肝细胞生长因子在纤维肉瘤细胞血行转移中的作用

目的：评价肝细胞生长因子（HGF）在纤维肉瘤细胞血行转移中的作用。方法：利用体 外肿瘤细胞血管内游走及血管外游走模型，定量地评价纤维肉瘤细胞(HT1080)的血行转移情 况。结果：HT1080能穿过基底膜和血管内皮细胞游走至血管内，并可通过内皮细胞间缝隙游 走至血管外基质；HT1080经HGF预处理后，血管内和血管外游走数量均明显高于对照组(P<0.01)。结论：HGF能够增强纤维肉瘤细胞的运动侵袭能力、加速血行转移。     

肝细胞生长因子对肺癌细胞血管外游走的影响

目的:评价肝细胞生长因子(HGF)对肺癌细胞血管外游走的影响.方法:利用体外癌细胞血管外游走模型,观察VMRC-LCD、LK-2、RERF-LC-KJ等3种肺癌细胞的血管外游走状况,并计算游走至血管外的肺癌细胞数.结果:LK-2和RERF-LC-KJ可以通过血管内皮细胞间缝隙游走至血管外、肝细胞生长因子能够刺激肺癌细胞更多地浸润至血管外基质.结论:肝细胞生长因子能增强肺癌细胞的运动能力,加速肺癌细胞的血管外游走.     

内皮细胞Rho/Rho激酶介导纤维肉瘤细胞血管外游走的机制

目的 研究内皮细胞Rho/Rho激酶在纤维肉瘤细胞血管外游走过程中的调控机制.方法 采用血管外游走体外模型观察纤维肉瘤细胞血管外游走状况;测定游走过程中血管内皮单细胞层电阻变化;进行细胞内磷酸化实验,利用放射自显影技术评价纤维肉瘤细胞游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平.结果 纤维肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外.在游走过程中跨血管内皮细胞层电阻下降,内皮细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平升高.内皮细胞Rho抑制剂(C3转移酶)、Rho激酶抑制剂(Y-27632)能够抑制上述变化.结论 内皮细胞Rho/Rho激酶可能是通过调节肌球蛋白轻链磷酸化水平诱导纤维肉瘤细胞向血管外游走.     

内皮细胞肌球蛋白轻链激酶调控纤维肉瘤细胞血管外游走的实验研究

目的:阐明内皮细胞肌球蛋白轻链激酶在纤维肉瘤细胞血管外游走过程中的调控机制.方法:利用血管外游走的体外模型,观察纤维肉瘤细胞(HT1080)的血管外游走状况,并测定游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化,进行细胞内磷酸化实验,利用放射自显影技术,评价纤维肉瘤细胞游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平.结果:纤维肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外,并且游走过程中跨血管内皮细胞层的电阻下降,内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平升高.内皮细胞肌球蛋白轻链激酶抑制剂(ML-7)能够抑制上述变化,并具有浓度依赖性.结论:内皮细胞肌球蛋白轻链激酶可通过调控肌球蛋白轻链的磷酸化水平,引起骨架重组、细胞收缩,从而导致纤维肉瘤细胞穿过内皮细胞间缝隙向血管外游走.     

组织因子在纤维肉瘤细胞血管外游走中的作用

目的:评价组织因子对纤维肉瘤细胞血管外游走的影响,明确组织因子与纤维肉瘤细胞血行转移的相关性。方法:应用流式细胞仪检测组织因子在纤维肉瘤细胞(HT1080)的表达情况;在体外模拟肿瘤细胞血管外游走过程,构建充分融合的单层血管内皮细胞及血管外基质,定量评价HT1080向血管外游走的状况。结果:应用流式细胞仪检测出组织因子在HT1080上有强表达;HT1080可以穿过单层血管内皮细胞游走至血管外基质,具有时间依赖性;抗组织因子抗体能够抑制HT1080的血管外游走,并且高浓度的抗TF抗体(20 mg/L)较低浓度的抗TF抗体(5 mg/L)的抑制作用更为明显,差异有显著意义(P<0.05),具有浓度依赖性。结论:组织因子能够促进纤维肉瘤细胞的血管外游走,从而加速纤维肉瘤细胞的血行转移。     

HGF与胶质瘤的血管生成

胶质瘤是中枢神经系统 (CNS)最常见的原发肿瘤 ,作为一种实体性肿瘤 ,其生长有赖于新生血管的持续不断生长。肝细胞生长因子 (hepatic growth factor,HGF)是 80年代中期克隆的亲肝性生长因子 ,对肝实质细胞具有强裂的丝裂原活性。近年研究发现 ,HGF是一种间质来源的多效性生长因子 ,可刺激血管生成 ,及异源性细胞 ,如上皮细胞、癌细胞和肉瘤细胞的增殖和迁移。本文就 HGF在胶质瘤血管生成中的作用做一简要概述。1　肝细胞生长因子 (HGF)1.1　 HGF及其受体 c- Met受体的分子结构 :HGF是一种含有 72 8个氨基酸的糖蛋白 ,由α链 (6 9k…     

HGF经HGF/Akt通路抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖

目的:观察肝细胞生长因子(HGF)对人胆管细胞型肝癌细胞HCCC-9810增殖的影响,并探讨其分子机制?方法:HGF处理HCCC-9810细胞后,用MTT及EdU法检测癌细胞的增殖;siRNA干扰技术抑制HCCC-9810细胞内源性Akt的表达,Western blot检测癌细胞Cyclin D1蛋白表达和Akt磷酸化的变化?结果:50和100 ng/ml HGF显著抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖?Western blot结果显示,HGF处理后的肝癌细胞Akt磷酸化和Cyclin D1表达量明显下调?siRNA干扰Akt的表达,阻断了HGF诱导的Cyclin D1表达量的下调及细胞增殖抑制?结论:HGF通过下调Akt磷酸化和Cyclin D1表达量抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖?     

生长因子对培养肝贮脂细胞增殖与游走的刺激作用

从大鼠肝分离贮脂细胞,培养5d后,分别添加碱性纤维母细胞生长因子(bFGF)、肝细胞生长因子(HGF),观察其对贮脂细胞增殖与游走的影响。结果,对照组贮脂细胞的BrdU标识率为18％,HGF组为17％,bFGF(50 mg/L)组达58％(P<0.01);细胞的游走速度,对照组为6.4μm/h,HGF组为6.5μm/h,bFGF组为16.6μm/h(P<0.01)。显示bFGF能促进贮脂细胞的增殖和游走,但HGF无类似作用。提示肝炎、肝纤维化时,病变局部贮脂细胞的大量积集可能与纤维母细胞生长因子有关。     

HGF及其受体C-Met和VEGF与星形细胞肿瘤恶性程度及其血管生成之间的关系

目的 探索肝细胞生长因子(HGF)及其受体肝细胞因子受体(C-Met)和血管生长因子(VEGF)与星形细胞肿瘤血管生成、病理学分型的关系及HGF、C-Met和VEGF之间的相互关系.方法　应用免疫组织化学(S-P)方法对93例星形细胞瘤组织中的HGF、C-Met、VEGF和微血管密度(MVD)进行检测.应用实时荧光定量...     

肝细胞生长因子促进培养的兔胃粘膜细胞损伤的修复

分离家兔胃粘膜细胞，培养48h细胞融合成片后，造成约2mm2的无细胞区，作为损伤修复模型进行实验。结果：空白对照组约48h完全修复，而肝细胞生长因子（HGF，50μg／L）组24h就修复完毕。其中对照组损伤周边的胃粘膜细胞游走速度为（16．62±0．38）μm／h，而HGF组达（23．90±0．68）μm／L（P＜0．01）；模型制作后12～24h五溴脱氧尿核苷标识率，HGF组（7．6％）约是对照组（0．5％）的15倍。表明HGF有显著促进胃粘膜细胞游走与增殖的功能。提示HGF在胃炎、胃溃疡等疾病的修复过程中可能起着重要作用。     

肝细胞生长因子对非小细胞肺癌侵袭和迁移的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对非小细胞肺癌(NSCLC)转移的影响及其可能的分子机制.方法 以HGF进行诱导培养NSCLC细胞株A549及其耐药株A549/DDP,应用Real time PCR及Western blot检测诱导前后细胞内上皮间质转化(EMT)相关标志物波形蛋白(vimentin)、钙黏蛋白E(E-cadhe-rin)表达的变化.将细胞种植在细胞培养板,设置未外源性添加HGF的为对照组,外源性添加HGF进行细胞培养的为HGF诱导组,应用细胞划痕以及Transwell实验检测诱导前后两株细胞迁移侵袭能力的变化.结果 HGF在A549/DDP细胞的mRNA表达水平较A549细胞显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);提高A549/DDP及A549细胞微环境中HGF水平可诱导细胞vimentin增加、E-cadherin减少,差异均有统计学意义(基因水平P<0.01,蛋白水平P<0.05).细胞划痕实验显示,A549/DDP细胞愈合较A549细胞快,差异有统计学意义(P<0.05),HGF诱导可使细胞侵袭能力增强;Transwell结果显示,HGF诱导组的A549/DDP、A549细胞相对未诱导前细胞的侵袭能力增强,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 HGF促进NSCLC细胞A549/DDP及A549的侵袭迁移,其机制可能与通过调控EMT相关基因的表达相关.     

Breast cancer associated fibroblasts promote MCF-7 invasion in vitro by secretion of HGF

This study was aimed to explore the influence of breast cancer associated fibroblasts (CAFs) in migration and invasion of breast cancer cell line MCF-7,and investigate whether hepatocyte growth factor (HGF) is involved in this process.Primary breast CAFs and their corresponding normal breast fi-broblasts (NFs) were obtained by collagenase digestion.On the basis of the co-culture,the migration and invasion capacity of MCF-7 cells was compared between CAFs and NFs by Transwell.The differ-ence in the HGF expression between them was detected by ELISA.The secretion of HGF was knocked down by using RNA interference technology in CAFs.Then the changes of migration and invasion ca-pacity of MCF-7 cells were investigated by Transwell.Eventually,we isolated high-purity CAFs and NFs,and the CAFs had a stronger ability in promoting MCF-7 migration and invasion than the NFs.ELISA results demonstrated that CAFs secreted higher HGF,and the capacity of MCF-7 migration and invasion was declined after knocking down the secretion of HGF in CAFs by RNA interference.It is suggested that CAFs can promote MCF-7 migration and invasion through HGF in vitro.     

间充质干细胞通过旁分泌效应激活心脏干细胞迁移(英文)

目的:探索移植到心梗部位的间充质干细胞是否通过其旁分泌效应促进心脏干细胞迁移至心梗部位。方法:间充质干细胞(MSC)特征经流式细胞术鉴定其表面标志物特征及多向诱导分化实验确认其干性。经体外Transwell分析心脏干细胞迁移特征,利用VEGF,HGF及SDF-1α等受体特异阻断剂观察其在心脏干细胞迁移中的作用。在体利用左冠状动脉前降之结扎法复制心肌梗死模型。心梗后7 d,植入MSC到心梗及周边部位。细胞移植7 d后,流式细胞术分析其外周血中c-kit阳性的干细胞含量,免疫荧光组织化学技术分析心梗部位c-kit阳性的干细胞数目,同时行Western Blot分析心脏VEGF,HGF及SDF-1α的表达,一月后心导管技术测量心功能及胶原染色和HE染色确定梗死面积。结果:移植的MSC增加了心梗部位VEGF,HGF及SDF-1α的表达,并动员c-kit阳性的干细胞迁移至心梗部位。与对照组相比,MSC移植组明显降低了心梗面积,显著增加了血管密度,明显改善了左室心脏功能。体外迁移实验发现MSC条件培养基能够诱导心脏干细胞迁移,这个过程能被VEGFR、CXCR4及c-Met等受体特异阻断剂所阻断,且c-Met可能起主要作用。结论:移植的MSC通过其旁分泌效应激活c-kit阳性的干细胞迁移至心梗部位修复受损的心脏。     

肝细胞生长因子对冠状动脉平滑肌细胞增殖迁移的影响

为观察肝细胞生长因子(HGF)对牛冠状动脉平滑肌细胞(BCASMC)增殖、迁移的影响,分离和培养BCASMC,采用四甲基偶氮唑蓝法观察HGF对BCASMC增殖的作用,倒置显微镜观察BCASMC的迁移。结果显示,对照组、HGF组BCASMC的D值相差显著(P<0.05),HGF组的BCASMC增殖率为45.2％,且迁移明显。提示HGF能促进BCASMC的增殖和迁移。     

肝细胞生长因子对辐射后心肌细胞蛋白合成的保护作用

目的 研究肝细胞生长因子(HGF)对60Coγ射线照射体外培养的大鼠心肌细胞蛋白表达的影响.方法 体外培养新生大鼠心肌细胞,分为未照射组、单纯照射组、HGF处理照射组,照射组细胞分别用60Coγ射线20Gy单剂量照射心肌细胞,HGF处理的照射组在照射前3 h用终浓度为40ng/ml的HGF孵育.在照射后48 h:(1)用蛋白检测试剂盒检测各组心肌细胞中的总蛋白含量;(2)流式细胞仪检测各组的细胞周期变化;(3)带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(AdGFP)感染各组心肌细胞,感染后48 h用流式细胞仪检测各组心肌细胞中所含的绿色荧光蛋白的荧光强度,间接比较各组心肌细胞中绿色荧光蛋白的生成量.结果 照射后48h,照射组心肌细胞中总蛋白含量较未照射组减低(P＜0.01),HGF处理的照射组心肌细胞中总蛋白含量较单纯照射组增高(P＜0.05).照射后96 h、感染AdGFP后48 h,照射组心肌细胞的绿色荧光强度明显弱于未照射组(P＜0.01),HGF处理的照射组心肌细胞的绿色荧光强度较单纯照射组增强(P＜0.01).结论 60Coγ射线单剂量照射抑制体外培养的心肌细胞蛋白合成,HGF可部分逆转60Coγ射线对心肌细胞蛋白生成的抑制作用.     

肝细胞生长因子在人肝细胞中的表达及对肝细胞损伤的保护作用

目的　构建肝细胞生长因子 (HGF)真核细胞表达载体 ,并观察其在人正常肝细胞中的表达以及对细胞增殖和抗损伤能力的影响。方法　利用基因重组技术将HGF与绿色荧光蛋白 (GFP)融合并构建真核表达质粒 ,通过脂质体介导法 ,导入正常人肝细胞系中。用荧光显微镜以及免疫组织化学方法观察HGF表达情况。采用 [3 H] TdR掺入DNA法、PCNA免疫组织化学观察肝细胞DNA合成 ,了解肝细胞增殖能力的变化。用CCl4造成急性肝细胞损伤 ,通过测定细胞存活率、细胞内丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、K+ 的漏出量了解肝细胞的抗损伤能力。结果　酶切鉴定证实HGF片断已克隆到pEGFP N3 的BamHⅠ和SalⅠ位点之间 ,在转染人正常肝细胞后 ,利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达 ,用免疫组化方法进一步证实了HGF蛋白在细胞中的表达。 [3 H] T转导HGF的肝细胞的DNA合成明显增加 (转染 96h后 ,[3 H] TdR掺入量为对照组的 7倍 )。PCNA免疫组化结果显示转导HGF的肝细胞阳性率明显增加 ,肝细胞增殖活性增加。转导HGF的肝细胞抗CCl4损伤的能力明显增强 ,肝细胞存活率显著提高 (83%与 6 1% ,P <0 0 5 ) ,细胞内丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、K+ 的漏出显著降低 (分别为 35 16U·L-1与 6 5 31U·L-1,P <0 0 1,5 5 9mmol/L与 6 0 2mmol/L ,P     

I型钠氢交换蛋白调节细胞内酸碱平衡对胃癌细胞迁移、侵袭的影响

目的  观察I型钠氢交换蛋白（NHE1）通过调控胃癌细胞SGC-7901内酸碱值（pH）对其迁移、侵袭的影响。方法  采用共聚焦显微镜观察比较用特异性阻断剂5-（N-乙基-N-异丙基）阿米洛利（EIPA）阻断胃癌细胞SGC-7901的NHE1功能前后胞内pH值的变化,划痕实验观察细胞迁移能力的改变,transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力的改变。结果  共聚焦实验发现对照组细胞内pHi为（7.2±0.12）,EIPA阻断剂组（5μm）为（7.01±0.23）,EIPA阻断剂组细胞内的pH值明显降低（P <0.05）;进一步划痕和侵袭实验证明加入不同浓度的EIPA（5、10和20μmol）后均能有效地抑制胃癌细胞SGC-7901的迁移和侵袭能力（P <0.05,P < 0.01）,并且抑制的程度与EIPA的浓度呈剂量依赖性。结论  阻断NHE1可以降低胃癌细胞pH值,进而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力。

     

肝细胞生长因子对IL-1α刺激肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化的作用

目的研究肝细胞生长因子(HGF)对IL-1α诱导的肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化(TEMT)及细胞分泌功能的影响。方法在体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)中加入IL-1α 20ng／ml诱导．并加入大(1600ng／ml)、中(1200ng／ml)、小(800ng／ml)剂量HGF阻断，流式细胞仪和免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白的表达；倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞形态变化；ELISA法测定培养细胞上清液分泌的粘连蛋白(FN)含量。结果IL-1α刺激后细胞转变为类似成纤维细胞形态；α-SMA阳性细胞百分数及α-SMA表达的平均荧光强度明显增加(P＜0．05)；培养上清液中FN含量增加(P＜0．05)。HGF可剂量依赖性地抑制IL-1α诱导NRK52E细胞形态学改变及α-SMA的表达(P＜0．05)，不同程度地抑制IL-1α的促FN分泌作用(P＜0．05)。单独加入不同剂量HGF对肾小管细胞无影响。结论HGF可抑制IL-1α诱导的TEMT作用，减少FN的分泌，对肾间质纤维化具有负性调节作用。     

UPF1影响AU565乳腺癌细胞侵袭、迁移及EMT的机制

目的 探讨上游移码蛋白1（UPF1）对人乳腺癌细胞AU565侵袭、迁移及上皮间充质转化（EMT）的影响及机制研究。方法 收集2021年9月—2022年3月于我院接受乳腺切除术43例乳腺癌患者新鲜癌组织及正常乳腺组织,制备石蜡块,免疫组织化学法检测UPF1表达情况。购置人乳腺癌细胞系AU565及人乳腺上皮细胞系DU4475,激光共聚焦扫描显微镜法测定UPF1水平。采用小干扰RNA（siRNA）技术构建UPF1低表达的重组细胞,分析转染siRNA-UPF1对AU565细胞侵袭、迁移能力以及EMT相关蛋白表达和蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（Akt/mTOR）信号通路的影响。结果 乳腺癌组织UPF1的吸光度值显著高于正常乳腺组织（P＜0.05）。AU565细胞UPF1荧光强度显著大于DU4475细胞（P＜0.05）。与siRNA-NC组比较,转染siRNA-UPF1后AU565细胞中UPF1蛋白及mRNA表达水平均显著降低（P＜0.05）。与siRNA-NC组比较,转染siRNA-UPF1后AU565细胞穿膜率和细胞迁移率均显著增加（P＜0.05）。转染siRNA-UPF1后AU565细胞E-candherin蛋白表达水平显著降低,Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。转染siRNA-UPF1后AU565细胞p-Akt和p-mTOR水平显著升高（P＜0.05）。结论 UPF1在乳腺癌中表达上调,但沉默UPF1可能通过激活Akt/mTOR通路传导,促进乳腺癌细胞AU565的侵袭和迁移,并诱导EMT发生