慢性粒细胞白血病骨髓体外净化的实验研究

目的　探讨白细胞介素、干扰素 α2 a、bcr- abl反义寡核苷酸对慢性粒细胞白血病骨髓体外净化效果。方法　采用体外克隆形成培养技术 ,分别用白细胞介素、干扰素 α2 a、bcr- abl反义寡核苷酸不同的组合方案 ,体外净化 5例慢性粒细胞白血病 (CML)骨髓。结果　联用 IL- 2、IFN- α2 a(各 80 0 u/ m l)、bcr- abl AS- ODN(30 μg/ ml)方案 ,对白血病细胞克隆形成单位 (L- CFU)抑制作用有显著差异 (P<0 .0 1) ,而相同条件下 ,GM- CFU及 L- CFU的集落存活率分别为 2 6 .91%和 3.49% (P<0 .0 1)。结论　联用 IL- 2、IFN- α2 a(各 80 0 u/ m l)、bcr- abl AS- ODN(30 μg/ml)方案 ,选择性体外净化慢性粒细胞白血病细胞的效果好 ,可用于临床净化 CML 骨髓     

慢性粒细胞白血病骨髓体外净化的实验研究

OBJECTIVE: To investigate the effect of IL-2, IFN and bcr-abl AS-ODN on bone marrow purging in vitro for patients with chronic myelogenous leukemia (CML). METHODS: By amplifying in vitro clone forming culture, and purging the bone marrow of 5 CML patients through different combined use of IL-2, IFN and bcr-abl AS-ODN, we compared the effects of 4 combined regimens. RESULTS: It was found that the suppressive effects of the 4th regimen combining IL-2 (800 U/ml), IFN (800 u/ml) and bcr-abl AS-ODN (30 micrograms/ml) on leukemia cell clone forming unit (CFU) were significantly different from the suppressive effects of the other 3 regimens (P < 0.01). With the use of the 4th regimen, the GM-CFU and L-CFU survival rates were 26.91% and 3.49% respectively (P < 0.01). CONCLUSION: The combined regimen of IL-2 (800 U/ml), IFN (800 u/ml) and bcr-abl AS-ODN (30 micrograms/ml) has good effect on selective CML bone marrow purging in vitro and can be used in clinical purging of CML bone marrow.     

慢性粒细胞白血病骨髓的体外净化

目的 :探讨白细胞介素、干扰素α2α、bcr -abl反义寡核苷酸对慢性粒细胞白血病骨髓体外净化效果。方法 :采用体外克隆形成培养技术 ,分别用白细胞介素、干扰素α2α、bcr-abl反义寡核苷酸不同的组合方案 ,进行体外净化 5例慢性粒细胞白血病 (CML)骨髓。结果 :联用IL - 2、IFN -α2α(各 80 0um/ml)、bcr-ablAS -ODN(30ug/ml)方案 ,对白血病细胞克隆形成单位 (L -CFU)抑制作用有显著差异 (P <0 .0 1 ) ,而相同条件下 ,GM-CFU及L -CFU的集落存活率分别为 2 6 .91 %和 3 .49% (P <0 .0 1 )。结论 :联用IL - 2、IFN -α2α(各 80 0u/ml)、bcr-ablAS -ODN(30ug/ml)方案 ,选择性体外净化慢性粒细胞白血病细胞的效果好 ,可用于临床净化CML骨髓。     

自体树突状细胞用于慢性粒细胞白血病骨髓净化的初步研究

目的 考察慢性粒细胞白血病（CML）树突状细胞（DC）刺激自体骨髓T细胞,清除白血病细胞的作用。方法 采用3例CML病人（2例慢性期和1例急变期）外周血,分离单个核细胞（PBMNC）,经塑料贴壁后在含自体血浆、重组人白介素4（rhIL－4)、重组人粒－单集落刺激因子（rhGM－CSF）和重组人肿瘤坏死因子（rhTNFα）的RPMI－1640培养液。37℃CO2孵箱培养10天,或用免疫磁珠从PBMNC分离DC,在含自体血浆、rhGMCSF和rhTNFα的RPMI1640培养液培养3天,收获的细胞即DC加到含rhIL－2的Dexter骨髓长期培养体系,置37℃,5％CO2孵箱培养7天,观察前后骨髓细胞的免疫表型和P210阳性细胞比例。结果 从CML病人外周血获得的DC大多数表达P210。在含rhIL－2的Dexter体系加入DC能进一步增加体系中的T细胞数。在2例慢性期病人体系中的P210。在含rhIL－2的Dexter体系加入DC能进一步增加体系中的T细胞数。在2例慢性期病人体系中的P210阳性细胞减少,但在急性期病例,体系中P210细胞明显增加。结论 CML病人的DC表达P210,能刺激自体骨髓中T细胞增生,在慢性期病人,这些自体DC活化的骨髓T细胞有清除白血病细胞的作用。     

高热体外净化骨髓白血病细胞的研究

利用台盼蓝拒染试验和祖细胞体外集落培养法对正常造血细胞和ＨＬ６０白血病细胞受热后的存活率做了观察，证实高热对白血病细胞具有选择性杀伤作用，并比较了两种方法所反映的存活率。     

慢性粒细胞白血症骨髓的体外净化

目的：探讨白细胞介素，干扰素α2α，bcr-abl反义寡核苷酸对慢性粒细胞白血病骨髓体外净化效果。方法：采用体外克隆形成培养技术，分别用白细胞介素，干扰素α2α，bcr-abl反义寡核苷酸不同的组合方案，进行体外净化5例慢性粒细胞白血病（CML）骨髓，结果：联用IL－2，IFN－α2α（各800um/ml),bcl-abl AS-ODN(30ug/ml)方案，对白血病细胞克隆形成单位（L－CFU）抑制作用有显著差异（P＜0．01），而相同条件下，GM－CFU及L－CFU的集落存活率 分别为26．91％和3．49％（P＜0．01），结论：联用IL－2，IFN－α2α（各800g/ml),bcr-abl AS-ODN(30ug/ml)方案，选择性体外净化慢性粒细胞白血病细胞的效果好，可用于临床净化CML骨髓。     

癌光啉体外净化骨髓中残留白血病变后行自体骨髓移植治疗白血病

目的 :为减少白血病患者自体骨髓移植后白血病复发率和提高长期无病存活率。方法 :采用缓解期急性非淋巴细胞白血病患者的骨髓细胞在体外经处理后用癌光啉 (浓度为 10 μg/ ml)加光照净化 ,待患者完成预处理后回输给自身。结果 :10例急性髓细胞白血病患者接受了本净化方法后移植治疗。净化后输入有核细胞中位数1.3 0 ( 0 .7～ 2 .4 5 )× 10 8/ kg,CD3 4 细胞中位数 2 .3 9( 0 .74～ 4 .0 6)× 10 6/ kg,CFU- GM中位数 1.4 4( 0 .3 2～4 .65 )× 10 4/ kg。 10例中 9例造血功能重建 ,WBC升到 >1.0× 10 9/ L中位数时间 2 0 ( 15～ 4 3 ) d,>2 .0×10 9/ L 中位数时间 3 0 ( 2 1～ 5 5 ) d,BPC>5 0× 10 9/ L 中位数时间 4 6( 2 5～ 62 ) d。经中位 2 6个 ( 2 0～ 64 )月随访 ,有 6例仍无病存活 ;3例复发 ,其中 2例复发后失去随访 ;1例嗜碱细胞性白血病经化疗再次取得缓解 ,至今 CR2后又无复发存活 14个月 ;1例死于与移植相关并发症。结论 :初步结果表明 ,用癌光啉加光照净化自体骨髓中残留白血病细胞后行自体骨髓移植治疗白血病是一种安全而有潜力的方法     

急性原粒细胞白血病缓解16年后复发

1/3以上的儿童急性或淋巴细胞白血病(ALL)患者是可治愈的。但是,急性粒细胞白血病(AML)的长期缓解仍然难于保持。我们治疗一例已经完全缓解16年的AML患者出现复发。病例报告:患者日本籍,妊娠及分娩过程正常,出生11个月时其父(32岁)死于AML,12岁时其姐(14岁)死于AML。其姐染色体检查为46XX正常女性核型。病程经过及实验室检查:患者于1964年2岁时第一次住Kyushu大学医院,被诊断为AML当时其白血病细胞可见Auer小体及过氧化酶染色     

激活骨髓自体移植治疗急性早幼粒细胞白血病

目的　探讨激活骨髓 (ABM)自体移植作为急性早幼粒细胞白血病 (APL)缓解后巩固强化治疗的意义。方法　 31例病人 ,第一次完全缓解 (CR1) 2 7例、CR2 3例、第二次复发部分缓解 (PR) 1例 ;移植预处理方案 :2 7例接受MACC(马法兰、阿糖胞苷、环磷酰胺、环己亚硝脲 )方案 ,5例用TBI +CY(全身放疗 +环磷酰胺 )方案 ;荧光原位杂交测定PML/RARα融合基因 ;用Kaplan Meier生存曲线评估移植后无病生存率 ,COX回归模型分析性别、PML/RARα阳性、移植前状态 (CR1与CR2和PR)、初治时白细胞 (WBC)和血小板 (PBC)值对无病生存的影响。结果　CR1病人移植后无一例复发 ,移植后无病生存期 3～ 113个月、中位无病生存期 4 6个月 ,5年无病生存率为 10 0 % ;CR2病人 1例于移植后 19个月复发 ,另 2例分别无病生存为 7与 4 8个月 ;PR患者在移植后获CR 8个月复发。移植后全部病人均获得造血重建 ,无一例死于移植相关并发症。多因素分析长生存与移植前状态相关 (P <0 .0 5 ) ,而与性别、PML/RARα阳性、初诊时WBC和PBC数无关 ;诱导缓解后PML/RARα阳性与初诊时WBC和PBC数相关。结论　激活骨髓自体移植治疗CR后的APL病人能降低复发率和提高无病生存率、尤是CR1后的APL病人。     

慢性粒细胞白血病骨髓细胞体外培养净化作用实验研究

目的 :采用 FISH方法直接在干细胞水平对慢性粒细胞白血病 (CML )患者自体骨髓体外培养前后的间期细胞进行 bcr/abl融合基因检测 ,从而探讨 CML 骨髓细胞体外培养对自体骨髓移植物的净化作用。方法 :分离初治的慢性期 Ph+ CML 7例骨髓单个核细胞 (MNCs) ,体外培养 10 d,用免疫磁珠 (MACS)富集培养前后的 CD34+ 细胞 ,通过流式细胞仪检测培养前后 MNCs中 CD34+ 干细胞比例 ,然后用 FISH方法检测其中 bcr/abl融合基因 ,同时分别用正常人细胞及 K5 6 2细胞株作阴性及阳性对照。结果 :(1) 7例患者骨髓细胞培养前后 CD34+ 细胞中 bcr/abl融合基因平均检出率分别为 85 .3%± 4 .9%和 78%± 5 .1% ,有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ,(2 )培养前培养体系中 CD34+ 细胞数量为 (6 .0 6 0± 1.5 6 4 )× 10 5个 ,培养后体系中的 CD34+细胞数量为 (5 .974± 1.4 2 4 )× 10 5个 ,两者无明显差异 (P>0 .0 5 )。 (3)在对照组中假阳性率为 2 .5 % ,假阴性率为 2 %。结论 :自体骨髓细胞体外培养对 CML 病人的骨髓肿瘤细胞有一定程度的净化作用 ;FISH技术直接在干细胞水平检测 bcr/abl融合基因 ,且能定量分析 ,较传统方法更适合对骨髓净化进行评价 ,为骨髓净化提供了一种更方便、可靠的评定方法     

单克隆抗体在骨髓体外净化中应用

急性白血病是一种血液恶性肿瘤疾病,虽然近代联合化疗的进展能够使急淋和急非淋的完全缓解率分别达到80～90％和60～80％以上,但五年无病生存率只有10～20％左右,而骨髓移植可以通过预处理摧毁白血病组织并重建造血,是治疗急性白血病的一种有效措施,其中异基因型骨髓移植(Allo-BMT)可使50～70％的急性白血病患者获得长期无白血病生存,而自身骨髓移植(ABMT)也可达到30～45％的良好效果,且没有Allo-BMT的供髓困难问题以及移植物抗宿主病(GVHD)的发生。但是ABMT中存在着一个最主要的问题——回输自身骨髓中残存白血病细胞,这是导致ABMT后白血病复发率显著增高的重要因素,因为ABMT时至少需要10~(10)个有核细胞,其中白血病细胞约占0.1％,因此含有10~7个白血病细胞足以导致移植后白血病复发,这是近年来开展体外净化工作的理论根据。所谓体外净化(Purging invitro)就是指通过某种技术和方法在体外清除白血病患者缓解期的自体骨髓或外周血中残存的白血病干/祖细胞(L-CFU)而保留正常造血细胞,使病人接受大剂量放化疗的预处理后能重建造血及免疫功能。近年来有人将Allo-BMT中去除T细胞的体外过程也称为体外净化,本文不包括这一过程。体外净化方法很多,其中包括(1)物理学方法如速度或密度梯度离心法、温热法、冷融法以及近年开展的逆流淘洗离心法等;(2)化学制剂法,主要是环磷酰胺衍生物(4-HC,ASTA-Z-7557等)应用;(3)免疫学方法,主要是单克隆抗体(McAb)及免疫毒素的应用;(4)生物学方法如LAK细胞、干扰素、肿瘤坏死因子以及胎肝低分子肿瘤抑制物的应用。本文就单克隆抗体在体外净化骨髓残存白血病细胞的近期有关文献综合报道如下:     

烷化溶血磷脂与自体骨髓体外净化

<正>烷化溶血磷脂(alkyl-lysophospholipid,ALP)是一种醚脂(ether lipid,EL),其化学结构与溶血磷脂血磷脂酰胆碱(lysophosphatidyl choline,LPC)相似。ALP的化学特性是:甘油骨架的sn-1位与sn-2位有代谢稳定的醚键相连;sn-1位为长链烷基,sn-2位为短链烷基,sn-3位为磷酸胆碱。ALP分子结构稳定,只能被O-烷基裂解酶(O-alkyl cleavage enzyme,OAC酶)所代谢。ALP家族具有选择性抗肿瘤作用,ET-18-OCH_3为该家族中研     

长期骨髓培养、白细胞介素2、干扰素α2a体外净化慢性粒细胞白血病骨髓的研究

用长期骨髓培养（ＬＴＢＭＣ）和白细胞介素２（ＩＬ－２,１０００Ｕ／ｍｌ）,干扰素α２ａ（ＩＦＮ－α２ａ,１０００Ｕ／ｍｌ）不同的组合方案,对１０例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）骨髓进行体外净化培养２周。结果发现：①单用ＬＴＢＭＣ体系其净化效果差;②加入ＩＬ－２后,对ＣＭＬ的ＣＦＵ－ＧＭ以及ｐｈ＇（＋）细胞有明显的杀伤作用（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）对正常的ＣＦＵ－ＧＭ则无影响;③ＩＦＮ－α２ａ在ＬＴＢＭＣ体系中抑制ｐｈ＇（＋）细胞生长而不影响ＣＭＬ和正常的ＣＦＵ－ＧＭ;④ＬＴＢＭＣ、ＩＬ－２、ＩＦＮ－α２ａ三者净化ＣＭＬ骨髓具有协同作用。结果提示：ＬＴＢＭＣ、ＩＬ－２、ＩＦＮ－α２ａ联合净化效果好,可用于临床净化ＣＭＬ骨髓     

体外高热联合α-IFN或As_2O_3对白血病骨髓净化的实验研究

目的　研究体外高热联合α IFN或As2 O3对白血病骨髓的净化。方法　 12例白血病病人及 10例正常对照骨髓 :①在高热 42℃ 1h、α IFN 30 0U ml条件下 ,测定持续高热与间歇高热对CFU GM和CFU L产率的影响。②在 37℃、42℃条件下 ,不同As2 O3浓度对CFU GM和CFU L抑制率的影响。结果　间歇高热联合α IFN与持续高热联合α IFN相比 ,前者对CFU GM具有保护作用 (P <0 0 5 ) ,两者对CFU L杀伤无明显差异 (P >0 0 5 ) ;37℃条件下 ,随着As2 O3浓度提高 ,对CFU L和CFU GM抑制率增加 ,高热 42℃联合As2 O3具有协同净化作用 ,As2 O3浓度以10 - 6 mol L为佳。结论　间歇高热联合α IFN净化有利于减少CFU GM损伤 ;高热联合As2 O3对白血病骨髓具有协同净化作用。     

微波体外净化自体造血干细胞移植治疗急性白血病76例长期疗效分析

目的 观察微波体外净化自体造血干细胞移植治疗急性白血病的长期疗效。方法 自体骨髓35例，自体骨髓和自体外周血干细胞联合移植7例，自体外周血干细胞移植34例。移植前采用微波体外净化自体骨髓和自体外周血干细胞。结果 76例病人造血均获造血重建，随访5年，5年生存率37．1％，其中急性髓细胞性白血病5年生存率40．1％，急性淋巴细胞白血病5年生存率33．3％。结论 自体造血干细胞移植对急性白血病的治疗是有效的。     

体外高热联合α—IFN或As2O3对白血病骨髓净化的实验研究

目的 研究体外高联合α－ＩＦＮ或Ａｓ２Ｏ３对白血病骨髓的净化。方法 １２例白血病人及１０例正常对照骨髓：（１）在高热４２℃ｈ、α－ＩＦＮ３００Ｕ／ｍｌ条件下,测定持续高是歇高热对ＣＦＵ＿ＧＭ和ＣＦＵ－Ｌ产率的（２）在３７℃、４２℃条件下,不同Ａｓ２Ｏ３浓度对ＣＦＵ－ＧＭ和ＣＦＵ＿Ｌ抑制率的影响。结果 间歇高热联合α－ＩＦＮ与持续高热联合α－ＩＦＮ相比,前者对ＣＦＵ－ＧＭ具有保护作用,两者对ＣＦＵ－     

自体骨髓干细胞移植在肝癌切除术中应用的初步研究

目的 观察自体骨髓干细胞移植治疗在肝癌切除术中的近期疗效.方法 符合入选标准的30例原发性肝癌患者按知情同意和自愿原则分为两组:A组(n=12)行肝癌切除+自体骨髓干细胞移植术;B组(n=18)单纯行肝癌切除术.比较两组患者治疗后1,7,14,21 d血清ALB、ALT、AST、TBIL、PT等指标的变化情况,并观察有无不良反应.结果 两组患者治疗后血清ALT、AST水平均不同程度降低,于治疗后第7天A组降低明显,两组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);两组患者治疗后血清ALB水平均不同程度的升高,于治疗后第14天A组升高明显,两组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);血清PT、TBIL水平于治疗后第14天在A组中明显降低,而B组降低不明显,两组间对比差异具有统计学意义(P<0.05).术后两组患者均未出现严重手术并发症及移植相关不良反应.结论 自体骨髓干细胞移植在肝癌切除术中应用能显著促进肝癌患者术后肝功能的恢复,近期疗效显著.     

慢性粒细胞白血病骨髓细胞增殖动力学研究

用抗Ｂｒｄｕ、ＯＫＴ～９和Ｋｉ～６７单抗免疫酶标对１５例ＣＭＬ，初诊患者进行细胞增殖动力学的研究、结果表明，单抗免疫酶标的标记指数（ＬＩ）中，抗ＢｒｄｕＬＩ在ＣＭＬ和正常组之间无显著性差异，而ＯＫＴ９和Ｋｉ一６７ＬＩ在ＣＭＬ中明显低于正常组，说明ＣＭＬ．与正常细胞的Ｓ期时相大致相等，而ＣＭＬ细胞的增殖活力是减低的．证明ＣＭＬ时的全身粒细胞总数增多并非固白血病细胞的迅速分裂，而是白血病细胞分裂次数增加。