利塞膦酸盐对BMSCs诱导的成骨细胞在脱钙骨支架上生物学行为的影响

目的:观察不同浓度利塞膦酸盐对脱钙骨支架中成骨细胞活性的影响.方法:选用含不同浓度利塞膦酸钠的培养液(10～-7、10-810-9,10-10 mol/L)对BMSCs诱导的成骨细胞与脱钙骨支架复合物进行培养,通过MTT,上清液碱性磷酸酶活性及Ⅰ型前胶原羧端肽、骨钙素检测对比观察不同浓度利塞膦酸钠对成骨细胞的作用效果.结果:MTT显示不同浓度利塞膦酸钠组细胞均随培养时间的增加而明显增殖,相同培养时间各不同浓度的利塞膦酸钠组的细胞增殖能力均高于对照纽(P＜0.05),且在10-10～10-7mol/L浓度范围内呈逐渐增加趋势.各不同浓度的利塞膦酸钠组的上清液ALP活性表达、Ⅰ型前胶原羧端肽表达、骨钙素表达均随培养时间的增加而明显增加,相同培养时间各组数值均高于对照组(P＜0.05),且在10-10～10-7 mol/L浓度范围内呈逐渐增加趋势.结论:利塞膦酸钠对成骨细胞在支架材料中的粘附、生长、增殖及骨化作用均有良好的促进作用.     

利塞膦酸钠对绝经后骨质疏松患者外周血单核细胞的影响

目的观察利塞膦酸钠对绝经后骨质疏松症患者外周血单核细胞(PMBC)分泌肿瘤坏死因子(TNFα),白细胞介素1(IL1),白细胞介素6(IL6)水平及PBMC细胞数目的影响。方法采用双盲法将54名绝经后骨质疏松妇女随机分为治疗组和对照组,所有患者在用药前和用药后6月进行外周血单核细胞(PBMC)培养,并以放射免疫方法(RIA)检测培养上清中TNFα、IL1、IL6水平,计录PBMC细胞数目改变。结果利塞膦酸钠治疗组服药6月后,PBMC培养上清中TNFα、IL1水平较治疗前有所下降,IL6较前增加,与对照组无统计学差异,PBMC细胞数目也无明显改变(P>0.05)。结论利塞膦酸钠作为一种骨吸收抑制剂,口服治疗对PBMC分泌细胞因子(IL1、IL6和TNFα)及细胞数目并无明显影响,这些结果提示利塞膦酸钠并未通过影响PBMC参与骨代谢调节。     

甲状旁腺激素对MG63细胞OPG、OPGL及其相关因子的调节

目的探讨甲状旁腺激素（PTH）调节骨吸收作用的途径和机理。方法用0．2-20μg PTH干预人成骨肉瘤MG63细胞2d，观察PTH对MG63细胞表达护骨素（OPG）、护骨素配体（OPGL）及其相关因子，如肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体（TRAIL）、巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）的影响，用RT-PCR法检测OPG、OPGL、M—CSF和TRAIL mRNA表达情况，用Western blot分析法检测OPG和OPGL蛋白表达情况。结果PTH下调MG63细胞中OPG的表达，上调OPGL、M—CSF及TRAIL的表达。结论删能够减低成骨样细胞MG63中OPG／OPGL表达比率，增加M—CSF、TRAIL的表达。这可能有利于促进破骨细胞生成及活化，进而促进骨吸收。     

阿仑膦酸钠干预人骨髓基质细胞OPG/RANKL的体外实验研究

目的观察阿仑膦酸钠对人骨髓基质细胞中骨保护素（OPG）核/因子Kappa B受体活化因子配基（RANKL）mRNA表达的影响,探讨阿仑膦酸钠防治骨质疏松的相关机制。方法从24名20~30岁的健康男性志愿者髂前上棘处分别抽取10 m l骨髓,分离培养骨髓基质细胞,取50%融合P2代骨髓基质细胞,混匀后随机分为4组：高、中、低剂量阿仑膦酸钠组和对照组,高、中、低剂量组在细胞培养液中,分别加入1×10-7mol/L、1×10-8mol/L、1×10-9mol/L阿仑膦酸钠;对照组采用普通LG-DMEM培养,不进行特殊处理。采用半定量RT-PCR和W estern blot检测OPG、RANKL mRNA和蛋白表达并计算OPG/RANKL比率。结果在RT-PCR实验中,高、中、低阿仑膦酸钠组和对照组OPG mRNA/RANKL mRNA表达比分别为（8.77±1.16）、（6.68±1.25）、（4.86±0.79）和（0.58±0.13）;W estern blot蛋白印迹实验显示,高、中、低阿仑膦酸钠组和对照组OPG/RANKL蛋白表达之比分别为（1.18±0.47）、（1.09±0.56）、（0.82±0.32）和（0.25±0.12）。经统计学分析,在mRNA和蛋白水平,高、中、低阿仑膦酸钠组OPG/RANKL比值明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,三组阿仑膦酸钠组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论防治骨质疏松药阿仑膦酸钠可以增加骨髓基质细胞中骨保护素的表达,减少核因子Kappa B受体活化因子配基表达。     

阿伦膦酸钠对骨髓生成破骨细胞及骨吸收作用的影响

[目的]研究阿伦膦酸钠对体外培养的小鼠骨髓生成破骨细胞及其骨吸收作用的影响。[方法]收集小鼠骨髓细胞于含有10^-8mol／L的1，25二羟基维生素D3[1，25-（OH）2D3]的α-MEM完全培养基中体外培养，设置不同浓度的阿伦膦酸钠给药，并于培养的第6、9、12d观察记录抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acidphosphatase，TRAP）阳性多核巨细胞[破骨样细胞（osteoclast-like cell，OLC）]生成数，反映破骨细胞生成情况。记数培养12d骨磨片上骨吸收陷窝数及吸收面积，反映骨吸收情况。[结果]随着阿伦膦酸钠浓度的增高，TRAP阳性的细胞数减少，骨吸收陷窝数及面积均减少。[结论]阿伦膦酸钠可抑制骨髓细胞体外培养中破骨样细胞的形成，体外可抑制破骨细胞骨吸收作用。     

XCT-790对沉默DKKl、Sost腺病毒载体转染MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα的影响研究

目的 研究ERRα抑制剂（XCT-790)对沉默Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)、骨硬化蛋白Sclerostin( Sost)重组腺病毒载体转染MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα的影响。方法 本实验将培养好的MG63细胞分为空白对照组、沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默（DKK1 + Sost)组、XCT-790处理空载腺病毒组、XCT-790处理沉默DKK1组、XCT-790处理沉默Sost组、XCT-790处理沉默（DKK1 + Sost)组,根据组别不同分别用包装好的沉默DKK1、Sost腺病毒载体转染MG63细胞,应用 Western blot检测MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα蛋白的表达量。结果 （1 )与空白对照组对比,沉默DKK1、Sost、 DKK1 + Sost可以提高OPG、CTGF、FGF2表达量（P <0. 05),降低TNFα表达量（P <0. 05) ;XCT-790干预MG63细胞可降低OPG、CTGF、FGF2 表达量（P <0. 05),增加 TNFα表达量（P<0. 05) ;(2)与沉默 DKK1、Sost、DKKl + Sost 组比较,XCT-790 处理沉默DKKl、Sost、DKKl + Sost组可降低因沉默DKK1、Sost、DKKl + Sost而增加OPG、CTGF、FGF2的表达量的作用（P <0. 05 ), 增加因沉默DKK1、Sost、DKKl + Sost而降低TNFα的表达量（P <0. 05)。结论 XCT-790可以降低MG63细胞中OPG、CTGF、 FGF2表达量,升高TNF α表达量;还可以调节因沉默DKK1、Sost、DKK1 + Sost而改变的MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2及 TNFα的表达量。     

T3 对 MG63 细胞株 TRAIL，QPG，QPGL 表达的影响

目的观察在不同浓度T3环境下人成骨肉瘤MG63细胞株肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)的表达,探讨甲亢性骨质疏松症的发病机制。方法用不同浓度T3(对照组,10-12、10-10、10-8mol/L组)分别刺激培养的MG63细胞24h,RT-PCR法检测TRAIL,OPG,OPGLmRNA的表达。结果T3对MG63细胞中TRAIL,OPGLmRNA的表达,均按照对照组、10-12mol/L组、10-10mol/L组、10-8mol/L组顺序递增(P<0.05),OPGmRNA的表达按照此顺序递减(P<0.05),10-8mol/L组TRAILmRNA的水平明显高于对照组(P<0.05)。同时,OPG/OPGL比率按照对照组、10-12mol/L组、10-10mol/L组、10-8mol/L组顺序递减。结论T3可能导致成骨细胞中TRAIL和OPGL表达增多,OPG的表达减少。这可能是甲亢性骨质疏松症的重要发病机制之一。     

XCT-790对沉默DKK1、Sost腺病毒载体转染MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα的影响研究

目的研究ERRα抑制剂(XCT-790)对沉默Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)重组腺病毒载体转染MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα的影响。方法本实验将培养好的MG63细胞分为空白对照组、沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默(DKK1+Sost)组、XCT-790处理空载腺病毒组、XCT-790处理沉默DKK1组、XCT-790处理沉默Sost组、XCT-790处理沉默(DKK1+Sost)组,根据组别不同分别用包装好的沉默DKK1、Sost腺病毒载体转染MG63细胞,应用Western blot检测MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα蛋白的表达量。结果 (1)与空白对照组对比,沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost可以提高OPG、CTGF、FGF2表达量(P0.05),降低TNFα表达量(P0.05);XCT-790干预MG63细胞可降低OPG、CTGF、FGF2表达量(P0.05),增加TNFα表达量(P0.05);(2)与沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost组比较,XCT-790处理沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost组可降低因沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost而增加OPG、CTGF、FGF2的表达量的作用(P0.05),增加因沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost而降低TNFα的表达量(P0.05)。结论 XCT-790可以降低MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2表达量,升高TNFα表达量;还可以调节因沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost而改变的MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2及TNFα的表达量。     

Genistein对破骨细胞分化和骨吸收功能的影响及其机制探讨

目的 探讨三羟异黄酮类药Genistein对破骨细胞性骨吸收的作用及其机制。方法 1，25(OH)2D3诱导小鼠骨髓细胞形成破骨样细胞，分别加入0moL／L、10^-9moL／L、10～moL／L、10^-7moL／L、10～moL／L、10^-5moL／LGenistein，于培养3，5和8d分别计数抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞个数；于培养12d利用图像分析系统对骨吸收陷窝的面积进行测量分析。另从小鼠颅盖骨分离培养获得原代成骨细胞，分别加入0，10^-8，10^-7，10^-6和10^-5moL／LGenistein并以10^-9moL／L^-7 β雌二醇为对照，采用RT-PCR的方法检测Genistein对骨保护因子(osteoprotegerin，OPG)及破骨细胞分化因子(receptor activator of NF-κB ligand，RANKL)mRNA表达的影响。结果 利用1，25(OH)2D3成功诱导出破骨样细胞；随Genistein浓度增加，抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞(单核、双核和多核)个数和骨吸收陷窝面积呈剂量依赖性减少。同时，应用Genistein后原代成骨细胞中OPG和RANKL的mRAN表达都有增强，但其最终效应表现为剂量依赖性和时间依赖性地增大OPG／RANKL的浓度比。结论 Genistein通过抑制破骨前体细胞分化来抑制其体外骨吸收功能，其分子机制与OPG／RANKL mRNA表达比值的升高有关。     

阿伦膦酸钠防治人工关节松动的实验研究

目的：评价二膦酸盐阿伦膦酸钠在防治人工关节松动中的作用。方法：36只SD大鼠右膝置入自制人工关节假体,建立人工关节松动的动物模型,分成3组：阴性对照组,阳性对照组和实验组。阴性对照组关节腔内注射磷酸缓冲液与鼠血清混合液,阳性对照组关节腔内注射10^10/ml关节磨屑（超高分子聚乙烯颗粒）,实验组关节腔内注射10^10/ml关节磨屑同时用阿伦膦酸钠灌胃（每日1mg/kg）。术后12周,处死各组动物行组织切片对比观察假体周围骨溶解情况。体外分离培养人外周血单个核细胞并分成5组,A组为单核细胞组,B组为单核细胞和关节磨屑混合培养组,C组为单核细胞和关节磨屑混合培养加入10^-4mol/L阿伦膦酸钠,D组单核细胞和关节磨屑混合培养加入10^-5mol/L阿伦膦酸钠,E组为单核细胞和关节磨屑混合培养加入10^-6mol/L阿伦膦酸钠,检测各组单个核细胞分泌溶骨因子的情况。结果：关节磨屑可引起假体周围骨溶解,刺激单个核细胞分泌溶骨因子,阿伦膦酸钠可阻止这种作用。结论：阿伦膦酸钠可有效防止关节磨屑诱导的人工关节松动,有望用于临床。     

膝关节后交叉韧带断裂治疗临床分析

目的 对35例膝关节后交叉韧带断裂治疗进行临床分析,重点探讨了有关交叉韧带断裂的治疗问题。方法 经明确诊断后,分析采用胫骨附着处撕脱骨折复位固定手术治疗26例、早期髌韧带中1／3移植重建3例、单纯长腿石膏固定6例。结果 本组病例全部进行随访,随访时间13个月－5年,胫骨附着处撕脱骨折复位固定及髋韧带中1／3移植重建29例为优良、单纯长腿石膏固定6例为差。结论 后交叉韧带断裂后应该及时给予手术修复;膝后外侧手术入路,操作简单,暴露充分;少于3个月的陈旧性病例仍适应手术治疗。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。