分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤细胞系

<正> 人绒毛膜促性腺激素(HCG)的免疫测定在妊娠诊断上有极其重要的作用。本工作目的是决定能否用单克隆抗体取代传统抗血清进行该项测定,为此我们进行了用杂交瘤技术制备抗HCG单克隆抗体的研究。 近交的BALB/c小鼠,以孕妇小便中提纯的HCG免疫,3天后,取脾细胞,与无分泌性的小鼠骨髓瘤细胞SP_2融合。聚乙二醇4,000为促触剂,融合率达100％。融合后10天,用HCG交联的胶乳作凝集试验,测定细胞培养上清液,阳性率为6％。取细胞生长好,阳性强的杂交瘤细胞克隆化四次以上,最后获得10个杂交     

EBV-杂交瘤技术制备抗乳癌人单抗的研究

本研究用EBV-杂交瘤技术制备抗乳癌人单抗获得初步成功。实验中首先预选出病人血清对肿瘤相关抗原有强阳性反应的乳癌患者,取其引流区淋巴结细胞,去除T细胞。在体外用EBV转化。筛选出分泌阳性抗体的B细胞,扩增后与一株人-鼠骨髓瘤杂交株HMD-33融合,用含HAT-ouban 1640培基进行选择培养。融合后两周左右见有杂交瘤生长,融合率为38％,从中获得16株稳定分泌抗体的杂交瘤,抗体类型75％为人IgM余为人IgG或混合型,上清     

二氢青蒿素对K562细胞BCR/ABL融合基因表达的影响及意义

目的 探讨二氢青蒿素( dihydroartemisinin,DHA)对白血病细胞K562 BCR/ABL融合基因表达的影响及意义.方法 采用噻唑蓝比色方法检测不同浓度的DHA对于K562细胞的增殖抑制作用,并计算不同培养时间点的抑制率.用逆转录PCR检测K562细胞处理前后BCR/ABL融合基因的表达变化,流式细胞仪检测K562细胞的凋亡情况.结果 DHA(10～160 μmol/L)能抑制K562细胞的增殖,随着浓度增加抑制作用明显增强,培养24 h后抑制率从52.76％增加到94.65％;用浓度为20μmol/L的DHA对K562细胞作用12～48 h后,逆转录PCR检测BCR/ABL融合基因表达,△Ct值为4.45±0.25和5.23±0.21.与对照组(4.23±0.21)相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DHA可通过影响BCR/ABL融合基因的表达抑制K562细胞的增殖.这可能是导致K562细胞凋亡的原因之一.     

新疆出血热单克隆抗体的建株

<正> 我们于1985年底用新近从南疆巴楚地区游离的亚洲璃眼蜱(Hyalomma asiaticum)中分离的BA84002毒株,取第四代感染乳鼠脑悬液加完全佐剂免疫BALB/c鼠,1月后尾静脉加强一针,4天后取脾脏与骨髓瘤细胞SP2/0融合,用50％的PEG(MW1000)作融合剂,分种入192孔,于22天后开始检测,其融合率达81.25％     

新生大鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养及标记方法

本文用等密度沉降离心法分离出新生大鼠骨骼肌卫星细胞,观察其生长规律,检测分裂指数及生长曲线。用胶体金、DAPI及Brdu标记液分别标记细胞8、24、48h,测标记后细胞的生长曲线及标记率。结果表明分离所得肌卫星细胞纯度95％以上,梭形,培养第5天细胞排列出现方向性,并开始融合成肌管,第3—5天增殖旺盛,5代以内生长较快。三种标记方法对肌卫星细胞有不同程度毒性。胶体金标记法毒性最小,标记率100％;DAPI标记细胞率为100％;Brdu毒性最大且标记率仅为10％。本实验方法简单、快速,所得肌卫星细胞纯度高,性能好。胶体金标记法适合于电镜研究,DAPI标记法适合于光镜研究,Brdu标记法较差。     

肺癌树突状融合细胞的制备及其生物学特征

目的 探讨利用杂交瘤技术制备肿瘤疫苗的方法,研究肺癌树突状融合细胞的生物学特征。方法 用ＰＥＧ法将ＨＧＰＲＴ缺陷型Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞株ＡＬ９９０１与小鼠骨髓诱生的树突状细胞进行融合,ＨＡＴ筛选融合克隆;Ｓ－Ｐ免疫细胞化学法鉴定融合细胞表型;对融合细胞进行生曲线、克隆形成和体内成瘤等鉴定。结果 树突状细胞与ＡＬ９９０１及６：１比例融合,融合率约为３０％。融合细胞ＦＬＤ－Ａ１１可在体外传代培养,表型为ＣＤ８０＾＋、ＣＤ４０＾＋、Ｈ－２Ｋ＾ｂ＋、ＭＩＤＣ＾＋和肺癌抗原阳性。ＦＬＤ－Ａ１１不能在软琼脂培养基中形成克隆,动物体内不能形成肿瘤。结论 利用杂交瘤技术制备的ＦＬＤ－Ａ１１细胞,具备了在体内激活抗特异性地抗肿瘤细胞免疫功能的分子表型;该细胞不存在体内成瘤的危险。本研究为ＦＬＤ－Ａ１１作为肿瘤疫苗,用于特异性抗肿瘤     

北亚立克次体单克隆抗体的产生及用于我国斑点热立克次体的鉴定

本文报道以斑点热立克次体精河株全细胞抗原免疫BALB/c小鼠,取10~8免疫小鼠脾细胞与10~7 Sp 2/0小鼠骨髓瘤细胞用50％PEG 1000融合,以微量间接免疫荧光(Micro-IFA)检测抗体。本试验融合率为79.2％,抗体分泌阳性率为22.7％。选择抗体滴度较高的三孔进行扩大培养及克隆化,选出三株杂交瘤细胞1—2C_(12),1—2F_5和1—2C_5,其腹水单克隆抗体     

细胞融合通过PI3K-AKT通路降低黑色素瘤细胞增殖能力

目的研究细胞融合在黑色素瘤细胞增殖中的作用及其分子机制。方法用聚乙二醇细胞融合方法融合黑色素瘤细胞,通过流式分选获得稳定的融合细胞。体外培养及细胞计数检测融合细胞的增殖速度。Affymatrix基因芯片分析差异表达的基因,IPA软件进行基因功能分析。Western blot检测细胞蛋白。结果 PEG化学融合法成功获得稳定的黑色素瘤融合细胞,其体外增殖速度明显减慢(P<0.01)。黑色素瘤融合细胞与增殖相关的PI3K-AKT通路明显下调(P<0.01)。融合细胞phospho-S6蛋白表达明显降低。结论细胞融合通过PI3K-AKT通路降低黑色素瘤细胞增殖能力。     

狂犬病毒单克隆抗体的杂瘤细胞系的建立

《病毒学报》1985,1(2)105朱家鸿、曾毅报道,将感染狂犬病毒aG株(我国狂犬疫苗生产毒种)后发病的BALB/c乳鼠脑内病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞S_P2/0融合。融合率为95.7％(401/419),阳性克隆占26.8％,经克隆化后获得3株杂交瘤细胞,用免疫荧光、BLISA和双向免疫扩散试验证明,该3株细胞分泌抗狂犬病毒     

EGFR靶向抗体融合蛋白激活免疫细胞杀伤肝癌细胞Huh7的研究

目的 探究靶向表皮生长因子受体(EGFR)的抗体西妥昔单抗(Cetuximab)与MHC-I(major histocompatibility complex-I)相关抗原分子MICB (MHC class I-related chain molecules B)的融合蛋白对肝癌细胞Huh7的杀伤效果.方法 通过重叠PCR(polymerase chain reaction)的方法通过柔性肽G4S将西妥昔单抗重链C末端及人MICB胞外区基因连接,构建成工程载体,并通过毕赤酵母进行表达;流式检测融合蛋白对Huh7细胞的结合能力;噻唑蓝(MTT)法检测Huh7细胞的增殖抑制;通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)实验验证融合蛋白是否能激活NK细胞杀伤肿瘤细胞.结果 通过基因工程手段和毕赤酵母表达,成功获得融合抗体蛋白,经Western blot鉴定结果说明融合蛋白Cetuximab-MICB表达及装配正确.流式细胞术检测Cetuximab-MICB与肝癌细胞Huh7的结合率为72.8％,与母体西妥昔单抗结合率(75.5％)相当.细胞增殖抑制实验,与PBS组对照相比,西妥昔单抗、融合蛋白组对肝癌细胞Huh7均有抑制作用,且抑制作用呈浓度依赖性.在蛋白浓度为400 nmoL/L时,Cetuximab-MICB融合蛋白组抑制率(66.09％)强于西妥昔单抗组(56.54％).将免疫细胞PBMC(peripheral blood mononuclear cell)/NK92和肿瘤细胞Huh7共孵育,通过检测LDH(lactate dehydrogenase)的释放,发现融合蛋白比西妥昔单抗更有效地介导NK细胞对肿瘤细胞的特异性杀伤,以PBMC为效应细胞,效靶比为100:1时Huh7细胞裂解率可以达到43.58％,优于西妥昔单抗组(37.77％).以NK92细胞为效应细胞,效靶比为10:1时Huh7细胞裂解率可以达到61.29％,明显优于西妥昔单抗组(40.54％).结论 采用毕赤酵母表达体系成功构建并表达了Cetuximab-MICB融合蛋白.Cetuximab-MICB融合蛋白具有良好的体外抗肿瘤活性,有效的抑制肿瘤细胞Huh7的增值,并能进一步通过NKG2D途径激活NK细胞加强免疫系统对肿瘤的免疫监视,为抗肿瘤治疗提供了新的思路,有潜在的临床应用前景.     

抗-P30单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立(文摘)

作者用纯化的P30抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。融合率为93.95％,抗体阳性率为21.01％。经克隆化,获得两株分泌抗-P30单克隆抗体的杂交瘤细胞株E8与G1。染色体计数:E8为98.7±6.54;G1为97.7±7.77。PAGEJ γ区出现浓染     

PML—RARα基因在早幼粒细胞性白血病发病中的作用研究

目的：通过封闭ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因对ＮＢ４细胞生长分化作用的影响，探讨ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因与ＡＰＬ发病的关系。方法：用反义核酸封闭ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的表达。ＮＢ４细胞的生长、分化及功能，通过细胞生长曲线、形态学、细胞表面标志及ＮＢＴ还原试验判定；细胞周期应用流式细胞仪分析。结果：ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的封闭能够抑制ＮＢ４细胞生长，促进其分化成熟，同时可降低Ｓ期细胞的百分比（由５６％降至３７％）。结论：急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）特征性的染色体易位ｔ（１５；１７）形成的ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因，是ＡＰＬ发病的分子基础。     

SPA单克隆抗体的制备与纯化

以SPA作基础免疫BALB/C小鼠后,融合前三天直接脾内免疫,取脾细胞与SP_2/O瘤细胞常规融合,融合率100％;以快速EIISA检测抗体,阳性率60％。5次有限稀释法克隆化后获得7株杂交瘤细胞,作中和抑制试验,证实为SPA特异性抗体。经鉴定属IgG2a及IgG2b亚类。电镜观察细胞融合,发现细胞内含逆转录病毒。经MAPS—100法纯化单抗腹水,获得了高纯度McAb。     

中国HIV-1 CRF01_AE流行株结构基因和调节/辅助基因DNA疫苗的构建和免疫原性研究

目的 构建表达gag-env融合基因和tat-rev-integrase(c-holf)-vif-nef融合基因的DNA疫苗,并评价其免疫原性.方法 按人源密码子使用频率对AE2f株的gag、env、tat、rev、integrase、vif和nef基因序列进行优化,构建真核表达质粒.用Western blot法验证体外表达情况;用ELISPOT法检测小鼠的细胞免疫反应.结果 限制性酶切及DNA测序结果表明两个融合基因质粒构建正确,可以表达相应的融合蛋白.ELISPOT结果显示,Gag-Env特异性的T细胞反应强度为(3010±566)SFC/10~6脾细胞;Tat-Rev-Integrase(C-half)-Vif-Nef融合蛋白特异性的T细胞反应为(948±737)SFC/10~6脾细胞,均显著高于空载体组.结论 构建的表达HIV-1 CRF01_AE流行株gag-env融合基因和tat-rev-integrase(c-half)-vif-nef融合基因的DNA疫苗可以正确表达所编码的融合蛋白并有效地激活机体的T细胞免疫反应.     

利用杂交瘤建立三株分泌抗破伤风类毒素单克隆抗体细胞的实验研究

以破伤风类毒素疫苗免疫Balb/c小鼠6次,每次间隔10—15天,末次免疫后三天取小鼠脾脏于铜网中研磨成单个细胞,按脾细胞与SP2/0瘤细胞的比值为10:1(脾细胞1.5×10~3,SP2/0瘤细胞为1.5×10~7)用50％PEG1000进行细胞融合,以Balb/c小鼠腹腔细胞为饲养细胞,于HAT培养液中将融合细胞分种于4块16孔大孔板(天津产)内,放入水封密闭的自制培养合中,充入5％Co_2混合气,37℃培养。培养5天后第一次换液,以后每3天观察换     

肺鳞状细胞癌EGFR/ALK的基因状态

目的:探讨肺鳞状细胞癌各亚型中EGFR和ALK的基因状态.方法:应用ARMS方法检测肺鳞状细胞癌石蜡组织中EGFR基因突变和ALK融合基因情况.结果:218例肺鳞状细胞癌样本中,E GFR基因突变率为4.59％(10/218),19del和L858R各为2.29％(5/218).ALK融合基因阳性率为6.14％(7/114).结论:肺鳞状细胞癌存在一定比例EGFR基因突变和ALK融合基因阳性,肺鳞状细胞癌EGFR基因和ALK融合基因常规检测不可忽视.     

应用活体内生长的骨髓瘤细胞促进细胞融合成功率

本文报告了用小鼠骨髓瘤细胞系NSI融合不易成功时,可先将其接种到Balb/c小鼠体内产生实体瘤,然后分离出单个细胞悬液,进行细胞融合的16次实验结果,成功率达100％。所用免疫原有胸腺细胞,CLLC、人和大白鼠肾细胞等细胞性抗原;也有Aldolase和POD等可溶性抗原。16次融合共获得315个单抗,其中131个单抗具有较好的特异性。从融合成功率单抗特异性及60株杂交瘤所分泌免疫球蛋白类与亚类的分析证明此法是可靠的。特别适用于细胞培养条件较差或因支原体污染造成鼬合失败的实验室。文中对此法的机制也进行了讨论。     

HSP65-PSA融合蛋白的体内外抗肿瘤活性研究

目的:研究热休克蛋白65(HSP65)-前列腺特异性抗原融合蛋白在体外对人树突状细胞的活化作用以及在小鼠体内抑制PSA阳性肿瘤细胞生长的作用.方法:利用Westernblot方法对融合蛋白HSP65-PSA的特异性进行鉴定;利用共聚焦显微镜、流式细胞术(FCM)检测和斑点杂交的方法对PcDNA3-GFP-PSA稳定转染的B16细胞进行鉴定;用HSP65-PSA融合蛋白刺激来自于人外周血的未成熟树突状细胞,观察融合蛋白对树突状细胞的体外活化作用;用PcDNA3-GFP-PSA稳定转染的B16细胞种植C57BL/6小鼠,继而用HSP65-PSA融合蛋白来免疫小鼠以观察融合蛋白对PSA阳性B16肿瘤细胞生长的体内抑制作用.结果:Western blot检测显示融合蛋白HSP65-PSA具有PSA蛋白特异性.共聚焦显微镜、FCM检测和斑点杂交结果均显示PcDNA3-GFP-PSA转染的B16细胞转染情况良好.体外细胞实验显示,将HSP65-PSA融合蛋白作用于人外周血树突状细胞后可以明显促进树突状细胞表面分子CD86的表达,其上调率为52.93%.动物体内实验显示,HSP65-PSA融合蛋白可以明显抑制PSA阳性B16肿瘤细胞在小鼠体内的生长.10 μg蛋白免疫组的肿瘤体积(4.91±5.21)与对照组(10.56±6.10)相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:HSP65-PSA融合蛋白可以在体外活化树突状细胞,在小鼠体内抑制PSA阳性B16肿瘤细胞的生长.HSP65-PSA融合蛋白可能具有应用于PSA阳性肿瘤的免疫治疗作用.     

肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体的研制与鉴定

本文报道,从肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染乳鼠鼠脑中提取高滴度的血凝素(HAN),以该血凝素免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。融合率为60％和78％,阳性孔率为15％和44％。IFA筛选后共获得56株分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系。对其中1A_8,2A_(11),1B_3,3D_8,2F_7,1G_4,1G_9,3G_1,3G_(11),2H_1十株细胞系用有限稀释法进行了3～4次克隆化,阳性克隆率达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养     

增强型绿色荧光蛋白基因与轮状病毒VP6基因融合表达载体的构建及表达

目的构建增强型绿色荧光蛋白（EGFP）与轮状病毒（RV）VP6基因融合表达载体,研究融合蛋白表达及在细胞中的分布。方法提取A组人RVTB-Chen株VP6基因,用PCR扩增VP6编码cDNA片段。将此基因片段与真核表达载体pEGFP-C1携带的EGFP融合;运用脂质体的方法,将获得的重组质粒转染到MA104细胞中,在荧光显微镜下观察蛋白的表达及其在细胞中的分布情况。结果成功构建了融合表达质粒;转染细胞后,融合蛋白可在MA104细胞中表达且主要分布在胞质中。结论RVVP6可与EGFP融合表达,融合蛋白在细胞质中呈均匀的分布,与RV感染细胞中合成的VP6蛋白的分布有较大的差别。