转移生长因子－β对骨髓基质细胞生长影响的实验研究

目的　研究体外培养及转移生长因子-β(TGF-β))对骨髓基质细胞生长的影响。方法　抽取兔骨髓基质细胞体外培养,倒置显微镜动态观察,并在培养液中加入TGF-β。结果　从原代培养细胞(P0)中观察到细胞集落的形态有明显差异,提示骨髓基质细胞是一个由多种细胞组成的混合体。经TGF-β处理的细胞,生长速度明显增快,传30代以上仍能保持较活跃的增殖能力。而未经TGF-β处理的细胞,活跃增殖能力约只能保持10～15代,随后即发生退化。结论　TGF-β能促进骨髓基质细胞增殖并较长期保持其生物活性。     

体外培养及成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞生长的影响

目的　研究体外培养及成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞生长的影响。方法　抽取兔骨髓基质细胞体外培养 ,倒置显微镜动态观察 ,从原代培养 (P0 )中观察到细胞集落的形态有明显差异 ,提示骨髓基质细胞是一个由多种细胞组成的混合体。在培养液中加入碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF ,5ng/ml)。 结果　第一代细胞(P1)的生长速度增至对照组的 1.5倍。而未经bFGF处理的细胞活跃增殖能力只能保持 4～ 5代 ,随后即发生退化 ;而经bFGF处理的细胞 ,传 10代以上仍能保持活跃的增殖能力。结论　bFGF能促进骨髓基质细胞增殖并长期保持其生物活性。     

体外培养及成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞生长的 …

目的 研究体外培养及成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞生长的影响。方法 抽取兔骨髓基质细胞体外培养,倒置显微镜动态观察,从原代培养（Ｐ０）中观察到细胞集落的形态有明显差异,提示骨髓基质细胞是一个由多样细胞组成的混合体。在培养液中加入碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ,５ｎｇ／ｍｌ）。结果 第一代细胞（Ｐ１）的生长速度增至对照组的１．５倍。而未经ｂＦＧＦ处理的细胞活跃增殖能力只能保持４～５代,随后即发生     

细胞密度和血清对小鼠骨髓基质细胞体外生长的影响

目的:研究不同细胞接种密度、血清浓度及种类对小鼠骨髓基质细胞体外生长的影响.方法:设置不同细胞密度、不同种类血清及血清量的培养体系,观察细胞贴壁情况,细胞80%贴壁时间,用台盼蓝排斥试验检测活细胞率,MTT法检测细胞增殖情况,HE染色光镜下观察细胞形态.结果:原代全血培养的小鼠骨髓基质细胞适宜接种密度为1～4×106/ml;细胞最适生长的血清浓度为10%～20%;与胎牛血清相比马血清对小鼠骨髓基质细胞的促增殖作用更好(P＜0.05);不同种类血清培养的小鼠骨髓基质细胞类型有一定差异(P＜0.05).结论:不同细胞接种密度及血清浓度和血清种类对小鼠骨髓基质细胞体外生长有一定影响.     

骨髓基质细胞与人脐血基质细胞表达造血生长因子的实验研究

目的在分子生物学水平上探讨体外培养的骨髓基质细胞与人脐血基质细胞表达TPO、GM-CSF、SCF的mRNA的能力的差异.方法收集培养28d的骨髓基质细胞与人脐血基质细胞,采用RT-PCR方法在mRNA水平上分析其造血生长因子GM-CSF、SCF、TPO的表达,比较二者表达TPO、GM-CSF、SCF等造血生长因子的mRNA能力的差异.结果体外培养的人脐血基质细胞与骨髓基质细胞均能表达:(1)TPO的mRNA,人脐血基质细胞表达能力强于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为1.57;(2)SCF的mRNA,人脐血基质细胞表达能力弱于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为0.83;(3)GM-CSF的mRNA,人脐血基质细胞表达能力弱于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为0.68.结论人脐血基质细胞和骨髓基质细胞均可以表达造血生长因子TPO、GM-CSF、SCF的mRNA,具有支持调控造血的物质基础.     

骨髓基质细胞体外成骨的实验研究

目的 研究骨髓基质细胞体外培养的成骨能力,为细胞移植修复骨缺损提供一条新途径。方法 取新西兰大白兔股骨大转子处骨髓,进行体外培养,纯化,10－14天后进行转代。培养后的细胞经倒置显微镜,透射地镜,钙染色,碱性磷酸酶染色等方法进行观察。结果 培养纯化后的细胞呈梭形,多角形,电镜显示具有分泌功能旺盛的结构,碱性磷酸酶染色强阳性,培养3－4周后,能形成钙结节。细胞在体外能多次传代,维持成骨表型。结论 骨髓基质细胞在体外培养纯化后,骨与成骨细胞相似的形态结构和生物学特性,能形成钙化的骨样组织。     

体外培养人骨髓基质细胞的超微结构

体外培养人骨髓基质细胞的组成及功能与人体造血微环境相似，可作为研究人体造血微环境的良好模型。选择体外培养第４周的人周髓基质细胞层，经固定、脱水、原位包埋、超薄切片染色后电镜观察。结果：可见基质层由３类基质细胞及ＥＣＭ组成。     

儿童骨髓基质细胞体外培养

目的 探讨儿童骨髓基质细胞体外培养条件,为儿童骨组织工程研究选择种子细胞。方法 将儿童髂骨内骨髓分别采用密度梯度离心法和全骨髓法培养,待细胞长满培养瓶后传代,选取正常生长骨髓基质细胞第3代绘制生长曲线并测定细胞内骨钙素(OCN)及培养液中碱性磷酸酶(ALP)含量。培养期间用倒置相差显微镜观察细胞形态。结果 原代儿童骨髓基质细胞呈长梭形、三角形或多角形,存在有集落样生长特性,传代后细胞形态无明显变化,且生长、增殖稳定,细胞内OCN及培养液中ALP含量在1周左右达到高峰。结论 采用密度梯度离心法和全骨髓法获得儿童骨髓基质细胞,经培养、传代后,可以得到大量稳定增殖的骨组织工程种子细胞。     

骨髓基质细胞对背根神经节细胞生长的影响

目的:体外研究骨髓基质细胞(Bonemarrowstromalcells,MSCs)对背根神经节细胞生长的影响。方法:采用差速贴壁的方法分离、培养大鼠骨髓基质细胞。经transwell膜与新生大鼠背根神经节细胞联合培养。利用MTT、细胞免疫荧光组织化学方法检测骨髓基质细胞对背根神经节细胞生长的影响。结果:联合培养后的新生大鼠背根神经节细胞活力增加,神经突起增长。结论:骨髓基质细胞对于背根神经节细胞的活力以及神经突起生长有一定的促进作用。     

不同浓度碱性成纤维细胞生长因子对兔骨髓基质细胞的影响

目的：观察骨髓基质细胞的培养及不同浓度碱性成纤维生长因子（bFGF）对其生长的影响。方法：采用全麻下抽取兔股骨骨髓，经体外培养的方法并在培养注保加入４种不同浓度的bFGF(0,60,120,240ng/ml)培养后经倒置显微镜观察；并用试剂盒测定细胞碱性磷酸酶的含量。结果：６０、１２０ng/ml的bFGF能明显促进骨髓基质细胞的生长（Ｐ＜0．01），其余两组无明显差异。而4组之间的细胞碱性磷酸酶含量在3天无明显差异，6天时加入bFGF组的细胞碱性磷酸酶含量明显下降。结论：bFGF对骨髓基质细胞的影响是复杂和多方面的；不同剂量浓度对骨髓基质细胞生长的影响亦不一样，并不呈正相关，合适的有效浓度为60－120ng/ml。     

体外培养骨髓基质细胞修复关节软骨缺损的实验研究

骨关节病、创伤性关节炎等均可造成关节软骨的破坏。由于软骨再生能力非常有限．软骨缺损修复一直是一个难题。多年以来，利用软骨移植、骨膜移植、软骨细胞移植等都未能取得良好的疗效，同时也存在着诸如供体来源有限、免疫排斥反应和移植物易退化等缺点，临床上不能广泛开展。关节形成术虽在一定程度上缓解了患者的痛苦，但该术创伤大、费用高、存在感染、植入关节松动等远近期并发症，因而存在较大的局限性。近年来组织工程学技术的发展为软骨修复提供了新方法。     

骨髓基质细胞体外培养的实验研究

骨髓基质细胞(bone manow stromal cells，BMSCs）是全能干细胞分化而来的非造血系干细胞，具有多向分化潜能。近来研究表明，体外可以诱导BMSCs分化为神经细胞或神经元样细胞，在常用的诱导剂中，多选择二甲基亚砜等抗氧化剂和多种细胞因子作为诱导剂。本实验把中药丹参作为一种诱导剂，目的在于寻求一种稳定的、经济的骨髓基质细胞的体外诱导方法。     

转化生长因子β1基因对骨髓基质干细胞增殖分化的影响

目的 观察转化生长因子β1（TGF－β1）基因能否转入骨髓基质干细胞（MSCs)，并探讨经TGF－β1基因转染后的MSCs增殖和分化情况。方法 取新西兰雄性大耳白兔的骨髓，得骨髓源MSCs体外培养。将重组TGF－β1和空载pcD-NA3基因分别转染MSCs后，免疫组化（SABC）法检测TGF－β1转染是否成功，用透射电镜和流式细胞仪观察两组MSCs的增殖和分化情况。结果 SABC法证明TGF－β1瞬间转染成功；转染48h后，实验组MSCs增殖较对照组显著；实验组MSCs具有一定的分化趋势。结论 重组TGF－β1基因转入骨髓源MSCs的方法是可行的，瞬间TGF－β1转染对MSCs的增殖和分化有显著促进作用。     

静脉注射骨髓基质细胞对脑梗死大鼠血管内皮生长因子表达的研究

目的：观察静脉注射的骨髓基质细胞（MSC）在大脑中动脉闭塞（MCAO）再灌注模型大鼠脑内分布及血管内皮生长因子（VEGF）表达。方法：采用Longa线栓法建立Wistar大鼠MCAO再灌注模型；从大鼠后肢骨髓分离、培养MSc；CD34、CD44、CD54免疫细胞化学染色鉴定MSC；5-溴脱氧尿苷（BrdU）标记的MSC注射给动物模型，免疫组织化学染色观察BrdU阳性细胞分布及VEGF表达。结果：体外培养的MSC具有多态性和贴壁生长特性，多次传代后细胞生物学特性没有明显改变；MSC表达CD34（-）、CD44（＋）、CD54（＋）；治疗组BrdU阳性细胞主要分布于梗死灶周围。VEGF表达比对照组多（P〈0．05）。结论：静脉注射的MSC能游走、迁移至太鼠缺血脑组织并存活，同时促进VEGF表达。     

1,25—VitD3在骨髓基质细胞体外培养中的作用

用条件培养液对骨髓基质细胞进行体外培养，通过倒置显微镜观察，组织化学染色，分析１，２５－ＶｉｔＤ３促进骨髓基质细胞形成成纤维细胞集落的作用，结果表明：１，２５－ＶｉｔＤ３有明显促骨髓基质细胞增殖作用，但主要表现在体外培养中的非贴壁细胞组份（Ｐ〈０．０１），对贴壁细胞组份无明显增殖作用（Ｐ〉０．０５）。     

人血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠骨髓基质细胞的实验研究

目的探讨对大鼠骨髓基质细胞进行重组人血管内皮细胞生长因子(VEGF)165基因修饰的可行性。方法采用全骨髓细胞贴壁培养法获得稳定的大鼠骨髓基质细胞,分别在脂质体LipofectamineTM2000和新型的阳离子聚合物Sofast介导下行pcDNA3.1-VEGF165转染骨髓基质细胞,在倒置显微镜下观察转染后细胞形态和生长情况的变化,通过免疫细胞化学鉴定VEGF在细胞中的表达情况。结果脂质体LipofectaminTM和新型阳离子聚合物Sofast介导转染的阳性细胞率分别为11.34%和11.42%,两者无明显差异。而细胞存活率分别为74.60%和85.88%,后者稍高于前者(P<0.05)。结论真核表达载体pcDNA3.1-VEGF165可以成功地在骨髓基质细胞中表达,新型阳离子聚合物Sofast的转染效率与传统的脂质体无明显差异,而细胞毒性略小于传统的脂质体。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养的兔骨髓基质细胞生长特性的影响

目的：研究骨髓基质细胞（BMSC）在体外培养条件下分化为成骨细胞的能力,及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对其贴附、增殖、分化的影响。方法：将各组BMSC传代后加入bFGF,其浓度分别为0、5、10、50、100、200?ng/ml,用倒置相差显微镜、电镜、四唑盐比色法、碱性磷酸酶（ALP）染色、钙染色和电子探针等方法观察其形态、贴附、生长增殖活性、分化成熟和体外钙化的状况。结果：经10?ng/ml bFGF诱导后,BMSC贴附细胞数量明显增加。当100?ng/ml时,bFGF对BMSC的促增殖作用达到最大值。当加入bFGF时,ALP染色阳性率降低,当bFGF浓度为100?μg/L时阳性率最低（P<0.01）。传代细胞连续培养30?d后钙染色结果呈阳性,电子探针检测矿化区的Ca/P值与羟基磷灰石结晶中Ca/P值相符。电镜观察可见培养的细胞具有典型的成骨细胞形态特征,并能产生胶原纤维。结论：BMSC在体外培养条件下具有分化为成骨细胞的能力,bFGF能够促进细胞的贴壁和增殖,但对其分化成熟具有抑制作用。     

诱导兔骨髓基质细胞向神经干细胞分化的初步实验研究

目的：观察兔骨髓基质细胞体外培养的生长行为及增殖、分化情况，探讨由骨髓分离培养神经干细胞的可行性和有效性。方法：无菌条件下行骨穿术，密度梯度离心分离获取骨髓基质细胞，利用多种增殖、分化诱导因子和神经干细胞培养液进行培养、分化诱导，用免疫细胞化学方法进行鉴定。结朵：骨髓基质细胞在体外培养中能形成NESTIN抗原阳性的细胞克隆团，进一步分化，部分细胞胞体增大并出芽，逐渐发育成为较成熟的长突起细胞，长突起相互连接、交织成网并建立纤维联系。结论：骨髓基质细胞具有较强的自我更新能力和多向分化潜能，易于取材、体外培养和增殖，在一定诱导条件下可以生成神经干细胞。     

人脐血基质细胞自发分泌多种造血生长因子的实验研究

目的探讨体外培养的人脐血基质细胞分泌血小板生成素(thrombopoietin,TPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、干细胞生长因子(stem cell factor,SCF)的能力.方法留取不同培养时相点的培养液上清,ELISA法检测上清中TPO、GM-CSF、SCF的浓度,并与骨髓基质细胞的培养上清液对照比较其特点.结果人脐血基质细胞和骨髓基质细胞均可分泌TPO、GM-CSF和SCF等造血生长因子,二者造血生长因子的分泌随着培养时间的延长而逐渐下降,其中人脐血基质细胞分泌TPO和SCF的高峰期出现在第7天,而GM-CSF的分泌则无高峰期的出现;通过与骨髓基质细胞分泌三种造血生长因子量进行对比发现,人脐血基质细胞SCF和GM-CSF的分泌量低于骨髓基质细胞,而TPO的分泌高于同期培养的骨髓基质细胞.结论人脐血基质细胞与骨髓基质细胞一样具有分泌造血生长因子,支持调控造血的作用.     

成纤维细胞生长因子对大鼠骨髓基质细胞诱导成骨的影响

目的 :探讨在体外培养中成纤维细胞生长因子(FGF)对大鼠骨髓基质细胞诱导成骨的影响。方法 :用IMDM培养基分离、培养出大鼠胫、股骨单层贴壁的骨髓基质细胞 ;用地塞米松 (Dex)、—甘油磷酸钠、抗坏血栓 (VitC)联合诱导培养 ;然后分 :A组 ,单纯诱导 ;B～E组 ,分别加入不同浓度的FGF对骨髓基质细胞 (MSC)的诱导分化过程干涉 ;选择 2 ,8,14 ,2 0 ,2 6d时间点比较各组的增殖指数、碱性磷酸酶活性、骨钙素含量及钙化结节形成率。结果 :当加入浓度为2 ,4 ,6 ,8mg·L-1的FGF后 ,培养细胞的碱性磷酸酶活性依次降低 ,分别为 :(82± 5 ,72± 5 ,5 8± 4 ,4 8± 4 )nkat·L-1,且 4组数据间有明显差异性 (P <0 0 5 ) ,但钙化结节形成率及骨钙素含量依次增加 ,分别为 :(1 998± 0 2 2 3,2 5 79± 0 2 38,3 0 6 7± 0 2 5 9,3 70 1± 0 2 93)ng·L-1,且 4组数据间有明显差异性 (P <0 0 5 ) .结论 :FGF浓度为 2mg·L-1时 ,ALP活性最高 ,钙化结节形成速度及骨钙素含量最小 ,且三者有明显剂量依赖性 (p <0 0 5 ) .