不同浓度EGF对人脐血间充质干细胞增殖的研究

目的探索不同浓度表皮生长因子（EGF）对人脐血间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）增殖的影响。方法无菌条件下来集正常人脐血，密度梯度离心法分离脐血单个核细胞，用Mesencult培养基进行纯化和扩增培养，通过MTT法检测不同浓度的EGF的促人脐血MSCs增殖作用。结果EGF的5—100ng／ml各浓度组增殖效应均明显大于对照组（P〈0．05），10ng／ml组明显大于其它各浓度组（P〈0．01）。结论EGF对体外培养的人脐血MSCs有促进增殖的作用，此作用呈剂量依赖性。     

表皮生长因子与碱性成纤维生长因子对人牙髓干细胞增殖的影响

目的：探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs)增殖能力的影响。方法：采用噻唑蓝（MTT）比色法分别测定不同浓度EGF和bFGF在不同时间,单独或联合应用对hDPSCs增殖能力的影响。结果：50 ng/ml EGF和20 ng/ml bFGF促hDPSCs增殖能力最强。以50ng/ml EGF、20ng/ml bFGF单独或联合作用,其促hDPSCs增殖能力均具有时间依赖性,第3 d、5 d、7 d, EGF、bFGF促hDPSCs增殖作用显著增强,二种生长因子联合作用,促增殖作用显著高于其单独作用效果,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：生长因子EGF和bFGF最大效应浓度分别为：50 ng/ml、20 ng/ml。EGF和bFGF单独作用均能显著促进hDPSCs的增殖,二者联合作用对hDPSCs的增殖有一定的协同作用。     

血清饥饿和表皮生长因子上调人肝癌细胞表皮生长因子受体的研究

目的探讨血清饥饿以及EGF对人肝癌细胞EGFR表达的影响。方法用免疫组化方法研究血清饥饿、5ng／mlEGF和25ng／EGF对人肝癌细胞EGFR表达的影响。结果撤血清培养组、5ng／mlEGF和25ng／mlEGF刺激组人肝癌细胞EGFR的表达阳性细胞分别为(5.66±0.86)％、(10.67±1.26)％和(16.83±1.66)％,与正常对照组(1.81±0.75)％相比较差异显著(P<0.01),EGF刺激组比血清饥饿组明显增高(P<0.01)、25ng／mlEGF组比5ng／mlEGF组增高(P<0.01)。结论血清饥饿和EGF能明显增强人肝癌EGFR的表达,且EGF上调EGFR表达的作用具有剂量依赖效应。     

EGF,bFGF单独及联合应用对原代培养的兔角膜缘干细胞增殖的影响

目的探讨EGF,bFGF及二者共同作用对培养的兔角膜缘干细胞增殖的影响。方法用DMEM和F12(1:1)培养基,20%胎牛血清,加入不同浓度EGF,bFGF和二者的混合液,采用MTT法检测细胞的OD值。结果EGF的5~160ng/mL各浓度组增殖效应均明显大于对照组(P<0.05),10ng/mL组明显大于其它各浓度组(P<0.01),bFGF各浓度组从5~80ng/mL各组均明显大于对照组(P<0.025),20ng/mL各组明显大于与其它各组(P<0.025);EGF与bFGF混合液各浓度组从5~80ng/mL各组增殖效应均明显大于对照组及单独使用EGF或bFGF组(P<0.05),EGF10ng/mL+bFGF20ng/mL组促增殖效果最强(P<0.025)。结论EGF,bFGF对培养的兔角膜缘干细胞有促增殖作用,此作用均呈剂量依赖性,EGF和bFGF共同表现为明显的促增殖作用。     

EGF与bFGF对体外大鼠巩膜成纤维细胞增殖的影响

目的研究表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）在体外对大鼠巩膜成纤维细胞生长的影响。为进一步了解近视发生的分子机制提供依据。方法采用植块法培养大鼠巩膜成纤维细胞。细胞经传代纯化鉴定后，取第3～4代细胞加入不同浓度的EGF（0．1～200ng／mL）、bFGF（0．1～50ng／mL）。分别培养24、48、72h用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞的增殖密度。观察不同浓度、时间下细胞增殖情况。结果发现0．1～100ng／mL的EGF和0．1～50ng／mL的bFGF对大鼠巩膜成纤维细胞均有明显的促增殖作用，且呈剂量相关性。结论一定浓度的EGF、bFGF对体外培养的大鼠巩膜成纤维细胞的生长具有促进作用。     

肝细胞生长因子对兔关节软骨细胞培养影响的实验研究

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对兔关节体外培养软骨细胞的作用.方法取10只大耳白兔的关节软骨制成软骨细胞悬液,接种到DMEM培养基中培养,细胞传至第3代后,加入不同浓度的HGF继续培养.通过MTT比色法及流式细胞仪技术检测培养细胞增殖情况.结果 HGF使软骨细胞增殖明显加快(P<0.05),HGF的作用存在剂量效应关系.不同浓度的HGF对关节软骨细胞增殖的促进作用不同,1 ng/ml时对细胞分裂增殖效应有作用,5～10 ng/ml作用效果最明显,加大HGF浓度,并未见促增殖效应加强.结论HGF对关节软骨细胞有明显促增殖作用.     

PDGF—BB和bFGF对牙周膜细胞增殖的影响

目的：探讨血小板衍生生长因子-BB（PDGF—BB）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜（PDL）细胞增殖的影响。方法：体外培养人PDL细胞与不同浓度的PDGF—BB，bFGF或PDGF—BB＋bFGF作用。用四唑盐（MTT）法观察PDL细胞增殖的情况。结果：PDGF—BB明显促进PDL细胞增殖，第3天最大显效浓度为10ng／ml，比对照组增加34％（P〈0．001），最小显效浓度为1ng／ml，比对照组增加25％（P〈0．001）。PDGF—BB在1d～9d，0．1ng／ml～10ng／ml范围内呈浓度时间依赖关系，峰值位于第9天，10ng／ml处，比对照组增加20％（P〈0．001）。bFGF也能明显促进PDL细胞增殖，第3天最大显效浓度为50ng／ml，比对照组增加71％（P〈0．001），最小显效浓度为1ng／ml，比对照组增加23％（P〈0．001）。bFGF在1d～6d，1ng／ml～50ng／ml范围内呈浓度时间依赖关系，峰值位于第6天，50ng／ml处，比对照组增加79％（P〈0．001）。PDGF—BB与bFGF最大与最小显效浓度联合作用均在1d～9d内呈浓度时间依赖关系，峰值位于第9天，最大显效浓度联合作用比对照组增加46％（P〈0．001），最小显效浓度联合作用比对照组增加17％（P〈0．001）。结论：PDGF-BB和bFGF均可促进人PDL细胞增殖，在一定范围内呈浓度时间依赖关系，二者联合对PDL细胞增殖具有协同效应。     

PDGF和EGF对牙周膜细胞增殖、纤维结合蛋白和碱性磷酸酶活性的影响

目的探讨血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)和表皮生长因子(EGF)对人牙周膜(PDL)细胞增殖、纤维结合蛋白(Fn)和碱性磷酸酶(APLase)活性的影响。方法体外培养人PDL细胞,与不同浓度的PDGF-BB、EGF或PDGF-BB+EGF作用,用噻唑盐(MTT)法观察PDL细胞增殖的情况,ELISA法检测Fn水平,用酶动力学方法检测ALPase的活性。结果PDGF-BB明显促进PDL细胞增殖,在1～50ng/ml和5d范围内,呈浓度-时间依赖关系,最佳效应时间和浓度为3d和10ng/ml,比对照组增加了256.1%(P<0.001),但对PDL细胞Fn水平无明显影响(P>0.05),却显著抑制PDL细胞的ALPase活性(P<0.01)。低浓度的EGF对PDL细胞的增殖没有影响(P>0.05),(10～50)ng/ml的EGF从第3天起,可促进PDL细胞的增殖,差异显著(P<0.05),但10ng/ml与50ng/ml之间无显著性差异(P>0.05),其最佳效应浓度为10ng/ml,最大效应在用药后4d,此时与对照组相比增加了124.1%,EGF可使PDL细胞Fn水平明显提高(P<0.01),但抑制ALPase的活性(P<0.001)。PDGF-BB和EGF二者联合应用,在促进增殖、提高Fn的水平和抑制ALPase活性方面均具有协同效应。结论PDGF-BB、EGF均可促进人PDL细胞的增殖、抑制PDL细胞的ALPase活性,但PDGF-BB对其Fn水平没有明显影响,而EGF可使其Fn水平明显提高,二者联合具有协同效应。     

VEGF-C联合HGF促进间充质干细胞向淋巴管内皮细胞分化的研究

目的：使用血管内皮细胞生长因子C（vascular endothelial growth factor C,VEGF-C）与肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs）向淋巴管内皮细胞（lymphatic endothelial cells,LECs）方向分化,寻求最适HGF浓度,探索HGF的促分化机制。方法：原代培养获得BMSCs,流式细胞仪检测相关表面抗原以及向成骨诱导分化鉴定干细胞特性,取原代培养第３代细胞进行诱导实验。设置50 ng/ml VEGF-C分别联合10、20、40、60、80、100 ng/ml HGF配置诱导培养基的6个联合诱导组以及同时设置50 ng/ml VEGF-C诱导组、50 ng/ml HGF诱导组和空白对照组,诱导10 d后利用real-time PCR检测各组LECs标志性分子淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1（lym－phatic endothelial hyaluronan receptor 1,LYVE-1）,同源异形盒蛋白1（prospero homeobox protein 1,Prox1）的表达,得出HGF最适浓度。Western blot、real-time PCR检测HGF诱导组、空白对照组、VEGF-C诱导组的LECs标志性分子LYVE-1、Prox1的表达,以及检测空白对照组、VEGF-C诱导组、HGF联合VEGF-C诱导组的integrinα9的表达。结果：成功分离获得原代培养大鼠BMSCs,80 ng/ml HGF联合50 ng/mlVEGF-C诱导组的LYVE-1、Prox1的mRNA表达量最高（PProx1=0.000,PLYVE-1=0.000）,同时HGF诱导组未检测到相关LECs标志性分子的表达,HGF联合VEGF-C诱导组的integrinα9的表达较VEGF-C诱导组明显提高（PWestern blot=0.001,Preal-time PCR=0.000）。结论：当HGF浓度为80 ng/ml时,此时HGF联合VEGF-C可更好地促进大鼠BMSCs向LECs分化。同时,在该浓度条件下HGF不具有单独诱导大鼠BMSCs分化为LECs的能力,但能在诱导分化过程中明显提高integrinα9的表达,证明在促分化过程中HGF可能是通过间接上调integrinα9表达发挥作用。     

EGF与bFGF单独及联合应用对原代培养的兔角膜缘干细胞克隆形成率的影响

目的了解单独及联合应用表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(b-fibroblast growth factor, bFGF)对原代培养的兔角膜缘干细胞体外增殖的促进作用.方法进行兔角膜缘干细胞原代培养,用克隆形成率和蛋白质免疫印迹方法检测单独及联合应用不同质量浓度EGF与bFGF对干细胞增殖力的影响.结果角膜缘干细胞在本培养条件下能够正常生长.单独应用时,质量浓度为10 ng/ml的EGF和20 ng/ml的bFGF对干细胞的促增殖作用最强(P<0.01),10 ng/ml的EGF与20 ng/ml的bFGF联合应用可达到最佳的促干细胞增殖作用.蛋白质免疫印迹检测也得到了相符的结果.结论体外单独及联合应用EGF与bFGF对原代培养的兔角膜缘干细胞的增殖能力有明显的促进作用,为提供大量的角膜缘干细胞以治疗眼表疾病提供了实验基础.     

腔镜下高频超声刀甲状腺部分切除术围术期的炎性及应激性指标变化研究

目的探讨腔镜下高频超声刀甲状腺部分切除术围术期的炎性及应激性指标变化情况。方法选取2010年1月-2011年5月于本院进行腔镜下高频超声刀甲状腺部分切除术治疗的25例患者为观察组,同期采用直视下小切口手术进行治疗的25例患者为对照组,比较两组术前及术后3d、7d的炎性及应激性指标。结果观察组术后3d及7d的血清hs-CRP、TNF—α、IL－6及IL－8均低于对照组,而SOD、TAC及NO均高于对照组,而MDA则低于对照组,且观察组术后7d优于术后3d,P均〈0．05,有显著性差异。结论腔镜下高频超声刀甲状腺部分切除术围术期的炎性及应激性指标变化幅度小于直视下小切口手术。     

血肌酐正常的2型糖尿病患者临床生化指标水平及其与肾功能的相关性

目的 探讨血肌酐(SCr)正常2型糖尿病患者临床生化指标水平及其对肾功能的影响。方法 选取2014年9月至2015年8月安徽省立医院SCr水平正常的2型糖尿病患者726例,根据美国慢性肾脏病及透析临床指南(NKF/DOQI)诊断标准将其分为肾功能正常组(A组)311例和肾功能受损组(B组)415例。比较两组患者年龄,病程,体重指数(BMI)等一般临床资料,记录患者的空腹血糖(FBG),糖化血红蛋白(HbA1c),总胆固醇(TC),三酰甘油(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),SCr,血尿素氮(BUN),血尿酸(UA),尿白蛋白肌酐比(UACR);采用Pearson相关分析,分析上述指标与肾功能的相关性。结果 B组患者的年龄,病程,肾功能指标(BUN、SCr、UA)及UACR水平明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05),糖代谢指标(FBG、HbA1c)B组明显低于A组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析提示肾小球滤过率估计值(eGFR)水平与年龄、病程、肾功能指标(BUN、SCr、UA)、UACR呈负相关,与糖代谢指标(FBG、HbA1c)呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05),与BMI、脂代谢指标(TC、TG、HDL-C、LDL-C)无相关性(P>0.05)。结论 血肌酐正常的2型糖尿病患者中,年龄,病程,肾功能指标(BUN、SCr、UA)及UACR水平明显升高且与肾功能密切相关。     

应用logistic回归分析结合roc曲线进行2型糖尿病肾病的危险因素分析

目的：以logistic回归分析结合roc曲线对2型糖尿病的危险因素进行分析。方法回顾该院2010年1月—2013年12月间收治的780例2型糖尿病肾病患者病历,并以800例健康人群作为对照组。以logistic回归分析对患者危险因素进行分析,以roc曲线患者检验学指标进行分析。结果年龄、糖尿病病程、肥胖、高血压病史、心脑血管疾病家族史是2型糖尿病的危险因素。roc曲线结果表明血清胱抑素C、糖化血红蛋白、尿微量白蛋白、同型半胱氨酸、C反应蛋白都可作为2型糖尿病肾病临床诊断指标, Youden指数达到1.837-1.953。结论临床可依据2型糖尿病患者临床资料以及检验学指标进行综合分析。     

缺氧对大鼠药物转运体MDR1、MRP2表达的影响

目的研究模拟急进高原缺氧对大鼠部分生理指标以及小肠、肝脏、肾脏内MDR1、MRP2两种外排型药物转运体表达的影 响,初步探讨高原低压低氧对药物转运体的影响。方法Wistar大鼠随机分成正常对照组、缺氧24 h组、缺氧72 h组。取腹腔主 静脉血分析生理指标;以Real-Time PCR方法检测各组大鼠不同组织中MDR1、MRP2转运体基因表达水平;同时采用ELISA 方法测定MDR1、MRP2 的蛋白表达变化。结果生理指标结果显示,模拟缺氧组大鼠相比于正常对照组发生了明显的变化。 与正常对照组比较,缺氧组小肠、肝脏、肾脏三个组织中MDR1、MRP2 基因表达明显升高,同时蛋白水平也增加（P<0.05,P< 0.01）,但随着缺氧时间的延长,不同转运体在不同器官组织中变化趋势不一样。结论高原缺氧会引起急进大鼠的生理指标及 MDR1、MRP2的表达发生变化,继而影响上述转运体底物在体内的处置过程,这可为高原药代动力学研究提供理论依据。     

血清中谷氨酰转移酶与2型糖尿病

目的：探讨2型糖尿病的有关诊断指标与γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）的关系。研究血清葡萄糖,糖化血红蛋白（HbA1c）,胰岛素（INS）,胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）等指标与γ-GT间的相关性。方法：连续观察210例新诊断的2型糖尿病患者,检测上述指标及血清总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）。用HOMA稳态模式计算胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）。比较上述指标在2型糖尿病患者和健康组间的差异和γ-GT与糖尿病诊断指标间的相关性。结果：糖尿病组的γ-GT较非糖尿病组的γ-GT明显升高;2型糖尿病患者中γ-GT与HbA1c、INS和HOMA—IR具有相关性。γ-GT与血清中TC、TG也有一定的相关性。结论：γ-GT升高与2型糖尿病和胰岛素抵抗有相关性,且与TC、TG也呈正相关,表明血清γ-GT升高可能是2型糖尿病一个新的危险因素。     

肝癌患者血清PreS_2蛋白与HBV复制标志物的关系

采用EIA法检测了84例肝细胞肝癌(HCC)患者和336名“健康”对照血清中的Pre-S_2蛋白,并初步分析了Pre-S_2蛋白与HBV其它复制标志物问的关系。结果显示:(1)HCC患者血清Pre-S_2蛋白及其它HBV感染、复制标志物的检出率均显著高于“健康”对照(P<0.01);HBsAg阳性HCC患者中HBV复制标志物的检出率均高于HBsAg阴性者;提示HBV复制标志物可能与HCC有着更密切的病因学联系。(2)HCC患者血清Pre-S_2蛋白的检出率与HB_eAg、HBV-DNA的检出率差异显著,说明Pre-S_2蛋白是反映HBV复制极为敏感的标志,值得用于HBV与HCC关系的研究“     

肝硬化患者血清纤维化指标及血小板相关指标的变化

目的：研究肝硬化患者血清纤维化指标及血小板相关指标的变化。方法：选取本院收治的59例肝硬化患者为观察组,同期59例健康人员为对照组,将两组的血清纤维化指标及血小板相关指标进行比较,并比较不同病因及肝功能分级肝硬化患者的血清纤维化指标及血小板相关指标。结果：观察组的血小板计数（PLT）低于对照组,而血清纤维化指标及其他血小板相关指标均高于对照组,且不同肝功能分级者之间也存在明显的差异,差异具有统计学意义（P〈0．05）;而不同病因者之间比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：肝硬化患者血清纤维化指标及血小板相关指标的变化较大,并且受肝功能分级的影响较大,但不同病因者之间无明显差异。     

2型糖尿病患者甲状腺功能与血小板参数的相关性研究

目的研究2型糖尿病(T2DM)患者甲状腺功能与血小板(PLT)参数的相关性。方法选择2013年1~4月首都医科大学附属北京朝阳医院T2DM患者共333例,根据促甲状腺激素(TSH)将患者分为亚临床甲腺功能减退症(SCH)组和甲状腺功能正常(ET)组。研究的代谢指标包括体重指数、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、三酰甘油(TG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)和空腹血糖;PLT参数包括PLT、PLT分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV)和大PLT比率(P-LCR)。甲状腺功能检测包括游离三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素和TSH。结果SCH组的PDW、MPV、P-LCR和TG分别为(14.43±2.28)fl、(11.47±0.99)fl、(36.61±8.10)%和(3.19±1.96)mmol/L,ET组相应为(13.02±1.89)fl、(10.74±0.89)fl、(30.70±7.21)%和(1.87±1.51)mmol/L,SCH组上述指标均明显高于ET组(均P<0.01)。多元线性回归分析发现,Hb A1c和TSH均是影响PDW、MPV以及P-LCR的因素(P<0.05或P<0.01)。结论 T2DM患者易出现血栓相关并发症并且其发生与PLT活性密切相关。PLT活性与TSH水平呈正相关,TSH升高会增加T2DM患者合并心脑血管疾病的风险。     

西藏小型猪血液生理生化指标的初步研究

本文以作者所在教研室实验动物科学教学改革实践经验为据,从改革的总体思路、教学内容、教学手段与方式、课程考核方式、实验教学等方面全面阐述了我室实验动物科学的教学改革的具体内容与措施,其效果是提高了实验动物科学的教学质量。     

特发性室性早搏心率变异性的临床研究

目的：探讨特发性室性早搏(PVCs)与心率变异性（HRV）的关联及不同室性早搏数目负荷与HRV的关系,分析其临床意义。方法：208例特发性室性早搏患者,根据24小时动态心电图（holter）记录室性早搏总数,分为A组（﹤1000个）,B组（1000~10000个）,C组（﹥10000个）,分别计算出HRV的时域指标：RR总体标准差（SDNN）、24h每5min时段平均RR间期标准差（SDANNindex）、每5min时段平均RR间期标准差（SDNNindex）、相邻RR间期差值的均方根（rMSSD）、相邻RR间期差值50ms的百分数（PNN50）。频域指标：低频功率（Low Frequency ,LF）、高频功率（High Frequency, HF）以及两者比值LH/HF。分析HRV各指标与特发性室性早搏的相关性及不同室性早搏负荷组间HRV有无差异。结果：特发性室性早搏与LF/HF（r=0.322,P=0.000)、HF（r=-0.017,P=0.014）、rMMSD（r=0.163,P=0.019）明显相关。各组间HRV指标比较,rMMSD在A、C,B、C之间比较,差异具有显著性。结论：特发性室性早搏患者其自主神经平衡调节受损,主要与迷走神经张力减弱相关,室性早搏数目负荷>10000/24h的患者迷走神经功能减低可能更明显。 关键词：室性早搏;心率变异性;时域指标;频域指标;临床研究