pEgr-ssEndostatin重组质粒瘤内辐射诱导表达及其抗肿瘤作用

目的 观察pEgr-ssEndostatin基因-放射治疗对移植黑色素瘤B16小鼠的抗肿瘤作用及其在瘤内辐射诱导表达。方法 肿瘤局部注射脂质体包裹的pEgr-ssEndostatin重组质粒后42h，接受20Gyx射线照射，观察放疗后不同时间肿瘤大小，检测放疗后第2天瘤内Endostatin转录水平。结果 pEgr-ssEndostatin基因-放射治疗荷瘤小鼠能够增强放疗疗效；单纯接种pEgr-ssEndostatin质粒组和接种pEgr-ssEndostatin质粒 20Gy照射组小鼠的肿瘤组织内有Endostatin mRNA表达，且pEgr-ssEndostatin质粒照射组的EndostatinmRNA水平高于单纯pEgr-ssEndostatin质粒组。结论 pEgr-Endostatin基因-放射治疗抗肿瘤作用明显优于单纯放疗和单纯基因治疗，肿瘤局部转染重组质粒后照射瘤内Endostatin表达增强。     

IFN-γ和内皮抑素双基因联合X射线对小鼠乳腺癌及肺转移的抑瘤作用

目的 评价IFN-γ和内皮抑素(endostatin)双基因-放射治疗在小鼠转移性乳腺癌中的抑瘤效应,并探讨其可能的作用机制。方法 用脂质体包裹pEgr-IFN-γ和 pEgr-endostatin质粒转染小鼠乳腺腺癌4T1 细胞,并用X射线照射,吸收剂量为2~20 Gy。用ELISA检测细胞培养液上清中IFN-γ和内皮抑素的浓度。小鼠下肢注4T1肿瘤细胞1×10⁵个,荷瘤小鼠随机分组为对照组、空质粒组,基因治疗组、放射治疗组及基因-放射治疗组,观察小鼠肿瘤生长及肺转移情况,计算肿瘤生长率、肿瘤/体重比及荷瘤小鼠生存率, 并用流式细胞仪检测脾脏 CTL 和 NK细胞的细胞毒活性,用免疫组织化学法检测肿瘤内部的微血管密度。结果 辐射显著增强了4T1 细胞分泌IFN-γ和内皮抑素的浓度。小鼠接受基因-放射治疗与单独接受基因治疗或者接受放射治疗相比,肿瘤生长率明显降低,同时生存率明显提高(t＝8.724,P<0.05)。双基因联合放射治疗组小鼠脾中CTL 和 NK 细胞的细胞毒活性及腹腔巨噬细胞的TNF-α水平较对照组明显升高(t=2.120、22.140和5.289,P<0.05),微血管密度明显降低(t=13.294,P<0.05)。结论 IFN-γ和内皮抑素的基因-放射治疗增强了小鼠转移性乳腺癌的抑瘤效应,其机制可能与IFN-γ激活 CTL 和 NK 细胞活性及内皮抑素引起肿瘤血管生成抑制有关。     

老年急性脑梗塞患者血清血管内皮生长因子和肿瘤坏死因子α水平的动态变化研究

目的：探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)在老年急性脑梗塞发病中的作用及与脑梗塞面积、神经功能缺损评分的关系。方法：应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)连续测定急性脑梗塞发病后3,7和14d VEGF和TNF-α血清浓度，并研究其与脑梗塞面积、神经功能缺损评分的关系。结果：①VEGF和TNF-α血清水平在脑梗塞发病第3，7和14天均高于对照组，高峰时间均在发病后第7天。并持续增高到发病后14d。②VEGF的血清浓度与梗塞灶的大小、神经功能缺损程度相关。VEGF与外周血白细胞明显相关。③TNF-α血清浓度与梗塞灶大小、神经功能缺损程度、外周血白细胞、血脂、血小板、纤维蛋白原无相关性。结论：VEGF和TNF-α在老年急性脑梗塞发病早期参与了脑梗塞病理生理过程。并可能参与了修复过程及诱导了免疫反应，该结果对急性脑梗塞的治疗具有一定指导作用。     

辐射诱导凋亡与放疗的关系

从几方面综述辐射诱导凋亡：凋亡和有丝分裂相关死亡的定量比较；辐射诱导凋亡与放疗的关系；分次放疗期间凋亡敏感细胞中新细胞的补充；辐射诱导凋亡的调节；今后需要研究的辐射诱导凋亡问题     

蒺藜总皂甙对TNF-α及IL-1β诱导内皮细胞粘附的抑制作用

目的：观察蒺藜总皂甙（ｇｒｏｓｓｓａｐｏｎｉｎｓｆｒｏｍ ＴｒｉｂｕｌｕｓｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓＬ,ＧＳＴＴ） 对肿瘤坏死因子－ α（ＴＮＦ－ α） 、白细胞介素－１β（ＩＬ－１β） 诱导的培养新生牛脑微血管内皮细胞（ＣＭＥＣ） 粘附大鼠血单核细胞（ＭＮＣ） 及中性粒细胞（ＰＭＮ） 的影响。方法：用ＴＮＦ－α和ＩＬ－１β分别诱导传代的ＣＭＥＣ,计粘附ＭＮＣ及ＰＭＮ的细胞数,并计算粘附率。结果：ＣＭＥＣ 经ＴＮＦ－ α处理４ｈ 后,ＣＭＥＣ与ＭＮＣ及ＰＭＮ的粘附率,分别增加到３１．３±０．５％ 和３２．１±０．５％ （对照组分别为１２ ．５±０ ．２％ 和１３ ．８±０ ．４ ％） ,经ＩＬ－１β处理２ｈ 后,则分别为４４．５ ±１．０ ％ 和４４．８ ±０．７ ％ （ 对照组分别为１２ ．９ ±０．６ ％ 和１４．７ ±０．６％ ）。在ＴＮＦ－ α（ＩＬ－ １β） 处理前,用ＧＳＴＴ与ＣＭＥＣ共孵育,预处理２ｈ,则ＧＳＴＴ可剂量依赖性地抑制ＴＮＦ－ α和ＩＬ－ １β的作用。结论：ＧＳＴＴ可抑制ＣＭＥＣ 与ＰＭＮ及ＭＮＣ的粘附。     

辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN的构建及其体外抗肿瘤作用的研究

目的 克隆人野生型抑癌基因PTEN／MMAC1 cDNA序列、构建辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN并研究其体外稳定转染联合X-射线照射对恶性胶质瘤细胞SHG-44增殖的抑制作用。方法 利用RT—nested PCR法从正常人胎盘组织中扩增出约1200bp的PTEN片段，并将其重组人pcDNA3．1-Egr载体中，构建为表达质粒pEgr-hPTEN，体外转染肿瘤细胞并经G418筛选稳定转染细胞株SHG-44-sPTEN，接受不同剂量X射线照射，观察基因-放射联合作用对肿瘤细胞生长的影响。结果 经全自动测序证明克隆得到了野生型PTEN基因；辐射诱导表达载体pEgr—hPTEN构建正确；稳定转染联合X-射线照射可明显抑制肿瘤细胞的恶性增殖，5Gy以内随吸收剂量的增加，肿瘤抑制作用更明显。结论 本研究成功克隆了人野生型抑癌基因PTEN／MMAC1 cDNA序列并构建了辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN，体外基因-放射联合治疗具有明显的肿瘤抑制作用。本研究为提高临床恶性肿瘤放疗疗效奠定了理论和实验基础。     

失血性休克对内毒素诱导肿瘤坏死因子α产生的影响

观察了大观察失血性休克（ＨＳ）条件下小剂量内毒素（ＬＰＳ，１μｇ／ｋｇ）对肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）的诱生作用及其细胞来源。结果显示，静脉注射ＬＰＳ后９０ｍｉｎ，ＨＳ＋ＬＰＳ组血浆ＴＮＦα水平分别较ＨＳ组高２０倍（Ｐ〈０．０１），较ＬＰＳ组高２．７倍（Ｐ〈０．０５）。体外研究结果显示，复苏后即刻，外周血白细胞（ＰＷＢＣ）体外产生ＴＮＦα的能力明显受抑，分别较休克前和假手术组低５５．８％和３６．５％     

烧伤血清诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α的规律

目的：探讨烧伤血清诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW264．7细胞分泌TNF-α的规律及其在脓毒症中的作用。方法：烧伤血清的剂量效应组分别用含有0．5,1．0,1．5,2．0,2．5ml烧伤血清的培养基与小鼠单核巨噬细胞系RAW264．7共培养6h,用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF-α含量。采用流式细胞技术观察细胞的凋亡。烧伤血清的时间效应组以含有2．5ml烧伤血清的培养基,对照组以不含烧伤血清的培养基,另外以含有2．5ml烧伤血清和100mg／L LPS的混合组的培养基分别培养RAW264．7细胞0,2,4,6,8,10,12,24h,同上留取离心后的培养液上清,用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF-α含量。结果：将烧伤血清加入到小鼠单核巨噬细胞RAW264．7培养液中能明显刺激TNF-α的分泌。在0．5ml～2．5ml范围内,烧伤血清诱导RAW264．7细胞的TNF-α分泌增加,呈显著的剂量依赖性关系,2．5ml烧伤血清能明显诱导RAW264．7细胞的凋亡;烧伤血清组和烧伤血清与LPS的混合组RAW264．7细胞的TNF-α分泌在0～24h间呈双相性规律。结论：烧伤血清能诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW264．7的TNF-α分泌与凋亡,初步证实烧伤血清在脓毒症的发生、发展中发挥重要作用。     

肠源性内毒素在烧伤后诱导肝损伤的作用

目的：探讨烧伤后肠源性内毒素在肝损伤中的作用．方法：大鼠３０％Ⅲ度烧伤，采用免疫组化染色检测肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）蛋白在肝组织中的表达及细胞定位，并观察门静脉血浆内毒素、肝组织白细胞介素－８（ＩＬ－８），丙二醛（ＭＤＡ）及腔静脉血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）含量变化的关系．结果：烧伤后ＴＮＦ蛋白表达阳性细胞数迅速增加，其动态变化与门静脉血浆内毒素的变化极为相似．烧伤后腔静脉血清中ＡＬＴ、ＬＤＨ及肝组织中ＩＬ－８、ＭＤＡ水平亦显著升高．结论：肠源性内毒素是导致烧伤早期肝损伤的主要致病因素之一；这种损伤效应是由其刺激单核吞噬细胞系统产生的多种细胞因子介导的；中性粒细胞可能也参与了肝损伤过程     

TNF-α对大鼠Leydig细胞的作用及机制研究

目的观察TNF-α对睾丸细胞功能的影响并探讨其可能机制。方法通过Percoll不连续密度梯度分离获取大鼠Leydig细胞进行原代培养。HE染色进行细胞形态学观察。Leydig细胞培养48h后在培养液中分别加入不同浓度的大鼠TNF-α,使其终浓度达到0.1、1、10、100ng/ml,分别在培养的第1、2、3、4天取上清,通过放免法测定上清液中睾酮的含量,应用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞术与丫啶橙(AO)染色检测及观察Leydig细胞凋亡情况。结果原代细胞通过提纯后的细胞纯度可达70%~80%。HE染色后可见细胞胞质含量丰富,含有分泌颗粒,胞核圆。TNF-α在0.1~100ng/ml浓度范围内能呈剂量依赖的方式抑制Leydig细胞睾酮的基础分泌。0.1、1、10、100ng/mlTNF-α作用24h后,对Leydig细胞睾酮分泌量的抑制率分别为22.03%、34.98%、52.95%、74.83%。各组Leydig细胞睾酮的分泌量随时间延长呈减少的趋势,但除100ng/ml组外,其他各组各时间点比较差异无统计学意义。高浓度TNF-α(10、100ng/ml)组具有抑制Leydig细胞增殖和促进其凋亡作用,其增殖抑制率分别达到38.35%±4.17%、76.35%±8.65%,而凋亡率分别为13.23%±1.11%、26.43%±5.82%,与对照组比较有统计学意义(P<0.01)。AO染色见高浓度TNF-α(10、100ng/ml)组出现明显的细胞凋亡。结论TNF-α对Leydig细胞睾酮的基础分泌具有抑制作用,在较高浓度时该作用可能与其抑制Leydig细胞增殖并促进细胞凋亡有相关。     

HIF-1的调控及抗肿瘤相关基因治疗

缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor,HIF-1)是细胞缺氧状态下的关键调控蛋白,作为调节肿瘤细胞缺氧适应、细胞活性、肿瘤血管形成、肿瘤侵袭性和恶性程度的中枢。控制HIF-1的活性及其下游基因的表达,有望成为抗肿瘤治疗的有效途径。本文就HIF-1的结构、表达的调控、相关基因治疗作一综述。     

人TNFα衍生物11a在体外对肿瘤细胞的细胞毒作用

人ＴＮＦα衍生物１１ａ在体外对肿瘤细胞的细胞毒作用１０００３６北京空军总医院李景泰刘丽赵建增谢宝树冷爱军关键词肿瘤坏死因子衍生物；细胞毒作用中国图书资料分类号Ｒ７３０．５３肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对多种肿瘤细胞具有显著的细胞毒作用，并可通过调节机体的自...     

辐射敏感性早期生长应答-1基因启动子的研究

肿瘤基因放射治疗已成为研究热点,早期生长应答-1(Egr-1)基因启动子为肿瘤基因放射治疗提供一种可能的方法。综述了Egr-1基因启动子及应用Egr-1基因启动子构建辐射诱导调控系统的研究。     

地塞米松对TNF -α诱导的H460细胞增殖的影响

目的:观察地塞米松对TNF -α诱导的肺癌H460细胞增殖的影响.方法:体外培养H460细胞,经TNF -α刺激后,随机分为对照组和实验组,对照组用不含地塞米松的DMEM培养液培养,实验组则分别加入含不同浓度地塞米松的DMEM培养液.通过MTT比色实验观察各组的值.结果:TNF -α( 12.5～100 ng/ml)可...     

管内皮抑制素对125I近距离照射裸鼠肺癌移植瘤的增敏效应研究

目的 探讨重组人血管内皮抑制素对125I粒子植入治疗裸鼠肺癌移植瘤模型的辐射增敏效应。 方法 建立裸鼠移植瘤模型,随机分成对照组（A组）、125I植入组（B组）、重组人血管内皮抑制素组（C组）和125I植入联合重组人血管内皮抑制素组（D组）,每组20只。移植瘤直径达2 cm时行125I粒子植入,处方剂量20 Gy,采用治疗计划系统计算移植瘤的体积及接受剂量。按每只裸鼠每天给予20 mg/kg重组人血管内皮抑制素,连续给药14 d,观察并记录肿瘤生长的速度和瘤体体积的变化,分别于第15、30天时处死裸鼠,并通过免疫组化方法检测血管内皮生长因子（VEGF）的表达和微血管密度（MVD）,通过RT-PCR分别检测各组肿瘤组织中αvβ3 mRNA水平。 结果 第15、30天时,D组的重量抑瘤率和体积抑瘤率与B、C组相比明显增加,差异有统计学意义,B组和D组第30天时的重量抑瘤率和体积抑瘤率均较第15天时明显增加,差异有统计学意义。免疫组化结果显示,第15、30天时,D组与A、B、C组VEGF、MVD差异均有统计学意义,其中,C组与A、B组VEGF、MVD差异有统计学意义,C组第30天时的VEGF表达水平和MVD较第15天时增加,差异有统计学意义。RT-PCR结果显示,第15、30天时,与A组相比,B组αvβ3 mRNA的表达有所增加,并随时间的延长增加更明显,差异有统计学意义,而C组和D组αvβ3 mRNA的表达下降,差异有统计学意义。 结论 重组人血管内皮抑制素对肺癌移植瘤的近距离辐射增敏作用明确,VEGF、MVD、αvβ3 mRNA的表达变化是其重要机制。     

强直性脊柱炎患者肿瘤坏死因子α-857和-863位点基因多态性分析

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)α-857和-863位点基因多态性与强直性脊柱炎(AS)的相关性。方法用序列特异引物PCR方法对112例AS患者和96例健康对照人群,以及98例HLA B27阳性AS患者和14例阴性AS患者的TNF-α-857(C/T)和-863(C/A)位点基因多态性进行分析。结果AS患者组TNF-α-857位点基因型和等位基因频率分布与健康对照组有显著统计学差异(P<0.01),AS患者的T等位基因频率明显高于对照组,而AS患者TNF-α-863位点基因型和等位基因频率分布与健康对照组无统计学差异(P>0.05)。HLA-B27阳性AS患者和阴性AS患者TNF-α-857位点基因型频率亦有显著统计学差异(P<0.01)。结论TNF-α-857位点基因多态性与AS相关,T等位基因可能增加AS的易感性。     

canstatin抗肿瘤作用研究现状

肿瘤的生长及转移均依赖于血管新生。抗血管生成治疗已成为肿瘤的治疗热点,目前以内源性血管生成抑制因子研究为主。血管能抑素（canstatin）是新近发现的一种来源于IV型胶原蛋白的内源性抗血管新生抑制因子,具有较强的抗血管新生作用而受到重视,现综述其抗肿瘤研究现状。     

电离辐射联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对乳腺癌MCF-7细胞株作用的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对人乳腺癌MCF．7细胞株的作用以及与放射治疗联合的可行性。方法1×10^4／ml MCF-7细胞接种至96孔板培养后加入不同浓度的TRAIL、给予不同剂量照射及TRAIL与电离辐射联合，Mrrr法检测细胞抑制率。MCF-7细胞接种至6孔板培养后，分别加入TRAIL（1μg／ml）、给予8Gy照射及TRAIL与8Gy照射联合，流式细胞术检测不同处理组细胞的凋亡率。应用RT-PCR法检测经不同处理后的细胞凋亡相关基因的表达情况。结果TRAIL（1μg／ml）与4、8和12Gy照射联合后对细胞的抑制率明显增加，与单独应用TRAIL及单独照射相比，差异有统计学意义。RT-PCR结果显示Bcl-2、Bcl-Xl基因在TRAIL与8Gy照射联合时表达减弱。结论在体外实验中，乳腺癌MCF-7细胞株对TRAIL不敏感，但TRAIL与电离辐射照射联合后抗肿瘤作用增强，TRAIL可能是一种有临床应用潜能的新型抗肿瘤生物制剂。