乙型肝炎病毒感染者外周血各亚群淋巴细胞绝对值的特点及意义

目的探讨不同类型乙型肝炎病毒(HBV)感染者各亚群淋巴细胞绝对值的特点及临床意义。方法 235例HBV感染者按病情分为急性乙型肝炎28例、慢性乙型肝炎40例、乙肝肝硬化(LC)76例、原发性肝癌(HCC)55例、慢性重型乙型病毒性肝炎(以下简称慢重肝)36例。利用流式细胞术对患者的外周血各亚群淋巴细胞绝对值进行检测,并与健康对照组进行比较。结果急性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群除NK细胞外,与对照组差异无统计学意义(均>0.05)。慢性感染者外周血淋巴细胞亚群计数普遍低于对照组,并随病情的进展而显著减少。慢重肝患者较慢性乙型肝炎患者所有亚群细胞计数均明显下降(<0.05)。HCC患者CD3+、CD3-CD19+、CD4+、CD8+亚群细胞计数在所有疾病组中最低,且CD8+细胞较其他疾病组下降更为显著(<0.05)。不同类型HBV感染者NK细胞计数均较对照组明显下降(均<0.05)。结论 HBV感染者存在不同程度的细胞免疫功能低下及免疫调节紊乱,其外周血各亚群淋巴细胞绝对值发生改变,与疾病类型、病情密切相关。     

慢性乙型肝炎病毒感染与T淋巴细胞亚群的变化

目的观察慢性HBV感染者的T淋巴细胞亚群的变化特征，探讨不同类型慢性HBV感染者免疫失衡的规律。方法2002～2007年慢性HBV感染者305例，其中慢性乙型肝炎157例，肝炎后肝硬化81例，原发性肝癌36例，慢性重型肝炎31例，观察患者的肝功能、T淋巴细胞亚群、乙肝病毒标记物等。同时收集80名健康志愿者的新鲜血检测T淋巴细胞亚群。结果慢性肝炎组ALT升高明显，肝细胞炎症较明显；重型肝炎组TBIL显著升高，肝细胞损害较重。慢性肝炎组CD4细胞计数明显下降；重型肝炎组CD3、CD4细胞计数及CD4／CD8均低于正常组；肝硬化、肝癌组的CD3、CD4和CD8细胞计数显著低于正常组和慢性肝炎组。结论慢性HBV感染随着病情进展，由慢性肝炎→肝硬化→肝癌，细胞免疫功能逐渐衰退。慢性HBV感染的不同阶段的细胞免疫紊乱各具特点，就不同类型患者应采用不同的免疫调节治疗手段。     

基因B型及C型慢性乙型肝炎患者特异性T淋巴细胞应答的差异

目的比较HBV基因B,C基因型患者间HBV特异性T淋巴细胞应答的差异。方法以我国主要流行的B,C基因型为病毒学背景,设计覆盖HBV全基因序列的重叠多肽池,PCR-RFLP方法检测患者HBV基因型,通过酶联免疫斑点试验检测30例基因B,C型慢性HBV感染者的特异性T淋巴细胞分泌IFN-γ差异。结果在30例慢性HBV感染者中基因B型有21例(70%),基因C型有9例(30%);在特异性T淋巴细胞应答方面,HBV基因B型患者明显高于基因C型患者(P=0.021)。结论HBV基因B型较高的特异性T淋巴细胞反应水平对于解释HBV基因B型患者与基因C型患者临床转归差异提供了细胞免疫学依据。     

Tim-3、PD-1在慢性HBV感染中的免疫调节作用

慢性HBV感染者体内免疫细胞存在功能障碍，免疫功能无法发挥正常作用；其CD4+、CD8+T淋巴细胞、NK细胞等免疫细胞表面存在Tim-3、PD-1的过度表达。大量文献表明该现象与HBV持续感染、疾病的发生发展以及预后密切相关，推测Tim-3、PD-1或许可作为新的免疫靶点治疗慢性乙型肝炎。     

慢性丙型肝炎自身免疫发病机制的研究

为探讨慢性丙型肝炎自身免疫的发病机制 ,用免疫学方法检测慢性HCV感染者、慢性HBV感染者和健康献血员的血清抗GOR ,ANA和TGA/TMA ,另检测部分慢性HCV感染者和健康献血员血清可溶性Fas(sFas)水平 ;用间接免疫荧光和流式细胞术检测部分慢性HCV感染者和健康献血员外周血淋巴细胞亚群及其凋亡百分率。结果显示 :慢性HCV感染者抗GOR ,ANA和TGA/TMA的阳性率及血清sFas浓度较正常对照组显著增高 (均为 P >0 .0 1) ,较慢性HBV感染者的抗GOR和ANA阳性率亦显著增高 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 ) ;慢性HCV感染者PBMCs及CD+ 3 T淋巴细胞凋亡明显高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,其抗GOR阳性者CD+ 4T淋巴细胞及CD+ 19B淋巴细胞凋亡比抗GOR阴性者明显减少 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 )。表明 :慢性HCV感染者存在自身免疫反应及淋巴细胞凋亡不均衡现象 ;CD+ 4T细胞及CD+ 19B细胞凋亡的减少在慢性HCV感染诱导的自身免疫反应中起重要作用。血清sFas水平升高可能是部分淋巴细胞凋亡减少 ,导致自身免疫的原因之一。     

HBV感染者外周血T细胞亚群的研究

目的:分析HBV感染者外周血T细胞亚群的特征及病程不同阶段的变化及意义.方法:采用流式细胞仪对112例HBV感染者的外周血T细胞亚群进行检测,分析其差异及意义并与正常对照组相比较.结果:慢性乙肝、肝硬化患者的外周血CIM T细胞、CD8 T细胞百分比及CD4 T/CD8 T较急性肝炎组及正常对照组明显减少;HBV-DNA阳性组、HBeAg 阳性组外周血CD4 T细胞、CD8 T细胞百分比及CD4 T/CD8 T较正常对照组明显减少.结论:HBV感染者体内存在T淋巴细胞亚群失衡和细胞免疫功能紊乱.外周血T淋巴细胞亚群与乙肝病毒感染的慢性化及肝病的临床发生、发展有关.     

慢性丙型、乙型肝炎合并感染者血清标志物检测及干扰素治疗的临床观察

目的探讨慢性丙型、乙型肝炎合并感染者体内病毒间的相互关系，以及对干扰素治疗效果的影响。方法采用ELISA法进行血清肝炎免疫检测，用荧光定量法进行丙型肝炎病毒基因（HCVRNA）和乙型肝炎病毒基因（HBVDNA）检测，并观察比较HCV、HBV合并感染与单独HCV感染者接受干扰素治疗的效果。结果HBV、HCV合并感染者血清HCVRNA和HBVDNA阳性率明显低于单独HCV、HBV感染者（46．43％和3．57％／71．43％和66．73％），且合并感染者体内HBVDNA阳性率明显低于HCVRNA（3．57％／46．43％）。HCV、HBV合并感染者接受干扰素治疗后ALT复常率、治疗结束时病毒学应答（ETVR）率，持续病毒应答（SVR）率与单独HCV感染者无明显差异（P〉0．05）。结论在慢性HCV、HBV合并感染者中，体内HCV和HBV间存在相互抑制作用，且以HCV对HBV的抑制占优势。HBV的合并感染对慢性丙型肝炎干扰素治疗效果影响不大。     

慢性HBV感染者特异性细胞毒性T淋巴细胞及HLA-A2的变化研究

目的：探讨慢性HBV感染者特异性细胞毒性T淋巴细胞（specific cytotoxic T lymphocyte,CTL）及人类白细胞抗原一A2（human leucocyte antigen-A2,HLA-A2）的变化。并分析CTL与血清丙氨酸氨基转移酶（alanineaminotransferase,ALT）水平和病毒载量的关系,以了解慢性HBV感染者特异性细胞免疫功能的状态。方法：采用HLA-A2限制的HBVcore18-27抗原表位肽五聚体（MHC Pentamersl法结合流式细胞技术,分析CHB组慢性乙型肝炎46例、LC组乙型肝炎肝硬化29例和NC组23例正常对照健康体检者,外周血HBV特异性CTL及HLA-A2的变化,并分析CTL与ATL水平和病毒载量的关系。结果：CHB组、LC组HLA-A2检出率均明显高于NC组;ALT水平和病毒载量与HBV特异性的CTL有一定的关系。结论：采用HLA-A2限制的HBVcore18-27抗原表位肽五聚体（MHCPentamers）法结合流式细胞技术可以检测到低水平的HBV特异性CTL;HLA-A2是乙型肝炎肝硬化的易感基因之一;ALT水平和病毒载量与HBV特异性CTL有一定的关系。     

乙型肝炎病毒感染者B淋巴母细胞系的建立

目的 在体外建立HBV感染者永生化的B淋巴母细胞系(LCL),并鉴定其HLA-A基因亚型.方法 利用EB病毒转化外周血B淋巴细胞使之永生化,用环胞菌素A(Cys A)抑制血液中T淋巴细胞的活性;用PCR-SSP法检测血样本的HLA-A基因亚型.结果 成功建立了HBV感染者的永生细胞株16株,其中急性乙肝4例,慢性乙肝10例,携带者2例.所有的细胞株冻存后复苏的成功率为100%.细胞株的HLA-A基因亚型包括1101、0201、0101、2403等.结论 转化后的LCL保持了良好的稳定性,既可能作为人源单抗的来源,也可作为体外研究HBV特异性免疫应答的刺激细胞和靶细胞.永生化细胞HLA-A基因亚型的鉴定有可能使其成为异体相应亚型体外特异性免疫应答的刺激细胞和靶细胞.     

慢性乙型肝炎病毒感染者肝纤维化指标检测的临床意义

针对慢性HBV感染者，一般将ALT≥2X正常上限值（ULN）或肝组织炎症分级≥G_2级和／或纤维化分期≥S_2期作为抗病毒治疗的重要指征，但有文献报道在ALT持续正常及轻度升高的慢性HBV感染者中仍有相当一部分患者存在显著的肝脏组织学改变[1-4]。     

rIL_（－2）对慢性HBV感染者NK细胞功能调节及影响因素

本文采用４小时、１６小时微量释放细胞毒法监测慢性ＨＢＶ感染者ＮＫ细胞对Ｋ５６２细胞及ＰＬＣ／ＰＲＦ／５细胞杀伤活性及某些影响因素。实验提示慢性活动型肝炎（ＣＡＨ）、慢性无症状携带者（ＡＳＣ）ＮＫ细胞杀伤活性均高于健康人。ｒＩＬ－２可明显增加健康人ＮＫ细胞活性，但对ＨＢＶ感染者ＮＫ细胞增强作用不明显。ＨＢｓＡｇ、ｒＨＢｅＡｇ和ｒＨＢｃＡｇ均可明显抑制ＮＫ细胞活性，并有剂量依赖性，加入外源性ｒＩＬ－２仍不能纠正。提示ＨＢｓＡｇ、ｒＨＢｅＡｇ和ｒＨＢｃＡｇ可通过某种机制阻抑ｒＩＬ－２与ＮＫ细胞结合发挥作用。     

抗HBe阳性慢性肝炎患者的HBV感染状态研究

本文结合肝内HBsAg与HBcAg的表达情况对15例抗-HBe阳性慢性肝炎患者进行了肝细胞内HBV DNA原位杂交分析。发现其HBV感染状态可分为3种类型;①HBV活动复制型(4例,26.7％),肝内HBV DNA、HBsAg、HBcAg三者或HBsAg、HBcAg阳性;②HBV不完全复制或表达型(8例,53.3％),肝内HBV DNA、HBsAg阳性;③HBV非复制型(3例,20.0％),肝内HBV DNA及HBV标志均阴性。提示:在血清HBeAg向抗-HBe转换的病例中,HBV感染状态不尽相同,部分患者仍存在HBV活动性复制,少数病例的HBV复制已停止,半数病例处于由活动性复制相向非复制相过渡阶段。     

血清HBV标志或HBsAg阴性慢性肝炎患者肝内HBV DNA原位杂交分析

本文采用原位杂交及免疫组化方法对23例血清HBV标志或HBsAg阴性慢性肝炎患者的HBV感染状态进行了研究。发现肝内乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA),HBsAg,HBcAg的检出率分别为43.48％、38.89％.16.67％;肝内有HBV感染依据者占65.22％,表明半数以上的血清HBV标志或HBsAg阴性患者肝内仍然存在HBV复制或基因表达。含HBV DNA的肝细胞及表达HBsAg,HBcAg的肝细胞大多毗邻灶状坏死和(或)碎屑样坏死灶,提示HBV复制及其产物表达与患者的慢性化、活动性坏死性炎症密切相关。     

Analysis of intrahepatic HBVDNA in serologic HBV markers-negative or HBsAg-negative patients with chronic hepatitis

Summary To explore HBV infection status in a group of serologic HBV markers-negative or HBsAg-negative patients with chronic hepatitis, in situ hybridization to hepatccellular HBVDNA was carried out in combination with detection of HBsAg and HBcAg in the liver tissues. It was found that prevalence of intrahepatic HBVDNA, HBsAg and HBcAg was 43 %, 39 % and 17 % respectively, and 15 out of 23 cases studied were sure to bear one or more positive marker (s) of intrahepatic HBVDNA, HBsAg and HBcAg. These findings suggest that more than half of the patients with chronic hepatitis were still undergoing HBV infection, despite serologic HBV markers or HBsAg negative. Furthermore, we found that hepatocytes containing HBV-DNA or surface or core antigen were often close to hepatic necrosis foci, indicating that HBV replication and its antigen(s) expression in hepatocytes could account for chronic, active and necrotic inflammation occurring in the liver of the patients mentioned above.     

乙型肝炎病毒携带者T细胞亚群检测及其与肝组织病变程度的关系

目的观察乙型肝炎病毒(HBV)携带者T细胞亚群的变化及其与肝组织病变程度的关系。方法HBV携带者79例进行肝组织病理检查,应用流式细胞仪检测T细胞亚群,与HBsAg阴性的健康者22例比较分析。结果(1)非活动性HBV携带者与对照组比较,CD4+百分率和CD4+/CD8+比值下降,CD8+百分率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。慢性HBV携带者与对照组比较,CD4+、CD4+/CD8+明显下降,CD8+明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)非活动性HBV携带者与慢性HBV携带者CD4+、CD8+百分率与CD4+/CD8+比值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)慢性HBV携带者CD4+百分率在G3～4亚组明显高于G0～2亚组(P<0.05),非活动性HBV携带者2亚组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论HBV携带者细胞免疫功能紊乱,导致慢性HBV携带。     

慢性HBV感染对原发性肝细胞癌年龄别死亡率高峰影响的队列研究

目的:探讨慢性HBV感染对原发性肝细胞癌(HCC)年龄别死亡率高峰的影响。方法:1992年在江苏省海门市建立了一支90234人群的HCC研究队列,以HBsAg(+)作为HBV感染的指标,凡半年内连续2次HB-sAg(+)者判定为慢性HBV感染。HBsAg(+)组14338人,HBsAg(-)组75896人。1993年起每年随访一次队列成员的生命状况,至2007年终止,计算两组人群HCC年龄别死亡率。以HBsAg(+)组死亡密度(787.27/10万人年)和HBsAg(-)组死亡密度(48.81/10万人年)分别作为两组人群进入HCC死亡率高峰的界点,比较进入死亡率高峰的年龄差别。结果:HBsAg(+)组报告HCC1352例,对照组479例,差异有统计学意义(χ2=5027.00,P<0.01),相对危险度(RR)为16.13(95%可信区间14.64～18.04)。HBsAg(+)组比对照组进入HCC年龄别死亡率高峰的年龄提前5～6年。结论:慢性HBV感染可促使HCC发病提前。     

T-cell sensitisation to hepatitis B virus surface antigens

The present study was conducted to explore the immunity to hepatitis B surface antigens (HBsAg) of ad and ay subtypes at the cellular level among adult individuals. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) obtained from acute hepatitis B virus (HBV) infected patients, chronic HBV infected patients, recovered subjects from HBV infection and uninfected vaccinated controls were stimulated with HBsAg ad and HBsAg ay subtypes in vitro. Stimulated PBMCs were incubated in CO(2) for production of interferon-gamma (IFN-gamma), which was measured from the supernatant of cultured PBMCs by an in-house ELISA technique. The mean +/- SE of IFN-gamma levels produced by PBMCs in response to HBsAg ad among the acute, chronic, recovered and control groups were 282.5+/-134.51 pg/ml, 307.45+/-94.84 pg/ml, 915.62+/-170.80 pg/ml and 511.67+/-161.22 pg/ml respectively, while on stimulation by HBsAg ay, the levels were 246.25+/-103.50 pg/ml, 374.70+/-104.02 pg/ml, 1040 +/-140.76 pg/ml and 465.83+/-166.26 pg/ml respectively among the above mentioned groups. The results of this study showed that PBMCs were non-responsive to stimulation by both HBsAg ad and HBsAg ay subtypes in acute and chronic patients with HBV infection. The recovered group responded significantly to both subtypes of HBsAg and the control group did not. The study indicates that although the patients with acute and chronic HBV infection showed weak or no IFN-gamma response to the HBsAg, subjects showed strong IFN-gamma response to the surface antigens on recovery from HBV infection.     

乙型肝炎病毒基因型B/C型患者血清和肝细胞内HBsAg表达水平的差异

目的 了解HBV基因型（B和C）对血清及肝内HBsAg表达的影响。方法 选择在广州南方医院感染内科住院的76例慢性乙型肝炎患者,具有同期对应的血清和肝组织切片。用PCR-RFLP方法行HBV基因分型;Abbott Architect法定量检测血清HBsAg;采用单克隆抗体或多克隆抗体对肝脏组织内的HBsAg和HBcAg分别进行免疫组织化学染色,计数阳性细胞数。并对6例基因型B和8例基因型C患者血清HBV HBsAg部分区段DNA进行序列测定。结果 共检测到4种基因型：B（47例）、C（21例）、D（3例）和B／C混合（5例）。血清HBsAg水平在基因型B和C之间无区别,但HBV基因C型患者肝内HBsAg的表达高于B型（P〈0．01）。在HBV基因B型患者中,HBsAg阳性肝细胞分布多为单个或散在几个（22／47）,C型中则多为广泛分布（8／21）（P〈0．01）。在基因B型的患者中,血清HBsAg和血清HBVDNA（r=0．674,P=0．000）,核心抗原核内（r=0．534,P0．000）以及细胞质表达水平（r=0．405,P=0．004）呈正相关关系;在基因c型的患者中,血清HBsAg仅与血清HBV DNA正相关（r=0．503,P=0．017）。肝内HBsAg水平仅在基因B型患者中与肝细胞质内HBcAg的表达水平呈正相关关系（r=0．318,P=0．029）,与血清HBsAg、HBV DNA、核心抗原核内表达水平无相关。序列分析显示基因型B和C表面抗原前20个氨基酸序列存在明显差异。结论 基因C型患者肝组织中HBsAg表达水平高于B型;而基因B型的血清HBsAg水平和病毒复制水平相关性明显。     

肺结节病患者外周血淋巴细胞IL-2生成及反应能力

观察16例肺结节病患者外周血淋巴细胞 IL-2产生能力及对 IL-2的反应性,结果显示:患者 IL-2产生能力明显降低。外源性 IL-2诱导增殖反应虽有降低趋势,但无统计学意义。外源性 IL-2可增强 PHA 诱导的淋巴细胞转化,提示患者细胞免疫功能可能低下,而外源性 IL-2可使之部分恢复。     

HBVPreS2反义寡核苷酸对HepG 2.2.15细胞系HLA-I类抗原表达及生物活性的影响

目的 :观察针对乙型肝炎病毒 (HBV)PreS2 基因特异性反义寡核苷酸 (asON)对转基因细胞HepG2 .2 .15表面的人类白细胞I类抗原 (HLA I)基因表达的影响。方法 :设计合成互补于HBVPreS2 翻译起始区的反义寡核苷酸即序列I ,并设非互补序列作对照即序列II ,免疫细胞化学染色观察asON对HepG2 .2 .15表面表达的HLA I类抗原的影响 ,用ELISA法动态检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg的变化 ,放射免疫测定法检测asON对宿主细胞自身分泌蛋白 血清铁蛋白的影响。结果 :HepG2 .2 .15细胞表面HLA I类抗原表达降低 ,用药组和对照组相比有统计学意义 (P <0 .0 5 )。asON能够抑制HBV表达HBsAg和HBeAg ,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为 6 6 %和 91% ,而序列II对HBsAg和HBeAg的抑制率均为 11%。asON对宿主细胞自身分泌蛋白无影响 ,即对宿主细胞无毒性作用。结论 :asON以序列特异性方式抑制HBV基因表达而对宿主细胞无毒性作用 ,HLA I类抗原表达降低 ,这对减轻过度炎症反应 ,阻止慢性肝炎至重症肝炎的发生具有重要意义