pLNCX-SOD基因转染大鼠心肌细胞联合黄芪对胆汁毒性损害的保护作用

目的 :探讨pLNCX -SOD基因转染大鼠心肌细胞联合中药黄芪对胆汁毒性损害的保护作用及中药黄芪的作用机制。 方法 :原代培养大鼠心肌细胞 ,阳离子介导心肌细胞转染 ,PCR法、Western -blot印迹分析检测SOD基因转染、基因表达 ,MTT比色法检测pLNCX -SOD基因转染联合中药黄芪对心肌细胞损害的保护。 结果 :转染后的心肌细胞瞬时表达SOD ,增强了对胆汁毒性的耐受 ,半数致死浓度 (IC 5 0 )由原来的 (1 4 7± 0 13) %提高了 2 19倍 ,达 (3 2 1± 0 17) %。联合黄芪后 ,半数致死浓度由单纯转染的 (3 2 1± 0 17) %提高到 (6 4 9± 0 38) % ,P <0 0 1。 结论 :pLNCX -SOD基因转染心肌细胞对胆汁毒性损害的保护作用 ,联合中药黄芪对胆汁毒性的损害具有协同保护作用。     

曲美它嗪对大鼠心肌缺血挛缩的保护作用

目的　探讨曲美它嗪 (TMZ)对心肌缺血挛缩的保护作用。方法　大鼠分为A、B、C、D4组 ,A为对照组 ,微流量灌注 (0～ 1ml/min)制成心肌缺血模型 ,实验前口服曲美它嗪 (3mg/d× 7d) ,灌流液中加入 1× 10 -6mol/L的TMZ ,观察缺血后心脏发展压力的变化。结果　口服曲美它嗪、灌流液中添加曲美它嗪组与对照组相比 ,心肌缺血后发展压力有明显改善。缺血 30min时 ,A组 :(4 .49± 0 .6 0 )kPa(1kPa =0 .75mmHg) ;D组 :(1.39± 0 .75 )kPa ,差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。再灌注 15min时 ,A组 :(4 .2 8± 0 .77)kPa ;D组 :(1.36± 0 .2 7)kPa ,差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。缺血后发展压力恢复率在复灌后 5min内明显改善 ,A组 :(74.3± 8.4) % ,D组 :(98.6± 3.2 ) % ,差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。结论　曲美它嗪对心肌缺血挛缩有明显的保护作用。     

pLNCX-SOD基因转染大鼠肝细胞对梗阻性黄疸损害的保护

目的 探讨pLNCX-SOD基因转染大鼠肝细胞对梗阻性黄疸(梗黄)损害的保护作用。方法 转染培养的大鼠肝细胞,克隆、筛选及鉴定阳性克隆,PCR法、western-blot印迹分析检测SOD基因表达,MTT比色法检测pLNCX-SOD基因转染肝细胞对胆汁、梗黄大鼠血清毒性损害的保护。结果2％浓度胆汁SOD转染的肝细胞抑制率由12h的78.80％±12.35％下降到43.35％±9.69％,24 h由82.55％±11.27％下降到-39.54％±15.13％,48 h由83.83％±18.69％下降到-48.32％±15.25％,P<0.01;对2.5％浓度的梗黄血清对抗作用明显,抑制率由12 h的89.72％±1.53％下降到14.68％±14.33％,24 h由92.2％±11.27％下降到41.39％±7.66％,48 h由94.25％±8.96％下降到22.71％±4.38％,P<0.01。结论 pLNCXS-SOD基因转染肝细胞对梗黄损害具有保护作用。     

大鼠血红素加氧酶-1基因转染对大鼠离体心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的 观察重组腺相关病毒介导大鼠血红素加氧酶-1基因转染对大鼠离体心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠30只随机分成3组,对照组(C组,n=6),缺血再灌注组(I/R组,n=12),腺相关病毒介导血红索加氧酶-1基因组(A-r组,n=12).基因转染3个月后,建立大鼠离体心脏Langendorff灌流模型,C组持续灌注100 min,其他各组均平衡15 rain,停灌40min与再灌注45 min,记录冠脉流量(CF),测定冠脉流出液肌酸激酶(CK)活性,测定再灌注后45 min时的心肌心肌组织超氧化物岐化酶(SOD)活性活性及丙二醛(MDA)含量,同时取每组大鼠心肌检测梗死面积、心肌细胞凋亡率以及心肌组织bax、bcl-2蛋白表达量.结果 离体心肌Langendorff灌注后,与I/R组比较,A-r组在复灌后冠脉流出液CK活性降低(P＜0.01),复灌后45min后心肌MDA含量降低(P＜0.01),SOD活性增高(P＜0.01),梗死面积较小(P＜0.01),心肌组织bax表达量、心肌细胞凋亡率均显著下降,心肌组织bel-2表达量明显增加(P＜0.01).结论 重组腺相关病毒血红素加氧酶1基因转染心肌后,可抑制离体缺血再灌注心肌细胞凋亡和增强心肌抗氧化能力,对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤有显著保护作用.     

氨力农对大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的　氨力农预处理大鼠离体缺血 /再灌注心肌或心肌经历缺血 /再灌注后灌注液加用氨力农 ,观察其有无心肌保护作用。方法　将 3 0只SD大鼠随机平均分对照组 (A组 )、停跳前灌注液加氨力农组 (B组 )和复跳后灌注液加氨力农组 (C组 ) ,应用离体灌注心模型 ,全心 2 5℃停跳3 0min ,再灌注复跳 12 0min ,测定复跳后 10、3 0、60、12 0min左室发展压 (LVDP)恢复率、冠脉流量(CF)恢复率、心肌含水量、心肌细胞ATP含量、心肌超微结构。结果　复跳后C组LVDP恢复率、CF恢复率、心肌含水量、ATP含量、心肌显微结构明显优于A组 (P <0 .0 5 ) ,其CF恢复率优于B组 (P <0 .0 1) ;复跳后 60、12 0minLVDP恢复率B组优于A组 (P <0 .0 5 )。结论　离体大鼠心肌缺血 /再灌注后加用氨力农有明显心肌保护作用 ,氨力农预处理对心肌缺血 /再灌注损伤也有改善作用。     

腺病毒携带肝细胞生长因子基因不同途径转染对大鼠急性缺血心肌的影响

目的探讨腺病毒携带肝细胞生长因子基因（Ad-HGF）不同途径转染对大鼠缺血心肌的影响。方法将75只大鼠随机分为心肌内注射Ad，HGF组、注射携带绿色荧光蛋白（Ad-GFP）组、注射生理盐水空白对照组，心室腔注射Ad-HGF组、注射Ad-GFP组，各组分别于第3、7、14、21、28天各处死3只检查腺病毒的分布情况及进行血管计数。结果心肌内和心室腔注射Ad-HGF组第14、21、28天可见新生血管生成数量显著增加，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。心肌内注射Ad-GFP组术后3d心脏绿色荧光最强，14d消失，心腔内注射Ad-GFP组术后3d心脏可见到范围较小的微弱绿色荧光，7d消失。结论Ad-HGF可明显促进大鼠缺血心肌微小血管生成，心肌内直接注射途径仍优于心腔内给药。     

异丙酚对鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的保护作用

心肌缺血/再灌注损伤是围术期经常面临的一种病理生理变化,静脉麻醉药异丙酚结构上的特殊性使其对各种因素（如缺血/再灌注）所致的氧化应激的诸多环节均有阻断作用,异丙酚的抗氧化性可能为其心肌保护作用的机制之一。本文研究了异丙酚预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及该作用是否与其抗氧化性有关。     

牛磺酸对严重烧伤大鼠心肌损害的保护作用

目的　观察牛磺酸(Tau)对严重烧伤大鼠心肌损害的作用。　方法　将Wistar大鼠随机分为对照组(10只,不致伤)、烧伤组(60只)和Tau治疗组(60只)。后两组大鼠造成30%TBSAⅢ度烫伤(以下称烧伤),烧伤组伤后常规补液,Tau治疗组伤后腹腔注射Tau400mg/kg.于两组烧伤大鼠伤后1、3、6、12、24、48h检测其血浆中心肌肌钙蛋白T(cTnT)、丙二醛(MDA)的含量以及血浆、心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNF- α)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量、心肌钙离子水平,用透射电镜观察心肌组织形态结构变化,并与对照组的上述指标进行比较。将烧伤组大鼠血浆TNF- α、AngⅡ检测结果分别与cTnT检测结果作相关性分析。　结果　烧伤组大鼠伤后3h起血浆cTnT水平较对照组(0.16±0. 03)μg/L显著升高(P<0. 01), 12h达峰值(6. 32±0. 41)μg/L, 48h仍显著高于对照组(P<0. 01).烧伤组伤后3—48h血浆MDA含量及心肌钙离子水平明显高于对照组(P<0. 01 );伤后6—48h血浆和心肌组织TNF- α含量显著高于对照组(P<0. 01);血浆及心肌组织中AngⅡ水平分别于伤后1—24h、3—24h明显高于对照组(P<0. 01).Tau治疗组上述指标在伤后多数时相点明显低于烧伤组(P<0. 01). 烧伤组大鼠伤后早期心肌肌丝断裂溶解、线粒体肿胀、嵴减少,Tau治疗组心肌组织接近正常。烧伤组     

吗啡对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 探讨吗啡对离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用和机制。方法 建立离体大鼠心脏灌注模型。TTC染色梗死心肌。观察缺血/再灌注后,吗啡对冠脉流量（CF）、心率（HR）、左室压力（LVP）、左室压力最大变化速率（LVP/dtmax）及心梗范围的影响,并观察纳洛酮和glibenclamide对吗啡作用的影响。结果 缺血/再灌注后,离体大鼠心脏的CF、HR、LVP和LVP/dtmax显著下降（P<0.01）。缺血前给予吗啡可以使缺血/再灌注后HR、LVP和LVP/dtmax显著恢复（P<0.01）,心梗范围显著缩小（P<0.01）。吗啡不能增加缺血/再灌注后离体大鼠心脏的CF（P>0.05）。分别给予纳洛酮和glibenclamide可以完全取消吗啡的心肌保护作用。结论 吗啡可以减轻大鼠心肌的缺血/再灌注损伤。吗啡是通过心肌局部的阿片受体及心肌细胞的KATP通道介导产生心肌保护作用。     

SOD����תȾ�����ϸ���Ե�֭�����𺦵ı���

目的　探讨超氧化物歧化酶 (SOD)基因转染大鼠肝细胞对胆汁毒性损害的保护作用。方法　SOD基因转染培养的大鼠肝细胞 ,克隆、筛选及鉴定阳性克隆 ,PCR法、Western -blot印迹分析检测SOD基因表达 ,甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测SOD基因转染肝细胞对胆汁毒性损害的保护。结果　SOD基因转染肝细胞对于2 %浓度胆汁抑制率由 12h的 ( 78 80± 12 3 5 ) %下降到 ( 4 3 3 5± 9 69) % ,2 4h由 ( 82 5 5± 11 2 7) %下降到( -3 9 5 4± 15 13 ) % ,48h由 ( 83 83± 18 69) %下降到 ( -4 8 3 2± 15 2 5 ) % ,P <0 0 1。结论　SOD基因转染肝细胞对胆汁毒性损害具有保护作用     

槲皮素和黄芪甲苷对大鼠缺氧心肌细胞的保护作用

目的 了解并比较槲皮素、黄芪甲苷对体外培养的缺氧心肌细胞的保护作用，寻找其作用的量效关系。方法 将SD乳鼠心肌细胞分成单纯缺氧组（A组）、缺氧＋100mg／L槲皮素组（B组）、缺氧＋50mg／L槲皮素组（c组）、缺氧＋25mg／L槲皮素组（D组）、缺氧＋50．0mg／L黄芪甲苷组（E组）、缺氧＋25．0131mg／L黄芪甲苷组（F组）、缺氧＋12．5mg／L黄芪甲苷组（G组）、缺氧＋10mg／L维生素E组（H组）。各组细胞原代培养后先加入相应浓度的槲皮素、黄芪甲苷、维生素E，再行缺氧处理12h（A组培养后直接行缺氧处理）。检测各组心肌细胞活力和乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、活性氧（ROS，只检测A、C、F、H组）值。结果B～G组与A组比较，LDH、MDA、ROS（C、F组）值下降，心肌细胞活力、SOD值上升，作用普遍优于H组。在同等高、中、低浓度下，加入黄芪甲苷组的心肌细胞活力和LDH水平总体优于加入槲皮素组（如C、F组的心,肌细胞活力为0．454±0．018、0．471±0．017，LDH为2800±9、2312±52），但两组MDA、SOD和ROS值比较，差异无统计学意义（C、F组的ROS为16．0±5．3、22．4±8．7，P〉0．05）。结论 黄芪甲苷、槲皮素能有效保护缺氧心肌细胞，减轻损伤程度，其作用优于维生素E。黄芪甲苷的保护作用较槲皮素更好，但两者减轻细胞脂质过氧化损伤的作用差异不明显。     

缺氧后处理和二氮嗪后处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧时钙网蛋白表达的影响

目的 探讨缺氧后处理和二氮嗪后处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧时钙网蛋白(CRT)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠,4～5月龄,分离心肌细胞,培养18 h后,随机分为6组(n=8):对照组(C组)、缺氧复氧组(HR组)、缺氧后处理组(HP组)和二氮嗪后处理组(DP组).C组细胞于5%CO2培养箱内继续培养2 h;HR组细胞于95%N2-5%CO2培养箱中缺氧45 min,然后于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h;HP组细胞于95%N2-5%CO2培养箱中缺氧45 min,然后复氧3 min,缺氧3 min,重复3次,再于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h;DP组细胞于95%N2-5%CO2培养箱中缺氧45 min,然后给予50 μmol/L二氮嗪处理10 min,再于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h.测定心肌细胞caspase-3活性、CRT表达和游离钙离子浓度.结果 与C组比较,其余各组caspase-3活性升高,HP组和DP组CRT表达上调,HR组游离钙离子浓度升高(P＜0.05或0.01);与HR组比较,HP组和DP组caspase-3活性降低,CRT表达上调,游离钙离子浓度降低(P＜0.01).结论 缺氧后处理和二氮嗪后处理可上调CRT的表达,减轻细胞内钙超载,减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

烧伤血清刺激对大鼠肠上皮细胞结构和粘弹性的影响

目的　动态观察烧伤血清对体外肠上皮细胞 (IEC)骨架和细胞生物力学 (粘弹性 )的影响。　方法　培养大鼠肠上皮细胞株IEC 6 ,用烧伤血清刺激后 ,通过细胞骨架免疫组化、细胞ELISA法定量分析以及粘弹性测定技术 ,动态观察IEC致伤前后的变化。　结果　IEC在烧伤血清作用早期 ,骨架蛋白的表达即明显降低 ,微丝、微管蛋白阳性信号减弱 ,细胞粘弹性下降。　结论　细胞骨架的损伤可引起细胞脆性增加、粘弹性下降 ,导致细胞生物力学特性的改变。这种变化 ,可能直接参与烧伤后肠上皮细胞损伤的发生。     

人参皂苷单体Re对大鼠心肌细胞缺氧的作用

目的 观察人参皂苷单体Re对大鼠心肌细胞缺氧的保护作用并探讨其机制.方法 SD大鼠乳鼠心肌细胞原代培养,按照随机数字表法分为5组,每组6个样本.正常对照组细胞常规培养;缺氧对照组细胞常规培养48 h再缺氧培养12 h;另外3组细胞先常规培养48 h,分别用20、40、80 g/L人参皂苷单体Re预处理30 min再缺氧12 h,相对应设为单体Re低、中、高浓度组.采用ELISA法检测心肌细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,荧光漂白恢复(FRAP)实验观察细胞间连接通讯,以FRAP率表示结果.数据处理行组间或配对t检验.结果 (1)与缺氧对照组细胞LDH活性[(403±22)U/L]比较,单体Re低、中、高浓度组均明显降低,分别为(255±16)、(241±13)、(237±24)U/L(t值分别为5.1、5.2、8.3,P值均小于0.05).(2)细胞经激光淬灭后10 min,正常对照组FRAP率为(74.8±3.6)%;缺氧对照组FRAP率为(13.2±5.6)%;单体Re低、中、高浓度组FRAP率分别为(34.3±3.9)%、(36.2±3.1)%、(39.5±2.9)%,与缺氧对照组比较,差异均有统计学意义(t值分别为18.3、-41.9、-6.6,P值均小于0.05).结论 采用人参皂苷单体Re预处理可降低缺氧大鼠心肌细胞LDH的释放,明显改善细胞间连接通讯,对缺氧心肌细胞有明显的保护作用,剂量尤以20 g/L为适宜.

Abstract：

Objective To investigate the protective effect of ginsenoside Re on myocardial cells of neonatal SD rat with hypoxia injury,and to explore its mechanism. Methods The primary passage of myocardial cells collected from neonatal SD rats were divided into A group (with ordinary treatment),B group[exposed to hypoxia (1% O2,5% CO2,94% N2) for 12 hours after being cultured for 48 hours],C group (pretreated with 80 g/L ginsenoside Re for 30 minutes after 48 hours of ordinary culture,then exposed to hypoxia for 12 hours),D group (received the same treatment as used in C group except for using 40 g/L ginsenoside Re),E group (received the same treatment as used in C group except for using 20 g/L ginsenoside Re) according to the random number table,with 6 samples in each group. Myocardial cell supernatants were collected for determination of content of lactate dehydrogenase (LDH) with enzyme linked immunosorbent assay. Fluorescence recovery after photobleaching technique was used to detect gap junction intercellular communication (GJIC).Result was observed by laser scanning confocal microscope. Data were processed with paired t test. Results (1) Compared with that in B group[(403±22)U/L],contents of LDH in E,D,and C groups were obviously decreased[(255±16),(241±13),(237±24)U/L,with t value respectively 5.1,5.2,8.3,P values all below 0.05]. (2) The fluorescence recovery rate in A group was (74.8±3.6)% 10 min after quenching,which was higher than that in B group[(13.2±5.6)%,t=15.2,P<0.01]. The fluorescence recovery rate in C,D,and E groups was respectively (39.5±2.9)%,(36.2±3.1)%,and (34.3±3.9)% 10 min after quenching,all higher than that in B group (with t value respectively -6.6,-41.9,18.3,P values all below 0.05). Conclusions Ginsenoside Re pretreatment,particularly with a dose of 20 g/L,can protect myocardial cells from hypoxia injury,and the effect may be attributable to inhibition of release of LDH and improvement of the GJIC function.     

异丙酚对大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用

目的研究异丙酚对大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法 以原代培养的新生大鼠海马神经细胞作为研究对象,建立缺氧模型,用MTT法测定神经元存活率。采用激光扫描共聚焦显微镜动态监测单个海马神经元内Ca2 浓度随缺氧或加入谷氨酸、KCl前后的实时变化。结果 异丙酚可明显降低神经元缺氧损伤时的细胞死亡率(P<0.01),异丙酚对缺氧、谷氨酸和高浓度KCl诱发的神经细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i)的升高有抑制作用(P<0.05)。结论异丙酚对离体培养的大鼠海马神经元缺氧性损伤具有保护作用,其作用机制部分与异丙酚抑制[Ca2 ]i异常升高有关。     

Anti-tumor effects and tumor immunogenicity following IL2 or IL4 cytokine gene transfection of three mouse mammary tumors

Background: The anti-tumor effects of three mouse mammary tumors transfected to express interleukin (IL) 2 or 4 were evaluated. Methods: Three immunologically different tumors were used: DA3, EMT6, and 410. All three cell lines were successfully transfected using high efficiency viral vectors. Wild-type or transfected tumor cells were injected subcutaneously into Balb/c mice and animals were observed for tumor growth. Results: Overall, there was a significant decrease in the incidence and in the size of palpable transfected tumor compared with control tumors. Animals were immunized with wild-type or transfected cells and challenged with wild-type tumor. In these experiments, animals immunized with transfected tumor cells had a significantly lower incidence of tumor and significantly smaller tumors than controls. Similar experiments were performed by immunization with irradiated cells (wild type and transfected), and significant immune protection was induced. Conclusions: Each cell line responded differently following gene transfection, with the greatest anti-tumor effects seen in the EMT6 tumor cells transfected with IL2 or IL4. Presented in part at the 47th Annual Symposium of The Society of Surgical Oncology, March 17–20, 1994.     

血红素氧合酶-1基因转染对移植小肠的保护作用

目的 观察重组腺相关病毒血红素氧合酶-1( HO-1)基因转染对移植小肠的保护作用。方法 建立大鼠同种异位小肠移植模型,实验分为2组:实验组(n=34):供体术前腹腔注射载有HO-1基因的腺相关病毒1.0×1012个/ml,对照组(n=34):供体术前腹腔注射腺相关病毒1.0×1012个/ml,在实验组和对照组中检测小肠移植术后小肠组织中HO-1的活性、HO-1 mRNA含量及细胞凋亡,免疫组织化学检测HO-1蛋白的表达,观察小肠组织病理学变化和受体生存时间。结果 实验组平均生存时间为(6.80±1.56)d,对照组平均生存时间为(5.80±1.28)d,两者之间差异无统计学意义(P＞0.05),小肠移植术后24、48 h和5d移植小肠实验组HO-1活性分别为2.11±0.04、1.90±0.04和1.56±0.05,均强于对照组(1.71±0.07、1.56±0.06和1.38±0.08,P＜0.05);各组移植肠缺血再灌注损伤程度以术后24h最重,实验组缺血再灌注损伤程度轻于对照组;术后24h和48 h实验组HO-1 mRNA表达水平分别为1.12±0.08和0.76 ±0.10,均高于对照组(0.69±0.05和0.38±0.08,P＜0.05),术后5 d HO-1 mRNA表达水平两组比较差异无统计学意义(P＞0.05);术后各时段移植小肠细胞凋亡数实验组低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),生存时间差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 HO-1基因转染可降低移植小肠缺血再灌注损伤程度。