性率为10.16％;46例HER-2基因有扩增,阳性率17.97％.26例HER-2蛋白表达（3＋）的标本中,24例有HER-2基因扩增,2例无扩增;95例HER-2蛋白表达（2＋）的标本中,20例有基因扩增,75例无扩增;90例HER-2蛋白表达（1＋）的标本中,2例有基因扩增,88例无扩增;45例HER-2蛋白表达（0）的标本中,HER-2基因均无扩增.IHC法和FISH法检测HER-2表达阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 IHC法检测胃癌HER-2蛋白表达可作为临床治疗的初筛,HER-2蛋白表达（2＋）的患者应常规行FISH法,以确定HER-2基因扩增状态.FISH法检测结果具有较高的稳定性和可靠性,联合IHC法可更准确和客观评价胃癌预后,并指导临床选用靶向药物治疗.     

双色银染原位杂交技术检测胃癌HER2基因扩增及临床意义

目的 探讨双色银染原位杂交技术（dual-color silver-enhanced in-situ hybridization,DSISH）检测胃癌人类表皮生长因子受体2（human epidermalgrowth factor receptor-2,HER2）基因扩增的可行性及其与临床病理学特征的关系.方法 应用DSISH技术检测230例患者胃癌切除组织中HER2基因扩增状态,并进行相关统计学分析.结果 DSISH检测230份胃癌标本中43例存在HER2基因扩增,HER2基因扩增率为18.7％.HER2基因扩增与胃癌的分化程度、淋巴结转移有关（P均＜0.05）,与患者年龄、性别、肿瘤发生部位、浸润深度、神经以及脉管侵犯无关（P均＞ 0.05）.结论 DSISH技术检测胃癌HER2基因扩增状态具有可行性;HER2基因扩增可以反应胃癌生物学行为.     

双色双融合荧光原位杂交方法检测bcr/abl融合基因

本研究总结分析1295份双色双融合荧光原位杂交方法(DC-DF-FISH)检测的bcr/abl融合基因结果并与常规细胞遗传学结果对比,进一步证实双色双融合荧光原位杂交方法检测bcr/abl融合基因的敏感性及临床应用价值.应用bcr/abl双色双融合DNA探针对骨髓间期细胞行荧光原位杂交,回顾分析FISH和核型检测结果.结果表明:在所检测的539例患者的1 295份骨髓标本中FISH阳性结果456份,涉及患者310例,核型正常的18例,核型分析失败的5例.310例FISH阳性病例中典型的DC-DF-FISH信号(2Y1G1R)234例,占75.5%(234/310).非典型信号患者76例,其中变异信号66例,占FISH阳性病例的21.3%(66/310).典型变异信号(1Y2G2R)16例,abl/和/或bcr缺失50例.213例多次DC-DF-FISH结果中,治疗后总转阴率为60%(128/213),治疗过程中阴性阳性多次反复的达12例.结论:双色双融合FISH技术可以检测隐匿核型、变异核型、基因序列缺失、微小残留病(MRD),是一个敏感、精确的白血病的诊断和治疗监测工具,有必要同细胞遗传学检查一样作为常规项目,尤其对于治疗后的病例,它在监测微小残留病及监测复发方面更优于常规细胞遗传学.     

间期荧光原位杂交技术检测恶性血液病的11q23/MLL基因重排

目的分析伴有11q23／MLL基因重排的恶性血液病的细胞遗传学特点,探讨荧光原位杂交技术（FISH）在诊断及鉴定恶性血液病11q23／MLL基因重排中的价值。方法用间期FISH分析11q23／MLL基因易位细胞的30例恶性血液病患者的核型特征,用MLL双色分离探针绿色标记在（5′MLL,光谱绿）和（3′MLL,光谱桔红）。结果应用常规细胞遗传学及间期FISH分析白血病患者30例,结果显示11q23＋／MLL＋患者9例（30．0％）,12q23-／MLL＋患者4例（13．3％）,11q23＋／MLL-患者2例（6．7％）,11q23-／MLL-患者15例,检测到部分病例染色体核型分析与间期FISH方法检测11q23异常与MLL基因重排不一致。结论FISH在检测11q23／MLL基因重排方面与传统的常规细胞遗传学相比具有检出率高的优势,能更有效、直观地分析恶性血液病的染色体异常,对于恶性血液病的诊断以及异常染色体的检出具有广泛的应用前景。     

荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究

目的 比较桂林市荧光原位杂交法(FISH)和免疫组织化学法(IHC)检测乳腺癌组织中人表皮生长因子受体(HER-2)基因扩增及其蛋白表达情况的一致性,探讨FISH与IHC检测乳腺癌HER-2基因状态的临床意义.方法 应用IHC和FISH对50例乳腺癌患者HER-2蛋白表达、基因扩增情况及17号染色体倍体性进行检测,分析IHC与FISH检测HER-2基因状态的差异以及HER-2蛋白状态与17号染色体倍体性的相天性.结果 FISH与IHC结果 总的符合率为82.0%,两者之间存在较好的一致性(kappa=0.640),FISH检测IHC结果 为3+、2+和0/1+者的符合率分别为92.9%、70.0%和80.8%;IHC3+及2+者出现17号染色体多体性的几率比IHC0/1+者高(P<0.05).结论 FISH可以准确和稳定地检测乳腺癌组织中HER-2的基因状态及17号染色体倍体性;FISH检测IHC3+者符合率较高,FSH与IHC的差异主要在于IHC2+和IHC0/+组,IHC仅作为检测HER-2基因状态的初筛方法 ,而IHC结果 为2+或0/1+者的HER-2基因状态必须应用FISH进一步确定.     

应用FISH和IHC技术检测中国乳腺癌患者HER-2基因状态及蛋白表达的前瞻性多中心研究

目的 对比研究乳腺癌患者IHC检测c-erbB2蛋白表达和FISH检测HER-2/neu基因扩增情况,并探讨HER-2基因状态与各临床病理特征的相关性.方法 本研究为全国73家中心参与的前瞻性研究.收集2007年10月至2009年9月乳腺癌患者标本3 249份,应用IHC和FISH两种方法分别检测3 249份乳腺癌患者手术的石蜡标本c-erbB2蛋白表达和HER-2基因扩增情况,并分析HER-2基因状态与患者各临床病理特征的关系.结果 全组患者IHC检测c-erbB2蛋白表达阳性率为46.9%(1477/3149),FISH检测HER-2基因扩增率为42.6%(1342/3149),其中IHC评分为3+和0分时,与FISH检测的一致性较高,分别为94.1%(892/948)和89.9%(660/734),而IHC 1+和2+组与FISH的一致性较低,分别为71.0%(514/725)和55.9%(415/742).同时,HER-2基因扩增与激素状态中雌激素与孕激素均阴性(r=0.45,P<0.01)、组织分级Ⅲ级(r=0.51,P<0.01)、淋巴结转移数目多于4枚(r=0.35,P<0.01)、临床分期Ⅲ/Ⅳ期(r=0.33,P<0.01)、肿瘤直径>2 cm(r=0.38,P<0.01)、绝经后(r=0.24,P<0.01)有相关性,与年龄(r=0.36,P=0.068)、CA125(r=0.11,P=0.722)、CA153(r=0.23,P=0.45)和CEA(r=0.22,P=0.074)表达情况、淋巴结转移(r=0.15,P=0.18)、肿瘤个数(r=0.21,P=0.056)及脉管瘤栓(r=0.12,P=0.133)无相关性.结论 FISH和IHC两种方法检测HER-2表达状态具有较高的一致性.结合实际情况包括费用仪器等限制,在IHC作为初筛的基础上,仍然推荐FISH作为检测HER-2基因扩增的标准方法.FISH技术检测乳腺癌患者HER-2基因表达状态可为临床指导用药和预后评价提供更可靠的依据.     

荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究

目的比较桂林市荧光原位杂交法（FISH）和免疫组织化学法（IHC）检测乳腺癌组织中人表皮生长因子受体（HER-2）基因扩增及其蛋白表达情况的一致性．探讨FISH与IHC检测乳腺癌HER-2基因状态的临床意义。方法应用IHC和FISH对50例乳腺癌患者HER-2蛋白表达、基因扩增情况及17号染色体倍体性进行检测,分析IHC与FISH检测HER-2基因状态的差异以及HER-2蛋白状态与17号染色体倍体性的相关性。结果FISH与IHC结果总的符合率为82．0％．两者之间存在较好的一致性fkappa=0．6401,FISH检测IHC结果为3＋、2＋和0／1＋者的符合率分别为92．9％、70．0％和80．8％;IHC3＋及2＋者出现17号染色体多体性的几率比IHC0／1＋者高（P〈0．05）。结论FISH可以准确和稳定地检测乳腺癌组织中HER-2的基因状态及17号染色体倍体性：FISH检测IHC3＋者符合率较高,FISH与IHC的差异主要在于IHC2＋和IHC0／＋组,IHC仅作为检测HER-2基因状态的初筛方法．而IHC结果为2＋或0／1＋者的HER-2基因状态必须应用FISH进一步确定。     

HER-2基因原位杂交方法学探讨

目的 尝试用新型自动化原位杂交仪(HS400Pro)建立规范化、标准化操作步骤.方法 可有效降低实验所需探针浓度、提高杂交效率.对5例已知HER-2阳性的乳腺癌存档蜡块,采用动态杂交技术行2种不同DNA探针标记(DIG和FITC),分别用手工和HS400Pro全自动杂交检测系统对比检测结果.结果 探针用专利杂交液按1∶40稀释后,采用新型自动化原位杂交仪37℃杂交12 h与手工37℃杂交18h结果一致.说明该仪器可以基本替代手工开展ISH.结论 自动化原位杂交仪的使用是实现ISH自动化、标准化、规范化的好方法.但要继续扩大检测样本量,找出HS400Pro的最佳杂交条件.     

Evaluation of the quantitative analytical methods real-time PCR for HER-2 gene quantification and ELISA of serum HER-2 protein and comparison with fluorescence in situ hybridization and immunohistochemistry for determining HER-2 status in breast cancer patients

BACKGROUND: HER-2 status is generally determined by immunohistochemistry (IHC) or fluorescence in situ hybridization (FISH). Both methods are only semiquantitative, require a tumor sample, and can be difficult to reproduce. We compared these methods with 2 quantitative approaches, one measuring HER-2 gene copy number in tissue by real-time quantitative PCR (qPCR), and the other measuring shed HER-2 protein in serum by ELISA in patients with metastatic disease. METHODS: We analyzed 52 cases of metastatic breast cancer for which both serum collected at the diagnosis of metastasis and stored primary breast tumor specimens were available. The within- and between-run imprecision of real-time qPCR and ELISA were evaluated according to Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly known as NCCLS) recommendations. Concordance among the 4 methods was assessed by calculating the kappa statistic and its 95% confidence interval (95% CI). RESULTS: The CVs for within- and between-run imprecision were both <10% with qPCR and ELISA. There was good agreement of results between qPCR and IHC (kappa = 0.81; 95% CI, 0.64-0.99), qPCR and FISH (kappa = 0.77; 95% CI, 0.58-0.96), ELISA and IHC (kappa = 0.65; 95% CI, 0.41-0.89); and ELISA and FISH (kappa = 0.69; 95% CI, 0.46-0.92). CONCLUSIONS: Measurements of HER-2 gene expression by qPCR and of serum HER-2 protein by ELISA are highly reproducible approaches for determining HER-2 status in metastatic breast cancer. In addition, ELISA eliminates the need for biopsy.     

乳腺癌HER-2基因扩增与临床病理特征的关系

目的 比较荧光原位杂交(FISH)和免疫组化(IHC)检测乳腺癌组织中人表皮生长因子受体2(HER-2)基因扩增及蛋白表达的一致性,并探讨HER-2基因扩增与临床病理特征的关系.方法 回顾性分析本院采用FISH法检测HER-2基因状态的112例乳腺癌,与IHC结果进行一致性分析,并对HER-2基因扩增与年龄、组织学分级、淋巴结转移及激素受体的关系进行统计学分析.结果 112例浸润性乳腺癌中,HER-2基因扩增57例,其中IHC检测HER-2(3+)者27例,(2+)者29例,(1+)者1例,分别占IHC病例总数的96.4％ (27/28)、48.3％ (29/60)和5.3％ (1/19).HER-2基因扩增与雌/孕激素受体呈负相关,而与年龄、组织学分级、淋巴结转移差异不显著.结论 对于IHC检测HER-2(3+)、(+或0)的病例可选择性做FISH进行确认,对于HER-2(2+)病例应常规进行FISH检测,以便更加准确和客观地对治疗和预后进行评价.     

Her-2/Neu在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的检测Her-2/Neu在不同胃癌组织中的表达,分析Her-2/Neu的表达与临床病理特征的相关性及其对预后的影响。方法应用免疫组化二步法,检测60例胃癌患者术后标本中Her-2/Neu的表达情况,并结合临床病理特征及该60例患者的随访资料进行综合分析,具体为:采用χ2分析Her-2/Neu在不同组织类型胃癌中的表达是否有差异;采用Spearman进行等级相关分析,分析Her-2/Neu表达与临床病理特征的相关性,采用Kaplan-Meier法进行生存期分析,分析Her-2/Neu表达对胃癌术后患者无病生存期及总生存期的影响。结果 (1)在60例胃癌组织中Her-2/Neu表达阳性者为29例(48.3%),在不同组织类型的胃癌中表达无差异。(2)Her-2/Neu的表达与浸润深度、淋巴结转移、临床分期有关,Spearman相关系数分别为0.360、0.321、0.412(P均<0.05)。Her-2/Neu表达阳性的患者无病生存期及中位生存期均显著低于表达阴性者。结论 (1)Her-2/Neu的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移情况及TNM分期相关。(2)生存分析显示,Her-2/Neu阳性表达者生存期劣于阴性表达者。     

端粒酶、人类表皮生长因子受体2和 c-myc 基因在宫颈病变中的表达及与高危型人乳头瘤病毒感染的相关性

目的：研究端粒酶基因（hTERC）、人类表皮生长因子受体2（HER-2）基因和 c-myc 基因在不同程度宫颈病变的表达情况及与高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染的相关性。方法选取236例就诊或筛查患者,行 TCT、HPV、hTERC、HER-2和 c-myc 基因检测。对任一阳性患者行阴道镜下多点活检,进行病理检测。结果①236例中有108例进行宫颈活检,在正常／慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ及浸润性子宫颈癌中 hTERC 阳性表达率分别为16．0％、39．5％、64．5％、100．0％;HER-2阳性表达率分别为4．0％、20．9％、45．2％、100．0％;c-myc阳性表达率分别为8．0％、30．2％、54．8％、100．0％;HPV 阳性率分别为40．0％、67．4％、80．6％、100．0％。②不同病理结果之间 hTERC、HER-2和 c-myc 阳性率比较差异均有统计学意义（P ＜0．05）,随着病理结果的严重程度,hTERC、HER-2和 c-myc 的阳性率逐渐增加（P ＜0．01）。③随着宫颈病变程度的加深,HPV 感染者中hTERC、HER-2和 c-myc 基因的阳性扩增率也增高（P ＜0．05）。结论hTERC、HER-2、c-myc 基因的阳性表达率与宫颈病变程度、高危型 HPV 感染密切相关,在宫颈癌的发生发展中可能起着重要作用。     

Delineation of HER2 gene status in breast carcinoma by silver in situ hybridization is reproducible among laboratories and pathologists

An automated enzyme metallographic silver in situ hybridization method (SISH) has been reported to successfully determine human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) gene amplification. We evaluated the staining and interpretative reproducibility of the HER2 SISH assay at five laboratories and compared SISH results with other in situ hybridization (ISH) methods. The HER2 gene status of 89 breast carcinomas was analyzed in parallel using manual dual-color fluorescence ISH, manual chromogenic ISH, and bright-field automated SISH. A total of 1098 SISH-stained slides were evaluated. For comparison, all specimens were stained by 4B5 immunohistochemistry for HER2 protein expression. Interpretation was performed by pathologists at five different laboratories using the algorithms provided by the manufacturers and the guidelines of American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists. Staining and interpretative reproducibility were measured through the computation of weighted kappa statistics. Following the optimization of SISH staining, 1077/1098 (98%) of slides were evaluable. Excellent reproducibility and efficacy of HER2 SISH staining, and interobserver interpretation (Kw = 0.91), were observed among five sites. For the 89 invasive breast cancer cases, the overall rate of concordance between consensus 4B5 and consensus SISH, fluorescence ISH, and chromogenic ISH was 96.6% (86/89), 97.8% (87/89), and 96.6% (86/89), respectively. Overall concordance between positive and negative SISH and fluorescence ISH results, as well as between individual and consensus positive and negative SISH results, was excellent (P < 0.001).