胰淀素致大鼠胰岛细胞功能损伤的实验研究

目的观察胰淀素对体外培养的大鼠胰岛细胞功能的影响,探讨胰淀素在2型糖尿病发病过程中的作用。方法应用体外单层培养大鼠胰岛细胞,检测不同浓度胰淀素对细胞胰岛素分泌、细胞内DNA及胰岛素含量的影响。结果10 μmol/L以上胰淀素作用2 h后,可抑制高糖(16.7 mmol/L)刺激下的胰岛素分泌(P<0.01),并呈剂量依赖性。10 μmol/胰淀素作用后,胰岛β细胞内DNA、胰岛素含量升高,与对照组相比有显著性差(P<0.01)。结论10 μmol/L以上胰淀素可显著抑制高糖刺激下大鼠胰岛素的分泌与释放。     

胰淀素对大鼠胰岛素和胰高血糖素分泌的影响

目的研究胰淀素对大鼠胰岛素和胰高血糖素分泌的影响。方法应用胶原酶消化和不连续密度梯度离心技术建立离体大鼠胰岛模型,研究不同浓度胰淀素对胰岛素和胰高血糖素分泌的影响。结果不同浓度的葡萄糖增加胰岛素的分泌,抑制胰高血糖素的分泌,并都呈线性相关。葡萄糖浓度为0、5.6、11.2mmol/L时,孵育1h,胰淀素(10-10~10-5mol/L)显著抑制胰高血糖素的分泌(P<0.05),且胰高血糖素的分泌与胰淀素浓度呈负相关(P<0.01)。葡萄糖浓度为5.6mmol/L时,不同浓度的胰淀素增加胰岛素分泌,而且两者呈正相关(P<0.05);但葡萄糖浓度为11.2和16.7mmol/L时,10-5mol/L胰淀素对胰岛素的分泌有明显抑制作用(P<0.05)。结论胰淀素对胰高血糖素的分泌有直接抑制作用;在葡萄糖浓度为5.6mmol/L时,胰淀素能增加胰岛素分泌,抑制胰高血糖素分泌;高糖时,高浓度的胰淀素抑制胰岛素分泌。     

胰淀素对大鼠胰岛素和胰高血糖素分泌的影响

目的 研究胰淀素对大鼠胰岛素和胰高血糖素分泌的影响.方法 应用胶原酶消化和不连续密度梯度离心技术建立离体大鼠胰岛模型,研究不同浓度胰淀素对胰岛素和胰高血糖素分泌的影响.结果 不同浓度的葡萄糖增加胰岛素的分泌,抑制胰高血糖素的分泌,并都呈线性相关.葡萄糖浓度为0、5.6、11.2 mmol/L时,孵育1 h,胰淀素(10-10 ～ 10-5 mol/L)显著抑制胰高血糖素的分泌(P＜0.05),且胰高血糖素的分泌与胰淀素浓度呈负相关(P＜0.01).葡萄糖浓度为5.6 mmol/L时,不同浓度的胰淀素增加胰岛素分泌,而且两者呈正相关(P＜0.05);但葡萄糖浓度为11.2和16.7 mmol/L时,10-5 mol/L胰淀素对胰岛素的分泌有明显抑制作用(P＜0.05).结论 胰淀素对胰高血糖素的分泌有直接抑制作用;在葡萄糖浓度为5.6 mmol/L时,胰淀素能增加胰岛素分泌,抑制胰高血糖素分泌;高糖时,高浓度的胰淀素抑制胰岛素分泌.     

GPR40反义RNA对胰岛β细胞内Ca2+浓度及胰岛素分泌的影响

目的应用反义RNA技术特异性下调胰岛β细胞G蛋白耦联受体(GPR40)的表达,观察其对胰岛β细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)及胰岛素分泌的影响。方法体外分离SD大鼠胰岛β细胞,将GPR40反义RNA表达载体pcDNA3.1(+)-GPR40(-)用脂质体体外瞬时转染胰岛细胞,Western blot检测GPR40蛋白的表达,将1.0 mmol/L游离脂肪酸(软脂酸∶油酸=2∶1)与胰岛细胞共培养10,30,60 min,进行高葡萄糖刺激胰岛素释放试验,利用荧光探针Fura-2/AM,测定胰岛细胞[Ca2+]i变化,放射免疫法检测培养液中胰岛素浓度变化。结果与对照组和空白质粒转染组比较,GPR40反义RNA可显著降低细胞GPR40蛋白的表达水平(P<0.05),在各作用时间点,GPR40反义RNA转染组[Ca2+]i显著低于对照组(P<0.05),同时GPR40反义RNA转染组胰岛细胞的胰岛素分泌明显低于对照组(P<0.05)。结论 GPR40介导游离脂肪酸刺激β细胞内[Ca2+]i升高和胰岛素分泌。     

血管紧张素Ⅱ对离体人胰岛细胞内游离Ca2+及cAMP的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ对离体人胰岛细胞内游离Ca2 及cAMP的影响,通过体外实验了解血管紧张素Ⅱ影响胰岛细胞分泌功能的相关分子机制.方法 以血管紧张素Ⅱ作用于分离纯化的人胰岛细胞,检测细胞内游离Ca2 及cAMP的波动情况,以胰岛灌流实验,绘制胰岛素动态分泌曲线.结果 血管紧张素Ⅱ时胰岛β细胞分泌功能的影响呈先升后降双向性,血管紧张素Ⅱ使细胞内游离Ca2 浓度升高,细胞内cAMP的浓度随着血管紧张素Ⅱ浓度的升高而下降.以上作用可被血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂Losartan所逆转.结论 血管紧张素Ⅱ通过与胰岛β细胞表面血管紧张素Ⅱ受体结合,导致细胞内游离Ca2 及cAMP变化,从而影响胰岛素分泌.     

甲状旁腺素相关肽对INS-1细胞株胰岛素分泌的影响

目的 探讨甲状旁腺素相关肽(PTHrP)对大鼠胰岛β细胞瘤株INS-1胰岛素含量的影响.方法 根据不同干预条件分为空白对照组、PTHrP干预组(分别应用1、10、100 pmol/L的 PTHrP 干预),48 h后应用放射免疫法检测各组葡萄糖刺激胰岛素分泌作用,Fura-3/AM荧光负荷技术测定Ca2+.Western Blot检测细胞胰岛素及胰腺-十二指肠同源框1(PDX-1)的表达.结果 PTHrP对INS-1细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌能力及Ca2+负荷呈浓度依赖性关系.PTHrP组上调胰岛素及PDX-1表达,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 PTHrP可以促进胰岛β细胞胰岛素分泌及合成.     

胰淀素基础与临床研究进展

胰岛β细胞除分泌胰岛素外还分泌一种由37个氨基酸残基组成的神经肽样分子一胰淀素,它是胰岛淀粉样蛋白的主要组成部分。1988年,Leighton和Cooperl首次证明这种天然多肽具有抗胰岛素的生物活性。胰淀素有胰岛细胞膜毒性作用,它在胰岛素分泌以及磺脲类药物失效方面起到一定的作用;胰淀素可作用于中枢神经系统（如下丘脑）,引起体重减轻,与肥胖、2型糖尿病（DM）以及高脂血症之间的关系逐渐得到认识。     

VEGF-B对胰岛β细胞胰岛素分泌和Ca2+、cAMP、ATP含量的影响

目的观察血管内皮生长因子B(VEGF-B)对胰岛MIN6细胞胰岛素分泌及细胞内Ca²⁺、cAMP和ATP含量的影响,并探讨其作用机制。方法采用50 ng/mL VEGF-B蛋白在5.5 mM和25 mM葡萄糖条件下处理MIN6细胞,在2 h和24 h时应用ELISA试剂盒检测MIN6细胞的胰岛素分泌,细胞内Ca²⁺、cAMP和ATP含量。应用siRNA抑制MIN6细胞中的VEGF-B 48 h后,在5.5 mM和25 mM葡萄糖条件下检测2 h和24 h时MIN6细胞的胰岛素分泌、细胞内Ca²⁺、cAMP和ATP含量。结果 VEGF-B干预MIN6细胞后胰岛素分泌减少,同时细胞内Ca²⁺、cAMP和ATP含量均减少;抑制VEGF-B后胰岛素分泌增加,细胞内Ca²⁺、cAMP和ATP含量与胰岛素变化趋势一致。结论 VEGF-B可能通过影响Ca²⁺、 cAMP和ATP的含量影响胰岛β细胞胰岛素分泌。     

老龄SD大鼠胰岛β细胞形态功能研究

目的观察3组不同月龄SD大鼠糖脂代谢指标变化,了解在基础及葡萄糖刺激下胰岛β细胞胰岛素分泌、结构变化与老龄糖耐量减退的关系,探讨老龄糖耐量受损的机制。方法采用免疫组化、细胞体视学、透视电镜等方法观察5~6、11~12、20~24月龄SD大鼠胰岛及胰岛β细胞形态及胰岛素分泌水平;将胰岛β细胞分离后与两种不同质量浓度的葡萄糖培养,观察葡萄糖刺激下老龄大鼠β细胞胰岛素分泌水平。结果20~24月龄大鼠体质量、空腹血糖及血脂水平有增高;11~12、20~24月龄大鼠血清中游离脂肪酸(FFA)水平显著增高;对葡萄糖刺激出现峰值降低、达峰时间延迟;胰岛β细胞体积增大和细胞内胰岛素分泌量减少。老龄胰岛β细胞内线粒体和内质网肿胀,空泡变性。从11~12月龄大鼠开始,胰腺中平均胰岛面积随着年龄的增加而减少;但每个胰岛中平均胰岛β细胞的面积比例却有增加。结论老龄鼠在空腹血糖正常时即已具备胰岛素抵抗的某些特征;老龄大鼠胰岛β细胞虽然有面积比例增大,但β细胞基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌功能减低。提示一旦糖代谢受损出现糖尿病,应尽早考虑胰岛素治疗同时改善胰岛素抵抗。     

老龄SD大鼠胰岛β细胞形态功能研究

目的观察3组不同月龄SD大鼠糖脂代谢指标变化，了解在基础及葡萄糖刺激下胰岛β细胞胰岛素分泌、结构变化与老龄糖耐量减退的关系，探讨老龄糖耐量受损的机制。方法采用免疫组化、细胞体视学、透视电镜等方法观察5～6、11～12、20～24月龄SD大鼠胰岛及胰岛β细胞形态及胰岛素分泌水平；将胰岛β细胞分离后与两种不同质量浓度的葡萄糖培养，观察葡萄糖刺激下老龄大鼠β细胞胰岛素分泌水平。结果20～24月龄大鼠体质量、空腹血糖及血脂水平有增高；11～12、20～24月龄大鼠血清中游离脂肪酸（FFA）水平显著增高；对葡萄糖刺激出现峰值降低、达峰时间延迟；胰岛β细胞体积增大和细胞内胰岛素分泌量减少。老龄胰岛β细胞内线粒体和内质网肿胀，空泡变性。从11～12月龄大鼠开始，胰腺中平均胰岛面积随着年龄的增加而减少；但每个胰岛中平均胰岛β细胞的面积比例却有增加。结论老龄鼠在空腹血糖正常时即已具备胰岛素抵抗的某些特征；老龄大鼠胰岛β细胞虽然有面积比例增大，但β细胞基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌功能减低。提示一旦糖代谢受损出现糖尿病，应尽早考虑胰岛素治疗同时改善胰岛素抵抗。     

能量限制诱导的Sirt1高表达对胰岛β细胞的寿命及胰岛素分泌功能的影响

目的:研究能量限制(CR)对大鼠胰岛及胰岛β瘤细胞(NIT-1细胞)寿命和胰岛素分泌功能的影响,为2型糖尿病(T2DM)的发病机制及防治提供实验依据和理论基础。方法:①18月龄健康雄性SD大鼠12只随机分为CR组和对照组,饲养6个月后取胰尾组织进行实验,用免疫组化染色检测胰岛中Sirt1和insulin表达水平,β-半乳糖苷酶(-βGal)染色反映胰岛细胞衰老情况;②NIT-1细胞亦分为对照组和CR组;用RT-PCR、免疫细胞化学染色检测Sirt1的表达变化,用放射免疫及免疫细胞化学检测胰岛素的分泌及表达量的变化,用细胞计数法检测细胞倍增周期的变化。结果:①Sirt1在SD大鼠胰岛及NIT-1细胞的胞浆胞核中均有表达,CR组Sirt1表达量均增加;②CR可使大鼠胰岛-βGal染色阳性率下降、NIT-1细胞倍增周期延长;③CR可使大鼠胰岛及NIT-1细胞胰岛素表达量明显减少,NIT-1细胞胰岛素分泌量亦明显减少。结论:CR通过上调Sirt1基因的表达而延缓β细胞的衰老,CR还通过减少胰岛素的表达及分泌从而减少胰岛素信号的刺激,减轻β细胞的负荷并改善胰岛素的分泌功能,因此CR有利于防止T2DM的发生发展。     

胰淀素对胰岛细胞损伤作用的初步研究

目的观察胰淀素对体外培养胰岛细胞活力的影响,探讨胰淀素在２型糖尿病发病中的作用。方法应用体外单 层培养新生乳鼠胰岛细胞,采用噻唑蓝法测定在不同浓度胰淀素作用不同时间后细胞的活力变化。结果１０ μｍｏｌ／Ｌ以 上胰淀素能引起胰岛细胞活力降低（Ｐ＜０．０１）,１０ μｍｏｌ／Ｌ胰淀素时间梯度组细胞活力呈进行性下降,在 ２ ｈ时与对照组 相比差异非常显著。相差显微镜下可见部分细胞胞体缩小,胞质发生空泡变性,少数细胞核固缩、裂解,胞膜突起呈出胞 状。结论　胰淀素对胰岛细胞有直接损伤作用,这种损伤程度与胰淀素浓度及作用时间呈正相关。     

胰淀素对胰岛细胞损伤作用的初步研究

目的 观察胰淀素对体外培养胰岛细胞活力的影响，探讨胰淀素在２型糖尿病发病中的作用。方法 应用体外单层培养新生乳鼠胰岛细胞，采用噻唑蓝法测定在不同浓度胰淀素作用不同时间后细胞的活力变化。结果 １０μmol/L以上胰淀素能引起胰岛细胞活力降低（Ｐ＜０.０１），１０μmol/L胰淀素时间梯度组细胞活力呈进行性下降，在２h时与对照组相比差异非常显著。相差显微镜下可见部分细胞体缩小，胞质发生空泡变性，少数细胞核固缩、裂解，胞膜突起呈出胞状。结论 胰淀素对胰岛细胞有直接损伤作用，这种损伤程度与胰淀素浓度及作用时间呈正相关。     

钙离子通道与胰岛素分泌关系的研究进展

胰岛β细胞产生和分泌的胰岛素是体内唯一直接降低血糖的激素,各种原因引起的胰岛素分泌不足会使血糖升高而导致糖尿病。胰岛β细胞膜上的电压门控钙( voltage-operated calcium,Cav)通道以及细胞内钙库上的受体通道调节着细胞内钙信号,从而影响胰岛素分泌,与糖尿病的发生、发展及治疗密切相关[1-2]。随着研究的深入,钙离子通道与胰岛素分泌之间的关系逐渐被人们所认识。现将钙离子通道的生理、生化特点及其调控胰岛素分泌的作用机制作一综述。     

iPLA2在人胰岛β细胞的表达和对胰岛素分泌功能的影响

目的 探讨Ca2+-非依赖性磷酸脂酶A2(iPLA2)在人胰岛的表达及在胰岛素分泌功能中的作用.方法 正常人胰腺组织切片免疫组织化学染色及人胰岛Western印迹方法检测,观察iPLA2在人胰岛中的表达情况;随机分组对照研究iPLA2选择性抑制剂溴烯醇内酯(BEL)对离体人胰岛的葡萄糖刺激引起胰岛素分泌反应的影响.结果 在人胰岛iPLA2高表达,与抗胰岛素染色分布一致,而外分泌腺很少表达;与对照组相比,BEL处理组胰岛素分泌反应明显减弱(P＜0.01),BEL通过抑制iPLA2活性抑制了葡萄糖刺激引起的离体人胰岛胰岛素分泌.结论 iPLA2在人胰岛β细胞高表达并在葡萄糖刺激胰岛β细胞胰岛素分泌过程起到重要的作用.     

小鼠胰岛α细胞的缺失对移植胰岛功能的影响

目的　探讨胰岛α细胞的丢失对胰岛素分泌功能的影响。方法　在人胰岛分离过程中 ,经胶原酶的过度消化造成胰岛周边α细胞缺失 ,用免疫组化及胰岛素 /胰高糖素含量分析予以证实。在体外 ,检测葡萄糖刺激引起的实验性糖尿病小鼠胰岛素的分泌 ;在体内 ,评价胰岛移植后对糖尿病小鼠血糖的调节 ,并研究胰高糖素对α细胞缺失胰岛功能的影响。结果　胶原酶的过度消化引起胰岛周边的α细胞丢失 ,使分离胰岛内胰岛素 /胰高糖素比值明显升高。与正常胰岛相比 ,α细胞缺失胰岛对葡萄糖刺激产生的胰岛素明显降低 ,胰岛素释放在正常胰岛和α细胞缺失胰岛分别为2 2 2 7uU/ml± 32 1uU/ml和 12 4 6uU/ml± 12 6uU/ml(P <0 0 1)。在体内 ,移植α细胞缺失的胰岛到糖尿病的C5 7/BL小鼠后不能有效地纠正动物的高血糖 ,胰岛移植后的平均血糖浓度在正常胰岛组和α细胞缺失胰岛组分别为 :8 9mmol/L± 1 98mmol/L和 2 1 3mmol/L± 2 2mmol/L(P <0 0 1) ,而给予外源性的胰高糖素可以在体外及体内明显改善α细胞缺失胰岛的胰岛素分泌功能。结论　胰岛α细胞的缺失明显降低胰岛的胰岛素分泌功能 ,用外源性的胰高糖素可以改善α细胞缺失胰岛的胰岛素分泌功能。     

胰高糖素样肽GLP—1（7—36）NH2对体外培养的新生大鼠胰岛细胞 …

目的与方法 探讨ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２对培养的新生大鼠胰岛细胞胰岛素和胰高 糖素释放的影响，并以Ｆlro－３为探针，用５７０型粘附式细胞仪研究ＧＬＰ－１（７－ ３６）ＮＨ２对β细胞内Ca＾２＋的作用。结果在含１１．２mmol/Ｌ葡萄糖的ＫＲＢＢ液中孵育１h,ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２在１０＾－１１～１０＾－８mol/Ｌ使胰岛细胞胰岛素分泌无明显增加，但在含葡萄糖５．６、１１．２和１６．７mmol/Ｌ时，胰岛素分     

胰敏颗粒胰腺灌流对2型糖尿病IR大鼠胰岛素含量的影响

目的观察胰敏颗粒对2型糖尿病大鼠胰腺离体灌流胰岛素分泌的影响。方法在链脲佐菌素(STZ)部分破坏大鼠胰岛细胞的基础上,喂养高脂高糖饲料造成大鼠2型糖尿病模型,分离造模大鼠胰腺进行离体灌流,检测胰腺灌流液胰岛素含量。结果在低糖刺激时,胰敏颗粒含药血清对离体胰腺分泌胰岛素无明显影响;在高糖刺激条件下,胰敏颗粒可刺激离体胰腺分泌胰岛素。结论胰敏颗粒对2型糖尿病胰岛分泌缺陷有一定的改善作用。      

丹参体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的初步研究

目的观察不同浓度丹参血清对HepG2细胞Caspase-3蛋白表达的影响,探讨该药诱导HepG2细胞凋亡的可能机制。方法不同浓度的丹参含药血清作用低分化人肝癌HepG2细胞,运用蛋白免疫印迹方法(Western Blot)检测各组HepG2细胞Caspase-3表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组细胞TGF-β1分泌水平;钙影像(Calcium Imaging)技术检测各组细胞内Ca2+浓度变化。结果与正常对照组比较,10倍浓度组能明显增加HepG2细胞Caspase-3蛋白表达(P0.05),同时,ELISA检测也显示10倍浓度组HepG2细胞TGF-β1分泌减少(P0.05),且细胞内Ca2+浓度明显降低(P0.05)。结论丹参能够诱导体外培养的HepG2细胞凋亡,Caspase-3蛋白表达明显增加,其促凋亡作用可能是通过降低细胞内Ca2+浓度从而阻断TGF-β1信号通路实现的。     

多巴胺通过D2样受体抑制大鼠胰腺胰岛素分泌的机制研究

目的研究多巴胺(dopamine,DA)及其D_2样受体对大鼠胰岛素分泌的影响及机制。方法向雄性Wistar大鼠的胆总管中注入胶原酶P消化胰腺得到胰岛组织。将胰岛组织在5 g/L的DispaseⅡ中消化5 min得到胰岛细胞。根据方法不同以及加入的物质不同,将胰岛组织或胰岛细胞分成对照组、2.8 G、16.7 G、多巴胺组、喹吡罗组、SKF38393组、多巴胺和喹吡罗混合液组。应用放射免疫分析法测定各组胰岛组织分泌的胰岛素含量变化;应用全细胞膜片钳技术测定各组胰岛细胞电压依赖性钾通道的电流变化;应用钙成像技术测定各组胰岛细胞内钙离子浓度的改变。结果多巴胺可抑制葡萄糖刺激的胰岛素分泌,该作用与D_2样受体的激活有关。多巴胺可能是通过D_2样受体,使KV通道激活,缩短动作电位时程,限制Ca~(2+)进入,进而导致了胰岛素分泌的抑制。结论多巴胺通过D_2样受体增加KV通道电流、降低细胞内Ca~(2+)浓度,从而产生葡萄糖刺激的胰岛素分泌抑制作用。