银杏叶提取物对实验性糖尿病大鼠肾组织HGF/c-met表达的影响

目的：研究银杏叶提取物（ginkgo biloba extract,EGb）对实验性糖尿病大鼠肾脏保护作用及其可能机制。方法：SD大鼠随机分为糖尿病对照组（DC）、银杏叶提取物（金纳多）治疗组（DG）和正常对照组（NC）,观察各组大鼠肾脏病理改变;应用免疫组化监测HGF、TGF-β1表达量,运用RT-PCR监测HGF、c-met的mRNA表达情况。结果：免疫组化显示：HGF在NC组微量表达于肾小球系膜区,DC组第2周表达明显增加,与NC组相比差异有统计学意义（P〈0.01）,第6周表达较前明显下降;DG组第2周表达明显增加,第6周表达较前有所下降,与NC组同期相比差异有统计学意义（P〈0.01）,与DC组相比差异有统计学意义（P〈0.05）;TGF-β1在NC组中无阳性表达,DC组表达明显升高,与NC组同期相比差异有统计学意义（P〈0.01）,DG组表达升高,但低于DC组（P〈0.01）,与NC组同期相比差异有统计学意义（P〈0.01）;RT-PCR结果显示：HGF/c-metmRNA在NC组中有一定量表达,第2周与第6周之间差异无统计学意义（P〉0.05）;DC组与NC组相比,在第2周表达量升高（P〈0.01）,第6周表达量较前明显下降;DG组与DC组平行相比表达量显著升高（P〈0.01）。结论：HGF在DN的病程进展中发挥着重要作用,EGb可以抑制ACE,下调TGF-β1的表达,上调HGF/c-met的表达,减轻肾小球系膜区增生,改善肾功能。     

肝细胞生长因子受体在高糖诱导肾I间质成纤维细胞中的表达及其意义

目的体外观察高糖刺激成纤维细胞时,肝细胞生长因子(HGF)受体c-met的表达及HGF/c-met系统的活性.方法高糖刺激细胞后,采用RT-PCR方法分析HGF、c-met mRNA水平.Western印迹分析c-met蛋白质.同时检测外源加入HGF对TGF-β、c-met表达影响,以及采用抗c-met抗体处理后的表达.结果高糖刺激早期HGF、c-met mRNA快速上升.另外,c-met mRNA、蛋白水平明显上调.HGF可以诱导c-met表达,同时降低TGF-β表达.结论c-met局部上调在糖尿病肾脏损伤过程中起重要作用.     

肝细胞生长因子受体在高糖诱导肾间质成纤维细胞中的表达及其意义

目的 体外观察高糖刺激成纤维细胞时，肝细胞生长因子（HGF）受体c-met的表达及HGF／c-met系统的活性。方法 高糖刺激细胞后，采用RT－PCR方法分析HGF、c-met mRNA水平。Western印迹分析c-met蛋白质。同时检测外源加入HGF对TGF－β、c-met表达影响，以及采用抗c-met抗体处理后的表达。结果 高糖刺激早期HGF、c-met mRNA快速上升。另外，c-met mRNA、蛋白水平明显上调。HGF可以诱导c-met表达，同时降低TGF－β表达。结论 c-met局部上调在糖尿病肾脏损伤过程中起重要作用。     

黄芪注射液对体外培养的人肾间质成纤维细胞c-met表达的作用

c-met是肝细胞生长因子（HCF）受体，在器官发育早期起重要作用。本研究以肾脏质成纤维细胞中表达，同时观察黄芪对c-met表达影响，为临床治疗寻求理论依据。     

高糖对大鼠肾间质成纤维细胞PINCH-1表达的影响

目的研究高糖对大鼠肾间质成纤维细胞(NRK49F)表达PINCH-1(Particulary interesting new cysteine-histicline rich protein-1)和整合素连接激酶(Integrin-linked kinase,ILK)的影响,探讨PINCH-1在糖尿病肾病中的作用机制。方法 (1)体外培养大鼠NRK49F细胞,分别采用高糖(25 mmol/L)和低糖(5.5 mmol/L)培养基培养6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后,检测各组细胞不同时间点PINCH-1、ILK、α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)mRNA及蛋白表达的动态变化,ELISA法检测各组细胞上清液纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原(collagen type I,Col I)的表达。(2)采用不同浓度葡萄糖(5.5 mmol/L、15.0 mmol/L、25.0 mmol/L)作用于大鼠NRK49F细胞48 h后,检测各组细胞PINCH-1、ILK、α-SMA mRNA及蛋白的表达。结果 (1)与低糖组相比,高糖组PINCH-1、ILK、α-SMA mRNA及蛋白的表达明显上调,高糖刺激早期呈一定时间依赖性增加,FN、Col I蛋白的分泌水平随着高糖刺激时间的延长,呈持续升高,差异均有统计学意义(P0.05)。(2)不同浓度葡萄糖培养大鼠NRK49F细胞48 h后,PINCH-1、ILK、α-SMA mRNA及蛋白的表达呈浓度依赖性增加,FN、Col I的分泌水平随着葡萄糖浓度的增加持续升高。结论高糖能够促进NRK49F中调节蛋白PINCH-1和ILK的表达,促进肾脏成纤维细胞表型转化以及纤维化蛋白FN、Col I的分泌。PINCH-1可能通过与ILK相互作用,在糖尿病肾病肾间质纤维化的发生发展中发挥重要的作用。     

转化生长因子β1对肾间质成纤维细胞胶原表达的影响

目的　探讨肾间质纤维化的机制。方法　体外培养大鼠肾间质成纤维细胞,采用Ｌ３Ｈ脯氨酸掺入法测定胶原合成及ＲＴＰＣＲ 技术观察转化生长因子β（ＴＧＦβ１） 对体外培养的大鼠肾间质成纤维细胞Ⅰ和Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ 表达的影响。结果　ＴＧＦβ１ 可促进肾间质成纤维细胞的３Ｈ脯氨酸掺入,且随着ＴＧＦβ１ 剂量的增加,３Ｈ脯氨酸掺入量增加,胶原合成增多。ＴＧＦβ１ 可促进Ⅰ和Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ 的表达,且在ＴＧＦβ１ 浓度２ ～１０ ｎｇ／ｍｌ 时ｍＲＮＡ 的表达量与浓度呈现正相关;在６ ～４８小时内与时间呈现正相关。结论　ＴＧＦβ１ 可能通过促进肾间质成纤维细胞胶原的合成及ｍＲＮＡ 的表达而参与肾间质纤维化。     

缬沙坦对糖尿病大鼠肾皮质TGF-β1表达的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦(Valsartan)对实验性糖尿病大鼠肾皮质TGF-β1表达的影响,为糖尿病肾病的防治提供实验性理论基础.方法:选择健康雄性SD大鼠24只,任取其中16只腹腔注射链脲佐菌素制成糖尿病大鼠模型.将糖尿病大鼠随机分为糖尿病缬沙坦治疗组(A组,8只,缬沙坦10 mg*kg-1*d-1灌胃);糖尿病对照组(B组,8只);其余8只为正常对照组(C组).分别于实验第6周末测定各组大鼠血糖、血肌酐、尿白蛋白排泄率,对肾脏标本进行光镜观察,用图像分析仪测量各组大鼠平均肾小球面积、平均肾小球体积.并取各组大鼠肾皮质提取RNA,用逆转录-PCR(RT-PCR)方法对肾皮质TGF-β1 mRNA表达进行半定量分析.结果:在糖尿病第6周末,B组上述指标较C组均有不同程度的升高(P＜0.01),而A组则显著低于同时期的B组.其中,A组、C组尿白蛋白排泄率始终无统计学差异,肾小球平均面积、平均体积A组显著低于B组(P＜0.01).RT-PCR半定量结果分析显示,B组TGF-β1 mRNA表达较A组、C组显著增高(P＜0.01),A组TGF-β1 mRNA表达较C组为高(P＜0.01),但仍较B组为低(P＜0.05).结论:缬沙坦能够抑制肾组织TGF-β1 mRNA的表达,减少糖尿病大鼠的尿白蛋白,减轻及延缓肾小球硬化,发挥保护肾脏的作用.     

糖肾方对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1及MMP-9表达的影响

目的：研究糖肾方对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1、MMP-2、MMP-9及Ⅳ型胶原表达的影响,探讨糖肾方对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护机制。方法：50只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、蒙诺组（0．833mg／kg）、糖肾方大剂量组（2．67g／kg）、糖肾方小剂量组（1．33g／kg）,每组10只,利用单侧肾切除加腹腔注射链脲佐菌素造成糖尿病肾病大鼠模型,连续给药20周。动态检测血糖和尿蛋白／肌酐水平;取肾组织进行病理组织学观察并对肾小球硬化和肾小管间质纤维化程度进行评分;RT-PCR方法检测TGF-β1、MMP-2及MMP-9 mRNA表达,免疫组化方法检测肾组织TGF-β1及Ⅳ型胶原表达。结果：大剂量糖肾方能显著降低糖尿病肾病大鼠尿蛋白／肌酐（P〈0．05）,降低肾小球硬化指数（P〈0．01）和肾小管间质纤维化指数（P〈0．01）,减少TGF-β1mRNA与蛋白表达（P〈0．05）,增加MMP-9mRNA表达（P〈0．05）,减少Ⅳ型胶原蛋白表达（P〈0．05）。结论：糖肾方可减轻实验大鼠肾小球硬化和肾小管间质纤维化,其作用机制可能与抑制TGF-β1表达和提高MMP-9mRNA水平有关。     

人类转化生长因子β诱导基因-克隆3在糖尿病大鼠肾组织中的表达以及洛沙坦和黄芪对其影响

目的探讨人类转化生长因子β诱导基因-克隆3(TGF-β-inducedgene-human,clone3,βig-h3)在糖尿病大鼠肾组织中的表达意义,以及血管紧张素受体拮抗剂洛沙坦losartan和中药黄芪对糖尿病大鼠肾组织βig-h3表达的影响。方法采用链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠模型。将SD大鼠随机分成5组,每组6只:正常对照组(N组)、糖尿病组(D组)、losartan治疗组(DL组)、黄芪治疗组(DA组)和losartan黄芪联合治疗组(DLA组)。治疗8周后取肾组织,观察肾脏病理改变;半定量RT-PCR法检测各组肾组织中βig-h3和TGF-β1mRNA的表达;免疫组化方法检测各组肾组织中βig-h3和TGF-β1蛋白质的表达水平。结果处理8周后,与N组相比,D组肾小球系膜增生、基质大量堆积,部分肾小球出现硬化;各治疗组系膜增生均有减轻。D组肾组织βig-h3、TGF-β1mRNA和蛋白表达均明显升高(与C组比较,P<0.05);各治疗组上述指标均有不同程度的下降(与D组相比,P<0.05)。βig-h3的表达与TGF-β1呈正相关(r=0.81,P<0.05)。结论βig-h3在糖尿病肾病发生发展过程中可能起重要作用;losartan和黄芪可能部分通过下调肾组织βig-h3mRNA和蛋白的表达对糖尿病肾病发挥抗纤维化作用。     

糖肾康对糖尿病肾病患者尿转化生长因子-β1的影响

目的:观察糖肾康对糖尿病肾病患者尿转化生长因子-β1的影响,进一步证实糖肾康对DN的治疗作用,并探讨其作用机制.方法:治疗组73例采用糖肾康和卡托普利联合治疗,对照组75例单服卡托普利,两组其他治疗相同,治疗时间为6个月,观察治疗前后尿TGF-β1 的变化.结果:治疗后尿TGF-β1显著下降(P<0.01),与对照组治疗后比较有统计学差异(P<0.05),同时血糖、血脂、胰岛素抵抗(IR)、血流动力学和肾功能明显改善.结论:糖肾康通过改善血糖、血脂、IR、血流动力学和直接抑制TGF-β1功能及分泌达到保护肾脏,使尿TGF-β1产生减少.     

黄芪对急性肺损伤鼠中性粒细胞粘附功能的影响

目的研究黄芪注射液对大鼠急性肺损伤时中性粒细胞(PMN)功能的影响。方法将24只健康SD大鼠随机分为急性肺损伤模型组、黄芪高剂量组(0.4mg/100g)、黄芪低剂量组(0.2mg/100g)和空白对照组。用流式细胞仪检测β2整合素(CD18)和选择素L(CD62L)的表达,放免法测定血清中肿瘤坏死因子α(TNFα)与白细胞介素6(IL6)的生成。结果0.4mg/100g的黄芪注射液能明显抑制CD18的表达,在一定程度上减少CD62L的脱失,减少血清中TNFα、IL6的生成;0.2mg/100g黄芪抑制CD18、CD62L的作用不明显,但是也能抑制血中TNFα、IL6的生成。结论0.4mg/100g黄芪注射液能抑制PMN的粘附功能,减少血清中TNFα、IL6的生成,减轻肺损伤。     

黄芪注射液对失血性休克兔小肠上皮细胞超微结构的影响

目的 观察黄芪注射液对兔失血性休克小肠超微结构的影响。方法 24只大白兔随机分为3组，每组平均8只，分别是H1组：20g/kg黄芪注射液治疗组；H2组：10g/kg黄芪注射液治疗组；C组：生理盐水对照组。复制兔重度失血性休克及复苏的动物模型，实验时取回肠末端组织一份行电子显微镜检查，并测量线粒体二维形态计量学参数和三维形态计量学参数。结果电镜下可见H1组上皮细胞柱状排列紧密，微绒毛整齐，线粒体丰富，无肿胀；H2组上皮细胞核缩小，微绒毛细、短、肿胀、排列不整，线粒体轻度肿胀，嵴不清，内质网扩张；C组细胞间隙增宽，可见大量的凋亡细胞。微绒毛短、粗、肿胀，部分脱落，线粒体肿胀，嵴断裂，内质网显著扩张，部分呈币状。小肠上皮细胞线粒体体视学参数显示C组上皮细胞单位胞浆内线粒体少，肿胀；H2组的线粒体数目减少，有较明显肿胀；H1组线粒体丰富，肿胀轻微。结论 黄芪注射液对失血性休克损伤兔小肠上皮细胞超微结构有保护作用，并呈一定的量效关系。     

高糖对大鼠肾成纤维细胞VEGF和PEDF表达的影响

目的探讨高糖对体外培养的大鼠肾成纤维细胞（NRK）血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和色素上皮衍生因子（pigment epithelium derived factor,PEDF）表达的影响。方法采用RT-PCR分析方法,测定在不同浓度高糖、不同时间点NRK细胞VEGF与PEDF mRNA的表达。设5．6mmol／L葡萄糖组为正常对照组。结果与正常组相比,加入不同浓度高糖的各组NRK细胞VEGF mRNA的表达明显升高（P〈0．05）,PEDF mRNA的表达明显下降（P〈0．05）,呈剂量依赖性改变;随着各组作用时间的延长,VEGF mRNA的表达呈上升趋势（P〈0．05）,PEDF mRNA的表达呈下降趋势（P〈0．05）,呈时间依赖性改变;VEGF与PEDF之间呈明显负相关（r=-0．811,P〈0．05）。结论在高糖环境中,体外培养的NRK细胞VEGF和PEDF表达失衡,PEDF表达下降的同时VEGF表达增加,两者的表达失衡可能在糖尿病肾病（DN）的发生发展中起一定的作用。     

黄芪预处理对未成熟兔心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 观察黄芪预处理对未成熟兔心肌缺血，再灌注(I/R)损伤的保护作用及其机制。方法 24只幼兔(14—21d)随机分为三组，每组8只，利用Langendorff模型灌注其离体心脏。平稳灌注30min后，向球囊缓慢注入生理盐水，调整左室舒张压(LVDP)为10mmHg。对照组：继续灌注15min；黄芪组：黄芪注射液灌注15min；5-羟葵酸液(5-HD)组：5-HD灌注5min，黄芪注射液灌注10min。三组心脏均经历停灌30min(保温、保湿)、缺血自动停跳及再灌注45min复制全心缺血再灌注(I/R)模型。观察各组的血液动力学、冠脉流出液心肌酶活性及心肌能量变化、病理学和分子生物学的改变。结果 黄芪组左心功能、冠脉流量恢复及再灌后心肌组织内ATP含量明显优于对照组及5-HD组，心肌酶活性明显低于对照组及5-HD组，心肌细胞线粒体超微结构分析显示黄芪组线粒体损伤轻于对照组及5-HD组，心肌诱导型一氧化氮合酶含量高于对照组及5-HD组。结论 黄芪注射液预处理对未成熟兔心肌有一定的保护作用，其机制之一是开放KATP通道。     

氟尿嘧啶联合黄芪对小鼠胃癌组织氨基酸代谢的影响

目的 研究氟尿嘧啶联合中药黄芪对3-甲基胆蒽（MC）诱发的小鼠胃癌氨基酸代谢的影响规律。方法 建立MC诱发小鼠胃癌的模型，分别设立氟尿嘧啶治疗组（A组）、氟尿嘧啶加黄芪治疗组（B组）、氟尿嘧啶加高剂量黄芪治疗组（C组）、胃癌对照组（D组）、假手术组（P组）和正常组（N组），对各组标本进行病理检测，并测定胃癌标本游离氨基酸含量。结果 MC诱发3个月时小鼠胃癌发癌率为48．7％。P组胃组织游离氨基酸中缬氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、精氨酸和胱氨酸含量高于正常组织（P〈0．05），且与D组无明显差异（P〉0．05）。A、B、C、D组中的丝氨酸含量高于N组（P〈0．05）；A、B组谷氨酸含量明显高于P、N组（P〈0．05），且A、B、C、D组的数值呈逐渐下降的趋势。C、D组胃癌组织中脯氨酸含量明显高于P、N组（P〈0．05），且A、B、C组的数值呈逐渐升高的趋势。讨论 MC诱发的小鼠胃癌模型中丝氨酸、脯氨酸升高可反映其氨基酸代谢紊乱；氟尿嘧啶与黄芪联合应用，可减少胃癌组织中谷氨酸含量而抑制肿瘤生长。     

体外添加黄芪注射液对人精子膜拮抗脂质过氧化的作用

目的 :观察体外添加黄芪注射液对弱精子症患者精子膜脂质过氧化的拮抗作用。方法 :应用计算机辅助精子分析仪 (CASA)和丙二醛 (MDA)及超氧化物歧化酶 (SOD)检测试剂盒 ,分别分析体外添加黄芪注射液 (A组 )对 30例弱精子症患者精子运动参数的影响 ,检测精子悬液MDA含量及总SOD(TSOD)力 ,并进行相关分析 ,同时设立空白对照组进行对比观察。结果 :A组的精子活率 (Mot)、前向运动精子百分率、曲线速度 (VCL)、平均路径速度 (VAP)和精子头摆幅度 (ALH)较空白对照组显著提高 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;A组精子悬液的MDA含量显著降低 (P <0 .0 5 ) ,TSOD活力与对照组比较差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。A组MDA含量与Mot、前向运动精子百分率、VAP和ALH间均有显著性负相关 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 :体外添加黄芪注射液对弱精子症患者精子具有拮抗脂质过氧化作用 ,为临床应用黄芪减少递质对精子的损害提供理论基础。     

Regenerative and protective effects of calcium silicate on senescent fibroblasts induced by high glucose

Diabetic wounds are a common complication of diabetes and therefore a pressing issue for clinicians. High‐glucose (HG)‐induced fibroblast senescence is mainly responsible for delayed wound healing. Calcium silicate (CS), a kind of bioceramic, is thought to have regenerative properties. The aim of this study was to determine the regenerative and protective effects of CS on senescent fibroblasts induced by HG. Fibroblasts were passaged five times and treated with HG and CS. Compared with the normal glucose (NG) group, the proliferation, migration, and differentiation capacity of HG‐induced fibroblasts significantly decreased (P < .05). After treatment with CS, the functions of HG‐induced senescent fibroblasts were partly restored (P < .05). The mechanism of the regenerative and protective effects of CS may be related to the decreased reactive oxygen species generation, improved senescent state (SA‐β‐gal expression decreased), up‐regulated expression of Smad2 and phosphorylated Smad2, and down‐regulated expression of p16, p21, and p53. An in vivo experiment also demonstrated that CS had a therapeutic effect on diabetic wounds via differentiation of fibroblasts into myofibroblasts and enhanced collagen deposition. These results indicate that CS may be a promising candidate for diabetic wound therapy.     

黄芪注射液对肝门阻断后肝功能损害的治疗作用

目的探讨黄芪注射液对肝门阻断后肝脏的治疗保护作用。方法88例肝门阻断肝脏手术的病人随机分为黄芪注射液治疗组（Ⅰ组）和非黄芪注射液治疗组（Ⅱ组）,术前和术后3d、7d分别检测直接胆红素（DBil）、碱性磷酸酶（ALP）、天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、7谷氨酰转移酶（GGT）、白蛋白（Alb）,两组资料进行对比分析。结果与Ⅱ组比较,Ⅰ组术后3d、7dAST、ALT明显恢复,差异有统计学意义。结论黄芪注射液对肝门阻断后的肝脏缺血缺氧及再灌注损伤有一定的保护作用。