竞争性定量PCR检测TCRVγI-Jγ基因重排方法的建立及应用

目的为提高急性淋巴细胞白血病（ALL）微小残留检测的临床意义。方法建立竞争性定量聚合酶链反应（PCR）检测TCRVγI－Jγ基因重排技术并定量分析16例ALL病人残留白血病细胞。结果建立定量PCR方法的灵敏度为10-5水平。16例ALL缓解期残留白血病细胞为（427±364）×10-5病人。3例病人可检测出寡／亚克隆重排,白血病细胞定量为117×10-5、196×10-5及211×10-5水平,其中1例寡／亚克隆水平在病程中不断增加并导致3月后复发伴克隆演化。结论所建立定量PCR技术简便、快速、灵敏;定量检测ALL缓解期残留白血病有利于预后预测并可应用于寡／亚克隆的定量检测。     

急性白血病复发时克隆演化的研究

为研究克隆演化在急性白血病复发发病机制中作用，应用聚合酶链反应（PCR）联合Southern杂交检测75例及其中36例复发急性非淋巴细胞白血病（ANLL）IgH重排基因，PCR检测81例及其中35例复发急性淋巴细胞白血病（ALL）IgH、TCRVγ2－Jγ、TCRVδ－Dδ3重排基因及bcr／ablmRNA，配合形态学和免疫学检查发现8例ALL（22．9％）和4例（11．1％）ANLL复发时形态学，免疫学或／和重排基因类型发生改变（克隆演化）。克隆演化是某些急性白血病复发的主要原因，克隆演化发现对于白血病治疗改进有重要意义，其选择机制尚需进一步研究。     

聚合酶链反应检测老年人急性白血病IgH基因重排的意义

目的为进一步了解老年人急性白血病的分子生物学特征。方法应用聚合酶链反应（PCR）检测28例老年人急性白血病免疫球蛋白重链（IgH）则基因重排结果66.7％（4／6）老年人急性淋巴细胞白血病（ALL）和40．9％（9／22）急性非淋巴细胞白血病（ANLL）存在IgH基因重排：IgH基因重排阳性老年人ANLL治疗缓解率（22．2％）显著低于IgH基因重排阴性老年人ANLL（66.7％）（P＜0.05）。结论应用PCR技术检测老年人急性白血病基因重排可帮助了解老年人白血病的分子生物学特征和预后,此方面尚需进一步研究。     

免疫球蛋白重链和T细胞受体γ基因重排检测在急性非淋巴细胞白血病患者中的意义

目的 探讨免疫球蛋白重链（IgH）和T细胞受体γ（TCRγ）基因重排在急性非淋巴细胞白血病（ANLL）患者中的临床意义。方法 用聚合酶链反应（PCR）检测50例ANLL患者骨髓、外周血单个核细胞（MNCs）中克隆性IgH、TCRγ基因重排。结果 克隆性IgH和／或TCRγ基因重排在50例ANLL中检出率为32.0%（16／50），其中IgH为28.0%（14／50），TCRγ为16.0%（8／50）。1例反应性淋巴结炎和20例正常人均未检测到IgH和TCRγ基因重排。27例非M3初发ANLL患者经DA或HA标准方案化疗，10例基因重排阳性的患者1疗程后获完全缓解3例（30.0%），而17例基因重排阴性患者1疗程后完全缓解13例（76.5%），两者判别具有显著性意义（P＜0.05）。结论 （1）IgH、TCRγ基因重排不仅出现于淋巴细胞来源的的肿瘤，也可见于部分ANLL患者；（2）出现IgH和／或TCRγ基因重排可能是ANLL患者预后不佳的指标之一。     

降落式PCR和SSCP检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体γ基因重排

目的 以降落式PCR和单链构型多态性(SSCP)方法检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体(TCR)γ基因重排,探讨其在淋巴细胞白血病诊断中的价值。方法 盐析法提取淋巴细胞白血病患者外周血白细胞DNA,TCR-γ基因重排通用引物和降落式PCR扩增基因重排。分别采用琼脂糖凝胶电泳、SSCP和DNA直接测序方法检测PCR扩增产物。阳性细胞系DNA模板与反应增生性淋巴组织DNA按不同比例混合后扩增,检测降落式PCR的灵敏度。结果 琼脂糖电泳中,18例T淋巴细胞白血病中有15例、4例B淋巴细胞白血病中有2例为阳性,阳性标本经SSCP进一步分析,呈不连续条带。DNA直接测序证实扩增产物为TCR-γ基因重排。阳性对照模板占1%以上时可得到阳性扩增结果。结论 TCR-γ基因重排通用引物结合降落式PCR可有效扩增T淋巴细胞白血病基因重排,可用于T淋巴细胞白血病的辅助诊断。     

免疫球蛋白重链T细胞受体γ基因重排在急性淋巴细胞白血病中的表达

目的：探讨初诊急性淋巴细胞白血病（ALL）患者免疫球蛋白重链（IgH）、T细胞受体γ（TCRγ）基因重排情况。方法：应用多聚酶链反应（PCR）检测19例初发ALL患者骨髓IgH、TCRγ基因重排。结果：19例标本中10例发生单一IgH基因重排，5例发生单-TCRγ基因重排，2例同时出现IgH/TCRγ基因重排。结论：ALL患者IgH基因重排几率高于TCRγ基因重排，且存在着交叉重排现象。     

淋巴系统肿瘤免疫球蛋白和T细胞受体重排基因的指纹图谱特征

目的确定淋巴系统肿瘤的免疫球蛋白（Ig）和T细胞受体（TCR）基因重排的特征。方法：用PCR和单链构象多态性等分析108例各类淋巴系统肿瘤。结果：不同患者各有特征性指纹图谱。54％的急性淋巴细胞白血病（ALL）和43％多发性骨髓瘤（MM）存在IgH或者TCRγ双等位基因重排，6例ALL和3例MM存在寡克隆性。结论：指纹图谱可判断恶性克隆之间的基因差异和寡克隆性。     

应用RT-PCR和基因扫描分析TCRVβ谱系的CDR3长度了解急性单核细胞白血病病人克隆性增殖T细胞(英文)

目的　了解急性单核细胞白血病 (AML M5 )病人TCRVβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法　利用RT PCR分别扩增 9例M5病人外周血单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因的CDR3,了解TCRVβ谱系的表达情况。PCR产物进一步经基因扫描分析 ,确定T细胞克隆性。结果　 9例AML M5病人仅存在 1 10个Vβ亚家族T细胞 ,而正常血标本则可检测到 2 4个Vβ亚家族。基因扫描分析显示 :8例病人的某些Vβ亚家族出现一主峰图象 (寡克隆性T细胞 )。Vβ2寡克隆T细胞发现于 6例病人中。结论　结果提示AML M5病人存在克隆性增殖的T细胞 ,主要为Vβ2亚家族 ,推测这可能是对白血病细胞 (M5 )相关抗原的特异性免疫反应并可能具有抗白血病的活性。     

降落式PCR和SSCP检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体γ基因重排

目的 以降落式PCR和单链构型多态性(SSCP)方法检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体(TCR)γ基因重排，探讨其在淋巴细胞白血病诊断中的价值。方法 盐析法提取淋巴细胞白血病患者外周血白细胞DNA，TCR-γ基因重排通用引物和降落式PCR扩增基因重排。分别采用琼脂糖凝胶电泳、SSCP和DNA直接测序方法检测PCR扩增产物。阳性细胞系DNA模板与反应增生性淋巴组织DNA按不同比例混合后扩增，检测降落式PCR的灵敏度。结果 琼脂糖电泳中，18例T淋巴细胞白血病中有15例、4例B淋巴细胞白血病中有2例为阳性。阳性标本经SSCP进一步分析，呈不连续条带。DNA直接测序证实扩增产物为TCR-γ基因重排。阳性对照模板占1％以上时可得到阳性扩增结果。结论 TCR-γ基因重排通用引物结合降落式PCR可有效扩增T淋巴细胞白血病基因重排，可用于T淋巴细胞白血病的辅助诊断。     

淋巴瘤克隆性TCRγ基因重排的多重引物分析

目的 探讨TCRγ多重引物检测淋巴瘤克隆性基因重排的功效及意义。方法 引物分为两组扩增淋巴瘤DNA,PCR产物用于琼脂糖电泳和单链构象多态性分析（SSCP）检测。结果 两组多重引物PER的阳性率高于通用引物阳性率;B细胞淋巴瘤组织中存在一定比例克隆性TCRγ基因生重排;部分淋巴瘤中存在两种,ICRγ基因重排。结论 多重引物和降落式PCR适于淋巴瘤TCRγ基因重排研究,可提高检出率、判断淋巴瘤组织中不同TCRγ基因重排情况;SSCP可排除假阳性。     

分子双标记鉴别急性淋巴细胞白血病细胞克隆起源

采用多聚酶链反应（PCR）技术，检测30例急性淋巴细胞白血病（ALL）患者IgH和TcRγ重排。结果显示：有23例至少可发现一种基因重排，其中，IgH重排11例，TcRγ重排4例，二者均重排8例。IgH重排多见于B－ALL，T－ALL则常见TcRγ重排，坦存在着系列交叉现象。结合免疫表型研究，有助于确定细胞克隆来源。采用PCR扩增、标记、制备的克隆探针进行分子杂交试验，可用于白血病缓解和复发或残留细胞克隆的检测。     

PCR-SSCP分析急性淋巴细胞白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变及意义

目的 研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者DNA水平FLT3基因及其内部串联重复(ITD)突变情况。方法 采用多聚酶链反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测63例不同免疫分型ALL患者DNA水平FLT3基因及FLT3/ITD基因突变。结果 63例ALL患者经PCR扩增发现41例(65.1%)FLT3基因检测阳性,其中前前B细胞ALL、前B细胞ALL、成熟B细胞ALL及T细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率分别为93.3%(14/15),77.8%(14/18),41.7%(5/12)和28.6%(4/14);前前B细胞ALL和前B细胞患者ALLFLT3基因检测阳性率84.8%,显著高于成熟B细胞ALL(41.7%,P<0.005);B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率为73.3%,显著高于T细胞系ALL患者(28.6%,P<0.001)。63例ALL患者中仅有2例(3.2%)出现FLT3/ITD基因突变,均为伴有两种髓系抗原表达、免疫学检查诊断为急性混合细胞白血病患者,均伴有外周血高白细胞数、骨髓中高白血病细胞比例,预后较差。结论 B细胞系ALL和T细胞系ALL患者DNA水平均可检测出FLT3基因,但B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率显著高于T细胞系ALL;B细胞系ALL中细胞分化越成熟则FLT3基因检测率阳性越低。ALL患者一般不出现FLT3/ITD基因突变,FLT3/ITD基因突变检测可能有助于急性白血病基因分型及预后判断。     

儿童急性淋巴细胞性白血病IgH基因和TCR基因重排的研究

采用PCR或巢式PCR方法对71例未治疗的急性淋巴细胞性白血病（ALL）患儿骨髓样本的免疫球蛋白重链基因（IgH）和T细胞受体基因（TCR）进行了克隆性重排检测，结果显示在52例B系ALL及19例T系ALL中分别存在82．7％（43例）和15．8％（3例）的IgHCDRⅢ区域重排，而TCRVδ2Dδ3基因重排见于32．7％的B系ALL（17例）和63．2％的T系ALL（12例），二种基因重排在儿童ALL的覆盖面达到88．7％（63例），此结果提示IgHCDRⅢ和TCRVδ2Dδ3基因可作为监测儿童ALL的标志基因；采有相同方法对完全缓解期患儿的67份脑脊液标本进行了检测，结果显示9例存在IgHCDRⅢ基因重排，4例存在TCRVδ2Dδ3基因重排（与骨髓标本重排类型一致），提示采用PCR技术对ALL患儿CSF标本进行IgH和Vδ2Dδ3基因重排的检测对早期诊断中枢神经系统白血病（CNSL）具有较大价值；采用有限稀释法对完全缓解期的儿童ALL病例骨髓样本进行上述二种基因重排的定量分析，结果提示对儿童ALL进行微小残留病（MRD）的持续追踪监测可指导化疗方法的选择，观察治疗效果并预测预后。     

用PCR技术采用多种基因特异标志跟踪检测小儿微小残留白血病研究

应用PCR等分子生物学技术,对65例儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)进行抗原受体基因(TCRγ、TCRδ和IgH)重排和肿瘤融合基因(SIL-TAL-1,BCR-ABL,AF4/HRX,和HRX/ENL)     

AgNOR染色在急性白血病诊断中的应用

目的研究AgNOR染色在急性白血病诊断中的应用价值.方法 用银染技术观察40例急性淋巴细胞白血病(ALL),其中ALL1 28例,ALL2 12例,30例急性非淋巴细胞白血病(ANLL)及20例正常对照组的细胞AgNOR数/核及性状.结果 ANLL平均AgNOR/核计数显著高于ALL(P<0.01),ALL2平均AgNOR/核计数显著高于ALL1(P<0.01).ALL AgNOR以点状分布为主.ANLL以块状分布为主,两者比较差异有极显著性意义(P<0.001).白血病组显著高于正常对照组(P<0.01). 结论AgNOR观察有助于急性白血病诊断及鉴别诊断.     

T-NHL TCRγ多重引物基因重排PCR参数优化

目的 优化PCR多个参数分析福尔马林固定石蜡包埋标本中T细胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)的TCRγ多重引物基因重排,以建立PCR扩增中不同变量性能改变的重要意义.方法 优化PCR循环参数,采用优化的PCR方法检测53例T-NHL的TCRγ基因重排率.结果53例T-NHL中,采用优化的TCRγ多重引物克隆性TCRγ基因重排检测率为62.3%.结论 实验性的调整PCR参数对FFPE组织的克隆分析,可能会有很大的价值.     

儿童急性淋巴细胞性白血病MRL与mdr 1基因表达动态监测

目的　探讨儿童急性淋巴细胞性白血病 (ALL)中 ,微小残留白血病 (MRL)与mdr 1基因表达动态监测的临床意义。方法　对 35例ALL患儿不同病期骨髓标本进行PCR或巢式PCR检测IgH和TCRVδ2 Dδ3 基因重排 ,同时应用半定量RT PCR检测mdr 1基因表达。结果　随着完全缓解期延续 ,IgH或 /和Vδ2 Dδ3 基因重排检出率逐渐下降 ,而mdr 1基因阳性表达检出率增加 ,IgH或 /和Vδ2 Dδ3 基因重排持续检测阳性或mdr 1表达水平增高者易复发。结论　动态监测MRL和mdr 1基因表达可判断疗效和预知复发 ,且较一次单独检测更为重要。当IgH或 /和Vδ2 Dδ3 转阴后检测mdr 1基因表达可作为预知复发的一个辅助指标     

PCR-SSCP分析急性淋巴细胞白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变及意义

目的研究急性淋巴细胞白血病（ALL）患者DNA水平FLT3基因及其内部串联重复（ITD）突变情况.方法采用多聚酶链反应（PCR）联合单链构象多态性（SSCP）方法检测63例不同免疫分型ALL患者DNA水平FLT3基因及FLT3/ITD基因突变.结果63例ALL患者经PCR扩增发现41例（65.1%）FLT3基因检测阳性,其中前前B细胞ALL、前B细胞ALL、成熟B细胞ALL及T细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率分别为93.3%（14/15）,77.8%（14/18）,41.7%（5/12）和28.6%（4/14）;前前B细胞ALL和前B细胞患者ALL FLT3基因检测阳性率84.8%,显著高于成熟B细胞ALL（41.7%,P＜0.005）;B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率为73.3%,显著高于T细胞系ALL患者（28.6%,P＜0.001）.63例ALL患者中仅有2例（3.2%）出现FLT3/ITD基因突变,均为伴有两种髓系抗原表达、免疫学检查诊断为急性混合细胞白血病患者,均伴有外周血高白细胞数、骨髓中高白血病细胞比例,预后较差.结论B细胞系ALL和T细胞系ALL患者DNA水平均可检测出FLT3基因,但B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率显著高于T细胞系ALL;B细胞系ALL中细胞分化越成熟则FLT3基因检测率阳性越低.ALL患者一般不出现FLT3/ITD基因突变,FLT3/ITD基因突变检测可能有助于急性白血病基因分型及预后判断.     

急性白血病患者p53和MGMT基因突变检测

目的：研究p53和MGMT基因突变在急性白血病发病中的意衣以及p53基因突变与MGMT基因突变的关系。方法：应用聚合酶链反应－单莲构象多态性（PCR－SSCP）技术，对36例急性非淋巴细胞白血病（ANLL），26例急性淋巴细胞白血病（ALL）和23例健康对照组骨髓细胞的p53和MGMT基因突变进行了分析。结果：p53基因突变率在ANLL中为16．7％、ALL中为19．2％，MGMT基因突变率在ANLL中为13．9％、ALL中为15．4％；62例急性白血病中有4例为p53和MGMT2个基因同时发生突变；正常对照组均未发生p53和MGMT基因突变。结论：p53和MGMT基因突变在急性白血病发生与发展中起到一定作用，急性白血病中p53基因突变和MGMT基因突变密切相关。     

多药耐药蛋白P170在儿童初发急性白血病患者骨髓中的表达及意义

目的检测儿童急性白血病初发时骨髓中多药耐药蛋白P170的表达,分析P170表达与患儿多药耐药的关系及临床意义。方法 66例儿童急性白血病患者中男性40例,女性26例;急性淋巴细胞性白血病(ALL)45例,急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)21例;根据疗效分为初治敏感组(n=40)和难治耐药组(n=26)。采用流式细胞术检测骨髓细胞多药耐药蛋白P170的相对表达率,并分析P170表达阳性率与耐药性和性别间的关系。结果难治耐药组的急性白血病患儿P170表达阳性率显著高于初治敏感组(65.4%和37.5%,P<0.05);但ANLL组与ALL组、男性组与女性组的P170表达阳性率比较差异均无统计学意义(44.4%和57.1%,P>0.05;45.0%和46.2%,P>0.05)。结论儿童急性白血病患者初发时P170表达阳性者易产生多药耐药,预后可能较差;P170在儿童急性白血病的不同分型和性别间的表达无差异。