载脂蛋白B与载脂蛋白A-I比值与糖尿病合并冠心病关系的研究

目的 评估血清载脂蛋白Apo B/Apo A-I在预测糖尿病患者冠心病方面的效果。方法 共2300例接受冠状动脉造影的患者入选此项研究。根据糖尿病诊断标准分为糖尿病组和非糖尿病组,同时建立冠心病（coronary artery disease, CAD）和非冠心病亚组。CAD诊断以冠状动脉造影为金标准。抽取研究对象空腹血行相关血脂指标检测并进行分析与统计。结果 在非糖尿病组中,根据几种主要心血管危险因素如年龄,性别,高血压,吸烟,三酰甘油(triglyceride, TG),总胆固醇(total cholesterol, TC)和低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)调整后,模型中的高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL),载脂蛋白A-I（Apo A-I）和载脂蛋白B（Apo B）/ Apo A-I在ROC曲线下的区域分别为0.707,0.703和0.710。在糖尿病组,HDL,Apo A-I和ApoB/Apo A-I的AUC分别为0.684,0.693,0.701。在预测CAD方面均具有统计学意义（P<0.001）。HDL,Apo A-I,Apo B/Apo A-I与冠状动脉病变的数量增加显著相关。非糖尿病组中Apo B/Apo A-I的相关系数最高,为0.176（P<0.001）,糖尿病组中Apo A-I的相关系数最高,为-0.239（P<0.001）ApoB/Apo A-I的系数为0.138（P=0.002）。结论 糖尿病人群中Apo B/Apo A-I可以独立于其他血脂指标对冠心病及冠状动脉病变数量有良好的预测价值。     

单向火箭免疫电泳测定大鼠血清载脂蛋白AI浓度

单向火箭免疫电泳测定大鼠血清载脂蛋白AI(Apo AI)浓度,操作简单,定量准确。待测样品采用9M脲致变性使抗原决定簇暴露,减少了样品处理时间,得到较好的测定结果。用此法测得雄性和雌性SD大鼠血清Apo AI浓度分别为45.76±6.0mg/dl(n=10)、60.60±9.4mg/dl(n=10)。批内CV为4％,批间CV为7％。正常大鼠注射胰岛素,血清Apo AI浓度明显降低。     

大鼠血清ApoA-I、LDL的分离和纯化

用沉淀法分离大鼠血清高密度脂蛋白(HDL),SephadexG—200层析纯化;将脱脂的HDL(ApoHDL)通过SephadexG—200柱层析得到单一的载脂蛋白A-I(ApoA-1)。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)测定该ApoA-Ⅰ的表观分子量为27000道尔顿,其免疫学特征及化学组成分析结果与文献报道一致。同时用超速离心法分离制备出纯化的大鼠血清低密度脂蛋白(LDL)。     

人血清载脂蛋白B_(100)火箭免疫电泳测定法

利用顺序超速离心法从正常人血浆分离密度为1.030～1.050g/ml 的低密度脂蛋白免疫家兔获得单价抗载脂蛋白B_(100)血清,在国内建立了人血清载脂蛋白B_(100)火箭免疫电泳测定法。本法灵敏、特异,重复性好。测定载脂蛋白B_(100)的范围为100～880ng。批间重复及批内重复变异系数分别为 2.1～2.4％及1.2～2.7％。回收率为103.4±3.4％。     

人血清载脂蛋白E火箭电泳测定法

Apo E was purified from the very low density lipoprotein (VLDL) of normal and hypertriglyceridemic subjects by Sephadex G-75, heparin-Sepharose 4B affinity chromatography, and preparative SDS polyacrylamide gel electrophoresis. The antisera were produced by injecting apo E into goats. With apo E antisera, Rocket immuno-electrophoretic method was developed to quantitate apo E levels in normal and hypertriglyceridemic human serum. The detection limit was 5.5 ng apo E. The coefficients of variation of intra- and interassay were 2.6% and 5.2%, respectively. The serum apo E level of 50 normal lipodemic subjects in Chengdu area was 4.7 +/- 1.2 mg/dl.     

4种方法检测血浆载脂蛋白A-I结果的比较

用脱脂RID、不脱脂RID、EIA、ITA 4种方法对60例正常人、79例非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)患者和39例冠心病(CHD)患者同时进行了血浆脂蛋白(apo)A-Ⅰ水平的测定。结果显示,正常人中apoA-Ⅰ水平脱脂RID法与不脱脂RID、EIA、ITA有极密切相关,r值分别为0.8091、0.6430、0.6281;脱脂RID法所测正常人血浆apoA-Ⅰ水平为152.58±18.51 mg/dl,非常显著高于其它3种方法,且脱脂RID法所测apoA-Ⅰ水平在三组间有极显著差异。表明脱脂RID法检测血浆apoA-Ⅰ水平对诊断糖尿病心血管并发症、冠心病有特异性。     

人血清载脂蛋白E火箭电泳测定法

本文报道一种简便、灵敏、特异的人血清载脂蛋白E(apoE)的火箭免疫电泳测定法。本法用自制的羊抗人apoE血清及1.5％的琼脂糖凝胶制成抗体凝胶板,血清apoE含量在1.1～8.9mg/dl范围内,在一定条件下电泳,其火箭峰高与抗原浓度成比例。最低检测量为5.5ng,板内及板间变异系数分别为2.6％和5.2％;回收率为94.0±3.9％(n=6);用此法测得成都地区血脂正常的成年人血清apoE的含量为4.7±1.2mg/dl(n=50)。     

人血清载脂蛋白A-I的分离纯化及其抗血清的制备

用超速离心法分得高密度脂蛋白,经琼脂糖平板电泳检定为一条区带。用甲醇/氯仿(1:2V/V)脱脂。然后经SephadexG-150层析及DEAE-纤维素(DE-52)离子交换柱所得蛋白在280nm有一吸收峰。做PAGE仅出现一条区带,电泳双扩散未见交叉沉淀线,说明所得载脂蛋白A-I(apoA-I)是纯的。PAGE测得分子量为28,000,其氯基酸组成与文献报道基本一致。用纯化的apoA-I免疫新西兰兔,获得效价为1:32的特异性抗人血清apoA-I抗血清。     

黄牛血清载脂蛋白A-Ⅰ的分离、提纯及鉴定

本文采用区带密度梯度离心,国内首次分离得到黄牛纯化的高密度脂蛋白(HDL)。然后用Sephadex G-200凝胶过滤,可将其中的载脂蛋白分为3个组分。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,确认组分Ⅱ为载脂蛋白A-Ⅰ(ApoA-Ⅰ)占HDL的80～90%。测定其分子量为27040道尔顿,整个氨基酸(AA)组成中不含半胱氨酸,其N端是天冬氨酸。本文确认了黄牛是含ApoA-Ⅰ丰富的动物之一。同时也为分离、提纯HDL和ApoA-Ⅰ提供了可靠易行的方法。     

血浆C反应蛋白和载脂蛋白A-I与冠状动脉病变的相关性研究

目的 探讨冠心病患者血浆C反应蛋白(CRP)和载脂蛋白A-I(ApoA-I)水平与冠状动脉病变的相关性.方法 91例经冠状动脉造影确诊的冠心病患者(冠心病组).根据冠状动脉病变支数分为单支病变亚组(35例)、双支病变亚组(36例)和多支病变亚组(20例);另选43例正常健康者作为对照组.分别检测入选人群的血浆CRP和ApoA-I水平.结果 ①与对照组比较,冠心病组CRP[单支病变组:(8±5)mg/L;双支病变组:(10±5)mg/L;多支病变组:(10±5)mg/L];水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);血浆ApoA-I[单支病变组:(1.33±0.33)g/L;双支病变组:(1.26±0.32)g/L;多支病变组:1.20±0.31g/L];水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).②冠心病组各亚组间比较,血浆CRP水平随冠状动脉病变支数的增加而升高,血浆ApoA-I水平在冠状动脉病变支数少的较低.各亚组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 血浆CRP和ApoA-I水平在冠心病患者中明显区别,并与冠状动脉病变程度密切相关,提示上述指标可能共同参与或介导了动脉粥样硬化的形成,并可用于预测动脉粥样硬化的严重程度.     

载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体结合脂质后抗炎性能的变化

目的 探讨载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体重组高密度脂蛋白抗炎能力.方法 应用脂多糖诱导构建内毒素血症小鼠模型,选取3种半胱氨酸突变体[A-I(S52C)、A-I(K107C)、A-I(R173C)]及野生型载脂蛋白A-I结合二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)构建重组高密度脂蛋白(rHDL52、rHDL107、rHDL173、rHDLwt)注射小鼠作为干预组(每组10只小鼠),以脂多糖组(9只小鼠)、生理盐水组(5只小鼠)作为对照.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测4种重组高密度脂蛋白干预后对肿瘤坏死因子(TNF)α,白细胞介素(IL)1β和IL-6的影响.病理检测各组小鼠肺组织.结果 小鼠注射后24 h,rHDL52组血清中TNF-α和IL-1β明显低于rHDLwt组[(39.66±2.44)pg/ml比(135.28±12.84)pg/ml;(66.83 ±6.24)pg/ml比(82.00±8.19)pg/ml,均P＜0.05].常规病理分析显示,rHDL52比rHDL107、rHDL173及rHDLwt更能够降低炎症细胞的浸润,保护肺器官免受损伤.结论 rHDL52拥有较野生型载脂蛋白更强的抗炎能力.     

载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体结合脂质后抗炎性能的变化

目的 探讨载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体重组高密度脂蛋白抗炎能力.方法 应用脂多糖诱导构建内毒素血症小鼠模型,选取3种半胱氨酸突变体[A-I(S52C)、A-I(K107C)、A-I(R173C)]及野生型载脂蛋白A-I结合二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)构建重组高密度脂蛋白(rHDL52、rHDL107、rHDL173、rHDLwt)注射小鼠作为干预组(每组10只小鼠),以脂多糖组(9只小鼠)、生理盐水组(5只小鼠)作为对照.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测4种重组高密度脂蛋白干预后对肿瘤坏死因子(TNF)α,白细胞介素(IL)1β和IL-6的影响.病理检测各组小鼠肺组织.结果 小鼠注射后24 h,rHDL52组血清中TNF-α和IL-1β明显低于rHDLwt组[(39.66±2.44)pg/ml比(135.28±12.84)pg/ml;(66.83 ±6.24)pg/ml比(82.00±8.19)pg/ml,均P＜0.05].常规病理分析显示,rHDL52比rHDL107、rHDL173及rHDLwt更能够降低炎症细胞的浸润,保护肺器官免受损伤.结论 rHDL52拥有较野生型载脂蛋白更强的抗炎能力.     

载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体结合脂质后抗炎性能的变化

目的 探讨载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体重组高密度脂蛋白抗炎能力.方法 应用脂多糖诱导构建内毒素血症小鼠模型,选取3种半胱氨酸突变体[A-I(S52C)、A-I(K107C)、A-I(R173C)]及野生型载脂蛋白A-I结合二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)构建重组高密度脂蛋白(rHDL52、rHDL107、rHDL173、rHDLwt)注射小鼠作为干预组(每组10只小鼠),以脂多糖组(9只小鼠)、生理盐水组(5只小鼠)作为对照.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测4种重组高密度脂蛋白干预后对肿瘤坏死因子(TNF)α,白细胞介素(IL)1β和IL-6的影响.病理检测各组小鼠肺组织.结果 小鼠注射后24 h,rHDL52组血清中TNF-α和IL-1β明显低于rHDLwt组[(39.66±2.44)pg/ml比(135.28±12.84)pg/ml;(66.83 ±6.24)pg/ml比(82.00±8.19)pg/ml,均P＜0.05].常规病理分析显示,rHDL52比rHDL107、rHDL173及rHDLwt更能够降低炎症细胞的浸润,保护肺器官免受损伤.结论 rHDL52拥有较野生型载脂蛋白更强的抗炎能力.     

人血浆载脂蛋白E的分离及纯化

本文建立了一种快速、简便、较大量分离载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）方法。其优点：①选用高脂血症病人血浆，因ＡｐｏＥ的含量高，来源方便，故克服了分离提纯ＡｐｏＥ时因含量少，不易分离提纯的困难；②采用不连续密度梯度直立头超速离心法，此法只需加两种不同密度的溶液，比经典地超速离心法减少两种不同密度的溶液，故操作方便，且离心时间比经典方法（２４小时）缩短了十分之九；③获得极低密度脂蛋白中的载脂蛋白（ＡｐｏＶＬＤＬ），用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析（１．１×１００ｃｍ）分离提纯得到的ＡｐｏＥ，即是纯的ＡｐｏＥ，且避免了柱太长、不便操作的麻烦。纯化了的ＡｐｏＥ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中显示一条带，测得分子量为３．８ｋＤａ。     

人载脂蛋白H的分离、纯化和鉴定

 目的 探索一种相对简便而高效的方法,从人血浆中分离、纯化载脂蛋白H。方法 用高氯酸预处理血浆,以离子交换色谱和亲和色谱相结合的方法进行蛋白质的分离和纯化。用SDS-聚丙烯凝胶电泳和Western blot对纯化产品进行鉴定。用BCA蛋白质定量测定试剂盒测定获得载脂蛋白H的量。结果 连续分离、纯化3次,每次获得的产品纯度均大于98%,且经Western blot分析均能与抗β₂-Glycoprotein I单克隆抗体呈阳性反应。3次纯化共获得apoH 12.56 mg,平均21 mg/L。结论 本方法重复性好、可靠性高,较传统方法更为简便和经济。     

载脂蛋白A-I、载脂蛋白B与动脉粥样硬化的相关性研究

载脂蛋白A-I(apoA-I)是高密度脂蛋白颗粒中主要的蛋白质,载脂蛋白B(apoB)为低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、中等密度脂蛋白、脂蛋白a与乳糜微粒的主要构成部分。大量实验证明apoA-I与动脉粥样硬化呈负相关,apoB、apoB/apoA-I则与之呈正相关。现就apoA-I、apoB与动脉粥样硬化的相关性研究进展做一综述。     

肾病患者血清载脂蛋白A1、B、高密度脂蛋白胆固醇水平的测定价值

目的为探讨肾病患者继发动脉粥样硬化性心血管合并症的危险因素.方法用免疫比浊法和直接测定法测定27例无合并症的肾病患者和36例健康人的血清载脂蛋白(apo)A