蛋白酶活化受体1在血管内皮损伤中的作用

血管内皮是血流和血管壁之间的半透性屏障,其功能障碍在血管疾病的发生、发展中起着关键作用。蛋白酶活化受体1(protease-activated receptors1, PAR1)是一种独特的G蛋白偶联信号受体,主要通过凝血酶、基质金属蛋白酶、胰蛋白酶及活化蛋白C等蛋白酶裂解其胞外氨基末端而被激活,在哺乳动物血管壁的几乎所有细胞膜上都有表达,并且对血管内皮细胞凋亡、血管张力调节、血管屏障功能、炎症募集发挥着重要的作用。本文对PAR1在血管内皮损伤中的作用进行了综述,旨在进一步探讨靶向抑制或激活PAR1对治疗血管性疾病的前景。     

蛋白酶活化受体2在疼痛中的作用研究进展

蛋白酶活化受体2(PAR2)属于蛋白酶活化受体家族,在许多组织细胞中广泛表达,特别是上皮细胞、肥大细胞、神经元和星形胶质细胞等。PAR2在全身广泛分布,激活后可促进细胞的增殖、分化、产生和释放多种蛋白,从而发挥不同的生物效应。PAR2在许多生理功能上发挥重要作用,如抗细胞凋亡、血管内皮细胞的分裂和增殖、视神经的发育再生以及肿瘤细胞的发生、发展和转移等。另外,PAR2在疼痛传导通路和慢性疼痛的发展中也发挥着重要作用。     

蛋白酶活化受体4在内脏痛觉信号调节中的作用

内脏痛是临床上的常见症状,内脏痛产生的机制很复杂,有多种递质与其受体参与调解作用,蛋白酶活化受体4（PAR4）是蛋白酶活化受体家族（PARs）成员之一,参与多种病理生理过程。最近有研究发现,活化的PAR4具有内脏镇痛作用。PAR4内脏镇痛作用是如何完成的,其分子机制如何,与其他致痛因子和受体存在什么样的联系尚不清楚。本文主要对内脏感觉神经信号转导机制及其在病理条件下的变化作一综述,旨在了解内脏痛产生的生理和分子机制对于解除缓减内脏痛的重要意义。     

蛋白酶活化受体-1在宫颈癌组织中的表达及意义

目的探讨蛋白酶活化受体（PAR）-1在宫颈鳞癌、腺癌及原位癌组织中的表达情况。方法收集宫颈鳞癌组织35例、腺癌组织25例、原位癌组织20例及正常宫颈组织标本20例，采用免疫组织化学方法、PAR-1单克隆抗体检测上述组织中PAR1表达。结果PAR-1在正常宫颈组织中无表达，宫颈原位癌和宫颈浸润癌I期及Ⅱ期组的阳性表达率分别为20．0％、36．4％和44．7％，显著高于正常宫颈组（P=0．0028）。有盆腔淋巴转移的宫颈癌组的PAR-1阳性表达率为68．4％，显著高于无淋巴转移组的29．3％（P=0.0042）。结论PAR-1与宫颈癌的发生和转移密切相关。     

蛋白酶激活受体-2介导的呼吸道上皮细胞活化在哮喘中的作用

蛋白酶激活受体(PAR)是近年来新发现的一个受体家族，其中PAR-2对呼吸道上皮细胞功能的影响及其在哮喘中的作用正受到越来越多的关注。作者就PAR-2的结构、激活剂及生物学功能，尤其是PAR-2介导的呼吸道上皮细胞活化及其在哮喘中的可能作用作一综述。     

蛋白酶活化受体4的研究进展

蛋白酶活化受体4（protease-activated receptor4，PAR4）是蛋白酶活化受体PARs（protease-activated receptors，PARs）的成员之一，PARs属于G蛋白偶联受体家族成员，其N-末端被蛋白酶裂解后，可形成新的N-末端，新N-末端能够结合、激活自身受体。PAR4激活、灭活、脱敏、复敏、及其与信号转导途径的关系，尤其是与疾病的关系正倍受关注，并且PAR4具有广泛的生物学效应，参与血液和呼吸道慢性炎症在内的诸多疾病的发生、发展过程，因而受到日趋增多的关注。本文就PAR4发现以来的研究进展综述如下。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1活化在胆红素神经毒性中的作用研究

目的 明确半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)活化是否参与胆红素神经毒性的发生机制;VX-765抑制caspase1活化是否能抑制胆红素神经毒性,发挥神经保护作用.方法 建立胆红素脑病动物模型,Western blot检测脑组织caspase-1蛋白的表达,ELISA法检测炎症因子IL-1β的水平,免疫荧光染色检测脑组织中GFAP蛋白的表达;VX-765干预后动态观察各组新生鼠的神经系统临床表现,记录新生鼠体质量变化,评估生活能力.原代培养大鼠皮层星型胶质细胞分为胆红素组、VX-765组、对照组:改良MTT法检测细胞存活率,Western blot检测细胞caspase-1蛋白的表达,ELISA法检测培养液上清IL-1β的水平.结果 胆红素脑病动物模型,建模后12 h,胆红素组较对照组,脑组织中活化型caspase-1表达增加(P＜0.05),IL-1β水平增高(P＜0.01),脑组织切片皮层区星型胶质细胞活化(P＜0.05).与胆红素组相比,VX-765组新生鼠建模后异常神经系统表现减少(P＜0.01),生活能力改善(P＜0.05).原代培养大鼠皮层星型胶质细胞,胆红素干预6h后,活化型caspase-1表达显著高于对照组(P＜0.05);与胆红素组相比,VX-765干预可抑制caspase-1活化(P＜0.05),提高细胞存活率(P＜0.05),减少培养液上清IL-1β的释放(P＜0.01).结论 胆红素可诱导活化型caspase-1表达增加;VX-765抑制caspase-1活化可减轻胆红素神经毒性,提高原代培养星型胶质细胞存活率,减少炎症因子释放.     

蛋白酶活化受体2对大鼠肝星状细胞分泌MCP-1的诱导作用

目的 探讨蛋白酶活化受体2(PAR2)对大鼠肝星状细胞(HSC)分泌单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的调控作用.方法 选用培养7d的SD大鼠HSC并接种于培养板各孔内,分别用不同浓度PAR2激动剂、活性肽、反活性肽和抑制剂刺激,ELISA法检测培养上清MCP-1水平.结果 PAR2激动剂和活性肽可引起HSC MCP-1释放增加,抑制剂可抑制HSC促MCP-1的释放作用,其反活性肽不引起MCP-1释放增加.结论 在大鼠肝纤维化炎症反应中,PAR2可促进HSC分泌MCP-1,促进炎症反应,其反活性肽和抑制剂可能具有抗炎作用.     

蛋白酶活化受体-2的研究进展

蛋白酶活化受体(protease-activated receptors．PARs)属于G蛋白偶联受体家族成员,其N末端被蛋白酶裂解后,可形成新的N末端。新N末端能够结合、激活自身受体。PAR-2是PARs的成员之一,其激活、灭活、脱敏、复敏及其与信号转导途径的关系,尤其是与疾病(如参与炎症、止血、疼痛与修复)的关系正倍受关注。本文就PAR-2的活化及其在部分组织器官的作用综述如下。     

活化血小板对血管内皮细胞表达基质金属蛋白酶-1的影响

目的 :探讨活化血小板对血管内皮细胞表达基质金属蛋白酶 - 1 (MMP - 1 )的影响及其分子学机制。方法 :体外分离健康人血小板 ,经不同浓度ADP、凝血酶诱导后 ,通过流式细胞术测定血小板CD6 2P、CD1 5 4表达水平 ;同时共育血小板与培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs) ,应用RT -PCR法检测HUVECsMMP - 1mRNA表达 ,底物凝胶电泳酶谱法分析培养基中MMP - 1活性。结果 :ADP或凝血酶均呈浓度依赖方式增加血小板CD6 2P、CD1 5 4表达。以ADP(4 μmol/L)或凝血酶 (1U/ml)诱导的血小板与HUVECs共育后 ,均能显著增加HUVECsMMP - 1mRNA表达 (P <0 .0 5 ) ,同时培养基中MMP - 1活性与未刺激组相比也明显增强 (P <0 .0 1 ) ,使用特异性CD1 5 4单抗后可阻断上述作用。静息血小板、单纯等量ADP或凝血酶 ,对MMP - 1mRNA表达及MMP - 1活性均无影响 (P >0 .0 5 )。结论 :活化血小板可通过其表达的CD1 5 4分子诱导内皮细胞产生MMP - 1 ,此效应对不稳定斑块的破裂可能具有促进作用     

血管内皮细胞生长因子及其受体flk-1在肝内胆管癌发生中的作用

目的探讨VEGF及其受体flk—1在肝内胆管癌发生中的作用。方法本研究在利用雄性叙利亚地鼠ICC动物模型的基础上，应用免疫组织化学方法检测了ICC形成过程中血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体flk—1在不同病变组织中的表达情况。结果①利用亚硝酸钠、氨基比林成功诱导出了ICC动物模型。②正常肝内胆管细胞中未见VEGF及其受体flk-1表达，VEGF在增生中弱表达或不表达，高表达出现在胆管腺瘤、不典型增生，肿瘤组织过分表达。flk-1在增生组织中不表达，在胆管腺瘤、不典型增生、肿瘤组织中存在flk—1的表达，在癌变过程中，flk—1的表达随着VEGF的增高而增高。结论VEGF与受体flk—1构成自分泌环与肝内胆管细胞的增殖、恶性转化密切相关，是叙利亚地鼠ICC的形成过程中的早期事件。     

钙蛋白酶活化在小鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨钙蛋白酶在小鼠心肌缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)损伤中的作用。方法:采用结扎/松解左冠状动脉前降支的方法建立小鼠心肌I/R模型。将实验动物随机分为假手术组、I/R组(冠状动脉结扎45 min,再灌注3h)及PD+I/R组(I/R前30 min静脉注射钙蛋白酶抑制剂-PD150606 1 mg/kg)。再灌注结束后,测定各组心肌梗死面积、细胞色素C含量、caspase-3活性。结果:与I/R组相比,PD150606预处理组心肌梗死区域面积明显减小,且PD150606能明显抑制由I/R引起的细胞色素C含量及caspase-3活性增加。结论:钙蛋白酶活化介导的心肌细胞凋亡在小鼠心肌I/R损伤中发挥了重要的作用。     

蛋白酶激活受体-1在凝血酶诱导大鼠脑损伤及神经再生中的作用

目的:研究蛋白酶激活受体的激活在凝血酶所致大鼠脑损伤中的作用,以及与神经细胞再生的关系。方法:90只成年雄性SD大鼠随机分为5组,分别海马注射生理盐水(NS)、凝血酶以及3种蛋白酶激活受体的特异性激动剂,注射1 d、3 d、7 d后,用HE染色检测海马面积变化,用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色检测星形胶质细胞数量和形态,用Flouro-Jade C染色检测神经元变性,微管相关蛋白(DCX)标记检测神经细胞再生。结果:与NS组比较,注射凝血酶和蛋白酶激活受体-1激动剂后1～3 d出现海马面积显著增大(P<0.05),7 d出现海马面积明显缩小;注射后1～7 d GFAP阳性细胞、Flouro-Jade C阳性细胞增多(P<0.05);注射后3～7 d DCX阳性细胞增多(P<0.05)。而注射蛋白酶激活受体-3激动剂和蛋白酶激活受体-4激动剂均未见上述变化。结论:蛋白酶激活受体-1激活可能参与凝血酶所致的急性期脑损伤以及后期的神经再生。     

蛋白酶激活受体2在类风湿关节炎中的作用研究进展

蛋白酶激活受体2 (protease activated receptor-2,PAR-2)是G蛋白偶联受体,主要是由肥大细胞表达,并可被胰酶、类胰蛋白酶激活,然后可导致肥大细胞去颗粒化而引起炎症。类风湿关节炎发生的本质过程可能就是通过激活肥大细胞上表达的PAR-2起作用。     

长度和化学修饰在多壁碳纳米管诱导内皮细胞活化中的作用

目的: 研究比较不同长度和化学修饰的多壁碳纳米管(multi-walled carbon nanotubes,MWCNTs)对内皮细胞的活化作用,并探讨核苷酸结合寡聚结构域样受体家族含pyrin结构域蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性小体的相关机制。方法: 采用动态光散射法对MWCNTs悬液进行表征,将不同长度[短MWCNT(short MWCNT, S-MWCNT) 0.5~2.0 μm或长MWCNT(long MWCNT, L-MWCNT) 10~30 μm]或相同长度(10~30 μm)下不同化学修饰的MWCNTs[未修饰(L-MWCNT)、羧基修饰(L-MWCNT-COOH)、氨基修饰(L-MWCNT-NH₂)和羟基修饰(L-MWCNT-OH)]作用于小鼠脑微血管内皮细胞系b.End3。分别采用细胞增殖检测(cell counting kit,CCK)-8试验和乳酸脱氢酶释放试验评价MWCNTs的细胞毒性,通过酶联免疫吸附试验测定胞外血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)含量并进一步使用人单核细胞系THP-1进行黏附力试验,评价不同种类MWCNTs的内皮细胞活化效应。进一步选择S-MWCNT、L-MWCNT和L-MWCNT-COOH探讨内皮细胞活化的炎症机制,采用免疫蛋白印迹法检测MWCNTs作用后细胞炎性小体蛋白NLRP3的表达水平。结果: 在较高浓度(125 μg/cm²)下作用24 h,不同种类的MWCNTs均可显著抑制b.End3的细胞活性并影响细胞膜完整性。在无明显细胞毒性的浓度下(6.25 μg/cm²),不同种类的MWCNTs作用12 h均可显著诱导b.End3细胞内皮细胞活化,表现为VCAM-1释放水平增加,以及b.End3对THP-1的黏附水平增强。相同浓度下,L-MWCNT诱导细胞内皮细胞活化的效应显著强于S-MWCNT;相同长度下,L-MWCNT和L-MWCNT-COOH对细胞内皮细胞活化的效应差异无统计学意义。在6.25 μg/cm²浓度下,S-MWCNT、L-MWCNT、L-MWCNT-COOH可时间依赖性地上调b.End3细胞的NLRP3蛋白表达水平。与相同浓度的S-MWCNT相比,L-MWCNT可显著上调细胞NLRP3的蛋白表达水平;在相同长度下,L-MWCNT和L-MWCNT-COOH作用后细胞的NLRP3蛋白表达差异无统计学意义。结论: 与化学修饰作用相比,MWCNTs长度增加更易诱导内皮细胞活化,其中间机制可能与NLRP3炎性小体的激活有关。MWCNTs的安全性评价应关注其理化特性对血管内皮生物效应的影响。     

AP-1在血管内皮细胞PAI-1表达中的作用

目的 研究核转录因子激活蛋白-l(activator protein-l,AP-1)在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、弱氧化修饰低密度脂蛋白(minimal modified low density lipoprotein,mmLDL)诱导血管内皮细胞PAI-l基因表达中的转录调控机制。方法 进行人脐静脉内皮细胞(human vascular endothelial cells,HUVECs)的培养和鉴定。采用基因重组技术,构建4个含人PAI-l基因不同长度5′上游序列的荧光素酶报告基因质粒,并结合瞬时转染分析实验,初步确定PAI-l基因上游具有调控作用的是位于-823到-553之间的AP-l元件。为进一步确证AP-l元件的调控作用,采用PCR法对该元件进行定点突变。结果 TNF-α能明显诱导构建质粒pGL3-PAl-l-823／ 90荧光素酶的表达,但对质粒pGL3-PAl-l-823／ 90的3个突变体诱导作用明显降低;mmLDL也能明显诱导质粒pGL3-PAI-1-823／ 90荧光素酶表达,但对质粒pGL3-PAl-l-823／ 90的3个突变体的诱导作用不明显。结论 在TNF-α、mmLDL作用下,内皮细胞转录表达PAI-l基因过程中,3个AP-l元件起着重要的作用。     

丝裂原活化蛋白激酶在染料木黄酮抑制血管内皮细胞中的作用

目的 探讨染料木黄酮(genistein,Gen)抑制血管内皮细胞的分子机制.方法 人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)经血管内皮生长因子(VEGF)预处理后,给予1、10、100 μmol/Gen,利用酶链免疫吸附测定(ELISA)法检测基质金...     

ERK/AP-1途径在蛋白酶激活受体2促进肝癌细胞增殖中的作用

目的 探讨胰蛋白酶和蛋白酶激活受体2(PAR-2)激动剂SLIGKV-NH_2对肝癌细胞增殖的影响及其细胞内信号转导机制.方法 免疫荧光及逆转录(RT)-PCR法检测HepG2细胞PAR-2蛋白及mRNA的表达;用SLIGKV-NH_2、胰蛋白酶、反PAR-2激动肽VKGILS-NH_2及PD98059干预细胞生长.用流式细胞术检测细胞周期改变情况;噻唑蓝(MTT)法检测对细胞增殖能力的影响;RT-PCR法检测PAR-2、c-fos及增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA表达变化;Western印迹检测c-fos和PCNA蛋白表达变化.结果 肝癌HepG2细胞存在PAR-2蛋白和mRNA的表达.50μmol/LSLIGKV-NH_2、25 nmol/L胰蛋白酶处理细胞后,PAR-2 mRNA表达量(PAR-2/β-肌动蛋白)分别为0.70±0.04,0.99±0.05,高于对照组(0.35±0.05,F=135.534,P<0.01).胰蛋白酶、SLIGKV-NH_2组G_0/G_1期比例均明显低于对照组[(56.11±0.85)%、(57.85±0.46)%比(79.12±0.67)%,均P<0.01],S期、G_2/M期细胞比例和细胞增殖指数(PI)则明显高于对照组(均P<0.01).胰蛋白酶、SLIGKV-NH_2可以诱导肝癌HepG2细胞增殖(F=319.287,P<0.01),上调c-fos、PCNA mRNA和蛋白的表达(均P<0.01),且这些作用可被ERK激活性蛋白激酶(MEK)抑制剂PD98059抑制(均P<0.01);反PAR-2激动肽VKGILS-NH_2对HepG2细胞增殖能力的影响不明显,与对照组相比差异无统计学意义(均P>0.05).结论 肝癌HepG2细胞表达PAR-2.胰蛋白酶、SLIGKV-NH_2可以通过激活PAR-2诱导HepG2细胞的增殖活性,且该过程部分由ERK/AP-1信号通路所介导.     

蛋白酶激活受体介导的凝血激活在脓毒症中的作用

脓毒症时由于内毒素及炎性递质的作用,机体处于高凝状态,凝血激活过程中产生的许多蛋白酶,如凝血酶、组织因子复合物等又可通过其特异的受体--蛋白酶激活受体(Protease-activated receptors,PARs)促进炎性反应过程。目前已有许多针对脓毒症时的凝血紊乱进行干预的临床前及临床试验,其中许多与PARs有关的试验都得出了肯定的结论。本文就有关PARs介导的凝血激活在脓毒症中的作用研究做一综述。