基因检测胃癌区域淋巴结微转移的实验研究

目的　探讨 RT- PCR检测胃癌区域淋巴结微转移及其意义。方法　以病理组织学和 RT- PCR扩增角蛋白 1 9(K1 9)对 1 8例胃癌患者的癌组织标本及 78个淋巴结进行检测。结果　 1 8例胃癌癌组织均有 K1 9m RNA表达 ,78个淋巴结中 ,组织学阳性 1 6个 ,而 RT- PCR阳性达 2 6个。结论　 RT- PCR扩增 K1 9m RNA检测胃癌区域淋巴结微转移是一种敏感、特异的检测方法 ,结合淋巴结微转移的情况 ,对胃癌患者手术淋巴结清扫范围有一定的参考价值 ,有助于更精确的分期及对预后的判断。     

贲门癌淋巴结微转移的检测及意义

目的观察常规病理学检查无淋巴结转移的贲门癌淋巴结的微转移情况,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化SP法,用细胞角蛋白19（CK19）单抗和CD44v6单抗检测48例贲门癌患者常规病理学检查阴性的323枚淋巴结的微转移情况。结果本组9例14枚淋巴结发现微转移。淋巴结微转移与贲门癌患者年龄、性别及肿瘤直径、浸润深度、分化程度无关（P均〉0．05）,与贲门癌的Lauren分型有关（P〈0．05）。45例随访患者中,有淋巴结微转移者3、5年生存率明显低于无淋巴结微转移者（P均〈0．01）。结论常规病理学检查无淋巴结转移的贲门癌患者淋巴结常存在微转移;淋巴结微转移的检测有助于贲门癌患者的预后判断。     

非小细胞肺癌患者外周血中多参数检测对诊断微转移的作用

目的 探讨细胞角蛋白19（CK19）、肺组织特异性X蛋白（LunX）、上皮癌相关基因（KS1/4）在非小细胞肺癌（NSCLC）外周血中的表达差异与NSCLC微转移的关系.方法 选择经过9个月随访的52例患者,分为转移组和无转移组,并以胸部良性病变手术患者20例作为对照组.提取外周血标本的总RNA,反转录为cDNA,采用荧光定量实时聚合酶链反应（PCR）检测其中CK19mRNA、LunXmRNA、KS1/4mRNA的表达水平.结果 总RNA通过紫外分光光度仪检测RNA纯度,OD268/280值在1.612 ～2.1之间,RNA浓度在100～ 1410μg/ml之间.经过随访,52例患者中发生转移或复发共18例,转移复发率34.6％ （18/52）.其中转移组外周血中CK19mRNA、LunXmRNA明显高于无转移组及对照组（P＜0.05）,但KS1/4 mRNA在三组患者外周血的表达差异无统计学意义（P＞0.05）;转移组的外周血中LunXmRNA的表达量最高,KS1/4 mRNA其次,CK19mRNA表达量最低,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 CK19、LunX可以作为预测NSCLC转移或复发的指标,辅助诊断NSCLC微转移,其中LunX的敏感性略显优势.     

大肠癌患者骨髓转移癌细胞的检测及临床意义

作以膜上皮抗原(epithelial membrane antigen.EMA)单克隆抗体为探针.对70例大肠癌患进行了骨髓中癌细胞的检测，70例中查出阳性癌细胞39例.阳性率为55.7％。骨髓内癌细胞的阳性率与肿瘤细胞分化程度、临床病理分期有关，腺癌、粘液癌、未分化癌骨髓内转移癌细胞的阳性率分别为47.9％、68.7％、83.3％,Duke′sA期、B期、C期、D期的阳性率分别为23.1％、53.8％、69.6％和15.0％，单纯手术.手术 化疗以及手术 化疗 免疫治疗骨髓内转移癌细胞的转阴率分别为33.3％、42.9％和50.0％。本研究提示：骨髓内转移瘤细胞的检查可估计肿瘤的转移与复发。指导临床治疗，可做为大肠癌术后复查的一项常规检查。     

食管癌患者外周血中CK19mRNA、CYFRA21—1、TPS联合检测的临床意义

目的 评价食管癌患者外周血中微转移基因标记物细胞角蛋白19(CK19)mRNA和细胞角蛋白片段21-1(CYFRA21-1)、组织多肽特异性抗原(TPS)联合测定的临床价值. 方法 取48例食管癌患者术前外周血标本,应用巢式逆转录聚合酶链反应法(nested-PCR)检测外周血单个核细胞CK19 mRNA的表达,同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定患者血清CYFRA21-1和TPS水平. 结果 食管癌患者外周血中CK19 mRNA和血清CYFRA21-1和TPS的阳性检出率分别为 52.1% 、83.3%和66.7%.联合检测CK19 mRNA 、CYFRA21-1和 TPS在食管癌患者中的阳性表达,发现其与患者肿瘤细胞分化程度、浸润深度、临床分期及有无淋巴结转移和远处转移等有相关性(P＜0.05或P＜0.01). 结论 在食管癌患者的随访中开展外周血中CK19 mRNA和血清CYFRA21-1和TPS的联合检测可提高食管癌微转移的检出率,以及时监控患者的病情.     

实时RT-PCR法检测非小细胞肺癌淋巴微转移

目的以Lunx和血管内皮生长因子C(VEGF-C)及其受体为靶基因,实时PT-PCR法检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌旁组织、手术切除区域淋巴结微转移,探讨人肺特异性X蛋白(humanlung-specificXprotein,Lunx)、VEGF-C、VEGF受体3(VEGFR-3)的敏感性和特异性。方法以肺部良性病变切除的20枚淋巴结为对照,采用SYBRGreenⅠ嵌合荧光实时RT-PCR检测NSCLC手术切除区域淋巴结60枚LunxmRNA表达并与常规病理比较;以肺部良性病变切除的组织20例为对照,检测VEGF-C、VEGFR-3在30例癌旁组织中的表达。结果30例NSCLC患者癌旁组织VEGFCR-3、VEGF-C阳性率分别为60%(18/30)、77%(23/30),分别与病理阳性率37%(11/30)比较,均有显著差异(χ2=4,P<0.05;χ2=6.72,P<0.01);60枚NSCLC患者手术切除区域淋巴结Lunx阳性率78.3%(47/60),与病理阳性率55%(33/60)比较有显著差异(χ2=7.68,P<0.01)。结论VEGFCR-3、VEGF-C、Lunx均可作为NSCLC淋巴微转移的分子标志物,与病理比较有较高的敏感性;实验采用一种新颖的荧光实时RT-PCR相对定量方法分析结果,有助于早期肺癌转移的检测。     

早期周围型非小细胞肺癌患者纵隔淋巴结转移的危险因素

目的研究分析临床早期周围型非小细胞肺癌(NSCLC)患者纵隔淋巴结(MLN)转移的危险因素。方法选择2008年2月至2013年2月该院182例术前拟诊、术后病理确诊的早期周围型NSCLC患者。将已发生MLN转移(N2期)的82例患者记为观察组。未发生MLN转移(N0期)的100例患者作为对照组。分析两组患者发生MLN转移的单因素情况,并实施多因素Logistic回归性分析,总结相应危险因素。结果单因素分析显示,观察组N2期的MLN转移率中,女性、吸烟史、咳嗽、胸痛、咯血、肿瘤家族史、结节大小0² cm、钙化、血管集束征等因素与之无显著相关性。男性占54.9%(45/82),消瘦占67.1%(55/82),既往肿瘤史占18.3%(15/82),结节大小22 cm、钙化、血管集束征等因素与之无显著相关性。男性占54.9%(45/82),消瘦占67.1%(55/82),既往肿瘤史占18.3%(15/82),结节大小2³ cm者占79.3%(65/82),毛刺占53.7%(44/82),分叶占26.8%(22/82),胸膜皱缩占32.9%(27/82),边界清楚占23.2%(19/82),空泡征占9.8%(8/82),密度均匀占31.7%(26/82),均显著高于对照组的30.0%(30/100),42.0%(42/100),7.0%(7/100),14.0%(14/100),31.0%(31/100),9.0%(9/100),11.0%(11/100),6.0%(6/100),2.0%(2/100),10.0%(10/100)(均P<0.05)。整理所得数据后发现,结节大小23 cm者占79.3%(65/82),毛刺占53.7%(44/82),分叶占26.8%(22/82),胸膜皱缩占32.9%(27/82),边界清楚占23.2%(19/82),空泡征占9.8%(8/82),密度均匀占31.7%(26/82),均显著高于对照组的30.0%(30/100),42.0%(42/100),7.0%(7/100),14.0%(14/100),31.0%(31/100),9.0%(9/100),11.0%(11/100),6.0%(6/100),2.0%(2/100),10.0%(10/100)(均P<0.05)。整理所得数据后发现,结节大小2³ cm时发生MLN转移为<2 cm时的3.678倍;密度不均者是均匀者的5.857倍;胸膜皱缩者是非皱缩者的3.254倍;边界不清者是边界清楚者的8.257倍;有空泡征者是无空泡征者的7.122倍;消瘦者是无消瘦者的28.261倍。Logistic回归性分析,消瘦和既往肿瘤史、结节大小23 cm时发生MLN转移为<2 cm时的3.678倍;密度不均者是均匀者的5.857倍;胸膜皱缩者是非皱缩者的3.254倍;边界不清者是边界清楚者的8.257倍;有空泡征者是无空泡征者的7.122倍;消瘦者是无消瘦者的28.261倍。Logistic回归性分析,消瘦和既往肿瘤史、结节大小2³ cm、密度均匀、胸膜皱缩、边界清楚以及空泡征7个因素均为N2期发生MLN转移的独立危险因素(均P<0.05)。结论对于早期周围型NSCLC,发生MLN转移的主要危险因素是结节大小>2 cm、密度不均、胸膜皱缩、边界不清、空泡征以及消瘦和含既往肿瘤史等,值得临床密切关注。     

检测非小细胞肺癌患者淋巴结中CK19、LunX、KS1/4的表达对诊断微转移的意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴结中细胞角蛋白19 (CK19)、肺组织特异性X蛋白(LunX)、上皮癌相关基因(KS1/4)的表达与NSCLC微转移的关系.方法 选择经过9个月随访的52例NSCLC患者,分为转移组和无转移组.提取淋巴结标本的总RNA,反转录为cDNA,采用荧光定量实时PCR检测其中CK19、LunX、KS1/4的mRNA表达水平.结果 总RNA通过紫外线分光光度仪检测RNA纯度,OD260/280值为1.650～2.1,RNA浓度为560～1420 mg/L.经过随访,52例研究病例中发生转移或复发共18例,转移复发率为34.6％.其中转移组淋巴结中CK19、LunX、KS1/4的mRNA表达均高于无转移组(P值均＜0.05).结论 CK19、LunX、KS1/4可以作为预测NSCLC转移或复发的指标,辅助诊断NSCLC微转移.     

非小细胞肺癌淋巴结微转移的研究进展

微转移是指恶性肿瘤细胞在发展过程中,部分癌细胞播散离开肿瘤原发病灶,存在于外周血、淋巴道、骨髓等组织器官中,但尚未形成转移性肿瘤结节,用常规诊断方法如CT、MRI、正电子发射计算机断层（PET）扫描、超声等难以发现的一种微转移肿瘤细胞,它们经过一定的时间和在合适的环境下,逐渐表现出临床上的转移病灶。因此,早期发现微转移对于判断患预后及能否最大程度地从系统性综合治疗中受益有着重要意义。目前在NSCLC微转移的研究中淋巴结微转移的研究较多,本结合国内外献综述如下。[第一段]     

应用免疫磁性分离技术检测小细胞肺癌循环癌细胞的实验研究

目的 在免疫磁性细胞分离技术的基础上探索一种能检测小细胞肺癌循环癌细胞敏感而有效的方法。方法 将微量小细胞肺癌细胞按比例加入到外周血单个核细胞悬液中混匀，再通过特异性单抗包被的免疫磁性微珠吸附，富集，免疫细胞化学鉴定，计算癌细胞的回收率和检测敏感性。结果 免疫磁性微珠与小细胞肺癌能敏感而特异地结合。与免疫细胞化学方法结合可检出45．6％混入外周血单个核细胞中的微量癌细胞。未有假阳性。应用此种方法，每5ml外周血单个核细胞悬液中含有5个癌细胞阳性率可达4／5。结论 免疫磁性细胞分离技术是一项检测外周血中循环癌细胞的有效技术，将来可能具有较高的临床价值。     

CK20 mRNA在胃癌病人外周血中的表达及意义

目的探讨胃癌病人外周血中CK20 mRNA的：表达及临床意义。方法采用巢式RT-PCR技术检测70例胃癌病人手术前、后外周血CK20 mRNA的表达情况，并以20例健康志愿者为阴性对照，以胃腺癌细胞株BGC-823作阳性对照。结果CK20 mRNA术前阳性表达率为32．9％，阳性表达率与组织学类型具有相关性（P〈0．01），而与TNM分期、肿瘤的部位、病人性别无明显相关性（P〉0．05）。术后CK20 mRNA阳性表达率明显高干术前（P〈0．05）；20例健康志愿者无一例阳性表达，胃腺癌细胞株BCK-823均为阳性表达。结论CK20 mRNA作为标志物用于检测胃癌的血循环微转移是可靠的；手术操作可促使肿瘤细胞释放入血。     

胰头癌淋巴结微转移的检出及其分析

目的 通过对胰头癌切除标本中淋巴结微转移的检测,分析淋巴结微转移对胰头痛临床分期及预后的影响,探讨其临床价值.方法 以手术显微镜法完整取出20例冈胰头癌行区域性胰十二指肠切除术标本中的淋巴结,常规病理检测淋巴结转移,免疫组化检测淋巴结微转移.结果 20例标本中共找到677枚淋巴结,常规病理显示13例共87枚淋巴结发生转移.在病理检测阴性的590枚淋巴结中,免疫组化检测又发现3例57枚淋巴结存在微转移.常规病理结合免疫组化检测,淋巴结转移阳性患者从65%(13/20)增加到80%(16/20);转移淋巴结的检出率从12.9%(87/677)上升到21.3%(144/677),相差显著(P<0.05).微转移检测使3例ⅡA期患者转为ⅡB期,有淋巴结微转移患者的1年内肿瘤转移、复发率为75%,而无微转移者的转移、复发率为25%.结论 胰头癌淋巴结微转移的检出有助于肿瘤分期的确定和预后的判断.     

K-19 mRNA RT-PCR in detecting micrometastasis in regional lymph nodes of gastric cancer

AIM: To investigate the value and prospect of RT-PCR in detecting micrometastasis in regional lymph nodes of gastric cancer. METHODS: Histopathology was used and K19 mRNA expression was detected by RT-PCR in tumor tissues and lymph nodes from gastric cancer patients undergoing radical resection of gastric carcinoma. RESULTS: K19 mRNA was expressed in all tumor specimens of 30 cases; of the 126 lymph nodes, 26 were histopathologically positive (20.6%), and 42 positive (33.3%) by RT-PCR. Amplification fragments of 460 and 540 bp were shown in all the tumor tissues and metastatic lymph nodes after K19 andβ-actin RT-PCR, while only a 540 bp fragment appeared in the lymph nodes of non-tumor patients. CONCLUSION: K19 mRNA RT-PCR is sensitive and specific in testing micrometastasis in regional lymph nodes of gastric cancer, and it is superior to routine histopathology.     

Detection of hepatoma cells in peripheral blood of HCC patients by nested RT-PCR

AIM:To offer a more simple method with a high sensitivity and specificity for detection of hepatoma cells in peripheral blood of the patients with HCC.METHODS:Improved nested RT-PCR method was used to detect the expression of AFP mRNA in nuclear cells separated from peripheral venous blood.RESULTS:AFP mRNA contained in tenhepatoma cells was detected from 2mL peripheral blood.CONCLUSION:The improved nested RT-PCR assay for AFP mRNA expressed in cancer cells in peripheral blood might be a valuable method for clinical diagnosis of HCC.     

肺癌微转移的检测及其临床意义

微转移是手术后非小细胞肺癌复发的关键因素。常规方法和技术难以发现这些隐匿性的癌细胞,运用分子生物学等敏感技术可有效发现肺癌患者淋巴结、骨髓、外周血等组织中的微转移。早期诊断和发现微转移可为确定肺癌分子分期,制定多学科综合治疗方案,评价治疗效果以及判断预后提供依据。本文对近年来国内外学者在检测肺癌微转移方面的研究进展作一综述。     

外周血中白蛋白mRNA作为肝癌微小转移标志物的进一步研究

目的　检测不同肝脏疾病患者的外周血中白蛋mRNA(ALBmRNA) ,探讨外周血中ALBmRNA作为肝癌微小转移标志物的特异性。方法　分离原发性肝癌患者以及肝硬化、急慢性肝炎、肝转移癌、肝脏良性肿瘤患者和健康志愿者的外周血单个核细胞 ,提取单个核细胞的总RNA ,进行RT PCR ,将RT PCR产物再进行Southern杂交。结果　原发性肝癌患者组外周血中ALBmRNA的检出率为 44 .8% ,对照组检出率为 2 9.2 % ,两者之间的差异无统计学意义 (P≥ 0 .0 5 )。结论　作为肝癌微小转移的检测标志物ALBmRNA的特异性不高